阿司匹林对TNF-α诱导人早孕滋养细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的:采用体外细胞模型探讨阿司匹林促进人早孕滋养细胞增殖和侵袭在预防子痫前期(preeclampsia,PE)发生中的作用及机制。方法:收集PE病例20例和正常孕妇作为对照20例;HE染色观察胎盘组织病理改变;ELISA法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9的含量。体外培养人早孕滋养细胞HTR-8/SVneo,分别加入不同浓度的阿司匹林和肿瘤坏死因子α(TNF-α);CCK-8法检测细胞活力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达水平。结果:PE组胎盘组织存在子宫螺旋动脉血管重铸障碍,且孕妇血清中MMP-2及MMP-9浓度明显低于对照组(P0.05)。体外早孕滋养细胞系实验表明,与对照组比较,0.1 mmol/L阿司匹林明显增加细胞活力,且可缓解TNF-α引起的细胞活力降低(P0.05);TNF-α处理滋养细胞后,细胞cyclin D1及PCNA蛋白表达水平显著下降,侵袭能力减弱,培养上清液中MMP-2和MMP-9表达水平及活性均明显下降(P0.05);同时给予0.1 mmol/L阿司匹林和TNF-α处理后,滋养细胞cyclin D1及PCNA蛋白表达水平显著增高,侵袭能力增强,培养上清液中MMP-2和MMP-9表达水平及活性均明显上升(P0.05)。结论:小剂量阿司匹林可以促进绒毛滋养细胞增殖和侵袭,可能有利于改善PE胎盘浅着床和子宫螺旋动脉重铸异常情况。这为阿司匹林预防PE的发生提供实验依据。     

柔毛水杨梅甲醇提取物通过调控miR-758表达对滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨柔毛水杨梅甲醇提取物对滋养层细胞增殖、迁移侵袭的影响。方法 不同浓度的柔毛水杨梅甲醇提取物处理人正常滋养细胞HTR8/SVneo后，四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验检测细胞增殖，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HTR8/SVneo、正常胎盘滋养细胞、子痫前期胎盘滋养细胞中miR-758表达水平。将miR-758抑制物转染HTR8/SVneo，检测抑制miR-758表达对HTR8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭的影响。将miR-758模拟物转染HTR8/SVneo，检测过表达miR-758对柔毛水杨梅作用的HTR8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 柔毛水杨梅甲醇提取物处理后HTR8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著升高，miR-758表达显著降低，并呈一定浓度依赖性（P<0.05）。在子痫前期胎盘滋养细胞中miR-758表达升高，抑制miR-758表达后HTR8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著升高（P<0.05）。过表达miR-758能够逆转柔毛水杨梅甲醇提取物对HTR8/SVneo增殖、迁...     

低氧预处理脐带间充质干细胞来源的外泌体对内皮细胞功能的影响

目的:探讨低氧预处理人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)后,其释放的外泌体对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移和小管形成的影响。方法:分离、培养并鉴定hUCMSCs和HUVECs。采用超速离心法提取hUCMSCs释放的外泌体,透射电镜观察外泌体的形态,纳米颗粒跟踪分析技术检测外泌体的粒径和浓度,Western blot检测外泌体表面特异性标志蛋白。将hUCMSCs分为常氧组和低氧预处理组,用CCK-8法检测细胞活力。将HUVECs分为对照组、常氧外泌体组和低氧外泌体组,用EdU法检测细胞增殖能力,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移能力,小管形成实验检测细胞小管形成能力。结果:与常氧组相比,低氧预处理增强hUCMSCs活力,促进其外泌体释放。与常氧外泌体组相比,低氧预处理hUCMSCs释放的外泌体增强HUVECs的增殖、迁移和小管形成能力。结论:低氧预处理hUCMSCs分泌的外泌体增强HUVECs增殖、迁移和小管形成能力。     

蜕膜巨噬细胞通过外泌体调控滋养细胞生物学行为参与不明原因复发性流产

目的:研究蜕膜巨噬细胞分泌的外泌体是否调控滋养细胞生物学行为,参与不明原因复发性流产(URSA)的发生。方法:收集正常早孕人工流产妇女和URSA患者的蜕膜组织,采用免疫磁珠法分选巨噬细胞。分离蜕膜巨噬细胞外泌体,透射电镜观察其形态,Western blot检测外泌体标记蛋白CD63的表达。荧光显微镜检测外泌体能否被滋养细胞摄取。将正常蜕膜巨噬细胞外泌体和URSA患者蜕膜巨噬细胞外泌体分别与滋养细胞HTR8/Snveo共培养,采用MTS法检测共培养后1 d、2 d和3 d滋养细胞的细胞活力;Transwell迁移实验检测共培养后滋养细胞的迁移能力。结果:透射电镜显示,外泌体直径40～80 nm,近似圆形。Western blot结果表明蜕膜巨噬细胞外泌体高表达CD63。荧光显微镜结果显示,外泌体可被滋养细胞内吞。MTS实验结果显示,与正常组相比,URSA组蜕膜巨噬细胞外泌体在共培养后第2和第3天均抑制滋养细胞的活力(P0.05)。Transwell迁移实验结果表明,与对照组相比,URSA组蜕膜巨噬细胞外泌体明显抑制滋养细胞的迁移能力(P0.01)。结论:蜕膜巨噬细胞可能通过外泌体调控滋养细胞生物学行为,参与母胎免疫调节,与URSA发病相关。     

妊娠期糖尿病中胎盘外泌体对滋养细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨妊娠期糖尿病（GDM）中胎盘外泌体对滋养细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法： 选取2018 年3 月至2019 年4 月间重庆市第七人民医院50 例诊断为GDM患者（GDM组）,另选取50 例正常孕产 妇作为对照组。分离纯化GDM组和对照组孕产妇外周血血浆中的胎盘外泌体,通过透射电镜观察外泌体的形 态,纳米粒径分析检测外泌体的直径,免疫印迹检测外泌体标志性蛋白CD63、TSG101 及胎盘标志性分子胎盘 碱性磷酸酶（PLAP）的表达。PKH67染色后荧光共聚焦显微镜观察体外培养滋养细胞系对外泌体的摄取情况; 应用MTT实验检测外泌体对滋养细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测外泌体对滋养细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI 双染色结合流式细胞术检测外泌体对滋养细胞凋亡的影响。结果：成功从外周血中分离获得了胎盘外 泌体,形态呈典型的杯状或双凹状,直径为40 ～ 120 nm,CD63、TSG101、PLAP 表达呈阳性;与对照组相比, GDM组胎盘外泌体以浓度依赖性促进滋养细胞的增殖、细胞周期进展,并抑制滋养细胞的凋亡。结论：GDM中 胎盘外泌体可能通过促进滋养细胞的增殖、细胞周期进展,抑制滋养细胞凋亡等参与GDM的发生和发展。     

不同浓度Dlll4调节绒毛外滋养细胞的生物学功能

背景：早孕时期绒毛外滋养细胞功能的正常发挥对妊娠有着至关重要的影响,绒毛外滋养细胞功能异常时将导致子痫前期、胎儿生长受限及胎盘植入等多种妊娠期疾病。 目的：探讨Notch信号家族配体Dll4对绒毛外滋养细胞的生物学功能的影响。 方法：以不同质量浓度外源性Dll4(0,0.125,0.25,0.5,1.0 mg/L)处理人绒毛外滋养细胞系HTR-8/SVneo,以CCK-8试验检测细胞活性,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变。 结果与结论：Dll4可明显促进绒毛外滋养细胞迁移与侵袭能力,而对细胞活性不产生显著影响;Dlll4对绒毛外滋养细胞侵袭功能的影响具有浓度依赖性。结果提示Dll4可通过调节绒毛外滋养细胞生物学功能,在妊娠过程很中发挥重要作用。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

不同浓度DⅢ4调节绒毛外滋养细胞的生物学功能

背景:早孕时期绒毛外滋养细胞功能的正常发挥对妊娠有着至关重要的影响,绒毛外滋养细胞功能异常时将导致子痫前期、胎儿生长受限及胎盘植入等多种妊娠期疾病。目的:探讨Notch信号家族配体Dll4对绒毛外滋养细胞的生物学功能的影响。方法:以不同质量浓度外源性Dll4(0,0.125,0.25,0.5,1.0 mg/L)处理人绒毛外滋养细胞系HTR-8/SVneo,以CCK-8试验检测细胞活性,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变。结果与结论:Dll4可明显促进绒毛外滋养细胞迁移与侵袭能力,而对细胞活性不产生显著影响;Dlll4对绒毛外滋养细胞侵袭功能的影响具有浓度依赖性。结果提示Dll4可通过调节绒毛外滋养细胞生物学功能,在妊娠过程很中发挥重要作用。     

蜕膜巨噬细胞经外泌体调控滋养细胞生物学行为参与不明原因复发性流产的作用机制分析

目的研究蜕膜巨噬细胞经外泌体调控滋养细胞生物学行为参与不明原因复发性流产的作用机制。方法采集从2018年1月～2019年2月于我院接受诊治的50例URSA患者蜕膜组织,记作实验组。另取同期于我院进行人工流产的50例孕早期女性蜕膜细胞组织作为对照组。以免疫磁珠法完成巨噬细胞的分选。借助透射电镜观察蜕膜巨噬细胞形态,以Western blot法检测外泌体标记蛋白CD63的表达。采用荧光显微镜观察外泌体是否可被滋养细胞所摄取。将两组不同蜕膜巨噬细胞外泌体和滋养细胞HTR8/Snveo共培养,以MTS法检测培养1～3d时HTR8/Snveo细胞的活力。采用Transwell迁移实验检测共培养3d后HTR8/Snveo细胞的迁移能力。结果在透射电子显微镜下观察发现,外泌体的形状为椭圆形,直径在40～80nm之间,且经Western blot法检测结果发现,蜕膜巨噬细胞外泌体存在明显的CD63高表达。将经PKH67染色处理的蜕膜巨噬细胞外泌体和滋养细胞HTR8/Snveo共培养,在荧光显微镜观察下发现:HTR8/Snveo胞质内存在荧光,提示了外泌体可被滋养细胞所摄取。实验组蜕膜巨噬细胞外泌体共培养2d、3d时的HTR8/Snveo活力低于对照组(均P0.05)。实验组HTR8/Snveo细胞迁移数少于对照组(P0.05)。结论蜕膜巨噬细胞经外泌体对滋养细胞的活力以及迁移能力均产生不同程度的抑制作用,继而可能引起胚胎的发育停止,进一步达到介导URSA发生的目的。     

肝癌细胞外泌体诱导巨噬细胞M2极化后促进肝癌细胞迁移及侵袭

目的：探讨外泌体在肝细胞癌（HCC）细胞与巨噬细胞间是否存在活性物质交通作用，分析肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）与HCC细胞转移的关系及机制。方法：采用超速离心法从Huh-7和RAW264.7细胞的培养基中提取外泌体，Western blot和透射电镜进行外泌体鉴定；激光共聚焦显微镜对外泌体与受体细胞结合内化进行追踪；qRT-PCR及ELISA检测巨噬细胞表型变化；miRNA模拟物进行功能性实验验证其作用；细胞划痕及Transwell试验检测TAMs对HCC细胞迁移及侵袭能力的影响。结果：HCC细胞外泌体可被巨噬细胞内吞；肝癌细胞外泌体及miR-151模拟物处理的巨噬细胞M2型标志物CD206、Arg-1 mRNA表达及IL-10、TGF-β蛋白表达显著高于对照组（P<0.05）;TAMs外泌体处理组HCC细胞迁移及侵袭能力高于其他组（P<0.05）。结论：HCC细胞来源外泌体miR-151可诱导巨噬细胞极化为TAMs,TAMs对肝癌细胞迁移及侵袭有促进作用。     

滋养细胞诱导肾小球内皮细胞损伤的机制及细胞因子干预靶点研究

目的通过研究病理状态的滋养细胞与肾小球内皮细胞共培养后细胞的形态变化、ET-1表达改变及VEGF干预效果,探讨子痫前期肾小球内皮细胞的损伤机制及针对该损伤的保护机制。方法将紫外线、水浴分别诱导凋亡、坏死的滋养细胞与肾小球内皮细胞共培养,荧光显微镜下观察细胞形态,real-time PCR检测ET-1mRNA;;表达,同时给予VEGF干预,琼脂糖凝胶电泳进行PCR产物验证。结果肾小球内皮细胞吞噬死亡的滋养细胞后ET-1mRNA;;表达量增加,应用VEGF干预后ET-1mRNA;;表达量下降。结论在子痫前期中,肾小球内皮细胞可能是通过吞噬死亡的滋养细胞引起ET-1的表达变化,进而发生损伤。VEGF可以抑制ET-1的表达从而改善该损伤。     

淫羊藿苷通过VEGF 通路对缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞系RF/6A 增殖、侵袭和迁移能力的调节作用

目的:探索淫羊藿苷对缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞RF/6A增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:MTT检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;蛋白印迹检测VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平。结果:与对照组相比,缺氧组细胞增殖明显升高,侵袭和迁移能力明显增强(P0. 05)。淫羊藿苷处理缺氧组细胞后,细胞增殖能力明显下降,侵袭和迁移能力明显减弱(P0. 05)。而且,缺氧组VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平显著高于正常组(P0. 01)。与缺氧组相比,缺氧加药组VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平明显降低(P0. 01)。结论:淫羊藿苷通过VEGF通路抑制缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞RF/6A增殖、侵袭和迁移能力。     

生长分化因子15在子痫前期胎盘滋养细胞中的表达及意义

目的探讨生长分化因子-15（GDF-15）在子痫前期患者胎盘滋养细胞中的表达,探讨其在子痫前期发病机制中的作用。方法选择2009年12月至2010年10月在青岛市市立医院住院分娩的子痫前期孕妇140例,其中早发型轻度子痫前期孕妇35例（早发轻度组）,晚发型轻度子痫前期孕妇35例（晚发轻度组）,早发型重度子痫前期孕妇35例（早发重度组）,晚发型重度子痫前期孕妇35例（晚发重度组）;另选同期健康孕妇35例为对照组。采用RT—PCR检测胎盘滋养细胞中GDF-15mRNA的表达量;采用免疫组化方法检测胎盘滋养细胞中GDF-15蛋白的表达。结果RT—PCR显示子痫前期各组胎盘滋养细胞中GDF-15mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化显示GDF-15表达于胎盘滋养细胞的细胞浆和细胞外基质中,并在各组胎盘滋养细胞中均表达。子痫前期各组胎盘滋养细胞中GDF-15蛋白表达水平均高于对照组组,差异有统计学意义（P〈0．05）;但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论GDF-15在子痫前期胎盘滋养细胞中表达升高,GDF-15的表达水平变化可能与子痫前期发病有关。     

负载膜联蛋白A2(annexin A2)的间充质干细胞来源外泌体减少M2巨噬细胞极化抑制裸鼠前列腺癌细胞生长

目的 探究负载膜联蛋白A2(ANXA2)的骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体(Exo-ANXA2)对前列腺癌细胞增殖、侵袭与迁移以及前列腺癌移植瘤生长的影响，并研究巨噬细胞是否参与该过程。方法 分离与培养BALB/c裸鼠BMSC,采用负载ANXA2的慢病毒质粒感染BMSC,并分离外泌体；加入外泌体处理THP-1巨噬细胞，ELISA检测细胞上清培养液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6和IL-10的水平；将外泌体处理的巨噬细胞与前列腺癌细胞共培养后，CCK-8法检测细胞增殖活性，Transwell^TM小室检测细胞侵袭与迁移。通过注射PC-3人前列腺癌细胞构建前列腺癌裸鼠移植瘤模型，将建模后的裸鼠随机分为对照组和实验组，每组8只，实验组裸鼠尾静脉注射1 mL Exo-ANXA2,对照组注射等量PBS,于注射后第0、 3、 6、 9、 12、 15、 18、 21天，使用游标卡尺测量计算肿瘤体积，21 d处死裸鼠并测量肿瘤组织质量，免疫组织化学染色法检测肿瘤组织中抗原KI-67(ki67)和CD163表达。结果 骨髓分离的细胞表面...     

脐带间充质干细胞外泌体抑制BEL7402细胞增殖与迁移

目的 研究脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)外泌体对人肝癌细胞株BEL7402细胞增殖与迁移能力的影响.方法 收集hUC-MSCs培养上清,采用超速离心法收集hUC-MSCs外泌体,利用透射电镜检测外泌体形态大小,使用纳米粒度颗粒跟踪分析仪(Nanosight,NTA)检测外泌体粒径大小,使用Western blot技术检测外泌体表面标记物表达情况;利用CCK-8实验观察hUC-MSCs外泌体作用BEL7402细胞后,细胞的增殖情况;运用Transwell迁移实验观察hUC-MSCs外泌体对BEL7402细胞迁移能力的影响.结果 从hUC-MSCs培养上清中成功分离hUC-MSCs外泌体,经检测hUC-MSCs外泌体呈茶托状结构,粒径大小位于50～150nm之间,表面标志物Alix、CD63、CD81及HSP70表达阳性.细胞功能学实验发现:与对照组相比,hUC-MSC-外泌体处理后的BEL7402细胞的增殖和迁移能力均下降.结论 hUC-MSC-外泌体抑制BEL7402细胞的增殖、迁移.     

重度子痫前期蜕膜NK细胞Tim-3的表达及其相关作用

目的探讨重度子痫前期Tim-3+CD56^+CD16^-NK细胞的表达及其对滋养细胞侵袭及血管内皮细胞成管能力的影响。方法分离重度子痫前期患者(sPE组)及正常妊娠孕产妇(Normal组)的胎盘蜕膜组织中单个核细胞,细胞流式检测蜕膜NK细胞(decidual NK cell,dNK)细胞所占比例;免疫磁珠分选CD56^+CD16^-NK细胞,细胞流式及RT-PCR实验检测Tim-3在其中的表达;将分选出的CD56^+CD16^-NK细胞分为3组:正常对照(Control)组,即来源于正常妊娠胎盘蜕膜组织中的dNK细胞;重度子痫前期(sPE)组,即来源于重度子痫前期胎盘蜕膜组织中的dNK细胞;Tim-3封闭(Tim-3-Fc)组,即加入Tim-3-Fc融合蛋白进行处理的正常妊娠胎盘蜕膜组织中的dNK细胞。采用ELISA、Transwell侵袭及小管形成实验分别检测上述3组细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-8、VEGF及IFN-γ的表达及其对HTR8侵袭能力及血管内皮细胞成管能力的影响。结果与Control组相比,sPE组中CD56^+CD16^-NK细胞占蜕膜组织单个核细胞比例显著减少(P<0.05);免疫磁珠可分选出纯度达90%以上CD56^+CD16^-NK细胞,且sPE组中Tim-3的表达丰度及Tim-3 mRNA表达水平均较Control组显著降低(P<0.05);ELISA结果显示与Control组相比,sPE组与Tim-3-Fc组dNK细胞上清液中TNF-α、IFN-γ表达均显著增加(P<0.05),而IL-6、IL-8、VEGF表达均明显降低(P<0.05);Transwell侵袭实验及成管实验结果表明,sPE组与Tim-3-Fc组HTR8细胞侵袭能力及HUVEC成管能力较Control组显著降低(P<0.05),但Tim-3-Fc组HTR8细胞侵袭能力及HUVEC成管能力较sPE组明显增强(P<0.05)。结论重度子痫前期患者Tim-3+CD56^+CD16^-NK的表达显著降低,其可能通过损害蜕膜NK细胞的分泌功能来抑制滋养细胞的侵袭及血管内皮细胞的成管能力,从而促进子痫前期的发展。     

肝癌细胞外泌体鉴定及其对肝细胞的影响

目的 鉴定小鼠肝癌细胞Hepa1-6来源的外泌体（Hepa1-6 Exos），探讨Hepa1-6 Exos与小鼠正常肝细胞AML12共孵育时细胞摄取外泌体效率及对细胞增殖、凋亡和细胞功能的影响。方法 提取Hepa1-6 Exos；透射电子显微镜和纳米颗粒分析仪鉴定外泌体形态和粒径分布；Western blot实验检测外泌体特异性蛋白；免疫荧光技术分析AML12细胞摄取外泌体效率；CCK-8和transwell侵袭实验检测外泌体对AML12细胞增殖和凋亡能力的影响；定量聚合酶链式反应（qPCR）和Western blot实验分析外泌体对AML12细胞功能的影响。结果 Hepa1-6 Exos呈茶托样形态，粒径为50～200 nm，表达特异性蛋白CD9、CD63和TSG101。AML12细胞可高效摄取Hepa1-6 Exos。与正常AML12细胞对照组相比，Hepa1-6 Exos可促进AML12细胞增殖，24 h、48 h、72 h细胞增殖率分别为（10.15±0.91）%、（16.61±1.56）%、（28.57±1.53）%（均P <0.05）；与正常AML12细胞对照组相比，...     

MDA-MB-231细胞在乏氧条件下通过外泌体传递miR-221、miR-222增强乳腺癌细胞侵袭和迁移能力

目的探讨乳腺癌细胞MDA-MB-231在乏氧条件下分泌的外泌体对肿瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法利用差速离心法分离外泌体,并通过动态光散射和透射电镜对外泌体的粒径、形态进行表征。通过对外泌体进行PKH26染色,进而观察肿瘤细胞对外泌体的摄取情况。应用qRT-PCR法检测肿瘤细胞及外泌体中miR-221、miR-222的含量。Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力。Western blot法检测MDA-MB-231细胞中上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和vimentin)的表达。结果MDA-MB-231细胞经乏氧处理后,其侵袭和迁移能力增强,并且N-cadherin和vimentin的表达上调;乏氧处理的肿瘤细胞分泌的外泌体通过传递miR-221、miR-222,促进MDA-MB-231细胞的EMT进展。结论MDA-MB-231细胞在乏氧条件下,可以通过外泌体传递miR-221、miR-222增加癌细胞侵袭和迁移能力。     

自然杀伤细胞来源外泌体的miR-30e-3p抑制人食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭

目的 研究自然杀伤(NK)细胞来源外泌体的miR-30e-3p对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 从健康供体的外周血中分离和扩增NK细胞，并分离NK细胞外泌体(EXO)进行鉴定。NK细胞外泌体与NEC细胞进行共培养，随机分为Exo1和Exo2组。采用透射电子显微镜观察外泌体形态及大小。Western blot法检测外泌体凋亡相关基因2相互作用蛋白X(ALIX)、抗肿瘤易感基因101(TSG101)、 CD81、钙联蛋白(calnexin)表达。将miR-30e-3p模拟物(miR-30e-3p mimic)、 miR-30e-3p抑制物(miR-30e-3p inhibitor)及阴性对照(miR-NC)转入NK细胞，并分离相应的外泌体与NEC细胞进行共培养。CCK-8法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期，异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡，Transwell^TM侵袭实验检测细胞侵袭能力。实时定量PCR检测NCE细胞和外泌体中miR-23b、 miR-422a、 miR-133b、 miR-124、 miR-30e...     

VEGF在不同类型子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）在不同类型子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测18例正常孕妇（对照组），36例子痫前期患者（子痫前期组，其中轻度子痫前期患者18例，重度子痫前期患者18例）胎盘组织中VEGF的表达强度。结果VEGF主要表达于胎盘绒毛滋养细胞；重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞VEGF表达强度明显低于对照组及轻度子痫前期患者（P＜0．05），而轻度子痫前期患者与对照组比较，无显著性差异（P＞0．05）。结论VEGF在胎盘中主要由绒毛滋养细胞分泌，子痫前期患者VEGF分泌减少，尤其是重度子痫前期的患者,这可能是引起局部胎盘绒毛及血管痛变的原因。     

微小RNA-195-5p通过调控LRP6抑制滋养细胞增殖和转移

目的 探讨微小RNA-195-5p对滋养细胞HTR-8/SVneo增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 体外培养滋养细胞HTR-8/SVneo,将miR-195-5p模拟物转染进滋养细胞HTR-8/SVneo中,实时定量PCR方法检测各组细胞miR-195-5p和LRP6 mRNA的表达,CCK-8方法检测HTR-8/SVneo细胞增殖能力,Transwell实验检测HTR-8/SVneo细胞迁移和侵袭能力。结果 miR-195-5p模拟物可显著促进HTR-8/SVneo细胞中miR-195-5p的表达,并抑制LRP6 mRNA的表达(P<0.05);双荧光素酶实验表明miR-195-5p可直接靶向LRP6;转染miR-195-5p模拟物后,HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭能力降低。结论 miR-195-5p可能通过抑制LRP6表达抑制HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭。