鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏的保护作用

目的观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化实验大鼠肾脏的保护作用并探讨其作用机理。方法采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾梗阻模型,将其随机分为缬沙坦组、鳖甲煎丸组与模型组,并设假手术组。观察梗阻侧肾脏肾上腺髓质素(ADM)在蛋白及基因水平的表达,并测定其在肾组织中蛋白含量。结果模型组及各治疗组大鼠肾脏中肾上腺髓质素组织蛋白含量、蛋白表达以及mRNA的基因表达较假手术组明显降低,鳖甲煎丸组、缬沙坦组的含量及表达均高于模型组(P<0.05?,但两组之间比较无显著性差异。结论鳖甲煎丸能够明显上调肾间质纤维化大鼠肾脏ADM的蛋白及mRNA的表达,对肾脏起到保护作用。     

鳖甲煎改良方含药血清对肝星状细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的 探讨鳖甲煎改良方含药血清对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)-T6增殖、周期及凋亡的影响.方法 分别用高剂量[28.4 g/(kg·d)]、中剂量[14.2g/(kg·d)]与低剂量[7.1 g/(kg·d)]的鳖甲煎改良方及与鳖甲煎改良方高剂量相同剂量的鳖甲煎丸灌胃大鼠以制备含药血清.将等体积不同剂量的鳖甲煎改良方含药血清分别处理HSC-T6细胞,以等体积鳖甲煎丸含药血清处理的细胞为阳性对照组,生理盐水处理的细胞为空白对照组,正常大鼠血清处理的细胞为正常对照组.CCK-8检测不同处理组HSC-T6细胞的增殖情况,并绘制其增殖曲线;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测经不同处理的HSC-T6细胞的周期,Annexin V-PI染色法检测其凋亡;在mRNA及蛋白水平分别检测经不同处理的HSC-T6细胞的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)基因及其编码蛋白的表达变化.结果 CCK-8检测结果显示,鳖甲煎改良方含药血清对HSC-T6细胞增殖具抑制作用,高剂量与中剂量组的增殖速度慢于正常对照组、阳性对照组和空白对照组(P ＜0.05,P＜0.01),且该抑制作用呈剂量-效应关系.FCM检测证实,鳖甲煎改良方含药血清可将HSC-T6细胞阻滞于S期,能诱导HSC-T6细胞的凋亡,与正常对照组比较,其凋亡诱导率差异具有统计学意义(P＜0.01).mRNA与蛋白水平检测结果显示,与空白对照组和阳性对照组比较,高剂量组能在基因与蛋白水平显著下调HSC-T6细胞PCNA的表达.结论 鳖甲煎改良方含药血清能明显抑制HSC-T6细胞的增殖,诱导HSC-T6细胞的凋亡,并能下调其PCNA基因及其编码蛋白的表达.     

霉酚酸酯对大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的: 探讨霉酚酸酯(MMF)在肾间质纤维化模型大鼠中的肾脏保护作用及其可能的作用机制.方法: 采用单侧输尿管结扎(UUO)致大鼠肾间质纤维化.将大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、霉酚酸酯治疗组.手术后第9天处死各组大鼠,分别经免疫组织化学方法观察各组大鼠肾组织的血小板源性生长因子-B(PDGF-B)的表达部位、表达水平及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.Masson染色评定各组肾小管间质损害程度.结果: 模型组PDGF-B,α-SMA,PCNA的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P<0.05),而霉酚酸酯组均明显低于模型组(P<0.05).各项指标作相关分析,PDGF-B与肾小管间质损伤指数(r=0.870,P<0.01),α-SMA(r=0.956,P<0.01),PCNA(r=0.881,P<0.01)呈显著正相关.结论: PDGF-B在肾小管间质纤维化的病程进展中起重要促进作用,霉酚酸酯则可能通过下调PDGF-B的表达减轻肾小管间质纤维化.     

金匮肾气丸对大鼠肾脏纤维化的影响

目的：研究金匮肾气丸对 UUO 致肾间质纤维化大鼠模型的影响,探讨金匮肾气丸抗肾间质纤维化作用机制。方法：采用UUO 大鼠模型,将雄性 SD 大鼠75只按照3：1：1的比例随机分为治疗组（45只）、UUO 模型组（15只）、假手术组（15只）。治疗组用金匮肾气丸配成溶液,按照高剂量、中剂量、低剂量分为治疗1组、2组、3组灌胃。灌胃后第7天、第14天、第28天取血液标本,测血肌酐、尿素氮,同时分别处死5只大鼠,取结扎侧肾组织,免疫组织化学技术检测各组大鼠肾脏中单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）、α-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）和细胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达。结果：UUO 造模后肾间质 MCP-1、α-SMA、PCNA 表达明显增加,使用金匮肾气丸治疗后大鼠肾间质 MCP-1、α-SMA、PCNA 表达较 UUO 模型组显著减少（P ＜0．05）。结论：金匮肾气丸可通过降低 MCP-1、α-SMA 和 MCP-1表达,减轻肾间质纤维化。     

UUO模型大鼠肾间质纤维化动态进展及α-SMA、TGF-β1和VDR表达变化

目的 观察单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管间质纤维化动态进展,研究该病理过程中肾脏纤维化相关蛋白表达的变化.方法 32只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(n=16)和UUO模型组(模型组,n=16).两组大鼠分别于术后(模型组建模后)第2、5、9、14天分批(n=4)处死,留取手术侧(模型组梗阻侧)肾脏组织.分别采用HE和Masson染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,评价肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、维生素D受体(VDR)及转化生长因子β1(TGF-β1)等相关蛋白的表达.结果 肾脏组织形态学观察显示,随着输尿管梗阻时间的延长,肾小管间质纤维化程度逐步加重.免疫组织化学染色显示,模型组大鼠建模后各时间点肾间质α-SMA和FN阳性面积百分比均显著高于假手术组(P＜0.05),且随着梗阻时间的延长逐渐升高,至建模后第14天时达到高峰.Western blotting分析表明,模型组大鼠建模后各时间点α-SMA和TGF-β1相对表达量均显著高于假手术组(P＜0.05),而VDR相对表达量显著低于假手术组(P＜0.05);建模后第2天,模型组大鼠肾脏组织α-SMA相对表达量已显著增加;建模后第14天,模型组α-SMA和TGF-β1相对表达量分别增高至假手术组的12.7倍和8.8倍,而VDR相对表达量下降至假手术组的3%.结论 UUO模型大鼠建模后第14天可出现显著的肾间质纤维化;建模早期肾间质中α-SMA表达增加提示肾间质成纤维细胞的活化;VDR表达的进行性减少提示其与肾间质纤维化有关.     

补肾活血方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中HGFmRNA表达变化的影响

目的:建立肾间质纤维化大鼠模型,动态观察模型大鼠肾功能、肾组织中HGFmRNA的表达变化及补肾活血方对其影响,探讨补肾活血方治疗慢性肾功能衰竭的可能作用机制.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、洛汀新组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组,除假手术组外其余大鼠采用单侧输尿管梗阻的方法建立肾间质纤维化大鼠模型;分别于UUO术后3、7、14、21、28 d观察造模大鼠血肌酐、尿素氮的动态变化;采用RT-PCR法,观察造模大鼠肾组织中肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达变化及补肾活血方对其影响.结果:与假手术组比较,造模大鼠血清肌酐、尿素氮浓度呈进行性增高,P＜0.05或P＜0.01;HGFmRNA表达于UUO术后第3天开始增加,于第14天达高峰,P＜0.05或P＜0.01,随后随时间延长表达逐渐渐弱.与模型组比较,各给药组大鼠肾功能改善,P＜0.05或P＜0.01;各时间点HGFmRNA的表达呈不同程度增加,P＜0.05或P＜0.01.结论:补肾活血方可以改善肾间质纤维化大鼠肾功能;可以提高肾组织中HGFmRNA的表达,防治肾间质纤维化.     

复方鳖甲软肝片对输尿管结扎大鼠肾组织TGF-β1蛋白及其mRNA表达的影响

目的探讨复方鳖甲软肝片对大鼠单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白及其mRNA表达的影响.方法建立UUO肾间质纤维化模型,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝片低、中、高剂量等7组.手术后4周处死大鼠,无菌取肾,制作冰冻切片,采用免疫组织化学和原位杂交方法,分别检测肾组织TGF-β1蛋白及其mRNA表达,使用图像分析系统对结果进行处理,采用SPSS11.5统计软件统计分析.结果模型组肾小管上皮细胞和肾间质其他细胞浆内,有少量的TGF-β1蛋白及其mRNA棕黄色颗粒状阳性反应物;苯那普利对照组细胞浆中棕黄色颗粒状阳性反应物明显减少,与模型组比,P＜0.01;复方鳖甲软肝片治疗组细胞浆中棕黄色颗粒状阳性反应物明显减少,不同剂量组呈剂量依赖关系,与模型组比,P＜0.01.结论 TGF-β1是导致肾间质纤维化的重要因素,复方鳖甲软肝片可以通过下调TGF-β1蛋白及其mRNA的表达,对UUO肾间质纤维化大鼠肾脏起一定的保护作用.     

黄芪当归在肾小管间质纤维化大鼠模型中的作用

目的:探讨黄芪、当归在肾间质纤维化大鼠模型中的作用及机制。方法:采用单侧输尿管结扎木(UUO)致肾间质纤维化大鼠模型,将大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、依那普利(ACEI)治疗组、黄芪当归治疗组。手术后第9天处死大鼠,经免疫组化方法观察各组大鼠肾脏平滑肌肌球蛋白(α-SMA)的表达,Masson染色评定各组肾小管间质损伤指数。结果:模型组α-SMA的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P<0.01),而ACEI治疗组、黄芪当归治疗组明显低于模型组(P<0.01),两治疗组间无显著差别(P>0.05)。结论:黄芪、当归合剂可通过抑制成肌纤维细胞的形成,在肾间质纤维化中发挥和ACEI相类似的肾保护作用。     

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1在梗阻性肾病肾间质中的表达和血竭素高氯酸盐对其的干预作用

目的 探讨在单侧输尿管梗阻(UUO)性肾病肾间质中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(serum and glucocorticoid induced kinase 1,SGK1)的表达及血竭素高氯酸盐(Dracohodin Perchlorate,DP)对其的干预作用.方法 用单侧输尿管梗阻的方法致大鼠肾间质纤维化,60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量和高剂量DP治疗组,分别在造模第3、7、14天后处死各组大鼠,采集静脉血检测肾功能(BUN、SCr)变化,肾组织标本用碘酸-席夫(PAS)染色确证发生纤维化病变,免疫组化技术检测肾组织SGK1蛋白的表达及DP干预后的变化.结果 与假手术组比较,模型组大鼠第7、14天血清BUN、SCr水平显著升高(P＜0.05),肾间质纤维化形成;与模型组比较,仅有DP高剂量治疗组大鼠血清肾功能指标好转(P＜0.05),肾间质纤维化好转.模型组大鼠肾间质SGK1蛋白的表达明显高于假手术组(P＜0.05),且随着梗阻时间延长其表达呈增强趋势;仅DP高剂量治疗组大鼠的肾间质SGK1蛋白显著低于模型组(P＜0.05).结论 在梗阻性肾病肾间质纤维化进程中,SGK1蛋白表达明显上调,而DP对SGK1蛋白的表达有显著的抑制作用,可能对肾间质纤维化病变起到一定延缓作用.     

鳖甲煎丸化裁方及其拆方对肝癌H22细胞的影响

目的探讨鳖甲煎丸化裁方及其拆方(软坚散结方、扶正方)对肝癌H22细胞增殖、侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT)的影响。方法将50只健康SD大鼠随机分为空白组,鳖甲煎丸化裁方低、中、高浓度组,软坚散结方低、中、高浓度组,扶正方低、中、高浓度组,每组5只,制备含药血清;采用CCK8法检测各组大鼠含药血清干预肝癌H22细胞12 h、24 h、48 h后的增殖影响;采用Transwell检测鳖甲煎丸化裁方及其拆方对肝癌H22细胞迁移与侵袭能力的影响;免疫荧光检测Vimentin与E-cadherin蛋白的表达,评估鳖甲煎丸化裁方及其拆方对H22肝癌细胞EMT进程的影响。结果各给药组干预12 h、24 h后,与空白组比较,鳖甲煎丸化裁方、软坚散结方、扶正方的低、中、高浓度组均可抑制H22肝癌细胞的增殖,差异有统计学意义(P 0.05)。各给药组干预48 h后,与空白组比较,除鳖甲煎丸化裁方低浓度组外,其余各组均可抑制H22肝癌细胞的增殖,差异有统计学意义(P 0.05)。与空白组比较,鳖甲煎丸化裁方高浓度组及其拆方高浓度组均可抑制H22细胞的迁移和侵袭能力,差异有统计学意义(P 0.05),与鳖甲煎丸高浓度组比较,软坚散结高浓度组、扶正高浓度组的细胞迁移和侵袭数相对较高,鳖甲煎丸高浓度组中迁移和侵袭细胞数量最少,表明鳖甲煎丸化裁方高浓度组较其拆方高浓度组抑制肝癌H22细胞的迁移和侵袭能力更明显。与空白组比较,鳖甲煎丸化裁方高浓度组及其拆方高浓度组可提高E-cadherin相对荧光表达量,降低Vimentin的表达,差异有统计学意义(P 0.05)。结论鳖甲煎丸化裁方及其拆方可抑制H22肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移及EMT的进程,鳖甲煎丸化裁方较拆方效果更显著。