白细胞介素13刺激成纤维细胞胶原基因转录和胶原蛋白的合成

目的:以成纤维细胞株3T3为实验对象,观察白细胞介素13对成纤维细胞株3T3胶原合成作用,探讨白细胞介素13对纤维化形成的作用机制。方法:实验于2005-03/2006-10在江西医学科学研究所江西省医学生物高技术重点实验室进行。实验材料:成纤维细胞株3T3细胞为江西省医学科学研究所江西省医学生物高技术重点实验室保存。白细胞介素13购自Peprotech公司。实验方法:①3T3细胞培养:3T3细胞常规培养在含体积分数为0.15胎牛血清、100U/mL青、链霉素的DMEM培养液中,置于37℃、含体积分数为0.05的CO2孵箱中培养,并分为实验组和对照组,两组细胞均用无血清DMEM培养12～16h,实验组加入100μg/L白细胞介素13,作用24,48,72h后进行以下实验。②应用Van Gieson胶原纤维特殊染色观察白细胞介素13作用下,3T3细胞体外合成胶原纤维情况。细胞培养上清液采用羟脯氨酸实验检测细胞分泌的总胶原蛋白含量。采用RT-PCR检测3T3细胞Ⅰ型胶原α1基因(COL1A1)mRNA的表达。采用Western blotting检测白细胞介素13作用后成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果:①Van Gieson胶原纤维特殊染色观察白细胞介素13对成纤维细胞体外合成胶原纤维的影响:有胶原纤维地方被Van Gieson液染成红色,细胞核则为灰黑色。显微镜下可见成纤维细胞呈放射状、编织状或旋涡状排列,细胞体呈梭形或不规则三角形,胞质向外伸出大小不等的突起,核为椭圆形,位于胞浆的中央,在白细胞介素13孵育的3T3细胞中可观察到较多的胶原纤维。②羟脯氨酸实验检测白细胞介素13对成纤维细胞分泌总胶原含量影响:白细胞介素13刺激3T3细胞分泌的总胶原含量24h后即明显增高,持续至72h(t=6.751,P<0.01),明显高于对照组(t=3.019,P<0.05)。③RT-PCR检测白细胞介素13作用下3T3细胞Ⅰ型胶原α1mRNA水平:在511bp(β-actin)和378bp处(COL1A1)均可见一明显条带。④Western blotting检测白细胞介素13作用下Ⅰ型胶原蛋白表达情况:白细胞介素13作用3T3细胞0,24,48,72h后,Ⅰ型胶原蛋白表达逐渐增强,与actin蛋白相比,差异显著(P<0.05)。结论:白细胞介素13可促进3T3细胞胶原基因的转录和胶原蛋白的合成,可能在纤维化疾病发病机制中发挥重要作用。     

鸡内金提取物通过调节肺泡巨噬细胞自噬水平减轻尘肺大鼠肺间质纤维化的机制

目的探究鸡内金提取物通过调节肺泡巨噬细胞自噬水平减轻尘肺大鼠肺间质纤维化的机制。方法选择30只雄性SD大鼠根据随机数字表法分为3组,每组10只。对照组为没有粉尘接触的健康SD大鼠;模型组采用一次性除尘方法建立大鼠矽肺模型;治疗组采用一次性除尘方法建立大鼠矽肺模型,每天灌服鸡内金提取物0.2 g。定量逆转录PCR(RT-qPCR)分析自噬相关基因(Beclin、LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ)和凋亡相关基因(Bcl-2)的mRNA表达。培养后6、12、24 h,MTT检测巨噬细胞的活力。培养后12、24 h,通过划痕实验测定细胞的划痕间隙距离。酶联免疫吸附试验法检测促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。蛋白质印迹检测大鼠肺部纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-12(MMP-12)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和重组人精氨酸酶1(Arg1)的蛋白表达。结果模型组大鼠Beclin、LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达、IL-1β和TNF-α水平以及纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9、MMP-12蛋白和iNOS蛋白表达水平均较对照组显著升高,Bcl-2 mRNA和Arg1蛋白表达水平均较对照组显著降低(P<0.05),治疗组大鼠Beclin、LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达、IL-1β和TNF-α水平以及纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9、MMP-12蛋白和iNOS蛋白表达水平均较模型组显著降低,Bcl-2 mRNA和Arg1蛋白表达水平均较模型组显著升高(P<0.05)。培养后6、12、24 h,模型组较对照组细胞活力降低(P<0.05),治疗组大鼠较模型组细胞活力升高(P<0.05)。培养后12、24 h,模型组大鼠细胞划痕间隙距离较对照组降低(P<0.05),治疗组大鼠细胞划痕间隙距离较模型组升高(P<0.05)。结论鸡内金提取物通过诱导肺泡巨噬细胞自噬而发挥抗炎和抗纤维化作用。自噬通过抑制纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9和MMP-12的表达,来保护肺泡巨噬细胞免受二氧化硅诱导的细胞凋亡,从而进一步减少由二氧化硅颗粒引起的炎症因子的分泌和最终的纤维化。     

槐角黄酮调控miR-199a-3p/p38MAPK/NF-κB对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响

目的 探讨槐角黄酮对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响。方法 将乳腺癌细胞BT549分为正常对照(NC)组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、miR-NC组、miR-199a-3p组、高剂量+anti-miR-NC组、高剂量+anti-miR-199a-3p组。采用CCK-8、克隆形成实验评估细胞增殖;采用Transwell法评估细胞迁移和侵袭。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-199a-3p表达。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及白细胞介素-1β(IL-1β)水平。采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测p-p38MAPK和p-p65蛋白表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,miR-199a-3p表达升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-199a-3p组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,细胞...     

白藜芦醇调控体外培养人骨关节炎滑膜细胞白细胞介素18的表达

背景:白藜芦醇可在体外抑制软骨细胞的凋亡。目的:观察白藜芦醇对体外培养人骨关节炎滑膜细胞中白细胞介素18、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α表达的影响。方法:对兔以白藜芦醇临床等效剂量灌胃后,制备含10%,20%,40%白藜芦醇含药血清,与人骨关节炎滑膜细胞共培养,以正常兔血清培养细胞为对照。结果与结论:ELISA检测及免疫细胞化学检测结果显示,不同浓度白藜芦醇含药血清组体外培养滑膜细胞白细胞介素18、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α分泌量较正常兔血清组明显降低(P<0.01),并随白藜芦醇浓度的增加,白细胞介素18、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α分泌量逐渐降低(P<0.01或P<0.05)。白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平依次与白细胞介素18水平呈正相关。表明白藜芦醇能够显著下调白细胞介素18、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α在骨关节炎滑膜细胞中的表达,减轻滑膜炎症反应。     

调节性T细胞促进重症肺炎大鼠体内β-连环蛋白介导的上皮细胞向间质转化和肺纤维化发展的机制

目的探讨调节性T细胞促进重症肺炎大鼠体内β-连环蛋白介导的上皮细胞向间质转化和肺纤维化发展的机制。方法40只雄性SD大鼠随机分配到三组:对照组(不进行任何处理标准饲养的健康大鼠)、重症肺炎模型组(通过脂多糖对大鼠支气管进行滴注建立重症肺炎模型)和抗CD25抗体治疗组(在构建重症肺炎大鼠模型的基础上给予10 d抗CD25抗体腹膜注射0.2 ml进行T细胞耗竭)。蛋白印迹分析上皮细胞向间质转化相关因子β-连环蛋白(β-catenin)、N-钙粘蛋白(E-cadherin)、肺表面活性物质相关蛋白C(Pro-SPC)的蛋白表达情况;RT-PCR实时分析肺纤维化相关因子纤维化波形蛋白、羟脯氨酸、E-cadherin的mRNA表达情况;酶联免疫吸附实验检测肺部炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)含量;治疗后第5天、第10天评估大鼠肺部干湿比;用血细胞计数器计数支气管肺泡灌洗液中总细胞数、肺泡巨噬细胞、嗜中性白细胞数量。结果与对照组比较,模型组β-catenin、E-cadherin的蛋白,波形蛋白、羟脯氨酸的mRNA表达升高(P<0.05),Pro-SPC蛋白、E-cadherin mRNA表达降低(P<0.05);与模型组比较,抗CD25抗体治疗组β-catenin、E-cadherin的蛋白、波形蛋白、羟脯氨酸的mRNA表达降低(P<0.05),Pro-SPC蛋白、E-cadherin mRNA表达升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组IL-1β、TNF-α、ROS、MDA的含量升高(P<0.05),与模型组比较,抗CD25抗体治疗组较模型组IL-1β、TNF-α、ROS、MDA水平含量降低(P<0.05)。第5天,与对照组比较,重症肺炎模型组肺湿/干重比升高(P<0.05),与重症肺炎模型组比较,抗CD25抗体治疗组肺湿/干重比下降(P<0.05)。第10天,抗CD25抗体治疗组与对照组肺湿/干重比比较差异无显著性(P>0.05)。与对照组比较,重症肺炎模型组总细胞、肺泡巨噬细胞、嗜中性白细胞数量升高(P<0.05),与重症肺炎模型组比较,抗CD25抗体治疗组总细胞、肺泡巨噬细胞、嗜中性白细胞数量减少(P<0.05)。结论减少调节性T细胞可降低重症肺炎大鼠体内β-连环蛋白的表达,进而有效减轻诱导模型大鼠肺炎纤维化和上皮细胞向间质转化。     

复方丹参注射液对关节炎模型大鼠滑膜细胞白细胞介素1β mRNA表达的影响

目的研究复方丹参对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节炎模型(CIA)滑膜细胞白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达的影响.方法用Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠关节炎模型,以反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)半定量法测定模型大鼠滑膜细胞IL-1βmRNA的表达.结果氯化钠注射液组、地塞米松组、小剂量丹参组IL-1βmRNA的表达均高于大剂量丹参组,差异有非常显著性意义(P＜0.01).结论复方丹参治疗类风湿性关节炎的机制可能与下调滑膜细胞IL-1βmRNA表达的水平有关.     

TGFβ1反义寡核苷酸对人腹膜间皮细胞增殖和纤维连接蛋白的影响

目的探讨阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,ASON)对人腹膜间皮细胞(HPMC)体外增殖及其分泌纤维连接蛋白(FN)的影响,初步探索腹膜间皮细胞对腹膜纤维化影响和TGFβ1反义寡核苷酸对其的干预作用,为临床防治腹膜纤维化寻找有效途径。方法①人腹膜间皮细胞原代培养,第三代用于实验;②合成特异性针对TGFβ1mRNA转译起始区ASON及正义、错义寡核苷酸,并和阳离子脂质体形成复合物;③将合成的寡核苷酸与第三代腹膜间皮细胞共同孵育24、48h,分为对照组(F12培养基组)、TGFβ1反义寡核苷酸组、TGFβ1正义寡核苷酸组和TGFβ1错义寡核苷酸组,采用MMT法观察细胞增殖,ELISA法测定细胞上清液内FN蛋白含量以及RT-PCR测定FNmRNA表达。结果①TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后,其细胞增殖率明显低于其它各组(P均<0.05);②TGFβ1反义寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24、48h后其上清液中FN蛋白质的含量明显降低;TGFβ1正义寡核苷酸组明显升高(P<0.05);③正义、反义和错义各组寡核苷酸作用人腹膜间皮细胞24h时FNmRNA表达与对照组比较,正义组上调22%,而反义组和错义组分别下调22%和11%。结论TGFβ1反义寡核苷酸能够抑制人腹膜间皮细胞增殖和FN的过度表达。     

微小RNA-101在心房颤动心房纤维化中的作用

目的:探讨微小RNA-101(mi RNA-101)在心房颤动心房纤维化中的作用。方法:59例开胸手术患者(心脏瓣膜病47例,先天性心脏病12例),分为房颤组30例、窦律组29例。q PCR及锁定核苷酸原位杂交技术检测两组右心耳mi RNA-101表达;q PCR检测两组右心耳转化生长因子βⅠ型受体(TGFβRⅠ)、Ⅰ型胶原(COL1)m RNA表达;免疫印迹法检测两组右心耳TGFβRI、COL1蛋白表达;Masson染色观察两组右心耳胶原的沉积。结果:房颤组右心耳mi RNA-101表达明显低于窦律组(P<0.05),原位杂交显示mi RNA-101主要分布于心房结缔组织,房颤组mi RNA-101表达较窦律组下降24.9%;房颤组TGFβRⅠm RNA表达与窦律组无明显差异(P>0.05),但蛋白表达明显高于窦律组(P<0.05);COL1m RNA及蛋白表达均明显高于窦律组(P<0.05);房颤组右心耳胶原沉积明显多于窦律组(P<0.05)。结论:mi RNA-101下调在心房颤动心房纤维化过程中起重要作用,其可能通过调控TGFβRⅠ而参与心房纤维化。     

糖皮质激素对重症肌无力患者血清IL-18、TGFβ-1水平的干预作用

目的探讨糖皮质激素(GC)对重症肌无力(MG)患者血清外周血白介素18(IL-18)和转化生长因子β-1(TGFβ-1)水平的干预作用。方法随机选取在我院治疗的52例重症肌无力患者为干预组,按照年龄和性别匹配60例健康对照组,采用ELISA检测干预组的患者糖皮质激素治疗前,治疗后血清IL-18,TGFβ-1水平以及健康对照组的血清IL-18,TGFβ-1水平,采用临床绝对和相对记分法判定临床疗效。结果干预组患者的血清IL-18,TGFβ-1水平与对照组差异显著(P<0.05);治疗后干预组血清IL-18水平明显下降(P<0.05),TGFβ-1水平明显升高(P<0.05)。结论糖皮质激素可以抑制IL-18,并且提高血清TGFβ-1水平进一步有效调节重症肌无力患者的细胞免疫功能。     

人端粒酶逆转录酶基因沉默对肺腺癌细胞侵袭、增殖、凋亡的影响

目的:探讨靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(siRNA)转染对肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:构建靶向hTERT的siRNA表达质粒转染A549细胞,通过Western blot检测蛋白的表达水平,确定有效后,通过Transwell小室检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡率。结果:成功构建靶向hTERT的siRNA表达质粒。实验组siRNA转染后的细胞侵袭能力较对照组减弱(P<0.01),生长抑制率明显高于阴性对照组(P<0.01),且表现出时间依赖性。流式细胞术测定显示,实验组siRNA转染48h后,肿瘤细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:靶向hTERT的siRNA转染后可以显著降低A549细胞侵袭能力,抑制增殖,诱导细胞凋亡的发生。     

复方丹参注射液对关节炎模型大鼠滑膜细胞白细胞介素1βmRNA表达的影响

目的：研究复议丹参对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节炎模型（CIA）滑膜细胞白细胞介素1β（IL-1β）mRNA表达的影响。方法：用Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠关节炎模型，以反转录-多聚酶链反应（RT-PCR）半定量法测定模型大鼠滑膜细胞IL-1βmRNA的表达。结果：氯化钠注射液组、地塞米松组、小剂量丹参组IL-1βmRNA的表达均高于大剂量丹参组，差异有非常显著性意义（P&;lt;0.01)。结论：复方丹参治疗类风湿性关节炎的机制可能与下调滑膜细胞IL-1βmRNA的表达的水平有关。     

IL-1β和IL-10在儿童热性惊厥表达的相关性研究

目的通过检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)在热性惊厥(FS)患儿和正常对照组儿童血清浓度,分析两者在儿童FS表达的相关性,探讨与儿童FS发病机制的关系。方法将60例FS患儿分为单纯型FS(SFS)组32例和复杂型FS(CFS)组28例;对照组60例,为年龄和性别相匹配的同期体检健康儿童。采用酶联免疫吸附方法测定中血清IL-1β、IL-10的表达情况。结果 IL-1β在FS组为高表达,而对照组中为低表达,差异有统计学意义(P<0.05);CFS组中IL-1β表达明显高于SFS组(P<0.05)。对照组IL-10明显高于FS组(P<0.05);IL-10在CFS组较SFS组有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。IL-1β和IL-10在FS患儿血清中的表达呈负相关(r=-0.513,P<0.05)。结论 IL-1β和IL-10的异常表达可能是儿童FS发生发展的重要因素并有协同作用,与FS密切相关。     

异种骨移植中多种免疫因子的表达及转化生长因子-β的调节作用

目的:观察异种骨移植局部白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和蛋白质的表达,探索转化生长因子β(TGF-β)对这些免疫因子的调节作用。方法:将复合了TGF-β的牛松质骨骨粒或单纯牛松质骨骨粒植入小鼠股部肌肉内,于植入后第4,7,14及21天取材检测。结果:在异种骨移植标本中多种细胞成份可表达I-L1α、IL-6及TNF-αmRNA和蛋白质。复合TGFβ的骨移植局部IL1-α、IL-6和TNF-αmRNA的表达明显低于单纯异种骨移植(P<0.01)。结论:在异种骨移植局部,多种细胞可以表达IL-1α、IL-6及TNF-αmRNA和蛋白质,且这种表达受到TGF-β的调节。     

大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究

【目的】探讨大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究。【方法】肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、模型组、20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组,对照组细胞常规培养,其余组细胞均经过肺炎链球菌感染,20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组细胞在感染后24 h分别加入不同浓度的大黄素(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL)处理。噻唑蓝(MTT)检测各组A549细胞的增殖;流式细胞术检测凋亡率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白质印迹法检测A549细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白水平。【结果】与对照组相比,肺炎链球菌感染的A549细胞增殖活性、Bcl-2、β-catenin、Cyclin D1蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率及IL-6、TNF-α、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平增加(P<0.05);不同浓度大黄素促进肺炎链球菌感染的A549细胞增殖(P<0.05),抑制其凋亡(P<0.05),降低IL-6、TNF-α水平(P<0.05),增加Bcl-2蛋白水平(P<0.05),下调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平(P<0.05),提高β-catenin、Cyclin D1蛋白水平(P<0.05)。【结论】大黄素可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路从而促进肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖,抑制其凋亡。     

lncRNA HOTAIR通过介导JAK2/STAT3通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制

目的探究长的非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义基因间RNA(HOTAIR)通过介导Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制。方法前瞻性分析2019年6月至2020年7月三二〇一医院收治的接受肾上腺肿瘤手术切除的60例患者,提取人原发性肿瘤和邻近的健康组织,并分别作为病理观察组和对照组。将大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12分为对照组(PC12细胞系)、过表达组(lncRNA HOTAIR过表达转染)和敲低组(shRNA lncRNA HOTAIR转染)。RT-PCR检测lncRNA HOTAIR的mRNA的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞增殖能力;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测促炎因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)]水平;蛋白印迹分析JAK2/STAT3、核因子κB(NF-κB)相关通路蛋白的表达。结果病理观察组较健康对照组lncRNA HOTAIR mRNA表达升高(P<0.05)。转染24 h和48 h后,3组细胞增殖率均显著高于转染12 h(P<0.05);对照组和过表达组细胞增殖能力均随转染时间显著增强(P<0.05);转染24 h和48 h后,过表达组细胞增殖数目较对照组显著升高(P<0.05),敲低组细胞增殖数目较HOTAIR过表达组显著降低(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05),敲低组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05),与过表达组相比,敲低组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论lncRNA HOTAIR通过上调促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)水平,激活了JAK2/STAT3通路,调节肾上腺肿瘤细胞的增殖和凋亡。     

直接和间接共培养条件下小鼠子宫自然杀伤细胞与树突状细胞相互作用的比较

背景:子宫自然杀伤细胞与树突状细胞可以相互作用,但相互间作用是否必须直接接触还存在不同的观点。目的:对比直接和间接共培养条件下子宫自然杀伤细胞与树突状细胞之间的相互作用,明确两者相互作用的方式。方法:将树突状细胞和子宫自然杀伤细胞进行直接接触共培养,设为直接共培养组;在2种细胞Transwell系统中进行共培养,设为间接共培养组。观察培养细胞的生长状况,酶联吸附法检测培养上清白细胞介素10,12、转化生长因子β细胞因子的浓度,流式细胞术检测各组细胞表面标志CD86的表达情况。结果与结论:与单独培养树突状细胞和子宫自然杀伤细胞相比,直接和间接共培养组培养液上清中白细胞介素10,12、转化生长因子β浓度均增加(P<0.05),尤以白细胞介素10浓度增加明显(P<0.05),CD86的表达明显增高(P<0.05)。直接共培养组白细胞介素10,12和转化生长因子β浓度更高(P<0.05),表达CD86的细胞含量更多(P<0.05)。证实子宫自然杀伤细胞可以促进树突状细胞成熟,而树突状细胞促进子宫自然杀伤细胞的分泌,两者通过细胞间的直接接触而相互作用。     

长链非编码RNA NEAT1靶向miR-27b调控RA-FLS细胞生物学功能机制研究

目的 研究长链非编码RNA NEAT1靶向miR-27b调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）细胞生物学功能机制。方法 选取2021年1月至2022年12月在南昌大学第一附属医院东湖院区风湿免疫科确诊的类风湿关节炎（RA）患者40例作为观察组,同期行膝关节手术的健康创伤患者40例作为对照组开展研究。分别采集观察组和对照组研究对象的膝关节滑膜组织中进行培养,培养成功之后将RA-FLS细胞根据免疫荧光分为对照组以及观察组。其中观察组待细胞汇合度达至80%时转入si-NEAT1,对照组则转入对照组-siRNA。比较两组NEAT1、miR-27b的表达,RA-FSL细胞生物学功能,炎症因子表达水平,并行Pearson相关性分析。结果 观察组NEAT1、miR-27b相对表达量分别相较于对照组均更低,差异有统计学意义（P<0.05）。观察组RA-FSL细胞增殖率、迁移细胞数、侵袭细胞数分别相较于对照组均更低,而细胞凋亡率相较于对照组更高,差异有统计学意义（P<0.05）。观察组白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平分别...     

降钙素对关节软骨细胞中β连环蛋白和分泌型frizzled相关蛋白1的影响

背景:研究表明降钙素具有抗骨吸收作用,对软骨有保护作用,但其具体机制尚不明确.目的:探讨降钙素是否通过Wnt/β信号通路对关节软骨细胞起保护作用.方法:分离培养雄性日本大耳白兔关节软骨细胞,随机分为对照组,白细胞介素1β组和降钙素组,后两组细胞于传代后的第2天加入白细胞介素1β(1×10-5g/L)模拟骨关节炎发生,降钙素组第4天换成含有降钙素的完全培养基.第6天采用免疫细胞化学法检测β连环蛋白的表达,以及实时荧光定量PCR法检测β连环蛋白与分泌型frizzled相关蛋白1 mRNA的表达.结果与结论:降钙素组β连环蛋白和mRNA的表达显著低于白细胞介素1β组(P<0.05);白细胞介素1β组β连环蛋白和mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05).降钙素组分泌型frizzled相关蛋白1的mRNA表达显著高于白细胞介素1β组(P<0.05),白细胞介素1β组分泌型frizzled相关蛋白1 mRNA表达显著低于对照组(P<0.05).这些结果说明降钙素能抑制关节软骨细胞的进一步损伤,可能是通过Wnt/β连环蛋白信号通路对关节软骨细胞起保护作用.     

双醋瑞因干预体外培养关节软骨结缔组织生长因子的表达

背景:在骨关节炎软骨退变中结缔组织生长因子作为一种重要的效应分子在软骨细胞的增殖、分化方面发挥重要作用。临床应用双醋瑞因治疗骨关节炎已取得了良好的效果,但其治疗的确切机制尚不清楚。目的:观察不同浓度双醋瑞因对体外白细胞介素1β诱导下软骨细胞中结缔组织生长因子的影响。方法:体外培养SD大鼠关节软骨细胞,重组人白细胞介素1β刺激软骨细胞制备体外骨关节炎模型。实验分组:正常对照组不给予任何处理因素;模型对照组给予重组人白细胞介素1β;实验组给予不同浓度双醋瑞因+10μg/L重组人白细胞介素1β。利用MTT比色法观察软骨细胞的增殖情况,Western Blot法检测结缔组织生长因子的表达。以上实验均重复3次。结果与结论:MTT结果显示,与正常对照组比较,双醋瑞因能促进软骨细胞MTT增殖活性,以浓度为10-5 mol/L更明显(P<0.01),白细胞介素1β作用后各实验组软骨细胞增殖能力下降(P<0.05);但与正常对照组比较,无论是否加白细胞介素1β,浓度为10-4 mol/L和10-5 mol/L双醋瑞因仍能促进软骨细胞MTT增殖活性(P<0.05)。Western Blot检测结果显示,白细胞介素1β能够降低结缔组织生长因子的表达(P<0.01),浓度为10-5 mol/L双醋瑞因能够显著促进白细胞介素1β诱导下结缔组织生长因子的表达,显著高于模型对照组(P<0.01)。提示双醋瑞因可以促进白细胞介素1β诱导下结缔组织生长因子的高表达,其可能是双醋瑞因促进软骨细胞的分化增殖,治疗骨关节炎的作用机制之一。     

氯沙坦对2型糖尿病肾病患者尿转化生长因子β1的影响

目的通过检测糖尿病肾病患者尿转化生长因子β1(TGFβ1水平,探讨患者肾脏纤维化状况及氯沙坦对肾脏纤维化的影响。方法检测33例2型糖尿病肾病患者氯沙坦(50 mg/d×8周治疗前后24 h尿蛋白、尿肌酐,尿TGFβ1和肌酐。尿TGFβ1检测方法为ELISA法。20例健康志愿者的尿液标本作为对照组。结果糖尿病肾病患者尿TGFβ1明显高于正常对照组,经氯沙坦治疗后尿TGFβ1浓度明显下降(P<0.001。尿TGFβ1浓度变化与尿蛋白变化具有相关性(P<0.01)。结论氯沙坦通过降低糖尿病肾病患者尿TGFβ1水平发挥抗肾脏纤维化作用,这是氯沙坦延缓糖尿病肾病进展的机制之一,这一表现先于蛋白尿的减少。