水通道蛋白3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的: 繁殖和鉴定水通道蛋白3(AQP-3)基因敲除小鼠。方法: 将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每种基因型小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,将其雄性纯合子与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果: AQP-3杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论: 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得AQP-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

Alk-SMase基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的 :为了繁育和鉴定碱性鞘磷脂酶(Alkaline sphingomyelinase,alk-SMase)基因敲除小鼠,将引进的基因敲除小鼠进行饲养繁殖,杂合子、纯合子用于继续保种。方法:对其幼鼠剪尾提取基因组DNA,采用PCR方法进行基因型鉴定;取alkSMase表达组织做HE染色进行形态学比较。结果 :对引进小鼠已成功饲养和繁殖,并得到纯合alk-SMase基因缺失型小鼠。结论:正确的饲养、繁殖及基因鉴定方法对于基因敲除小鼠的获得和保种具有重要的意义。     

Nrf2基因敲除小鼠的饲养繁殖及基因型鉴定

目的 繁殖和鉴定Nrf2基因敲除小鼠.方法 将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功的子代有3种基因型小鼠,即野生型、杂合子以及纯合子小鼠,从繁殖成功的小鼠尾巴中提取基因组DNA,用PCR法鉴定小鼠的基因型.结果 Nrf2杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得Nrf2基因敲除纯合子小鼠的有效途径.     

鞘氨醇激酶2(SphK2)基因敲除小鼠繁殖及基因型鉴定

目的 繁殖和快速鉴定鞘氨醇激酶2(SphK2)基因敲除小鼠.方法 将SphK2敲除杂合子小鼠进行配种繁殖,提取子代小鼠尾部DNA,用PCR方法检测子代小鼠基因型.结果 SphK2杂合子小鼠的饲养及繁殖均获得成功,获得子代小鼠,基因型分别为杂合子(SphK2+/-)、纯合子(SphK2-/-)和野生型(SphK2+/+).结论 SphK2基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,为进一步研究SphK2生物学功能提供了理想的动物模型.     

水通道蛋白1基因敲除小鼠的饲养繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖和基因型鉴定水通道蛋白1（aquaporin-1，AQP-1）基因敲除小鼠。方法 将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖，繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型，提取每只小鼠尾部基因组DNA，用PCR法进行鉴定，一旦获得雄性纯合子，将其与雌性杂合子交配，依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果AQP-1基因敲除杂合子小鼠的饲养和繁殖及鉴定均获得成功，并得到较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从亲代杂合子小鼠中获得AQP-1基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

SRC-3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的繁殖和鉴定SRC-3基因敲除小鼠.方法将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雄性纯合子,就将其与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠.结果SRC-3杂合子小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠.结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得SRC-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径.     

类固醇受体辅活化子-1基因敲除小鼠的繁殖与筛选

目的 繁殖和鉴定SRC-1基因敲除小鼠.方法 将所引进的雄性野生型小鼠和雌性SRC-1基因敲除小鼠进行交配繁殖,繁殖成功后其子代均为杂合子,杂合子和杂合子再交配就可以得到野生型、杂合型及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雌性和雄性纯合子,其子代就均为纯合子.结果 SRC-1小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦成功获得了较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及筛选方法,可以获得较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.     

NLRP3基因敲除小鼠的繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖及鉴定NLRP3基因敲除（NLRP3^-/-）小鼠。方法 将引进的NLRP3基因敲除杂合子小鼠,单独进行饲养及配种繁殖,繁殖后其子代出现3种基因型：野生型、杂合子型及纯合子型,提取每只小鼠的基因组DNA,用PCR和T7E1酶切方法进行鉴定,将获得的纯合子小鼠与异性杂合子交配,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠。结果 NLRP3杂合子小鼠的饲养及繁殖均获得成功,获得了NLRP3基因敲除纯合子和杂合子小鼠。结论 正确的饲养、繁殖及鉴定方法是从NLRP3基因敲除杂合子小鼠中获得纯合子小鼠的有效途径。     

Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型鉴定及繁育方法研究

目的 探讨小凹蛋白-1（Caveolin-1）基因敲除小鼠的鉴定方法与最优繁育方式，为深入研究Caveolin-1在脑缺血损伤修复中的作用提供理想的动物模型。方法 将引进的Caveolin-1基因敲除小鼠饲养于SPF级实验室，煮沸裂解法提取鼠尾组织基因组DNA，根据美国杰克逊实验室（Jackson Laboratory）提供的引物序列进行PCR反应检测其基因型，采用Caveolin-1+/-杂合子互交、杂合子与Caveolin-1-/-纯合子杂交（正交及反交）、纯合子互交4种不同的交配方式，观察亲代小鼠的受孕率、子代小鼠的外形特征及纯合率。结果 琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量大小约200bp和661bp，与预期的目的基因片段分子量大小一致，成功鉴定了Caveolin-1基因敲除小鼠的不同基因型；不同交配方式的繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律，且雌性、雄性Caveolin-1-/-纯合鼠具有一定的繁殖能力，三种不同基因型小鼠的外形特征无明显差异。结论 煮沸裂解法提取基因组DNA、PCR法能够快速可靠鉴定Caveolin-1基因敲除小鼠的基因型；Caveolin-1杂合子小鼠互交与纯合子互交相结合的繁育方法可能是短期内获得足量纯合子子鼠与同源野生子鼠的较好方式。     

利钠肽受体-A基因敲除小鼠的繁育与鉴定

目的:繁殖和鉴定NPR-A基因敲除小鼠.方法:将所引进的雄性野生型和雌性NPR-A基因敲除杂合子小鼠进行交配繁殖,可以得到野生子、杂合子及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行基因型鉴定.结果:NPR-A基因敲除小鼠的饲养和繁殖均获得成功,成功获得了较多的NPR-A基因敲除纯合子小鼠.结论:雌、雄性NPR-A基因敲除杂合子小鼠交配是繁育NPR-A基因敲除纯合子子鼠的较好方法;用PCR方法能够精确鉴定NPR-A基因敲除纯合子子鼠.     

ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定

饲养并繁殖酸敏感离子通道1(ASIC1)基因敲除杂合子小鼠,提取小鼠尾部组织DNA,采用聚合酶链反应( PCR)方法鉴定子代小鼠基因型. ASIC1 基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,子代小鼠基因型分别为杂合子( ASIC1+/-)、纯合子( ASIC1-/ -)和野生型( ASIC1+/ +).     

支架蛋白JLP基因敲除小鼠的构建及其肾脏表型的初步观察

目的 繁殖和鉴定支架蛋白JLP基因敲除小鼠,对其肾脏表型进行初步观察。方法 将JLP基因敲除杂合小鼠进行配种繁殖,提取子代小鼠的组织DNA,用PCR技术检测小鼠的基因型,并用Western blot法验证基因敲除效果。通过PAS病理染色等观察肾脏微观结构。结果 成功繁殖并获得子代小鼠,子代小鼠有3种基因型,包括纯合子（JLP+/+、JLP-/-）和杂合子（JLP+/-）。PCR检测基因型的方法方便且结果准确。结论 笔者成功建立了JLP基因敲除小鼠模型,能够进一步探究发现JLP基因对生物体的作用及机制。     

Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型的鉴定及繁育方法

目的 探讨小凹蛋白-1(caveolin-1)基因敲除小鼠的鉴定方法与最优繁育方式,为深入研究caveolin-1在脑缺血损伤修复中的作用提供理想的动物模型。方法 将引进的caveolin-1基因敲除小鼠饲养于SPF级实验室,煮沸裂解法提取鼠尾组织基因组DNA,根据美国杰克逊实验室(Jackson Laboratory)提供的引物序列进行PCR反应检测其基因型,采用caveolin-1^+/-杂合子互交、杂合子与caveolin-1^-/-纯合子杂交(正交及反交)、纯合子互交4种不同的交配方式,观察亲代小鼠的受孕率、子代小鼠的外形特征及纯合率。结果 琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量大小约200 bp和661 bp,与预期的目的基因片段分子量大小一致,成功鉴定了caveolin-1基因敲除小鼠的不同基因型;不同交配方式的繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌性、雄性caveolin-1^-/-纯合鼠具有一定的繁殖能力,三种不同基因型小鼠的外形特征无明显差异。结论 煮沸裂解法提取基因组DNA、PCR法能够快速可靠鉴定caveolin-1基因敲除小鼠的基因型;caveolin-1杂合子小鼠互交与纯合子互交相结合的繁育方法可能是短期内获得足量纯合子子鼠与同源野生子鼠的较好方式。     

应用PCR测定Cx43转基因小鼠的基因型

目的：应用聚合酶链反应(PCR)技术，检测Cx43(connexin 43)转基因小鼠的基因型。方法：采用CMV43转基因小鼠和Cx43剔除小鼠分别与野生型小鼠杂交繁殖，切取子代小鼠尾巴制备DNA，应用PCR技术扩增DNA，观察目的基因的阳性率。结果：CMV43转基因小鼠子代66个，dhfr PCR检测阳性率为31．8％。Cx43基因剔除小鼠子代21个，分别与Cx43野生型引物和Cx43剔除引物进行PCR，两者均阳性( ／ )12个，百分率为57．1％，前者阳性而后者阴性(杂合子 ／-)7个，百分率为33．3％，两者均阴性(纯合子-／-)2个，百分率为9．6％。野生型小鼠经Cx43野生型引物PCR检测结果均为阳性。结论：PCR技术用于Cx43转基因小鼠基因型的检测敏感度高，特异性强，易操作，可用作Cx43转基因小鼠心血管畸形模型研究的初选方法。     

IL-2基因敲除小鼠的饲养繁育及基因型鉴定

目的繁殖和鉴定白介素2(IL-2)基因敲除小鼠。方法将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,提取子代小鼠尾部DNA,用PCR方法检测子代小鼠基因型。结果子代小鼠基因型分别为杂合子(IL-2+/-)、纯合子(IL-2-/-)和野生型(IL-2+/+)。结论 IL-2基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,为进一步研究IL-2缺失如何影响机体免疫功能提供了必要条件。     

碱性鞘磷脂酶基因剔除鼠的基因型和表型特征

目的：阐明碱性鞘磷脂酶(Alkaline sphingomyelinase, alk-SMase) 基因剔除小鼠的背景特征,为研究alk-SMase在结肠癌发生发展中的作用提供动物模型的实验数据。方法: 将野生型（WT, / ）、杂合子( /-)、纯合子（KO,-/-）alk-SMase基因剔除小鼠剪尾提取DNA,PCR法作基因型鉴定;取其肝肠组织进行HE染色、激光共聚焦分析以及质谱仪检测,观察和分析不同基因型鼠的表型特征。结果: 与WT和杂合子比较,KO鼠显示：外观和体重无明显区别;基因型鉴定出现一个条带,其分子量为247bp; 小肠粘膜明显增厚,但alk-SMase表达减弱;质谱分析显示在肠道和肝脏中的鞘磷脂含量增高,1-磷酸鞘氨醇含量增加,而神经酰胺含量降低。结论: alk-SMase KO鼠有明显特征,但其外观和体重与其他基因型比较没有明显区别,这为研究alk-SMase的生物功能提供了一个理想的动物模型。 【关键词】碱性鞘磷脂酶;基因剔除小鼠;基因型;表型     

Connexin43基因缺陷新生小鼠心脏组织病理学研究

目的观察不同程度Connefin43基因缺陷对新生小鼠心脏发育的影响。方法采用Cx43基因敲除(Cx43 KO)和CMV43^CT两种Cx43基因缺陷的小鼠模型,聚合酶链反应鉴定基因型。然后将新生小鼠心脏分离固定,HE染色观察心脏的形态结构。普通C57BL6／SJ小鼠作为对照。结果所有11只纯合型Cx43 KO小鼠生后1d内均死亡,心脏表现为严重右室流出道梗阻。在20只纯合型CMV43^CT新生小鼠中,有12只生后2d内死亡,其心脏不仅表现有右室流出道梗阻,还出现了房间隔缺损、室间隔缺损等其他心脏畸形;而另外8只未见心脏异常。所有杂合型Cx43 KO和CMV43^CT基因缺陷的小鼠生后均存活,心脏病理学检测未见异常。结论Cx43基因缺陷与心脏发育异常有密切的关系,但不同类型和不同程度的Cx43基因功能缺失对心脏发育的影响也不尽相同。     

BAMBI基因敲除小鼠的繁育、基因型鉴定

目的 探讨BAMBI-/-小鼠的繁殖和鉴定方法,筛选出足够数量的BAMBI-/-小鼠,为研究BAMBI基因在肥胖、能量代谢等方面的生理功能提供实验动物.方法 将引进的2对BAMBI-/-小鼠扩繁后,以与背景品系C57BL/6J野生型（WT）回交的方式获得BAMBI＋/-小鼠,再将BAMBI＋/-小鼠进行互交大量繁殖.提取幼鼠尾部组织DNA,利用PCR方法鉴定基因型;选取BAMBI-/-小鼠取肩胛部位棕色脂肪组织（BAT）,腹股沟部位皮下白色脂肪组织（sWAT）,性腺周围白色脂肪组织（gWAT）和肝脏,利用实时PCR方法检测BAMBI mRNA的表达量.结果 BAMBI＋/-小鼠互交扩繁,短期能获得大量小鼠;C57BL/6J野生型（WT）、BAMBI＋/-和BAMBI-/-各表型结果基本符合孟德尔遗传规律;BAMBI-/-小鼠敲除效率理想.结论 BAMBI＋/-小鼠互交是繁育BAMBI-/-小鼠的较好方法;PCR方法能够准确鉴定BAMBI-/-小鼠.     

5-羟色胺转运体敲除小鼠在应激下焦虑行为和HPA轴的改变

目的研究5-羟色胺转运体(serotonin transporter,SERT)敲除小鼠焦虑行为及ACTH和皮质酮分泌变化。方法将基因型为SERT+/-的雌雄小鼠交配产子,并把鉴定后子代小鼠按基因型(SERT+/+、SERT+/-、SERT-/-)分为对照组和EPM组,每组15只。利用高架十字迷宫作为应激原刺激小鼠,观察各组小鼠的焦虑行为,并测定各组小鼠的ACTH和皮质酮分泌。结果①基因型PCR成功鉴定SERT+/+、SERT+/-和SERT-/-的小鼠。②SERT+/-和SERT-/-小鼠的开臂停留时间、开臂停留时间百分比、进入开臂的次数和进入开臂的次数百分比较SERT+/+均显著降低(P<0.05,P<0.01)。③EPM刺激下,SERT+/-和SERT-/-小鼠ACTH分泌的增加显著高于SERT+/+(P<0.05),SERT-/-小鼠皮质酮分泌的增加显著高于SERT+/+(P<0.05)。结论 SERT敲除小鼠在应激条件下易产生焦虑,并且ACTH和皮质酮分泌显著升高。