补肾泻肝方对免疫介导再障模型小鼠的影响

为研究补肾泻肝方(主药：熟地黄、制首乌、补骨脂、菟丝子、淫羊藿、牡丹皮、黄连、水牛角等)治疗免疫介导再障的机理。Balb／C小鼠经^60Co5．5Gy γ射线照射后由尾静脉输入取自DBA／2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。用补肾泻肝方灌喂模型小鼠后检测外周血象、T细胞亚群，应用RT-PCR技术检测IFN-γ基因表达。结果：与模型组相比，治疗组小鼠的周围血象及CD8明显升高、IFN-γ基因高表达则明显减弱。提示：调节免疫紊乱状态、减弱再障时的IFN-γ基因高表达，进而影响造血干／祖细胞增殖、分化可能是该方治疗再障的机理之一。     

蚕沙提取物对再生障碍性贫血小鼠细胞因子影响的实验研究

目的：探讨蚕沙提取物对再生障碍性贫血的治疗作用并机制。方法：建立免疫介导的再生障碍性贫血小鼠模型，胃饲3种不同剂量叶绿素铜钠，以环孢菌素为阳性组，正常组及模型组胃饲生理水，连续15天。检测血清及骨髓α肿瘤坏死因子，γ干扰素、白介素-6含量。结果：模型组小鼠血及骨髓IFN-γ、IL-6、TNF-α水平升高，蚕沙提取物组小鼠血及骨髓IFN-γ、IL-6、TNF-α水平降低，与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：蚕沙提取物通过调节造血调控因子IFN-γ、TNF-α及IL-6的水平，改善造血功能。     

中药对免疫介导性再生障碍性贫血T淋巴细胞的实验研究

实验用Balb／c小鼠经亚致死剂量的射线照射后，输入取自DBA／2小鼠的胸腺淋巴结细胞来制作免疫介导性再障的模型。用正气活血、温补脾肾、扶正解毒中药煎出液，分别浓缩成含生药量为0．79g／ml浓度的药液灌胃，每日1次，每次0．5ml。探讨这些方药对免疫介导型再障的治疗效果和作用机理。结果表明：这些方药在不同程度上都能提高再障小鼠的TH细胞，降低TS细胞，使TH／TS比值升高，减轻免疫异常对骨髓造血细胞的抑制和损伤，有利于再障骨髓造血的修复和重建。提示了辨证论治对指导用药的重要性。     

叶绿素铜钠盐对AA模型小鼠的实验研究

目的:探讨叶绿素铜钠盐对再生障碍性贫血治疗的作用机制。方法:建立免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型,分别胃饲3种不同剂量叶绿素铜钠25,50,100 mg/(kg.d),以环孢菌素[25 mg/(kg.d)]为阳性对照组,正常对照组及模型对照组胃饲生理盐水,连续15 d。检测血清及骨髓α肿瘤坏死因子,γ干扰素、白介素-6含量。结果:免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠血及骨髓IFN-γ、IL-6、TNF-α水平升高,叶绿素铜钠盐组模型小鼠血及骨髓IFN-γ、IL-6、TNF-α水平降低。结论:叶绿素铜钠盐通过调节造血调控因子IFNγ-、TNF-α及IL-6的代谢,促进造血干/祖细胞的造血功能,从而有效治疗AA。     

复方活血汤对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血细胞粘附分子及细胞周期蛋白表达作用

目的：探讨复方活血汤（简称中药）对免疫诱导的再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓造血细胞粘附分子及细胞周期蛋白表达的作用。方法：建立免疫诱导的再障小鼠模型，喂饲１００％复方活血汤每次０２ｍｌ，每日２次，第１３日用流式细胞仪检测小鼠骨髓单个核细胞β１整合素家族（ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９，α４β１；又称ＶｅｒｙＬａｔｅＡｎｔｉｇｅｎｓ，ＶＬＡ家族）及细胞周期蛋白Ｄ２的表达水平。结果：中药组ＣＤ４９ｄ表达明显高于再障组（Ｐ＜００５），且与正常组无明显差异；中药组细胞周期蛋白Ｄ２表达明显高于再障组（Ｐ＜００１）；而其Ｇ０＋Ｇ１期细胞数显著低于再障组（Ｐ＜００１）。结论：复方活血汤能增强免疫再障小鼠骨髓造血细胞粘附分子ＣＤ４９ｄ和细胞周期蛋白Ｄ２的表达，促进造血细胞的增生。     

保元汤对再障小鼠骨髓造血细胞的刺激增殖作用

目的：观察保元汤对再障小鼠骨髓造血细胞的刺激增殖作用。方法;利用本及辐射损伤获得再障动物模型,采用半固体集落培养（CFU－GM,CFU－E、BFU－E）和液体培养（MTT）观察保元汤对再障小鼠骨髓造血细胞增殖的影响。结果：对苯及辐射所致再障小鼠,保元汤3g生药／kg体重灌胃可提高CFU－GM、CFU－E、EFU－E的产率;MTT法结果也提示,保元汤对射线损伤的小鼠骨髓具有刺激造血的作用。结论：保元汤可防治再障,其应用前景广阔。     

再障饮对免疫介导性再生障碍性贫血小鼠免疫功能的影响

目的:观察再障饮对免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠免疫功能的影响,以探讨再障饮治疗再障的作用机理.方法:以免疫介导法复制小鼠再生障碍性贫血模型,给药治疗20天后,用放射免疫法检测小鼠血清内IL-2、TNF的含量,采用细胞毒法检测小鼠脾脏T淋巴细胞百分比率.结果:模型组小鼠血清IL-2、TNF含量增加,Ts细胞比率升高,Th细胞以及Th/Ts比值明显降低,治疗后IL-2、TNF的含量降低,Ts细胞比率下降,Th细胞比率以及Ts/Th比值明显升高.结论:再障饮能抑制小鼠血清内IL-2、TNF的表达,调整再障小鼠Ts/Th比值,具有免疫调节作用.     

叶绿素铜钠对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓间充质干细胞TGF-β_1表达的影响

目的：探讨叶绿素铜钠对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。方法：参照文献方法建立免疫介导再障小鼠模型。实验随机分为6组,正常对照组、再障模型对照组、叶绿素铜钠小剂量组、叶绿素铜钠中剂量组、叶绿素铜钠高剂量组、环孢菌素对照组,每组10只,分组给药15天后处死。取各组小鼠的骨髓进行MSC培养,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠骨髓MSC分泌的TGF-β1浓度。结果：模型组小鼠骨髓MSCTGF-β1分泌水平低下,与正常组比较有明显差异;叶绿素铜钠各组的TGF-β1水平较模型组明显增高（P〈0.05或P〈0.01）;与阳性药环孢菌素相当。结论：叶绿素铜钠能促进免疫介导再障小鼠MSC分泌TGF-β1。     

健脾清化方药物血清对慢加急性肝衰竭患者体外T淋巴细胞及其细胞因子的影响

目的:本研究通过健脾清化方大鼠含药血清和空白对照组血清体外培养湿热型HBV相关慢加急性肝衰竭患者淋巴细胞,观察患者T细胞亚群以及细胞上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-18、IL-10水平变化,探讨健脾清化方对慢加急性肝衰竭患者T细胞分化的影响及细胞上清液中细胞因子的影响。方法:分离20例HBV相关慢加急性肝衰竭证属湿热型患者外周血淋巴细胞,分别应用健脾清化方大鼠含药血清和空白对照组血清体外培养,流式细胞仪检测T细胞亚群的变化,ELISA定量检测细胞上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-18、IL-10水平变化。结果:含药血清刺激细胞后,CD_3~+、CD_4~+百分比较空白血清组上升,CD8+百分比较空白血清组下降,CD_4~+/CD_8~+比值较空白血清组上升,细胞上清液中TNF-α、IFN-γ、IL-18水平呈下降趋势,IL-10水平呈上升趋势,两组差异有统计学意义(P0.001)。结论:健脾清化方可以提高CD_3~+、CD_4~+百分比及CD_4~+/CD_8~+比值,降低CD_8~+百分比,改善T细胞亚群紊乱状态,健脾清化方可降低慢加急性肝衰竭患者外周血淋巴细胞上清液中TNF-α、IFN-γ、IL-18水平,提高IL-10水平,改善Th1/Th2失衡状态,减轻肝脏损伤程度,延缓病情发展。     

蚕砂提取物联合环孢菌素A治疗再生障碍性贫血的实验研究

目的:研究蚕砂提取物联合环孢菌素A治疗再障的作用机制。方法:建立免疫介导的小鼠再障模型,随机分为4组,每组10只。对照组胃饲生理水,SCC组胃饲SCC,CsA组胃饲CsA,SCC+CsA组胃饲SCC+CsA,连续胃饲13天,检测外周血象及外周血CD3+、CD4+、CD8+、TNF-α、IFN-γ、IL-6水平。结果:蚕砂提取物联合环孢菌素A灌胃,可提高小鼠外周血白细胞、血红蛋白、血小板,有效调节再障小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+、TNF-α、IFN-γ、IL-6水平。结论:蚕砂提取物联合环孢菌素A治疗再障具有协同增效作用。     

朝药鹿茸对哮喘小鼠模型气道炎症的影响

目的：探讨朝药鹿茸对哮喘小鼠气道炎症和Th1／Th2类细胞因子变化的影响及其可能机制。方法：雄性BALB／c小鼠32只随机分成4组。分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-4（IL-4）、IL-5、IL-13及γ-干扰素（IFN-γ）含量,观察BALF中炎症细胞变化。结果：与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平明显增高和IFN-γ水平显著降低（P〈0．05）。与哮喘模型组比较,朝药鹿茸低、高剂量组小鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平降低,IFN-γ水平显著上升（P〈0．05）。结论：朝药鹿茸对哮喘小鼠具有保护作用,其机制可能与调节IL-4／IFN-γ平衡失调、减轻炎症细胞浸润有关。     

红芪替换玉屏风散中黄芪对SAMP8小鼠抗免疫老化作用的比较

目的比较研究含红芪和黄芪玉屏风散对快速老化小鼠8(SAMP8)抗免疫衰老作用。方法通过MTT法确定最佳含药血清质量分数和作用时间,并检测最佳含药血清对T淋巴细胞增殖能力的影响。流式细胞术检测含药血清对T淋细胞亚群分化的影响。ELISA法检测培养上清液中白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达。RT-PCR法检测含药血清对T淋巴细胞Pi3k mRNA表达的影响。结果当含药血清质量分数为40%,作用时间为48 h时对SAMP8小鼠的脾淋巴细胞促进增殖的作用最强;含红芪和黄芪的含药血清对SAMP8小鼠T淋巴细胞亚群的分化作用不明显,没有统计学差异;红芪和黄芪含药血清均可增加IL-2、IFN-γ的分泌(P0.05);红芪和黄芪玉屏风散均可增加Pi3k mRNA的相对表达量,且红芪组明显优于黄芪组(P0.05)。结论含红芪和黄芪的玉屏风散均有抗免疫老化的作用,且红芪玉屏风散在诱导T淋巴细胞增殖、上调Pi3k mRNA的表达方面作用优于黄芪,所以在抗免疫衰老方面红芪可以替代黄芪。     

麇鹿角醇提液对正常小鼠IL-2和IFN-γ的影响

目的:观察麋鹿角醇提液对正常小鼠细胞因子白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的影响.方法:30只ICR小鼠随机分成3组:正常组、麇鹿角醇提液低剂量组(2 g·kg~(-1)·d~(-1))、高剂量组(4 g·kg~(-1)·d~(-1)),灌胃给药,连续7 d.采用ELISA法检测血清中细胞因子IL-2,IFN-γ的浓度,RT-PCR法检测脾淋巴细胞IL-2,IFN-γ mRNA的表达.结果:麋鹿角醇提液高剂量组小鼠血清中IL-2和IFN-γ的浓度升高,脾淋巴细胞IL-2,IFN-γ mRNA的表达增强.结论:麋鹿角醇提液能促进正常小鼠细胞因子IL-2,IFN-γ的分泌与表达,增强其细胞免疫功能.     

益气养阴祛瘀方含药血清对干燥综合征人颌下腺细胞AQP5和M3R表达的影响

目的观察益气养阴祛瘀方含药血清对干燥综合征(■;gren′s syndrome, SS)人颌下腺细胞(human submandibular gland cells, HSG cells)中水通道蛋白5(aquaporin protein-5, AQP5)和毒蕈碱样胆碱能受体3(type 3 muscarinic acetylcholine receptors, M3R)表达的影响。方法制备益气养阴祛瘀方含药血清,将对数生长期的HSG细胞随机分为空白组(RPMI 1640培养液)、空白血清组(10%的空白血清+RPMI 1640培养液)、含药血清组(10%的益气养阴祛瘀方含药血清+RPMI 1640培养液)、IFN-γ组(IFN-γ+RPMI 1640培养液)、IFN-γ+IFN-γ拮抗剂组(IFN-γ+IFN-γ拮抗剂+RPMI 1640培养液)、IFN-γ+含药血清组(IFN-γ+10%益气养阴祛瘀方含药血清+RPMI 1640培养液),共6组。培养24 h后,Western blot法检测HSG细胞中AQP5和M3R蛋白表达;RT-PCR法检测HSG细胞AQP5 mRNA和M3R mRNA表达;免疫荧光法观察HSG细胞AQP5蛋白通道表达变化。结果与空白血清组比较,含药血清组AQP5、M3R蛋白及AQP5 mRNA和M3R mRNA表达升高(P0.05)。与IFN-γ组比较,空白组、空白血清组、含药血清组、IFN-γ+IFN-γ拮抗剂组AQP5、M3R蛋白及mRNA表达均升高(P0.05)。结论益气养阴祛瘀方具有与IFN-γ拮抗剂类似功效,能上调主管水运的AQP5、M3R表达,增加唾液量的分泌。     

生血丸1号对免疫介导的再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及细胞周期蛋白D_3表达的影响

目的:探讨生血丸1号(简称生血丸)对免疫介导的再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓增殖及细胞周期蛋白 D_3(Cyclin D_3)表达的影响。方法:建立免疫介导的再障模型,胃饲生血丸1号水提液,每次0.1ml/10g 体重,每天2次,连续9天,并以康力隆为对照。第10天处死动物,采用流式细胞仪检测小鼠骨髓有核细胞(BMNC)G_0/G_1期百分率,免疫组织化学超敏 S-AP 法检测股骨中段骨髓 Cyclin D_3表达水平。结果:生血丸组 G_0/G_1期细胞百分率较再障模型组显著降低(P<0.05),而 Cyclin D_3表达水平明显高于再障模型组(P<0.01),两项指标之间呈显著负相关(r=-0.8219,P<0.05)。结论:生血丸1号能提高免疫介导的再障小鼠骨髓 Cyclin D_3的表达水平,从而促进造血细胞由 G_0/G_1期进入增殖期。     

三七总皂甙对免疫介导性再生障碍性贫血小鼠造血祖细胞的增殖作用

目的：探讨三七总皂甙(PNS)对免疫介导性再生障碍性贫血(再障)小鼠模型血细胞生成的作用。方法：采用免疫介导法进行再障造模,Balb／c小鼠经^60Coγ射线亚致死量照射后,自尾静脉输入DBA／2小鼠的淋巴细胞,随机分成4组,即模型组、PNS治疗高、中和低剂量组(每只3．2、1．6、0．8mg／d),并设正常对照组。腹腔注射给药,模型组和正常对照组注射生理盐水。治疗12天后,做血白细胞计数、骨髓病理检查和粒系、红系造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E)集落培养。结果：(1)PNS升高白细胞数,与模型组比较,PNS高、中和低剂量组的白细胞数提高率分别为(34．3±2．9)％,(29．2±1．7)％和(14．5±1．6)％(P<0．01或P<0．05)。(2)改善骨髓抑制,骨髓病理检查模型组出现大片空白区,被大量的脂肪组织代替,而PNS治疗组造血组织结构较完整,造血细胞量丰富。(3)促进造血祖细胞增殖,高、中和低剂量PNS对CFU—GM集落提高率分别为(64．4±2．8)％、(67．3±2．4)％和(21．9±1．8)％(均P<0．01);CFU—E集落的提高率分别为(31．9±3．6)％、(20．7±2．4)％和(12．8±2．6)％(P<0．01或P<0．05)。结论：免疫介导性再障小鼠在骨髓抑制、造血功能低下时,PNS通过促进骨髓粒系、红系造血祖细胞的增殖,改善骨髓造血组织增生,从而促进血细胞的生成。     

穿山龙总皂苷含药血清对小鼠脾淋巴细胞增殖及IL-6产生影响的实验研究

目的：用血清药理学方法研究穿山龙总皂苷对小鼠脾淋巴细胞增殖及其分泌IL-6的影响，探讨其可能的作用机制。方法：用MTT法测定不同浓度穿山龙舍药血清（分别在培养系中加入20％，10％，5％合药血清）时LPS诱导的脾淋巴细胞增殖的影响；用双抗体夹心ELISA法测定不同浓度穿山龙总皂苷含药血清对LPs诱导的脾淋巴细胞分泌IL-6的影响。结果：20％和10％穿山龙总皂苷含药血清可抑制LPS诱导的脾淋巴细胞增殖．20％穿山龙总皂苷含药血清可抑制LPS诱导的脾淋巴细胞分泌IL-6。结论：穿山龙总皂苷含药血清可抑制LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖及IL-6的产生．可能是其免疫抑制作用的机制之一．     

活髓片对免疫介导再障小鼠骨髓超微结构影响的研究

再生障碍性贫血是多种原因导致的骨髓造血功能衰竭的一种疾病，必然伴有骨髓造血细胞及基质细胞形态学的改变。实验的目的是观察活髓片对免疫介导再障小鼠骨髓细胞形态学的影响。用常规超薄切片技术进行切片，透射电镜观察并摄片分析，观察活髓片治疗再障小鼠前后骨髓超微结构的变化，以探究活髓片治疗再障的机理。     

羧甲基茯苓多糖对小鼠T淋巴细胞分泌细胞因子的影响

目的：探讨羧甲基茯苓多糖（CMP）对小鼠T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-10的影响。方法：CMP溶液给小鼠腹腔注射，10天后取外周血分离T细胞，体外将不同浓度的CMP与T细胞共培养，MTT法观察其对T细胞的毒性作用，ELISA法检测IFN-γ、IL-10的含量。结果：CMP在0～500μg／ml对小鼠T细胞无明显毒性作用，CMP能显著提高IFN-γ水平，降低IL-10含量。结论：CMP具有较好的调节Th1／Th2细胞因子分泌作用。     

中药复方对免疫介导小鼠再生障碍性贫血红系造血祖细胞的影响

目的研究中药复方地甘口服液、红霖四物口服液对免疫介导再障小鼠模型骨髓红系造血祖细胞体外增殖影响。方法选用Ｂａｌｂ／ｃ小鼠为实验对象,在注射ＤＢＡ／２小鼠胸腺、淋巴结混合细胞后,立即接受亚致死剂量射线照射,形成免疫介导再障小鼠模型,然后分组处理。结果地甘口服液、红霖四物口服液在有ＥＰＯ存在的条件下,能促进小鼠骨髓细胞体外培养ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ集落的形成,其中１００％浓度的地甘口服液效果明显优于２００％地甘口服液及红霖四物口服液。结论中药复方地甘口服液、红霖四物口服液能促进免疫介导再障小鼠模型骨髓红系祖细胞的体外细胞培殖。