TIMP-3表达下调促进前脂肪细胞分化

细胞与细胞外基质的相互作用以及细胞外基质的重构在脂肪组织的形成过程中发挥了重要作用。细胞外基质的这一系列变化是由细胞分泌的蛋白酶及其抑制物调控的,其中基质金属蛋白酶(MMPs)是一类调控细胞外基质分解的蛋白酶家族。MMPs的活性受其四种组织抑制物调节,即TIMP1-4。以前对TIMP在脂     

金属蛋白酶组织抑制剂在心血管疾病发病中的作用

金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)由4个成员组成:TIMP1、TIMP2、TIMP3和TIMP4,它们是基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的生理性抑制剂.同时它们也具有MMP非依赖的功能.T I ...     

恒河猴细菌感染性子宫出血模型内膜组织基质金属蛋白酶1、9及其抑制剂的表达

目的　探讨基质金属蛋白酶 1、9在炎性子宫出血中的作用。方法　运用免疫组化链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶染色法 (SP)检测细菌感染性子宫出血恒河猴模型组子宫内膜组织中基质金属蛋白酶 1、9(MMP 1、MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)的表达 ,用正常恒河猴子宫内膜作对照。结果　模型组子宫内膜组织间质、腺上皮中MMP 1、9的表达明显高于正常对照组 ,而TIMP 1的表达与正常组水平相似。结论　基质金属蛋白酶 1、9的高度表达可能与炎症导致的异常子宫出血有关。     

四周尾部悬吊大鼠颈总动脉MMP9和TIMP1的表达及活性改变

目的:探讨四周尾部悬吊模拟失重大鼠颈总动脉基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein9,MMP9)和金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase1,TIMP1)的基因、蛋白表达及酶活性变化。方法:采用4周(week,wk)尾部悬吊大鼠模拟失重影响,通过透射电镜检测颈总动脉壁基质含量,实时定量聚合酶链式反应检测MMP9和TIMP1的mRNA表达,Western blot和免疫组织化学染色检测其蛋白表达和分布,明胶酶谱法测定MMP9活性水平。结果:与对照组相比,悬吊组大鼠细胞外基质面积较对照组显著增加(P0.05),胶原蛋白含量显著增加(P0.05);悬吊组大鼠颈总动脉MMP9的m RNA表达量无明显改变,而其蛋白表达量和酶活性均显著降低(P0.05);TIMP1 mRNA和蛋白表达量则显著升高(P0.05)。结论:模拟失重使大鼠颈总动脉MMP9水平降低,TIMP1水平升高,可能与其管壁基质增生和胶原蛋白含量增加有关。     

胰腺应激蛋白PSP/reg抑制胰腺星状细胞TIMPs:MMPs及RECK表达

目的 观察胰腺应激蛋白PSP/reg对胰腺星状细胞(PSC)合成和分泌基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)以及RECK表达的影响.方法 分离纯化慢性胰腺炎患者纤维化区的PSC,基因重组胰腺应激蛋白PSP/reg,以终浓度为10和100 ng/mL对PSC进行干预,实时荧光定量PCR检测MMP1/2、TIMP1/2及RECK基因表达,Western blot测定MMP1/2、TIMP1/2及RECK蛋白,细胞免疫荧光观察细胞膜表面RECK分布.结果 PSP/reg对MMP1/2、TIMP1/2及RECK表达无明显影响;PSP/reg轻度抑制PSC培养上清中MMP2水平(P＜0.05),而显著抑制TIMP1/2水平(P ＜0.01);PSC细胞膜表面发现有RECK蛋白,PSP/reg减少PSC的RECK含量(P＜0.01).结论 胰腺应激蛋白PSP/reg能够降低TIMPs:MMPs比率、减少RECK蛋白水平表达,从而解除对MMPs的部分抑制,使MMPs活性相对增高,有利于纤维化的分解消散,促进胰腺损伤后的再生修复.     

Le^Y寡糖单克隆抗体对小鼠胚泡基质金属蛋白酶表达和分泌的影响

以LeY 寡糖特异性单克隆抗体AH6为工具中和胚泡表面LeY 寡糖后 ,通过RT PCR、明胶酶谱法、免疫印迹法等方法 ,在体外研究了着床前小鼠胚泡表面LeY 寡糖抗原与其基质金属蛋白酶 (MMP)、金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP1)的表达和分泌之间的关系。结果显示 :胚泡表面LeY 寡糖抗原被中和后仅 1.5h ,胚泡MMP2和MMP9基因转录表达明显下降、而TIMP1基因转录表达则略有升高 ;随后抗体中和引起胚泡MMP2、MMP9的分泌减少 ,而TIMP1的分泌则未见明显变化。结果表明胚泡表面的LeY 寡糖抗原对着床前胚泡的MMP的合成和分泌具有调节作用 ,而且这种作用可能主要是通过调节相应的MMP2和MMP9基因的表达而引起的     

北黄海沉积物可培养产蛋白酶细菌分离鉴定

【目的】揭示北黄海沉积物中可培养产胞外蛋白酶细菌及蛋白酶多样性,增加人们对北黄海生态系统中产蛋白酶菌多样性的认识,为海洋产蛋白酶微生物的挖掘提供菌群资源。【方法】分别将5个北黄海沉积物样品梯度稀释涂布至酪蛋白明胶筛选平板,选择性分离产蛋白酶细菌;并通过分析基于16S rRNA基因序列的系统发育关系,揭示这些细菌的分类地位和遗传多样性;分别测定胞外蛋白酶活性并对酶活较高的39株菌进行基于苯甲基磺酰氟(PMSF,丝氨酸蛋白酶抑制剂)、邻菲罗啉(o-phenanthroline,O-P,金属蛋白酶抑制剂)、E-64(半胱氨酸蛋白酶抑制剂)和pepstatin A(天冬氨酸蛋白酶抑制剂)4种抑制剂的酶活抑制实验以及所有菌株对3种底物(酪蛋白、明胶、弹性蛋白)的水解能力;分析这些细菌所产胞外蛋白酶的特性及多样性。【结果】从5个北黄海沉积物样品中分离获得66株产蛋白酶细菌,这些菌株隶属于Bacteroidetes、Proteobacteria、Actinobacteria和Firmicutes 4个门的7个属,其中Pseudoalteromonas(69.9%)、Sulfitobacter(12.1%)和Salegentibacter(10.6%)是优势菌群;沉积物中可培养的产蛋白酶细菌的丰度为104 CFU/g;蛋白酶酶活抑制实验表明所有测定菌株产生的胞外蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶和/或金属蛋白酶,仅有少数菌株所产蛋白酶具有半胱氨酸蛋白酶或天冬氨酸蛋白酶活性。【结论】北黄海沉积物中可培养产蛋白酶细菌类群较为丰富,Pseudoalteromonas、Sulfitobacter和Salegentibacter菌株是优势菌群,测定菌株所产胞外蛋白酶主要是丝氨酸蛋白酶和/或金属蛋白酶。     

人绒毛膜促性腺激素对绒癌细胞系TIMP表达的影响

目的：研究人绒毛膜促性腺激素(hCG)对滋养层细胞或绒癌细胞侵袭性的影响。方法：采用RT—PCR方法,观察不同浓度hCG对JEG—3绒癌细胞系表达金属蛋白酶组织抑制因子TIMP—1和TIMP—2的影响。结果：用不同浓度hCG处理48h后,JEG—3细胞中TIMP—1 mRNA的表达略降低,而TIMP—2 mRNA的表达则被诱导增加。结论：人绒毛膜促性腺激素(hCG)可能通过改变绒癌细胞中TIMP的表达,影响绒癌细胞的侵袭性。     

MMP—26及其抑制剂—4在正常人细胞滋养层细胞与绒癌细胞系JEG—3中的表达

基质金属蛋白酶（MMPs)及其组织抑制（TIMPs)的平衡对于维持正常生理过程（如胚胎植入）是至关重要的。MMPs和TIMPs之间平衡机制调节的缺失将会导致肿瘤的转移和发展,近年来,MMP－26和TIMP－4相继被克隆鉴定,但是它们的功能,尤其是在正常胎盘建成和绒癌的功能仍属空白,本应用免疫细胞化学,免疫印迹,酶谱分析,RTPCR和Northen blot等方法检测了二在人早孕细胞滋养层细胞（Cyto)和绒癌细胞系JEG－3中的表达,免疫细胞化学和免疫印迹研究显示,MMP－26在JEG－3中的表达显高于在Cyto中的表达,TIMP－4在JEG－3中的表达显高于在Cyto中的表达（P＜0．05）;酶谱分析表明：Cyto中MMP－26水解明胶的活性明显低于JEG－3中MMP－26和TIMP－4的mRNA表达,并且MMP－26 mRNA在JEG－3中的表达显高于在Cyto中的表达（P＜0．05）,以上结果表明,MMP－26和TIMP－4在与正常妊娠和肿瘤转移浸润等有关组织重建过程中起着一定的作用。     

基质金属蛋白酶

基质金属蛋白酶是一类分解细胞外基质组分的锌蛋白酶⒚它们在有机体生长发育中的细胞外基质逆转与重塑以及疾病中的病理损害起着极为重要的作用⒚基质金属蛋白酶的表达和活性在不同细胞水平受到严密调控,如细胞因子、生长因子以及激素的调节⒚基质金属蛋白酶以酶原形式分泌,随后被其它蛋白酶如胞浆素或非蛋白酶类化学物质如有机汞所激活⒚所有基质金属蛋白酶都受到天然抑制剂 金属蛋白酶组织抑制剂所抑制⒚两者的不平衡导致许多疾病的发生,如肿瘤侵入及转移⒚合成基质金属蛋白酶组织抑制剂所抑制,如 Ｍ ａｒｉｍ ａｓｔａｔ 能控制肿瘤转移的发生及进一步扩散⒚本文将对基质金属蛋白酶的特征、分子区域结构、底物特性、激活机制、调控方式等方面进行最新概述⒚     

抗人组织金属蛋白酶抑制剂—1核酶的体外制备和活性鉴定

研究了特异切割人瘢痕组织中组织金属蛋白酶抑制剂 1(tissueinhibitorofmetalloproteinases 1,TIMP 1)的锤头状核酶 ,测定了其体外切割活性。制备特异切割TIMP 1的U6snRNA嵌合型核酶基因克隆。TIMP 1mRNA基因片段克隆至T载体。用体外转录法大量制备以 [α 3 2 P]UTP标记的核酶及靶RNA ,进行体外切割实验。结果表明 :核酶∶底物 =1∶1时 ,活性的U6snRNA嵌合型核酶 (U6Rz35 8)在 5 0℃具有最佳切割活性 ,切割效率为 76 .34% ;37℃时 ,切割效率为 5 5 .2 1%。5 0℃时 ,Km=39.6nmol/L ,kcat=0 .2 1min-1;而点突变型核酶U6Rz35 8m 没有切割活性。制备的U6 Rz35 8有良好的特异切割活性 ,有望在瘢痕成纤维细胞内抑制人TIMP 1的表达。     

昆虫锌金属蛋白酶研究进展

锌金属蛋白酶是指含有锌离子的蛋白酶,在哺乳动物中参与多项生物学过程的调控.在昆虫中也发现了许多锌金属蛋白酶,能够参与昆虫体内多项生命活动进程如食物的消化与吸收、组织重塑、变态发育、神经系统的调控及免疫防御反应等.本文综述了目前在昆虫中发现的锌金属蛋白酶的结构和底物特异性,聚焦6种锌金属蛋白酶(羧肽酶、基质金属蛋白酶、脑啡肽酶、胰岛素降解酶、血管紧缩素转换酶及氨肽酶)在昆虫中的功能,旨在为昆虫锌金属蛋白酶的深入研究提供参考.     

基质金属蛋白酶抑制剂-4在大肠杆菌中的克隆与表达

基质金属蛋白酶抑制剂4(tissueinhibitorofmetalloproteinase4,TIMP4)为心脏特异性表达,在心脏代谢和肿瘤转移、侵袭过程中具有重要作用。为进一步研究其功能和作用机理,以PCR方法扩增人基质金属蛋白酶抑制剂4不含信号肽的表达序列,测序鉴定正确后,构建原核重组表达质粒pMALc2TIMP4,转化大肠杆菌,IPTG诱导阳性克隆,大量表达重组蛋白。细菌经超声破碎后,其上清中的重组蛋白经SDSPAGE初步鉴定分子量大小与理论值一致,为以后基质金属蛋白酶抑制剂4的研究创造了条件 。     

原位杂交检测组织金属蛋白酶抑制因子—1 mRNA在IgA肾病肾脏中的表达

为探讨组织蛋白酶抑制因子在IgA肾病肾小球硬化中的作用。本文用原位杂交法研究组织金属蛋白酶抑制因子－1（TIMP－1）mRNA在3种类型IgA肾病（轻度系膜增生型、中度系膜增生型及局灶型）肾组织中的表达。结果表明：TIMP－1 mRNA原位杂匀的阳性信号主要分布于部分肾小管上皮细胞内。在肾小球系膜细胞也可检测到TIMP－1 mRNA阳性信号,但较肾小管弱,中度系膜增生型的TIMP－1 mRNA阳笥信号明显地较其他两型IgA肾病为强。以上结果表明：由肾小管上皮细胞及系膜细胞合成的TIMP－1通过抑制基质金属酶的活性,可导致细胞外基质（ECM）在肾小管间质及肾小球内过度沉积,从而对肾小球硬化有促进作用。     

集胞藻PCC6803中S2P同源蛋白Slr0643及Sll0862 金属蛋白酶活性的体外鉴定

【目的】金属蛋白酶S2P在细菌中通过在膜切割转录调控因子、释放δ因子参与胁迫响应是跨膜信号转导的保守机制,但蓝细菌中S2P的功能还未被鉴定,故我们考察集胞藻PCC6803中的S2P同源蛋白Slr0643及Sll0862的金属蛋白酶活性。【方法】以pET-30b(+)为载体,分别构建重组质粒pF0643和pF0862,在大肠杆菌BL21(CE3)中诱导表达并纯化Slr0643及Sll0862蛋白,以β-酪蛋白为底物检测重组蛋白的酶活性。【结果】体外酶活实验显示重组表达的Slr0643及Sll0862蛋白有内切蛋白酶活性,且其活性受金属螯合剂o-phenanthroline的抑制。体外酶活的鉴定结果为进一步研究Slr0643和Sll0862的体内酶活和生物学功能奠定了基础。【结论】集胞藻PCC6803中的S2P同源蛋白Slr0643及Sll0862具有金属蛋白酶活性。     

Kiss-1、MMP2、TIMP2蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的探讨Kiss-1、基质金属蛋白酶-2(MMP2),组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)在甲状腺乳头状癌(PTC)原发灶与淋巴结转移灶中的表达。方法采用免疫组织化学方法检测86例PTC原发灶及其40例颈部淋巴结转移性癌灶中Kiss-1、MMP2、TIMP2的表达。结果 1.伴有颈部淋巴结转移的PTC原发灶中MMP2的表达强度高于无淋巴结转移者,而前者Kiss-1、TIMP2的表达强度均低于后者,两者的差异均具有统计学意义(P0.05);2.PTC转移灶中MMP2的表达强度高于原发灶,它们的差异均具有统计学意义(P0.05),而TIMP2、Kiss-1在原发灶与转移灶中表达强度的差异无具统计学意义(P0.05);3.三者在PTC原发灶和转移灶中表达强度的自身对比差异均具有统计学意义(P0.05);4.在PTC有转移组原发灶中,Kiss-1的表达与MMP2、TIMP2的表达相关(r=0.604,P0.05;r=0.819,P0.05);在PTC无转移组原发灶中,Kiss-1的表达与MMP2、TIMP2的表达相关(r=0.906,P0.05;r=0.915,P0.05)。结论 MMP2在PTC癌组织中的表达增强,尤其在转移灶中的高表达可能在PTC淋巴结转移过程中起着主导作用;而TIMP2、Kiss-1的表达下调,尤其在自身转移灶中的低表达可能在转移过程中与前者相得益彰。     

MMP/TIMP失衡在肺部疾病中的研究进展

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一类锌依赖性内肽酶家族,可以特异性降解细胞外基质(extracellular matrix,ECM)。基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)是MMPs的内源性抑制剂,可抑制MMPs、整合素-金属蛋白酶以及聚蛋白多糖酶。TIMPs/MMPs之间的平衡可以调节组织重塑、修复和再吸收。二者在人体中保持平衡状态,近年来发现二者失衡可导致多种疾病的发生,本文主要对MMPs/TIMPs失衡及作用机制在肺部疾病中的研究进展进行简单综述。     

牛黄对小鼠口腔成纤维细胞功能的调节作用

探讨牛黄对原代小鼠口腔成纤维细胞功能的影响,揭示其在溃疡愈合过程中的作用及机制。本试验采用MTT法、氯胺-T法、明胶酶谱分析和酶联免疫反应测定了牛黄对小鼠口腔成纤维细胞增殖、胶原沉积、金属蛋白酶-2、-9活性和基质金属蛋白酶抑制因子-1合成的影响。结果表明牛黄能显著抑制小鼠口腔成纤维细胞的增殖、胶原沉积和金属蛋白酶-2活性,同时也极显著(P<0.01)抑制基质金属蛋白酶抑制因子-1的产生。结果提示牛黄在溃疡愈合过程中不具生肌作用,可能通过抗炎促进溃疡愈合;其抑制胶原合成的机制可能与极显著抑制基质金属蛋白酶抑制因子-1有关。     

回转模拟失重对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原代谢的影响

为探讨模拟失重对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原代谢的影响 ,本研究采用回转器模拟失重效应 ,通过免疫细胞化学和反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)研究了回转模拟失重对原代培养的新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白及mRNA表达 ,以及胶原降解抑制物———金属蛋白酶组织抑制因子 (Tissueinhibitorofmetallopro teinase ,TIMP)mRNA表达的影响。免疫细胞化学染色显示回转组Ⅰ型胶原蛋白沉积增加 ;RT PCR分析显示Ⅰ型胶原α1链 (TypeⅠcollagenα1chain ,ColⅠA1)mRNA表达没有明显变化 ,TIMP 1、TIMP 2及TIMP 3的mRNA表达均增强。提示在回转模拟失重条件下 ,心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白沉积增加 ,作为胶原降解抑制物的TIMP可能是造成胶原沉积的原因     

前体蛋白转化酶家族的重要成员之一：弗林蛋白酶

弗林蛋白酶(Furin)是前体蛋白转化酶家族的重要成员之一,广泛存在于各种组织和细胞系中。Furin经过两次自剪切去掉前肽后具有生理活性,能够识别特定的氨基酸序列并在TGN中对多种前体蛋白进行加工。Furin的作用底物不仅包括神经肽和肽类激素,还包括许多生长因子、受体、血浆蛋白酶、基质金属蛋白酶及细菌外毒素等,具有重要的生物学功能。