壳寡糖修饰多聚半乳糖醛酸酶优化条件研究

以水溶性低分子量壳寡糖作为修饰剂对已纯化的多聚半乳糖醛酸酶进行化学修饰,通过单因素试验和正交试验探讨pH值、温度、修饰时间、壳寡糖的用量等因素对修饰效果的影响和最佳修饰条件的优化筛选.结果表明,通过正交试验筛选出最佳修饰反应条件为:80 mg活化的多聚半乳糖醛酸酶,反应体系中pH为4.0,反应温度为3℃,反应时间为12h,壳寡糖用量为150 mg,修饰效果最佳.利用此条件对多聚半乳糖醛酸酶进行化学修饰具有显著的激活作用,修饰后酶的比活力是340.10 U/mg protein,比修饰前提高了153.42％.     

酚类物质对哈密瓜两种主要致腐病原产生的细胞壁降解酶活性的影响

本研究表明引起哈密瓜采后腐烂的两种主要致腐性病原,匍枝根霉(Rhizopusstolonifer)、半裸镰刀菌(Fusariumsemitecum),在诱导培养基上均能产生多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶甲酯酶(PME)和纤维素酶(Cellulase)。其中Rhizopusstolonifer所产的这两种果胶酶类多聚半乳糖醛酸酶与果胶甲酯酶的活性均比Fusariumsemitecum所产的多聚半乳糖醛酸酶与果胶甲酯酶的活性高。而F.semitecum所产的纤维素酶活性比R.stolonifer产的酶活高。邻苯二酚、对苯二酚、对羟基苯甲酸丁酯均能明显地降低R.stolonifer与F.semitecum产生多聚半乳糖醛酸酶,果胶甲酯酶与纤维素酶的能力,并且这些酚类物质对这些酶的活性也有明显的抑制作用。培养基中加入1%果胶或1%的羧甲基纤维素钠(CMC),则均能诱导病原菌产酶,且酶活性不同。其中果胶在诱导病原物产生多聚半乳糖醛酸酶、果胶甲酯酶方面特别显著,果胶与CMC在诱导病原菌产纤维素酶方面差别不大。     

秦薯5号甘薯营养成分测定及贮前低温处理对贮藏品质的影响

为防止秦薯5号甘薯贮藏冷害,延长贮藏期,保持贮后优良品质,测定了其主要营养成分,探讨了贮前2、4、6℃低温处理贮期淀粉酶、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)的活性以及还原糖、抗坏血酸、淀粉、原果胶含量的变化情况,调查了贮后商品果率,并评价了感官性状。秦薯5号甘薯贮前低温处理能有效抑制淀粉酶和多聚半乳糖醛酸酶的活性,使超氧化物歧化酶活性处于较高水平,减缓抗坏血酸、淀粉、原果胶含量的下降速率,防止淀粉向还原糖转化,延缓采后生理衰老过程。秦薯5号甘薯采后愈伤5 d,用4℃低温处理2 d,11℃下贮藏210 d后,商品果率达90%,品质优良。     

生物酶对半乳糖醛酸的降解作用

用GC-MS总离子流色谱图来比较半乳糖醛酸在分别经漆酶、果胶酶和木聚糖酶处理前后量的变化,结果发现,用漆酶、果胶酶或木聚糖酶处理后的试样,半乳糖醛酸峰完全消失。用颗粒电荷测定仪测定阳离子需求量,来确定3种不同酶对半乳糖醛酸的作用,结果表明,漆酶或果胶酶处理后的半乳糖醛酸试样阳离子需求量分别下降了91.9%和96.9%,木聚糖酶处理样的阳离子需求量较半乳糖醛酸空白样有所升高,若将木聚糖酶的阳离子需求量扣除,半乳糖醛酸的去除率仍达到84.2%。     

李果实褐腐病病原菌产生细胞壁降解酶条件优化及其致病机理

研究李果实褐腐病病原菌产生细胞壁降解酶的种类及其产酶最佳条件,并探讨其导致果实发病的作用机制。以Monilinia fructicola为研究菌株,通过单因素试验和正交试验优化M.fructicola产生细胞壁降解酶条件;通过损伤接种粗酶液,研究其对李果实的致病作用。结果表明:M.fructicola产细胞壁降解酶的最佳条件为:培养时间6 d、培养基pH 6.0、碳源为3.5%蔗糖、氮源为2.5%硝酸钾;粗酶液处理能够导致李果实发生褐腐病,同时引起果实多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(pectin methylgalacturonase,PMG)活力的上升,使果实原果胶物质转化为可溶性果胶,同时造成其纤维素含量下降,加速果实的软化腐烂进程。     

细胞壁组分及酶活性与清见果实囊衣绵韧的相关性

以清见杂柑为研究材料,进行定点和定期的跟踪测定,探究清见果实囊衣中果胶类物质、纤维素、半纤维素、木质素含量和果胶甲酯酶、多聚半乳糖醛酸酶、纤维素酶活性在花后120～300 d的动态变化情况,及其与清见果实囊衣绵韧程度的相关性。结果表明：囊衣胞壁物质含量在成熟后期均有下降,多聚半乳糖醛酸酶和纤维素酶活性在后期处于上升趋势,果胶甲酯酶则相反;较高水平的水溶性果胶和低水平的木质素、纤维素、半纤维素有利于清见果实良好化渣性的形成;从花后210～300 d,细胞壁中多聚半乳糖醛酸酶、纤维素酶活性高低是决定囊衣质地绵韧程度的关键因子。     

湿冷贮藏对冬枣软化水解酶活性影响的研究

软化是冬枣贮藏中存在的主要问题之一,研究了湿冷贮藏对冬枣不溶性果胶含量和果胶甲酯酶(PME)活性、可溶性果胶含量和多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性、纤维素含量和纤维素酶(Cx-cellulases)活性、淀粉含量和淀粉酶活性的影响。结果表明:湿冷贮藏可以延缓冬枣不溶性果胶含量、淀粉含量、PG活性的下降速度,降低可溶性果胶含量、PME活性、Cx-cellulases活性、淀粉酶活性的上升速度,而纤维素含量则表现为先慢后快的增长规律。     

冷激对贮藏银杏多聚半乳糖醛酸酶的影响

以银杏(Ginkgo bllba L.)为材料,以0℃冰水混合物为冷却介质,研究了不同冷激处理(1h,2h,3h,4h)对贮藏期间多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性的影响。结果表明：冷激能显著抑制PG活性,抑制程度随冷激处理时间的延长而加。     

湿泠贮藏对冬枣软化水解酶活性影响的研究

软化是冬枣贮藏中存在的主要问题之一，研究了湿冷贮藏对冬枣不溶性果胶含量和果胶甲酯酶(PME)活性、可溶性果胶含量和多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性、纤维素含量和纤维素酶(Cx-cellulases)活性、淀粉含量和淀粉酶活性的影响。结果表明：湿冷贮藏可以延缓冬枣不溶性果胶含量、淀粉含量、PG活性的下降速度，降低可溶性果胶含量、PME活性、Cx-eellulases活性、淀粉酶活性的上升速度，而纤维素含量则表现为先慢后快的增长规律。     

低温贮藏期间‘长富2’果实细胞壁酶及基因表达的变化

以‘长富2’苹果为实验材料,测定冷藏(1~4℃)期间果实多聚半乳糖醛酸酶(poly galacturonase,PG)、β-半乳糖苷酶(β-Gal)活性及基因表达变化,同时分析果实硬度、可溶性固形物(soluble solid content,SSC)、可滴定酸和还原糖含量。结果表明,果实的硬度和可滴定酸持续下降且变化显著;SSC和还原糖含量在贮藏前期有少量增加后缓慢下降;PG活性及Md PG1、Md PG2表达量均增加,PG活性和Md PG2表达量均在120 d达到峰值,Md PG1表达量在60 d达到最大值。β-Gal活性持续增加,与果实硬度呈显著负相关;Md GAL1和Md GAL2表达量在60 d之前增加,60 d以后迅速下降。总体上,PG和β-Gal基因表达先于酶活增加,对两种酶活性变化有重要作用。     

沙苑子提取物中多酚含量的测定

研究Folin-Ciocalteu 比色法测定沙苑子中多酚含量的优化条件,并以优化的条件测定沙苑子不同溶剂提取物中多酚的含量。结果表明：Folin-Ciocalteu 显色剂(经稀释10 倍)用量1.00mL、7.5g/100mL Na2CO3 用量3.00mL、反应温度25℃、反应时间120min、测定波长647nm 为沙苑子中多酚含量测定的最佳条件,所用没食子酸标准品在10～100μg/mL 范围内与吸光度呈良好的线性关系(y=0.0081x － 0.0249,R2=0.9996);沙苑子甲醇、乙醇和丙酮溶液提取物的质量浓度为1g/100mL 左右时较适合测定其多酚的含量。     

气调贮藏对草莓细胞壁酶活性的影响

以草莓为材料,研究不同气体成分处理及冷藏对果实纤维素酶(CS)、果胶甲酯酶(PE)及多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性的影响。结果表明,0%O2+10%CO2处理增强了果实CS、PE和PG活性;11%O2+10%CO2处理亦增强了果实PE和PG活性,其对低温贮藏果实CS活性的影响不显著,但增强了货架果实的CS活性;3%O2+5%CO2处理对低温贮藏果实CS和PG活性的影响不显著,而导致货架期CS和PG活性增强,但显著降低了果实的PE活性。说明0%O2+10%CO2处理加快果实软化与其诱导果实CS、PE和PG活性升高有关,3%O2+5%CO2处理主要是通过抑制PE活性而减缓果实的软化进程。     

酸橙内生菌Bacillus thuringiensis Bt028几丁质酶的分离纯化及其酶学性质

为揭示酸橙内生菌Bacillus thuringiensis Bt028几丁质酶的基本酶学性质,采用离心、硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶G-100层析及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法对菌株Bt028发酵液中的几丁质酶进行分离纯化鉴定,并考察该几丁质酶的最适温度、最适pH、催化动力学参数等性质。结果表明,Bt028菌株发酵液经离心、硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶G-100层析分离纯化后获得电泳纯几丁质酶比活力为681.78 U/mg,纯化倍数为3.21,回收率15.52%。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,几丁质酶的分子质量为65 kDa。酶学性质研究结果表明,该酶的最适反应温度为60 ℃,最适反应pH为6.5,在温度低于60 ℃、pH5.5~7.5时有较好的稳定性;Mg2+、Ca2+、Hg2+、Co2+对该酶活力有抑制作用,而Cu2+和Fe3+有一定的促进作用;低浓度的甲醇、乙醇、正丙醇和二甲亚砜使酶的活性增加,但当浓度继续增大,反而会抑制酶的活性;丙酮对几丁质酶有激活作用,而甲醛对几丁质酶有抑制作用。在最适催化条件下,几丁质酶催化反应的米氏常数Km、最大反应速率Vmax、酶的转换数Kcat分别为29.533 mg/mL、108.696 μmoL/(L·min)和0.527/min。研究结果可为该酶的实际应用提供必要的工艺参数。     

Pectolytic Enzymes in Sweet Bell Peppers (Capsicum annuum L.)

Low levels of polygalacturonase (PG) and pectinesterase (PE) activities were quantitated in sweet bell peppers at four stages of maturity based on surface ground color (dark green, light green, turning, and red). The PG activity increased during pepper ripening and was maximal at the turning stage while the PE activity declined during ripening and was maximal at the light green stage. Pepper texture measurements were found to decline concomitantly with the increase in PG activity. Pepper PG showed pH optimum between 4.8 to 5.0 and increased temperature stability with advanced ripening. Compared to tomatoes, pepper PG activity was 116- to 164-fold lower and pepper PE activity was 429- to 1900-fold lower than the corresponding tomato enzymes.     

黄色洋葱皮不同溶剂多酚提取物的总酚、总黄酮含量及抗氧化活性

以黄色洋葱皮为原料,分别利用70%甲醇、70%乙醇和70%丙酮作为提取溶剂进行多酚类物质提取。测定提取物中的总酚含量、总黄酮含量并研究其抗氧化活性(DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力以及铁还原能力)。研究结果显示:利用甲醇作为提取剂所得的多酚类物质提取率最高(12.35%),并且提取物中总酚和总黄酮含量最高,分别为83.17、34.31 mg/g。同时,甲醇提取物对DPPH自由基和ABTS自由基的半抑制浓度IC₅₀分别为0.059和0.031 mg/mL,低于抗坏血酸而高于乙醇提取物和丙酮提取物。     

SRE处理对采后番茄贮藏效果的影响

研究乙醇的新型固体缓释剂(slow-release ethanol,SRE)对采后番茄贮藏效果的影响。以番茄‘粉太郎’为试材,破色期采收,在20℃、相对湿度85%的条件下贮藏,用SRE处理,以不做任何处理为对照,测定番茄贮藏期间品质特性、乙烯释放量及多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)和纤维素酶活性。结果表明:SRE处理可以提高果实亮度,延缓果实质量损失率降低,减少可溶性固形物含量损失,保持一定硬度,同时提高了果实贮藏后期糖酸比,比对照果实延缓变红6 d。SRE处理显著降低乙烯释放量和PG、纤维素酶活性。综上,SRE处理可以延缓采后番茄果实成熟衰老,从而延长货架期,使番茄更长久保持风味品质。     

油茶蒲不同溶剂粗提液的总黄酮提取率与抗氧化活性比较

为探索油茶蒲的有效利用途径,采用各具5个体积分数梯度的5种有机溶剂对油茶蒲进行超声辅助浸提而得到25种粗提液,研究比较了各粗提液的总黄酮提取率和清除DPPH·的能力。结果表明:总黄酮提取率最高的5种溶剂及其对应的总黄酮提取率依次是60%丙酮溶液(6. 28%)、60%乙醇溶液(5. 24%)、80%甲醇溶液(4. 82%)、60%1,3-丁二醇溶液(4. 40%)、60%乙酸乙酯-乙醇溶液(4. 13%);清除DPPH·能力最强的5种粗提液及其对应的清除率依次是100%乙醇溶液提取物(92. 78%)、60%乙酸乙酯-乙醇溶液提取物(92. 69%)、100%1,3-丁二醇溶液提取物(89. 68%)、100%甲醇溶液提取物(86. 54%)、100%丙酮溶液提取物(81. 99%)。黄酮提取率最高的油茶蒲提取物所对应的DPPH·清除能力并不是最强的,说明油茶蒲提取物中除了黄酮以外,可能还有多酚、皂素、多糖等其他抗氧化活性成分。适合油茶蒲黄酮利用的最佳提取剂是60%乙酸乙酯-乙醇溶液,总黄酮提取率达4. 13%,所对应提取物对DPPH·清除率达92. 69%,是一种适应工业化开发利用油茶蒲黄酮的理想溶剂。     

茄子果实采后软化过程中细胞壁组分及其降解酶活性的变化

研究了细胞壁组分及其降解酶活性的变化与茄子果实采后软化的关系。结果表明,采后茄子果肉硬度随贮藏时间的延长而不断下降。贮藏期间果肉水溶性果胶(WSP)含量在贮藏前12天不断增加,之后快速下降,而共价结合型果胶(CSP)、半纤维素和纤维素等细胞壁组分含量持续减少。果肉果胶甲酯酶(PME)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)和纤维素酶(CX)活性均呈先升高后下降趋势,分别在贮藏至第6、9、12天达到最大值;β-半乳糖苷酶(β-Gal)活性始终保持较高水平,且在整个贮藏期间活性变化不明显。相关性分析结果表明,CSP、半纤维素和纤维素的降解与采后茄子果实软化密切相关,PG和CX在茄子果实采后软化过程中起着重要的作用。     

Lessening polygalacturonase activity in a commercial enzyme preparation by exposure to pulsed electric fields

The effect of high-intensity pulsed electric field (HIPEF) treatments on polygalacturonase (PG) activity in an aqueous solution of a commercial enzyme preparation was evaluated. HIPEF treatments reduced PG activity notably. Exponentially decaying pulses of 40 and 160 µs generated by a laboratory scale device were applied in a batch processing and bipolar mode. Electric fields ranged from 5.18 to 19.39 kV/cm. The number of pulses ranged up to 400. Temperature was always below 25 °C. Maximum inactivation of PG activity (98%) required 32.4 ms HIPEF treatment at 10.28 kV/cm. PG activity depleted exponentially because of HIPEF treatments. The first order rate constants ranged from 32 to 590 µs ^-1 and increased exponentially with electric field intensity. PG activity decreased exponentially with input electric energy density.     

葡萄籽中原花色素提取条件的研究

本研究采用甲醇、乙醇、丙酮、水四种溶剂作为提取剂从葡萄籽中提取原花色素。实验结果表明丙酮提取效果最佳。然后,通过对各影响因素所做的单因素试验,在正交试验基础上,运用极差分析法确定出丙酮提取原花色素的最佳条件为:提取温度60℃,丙酮浓度50%,提取时间60min,料液比为1:6。