树舌多糖GF对小鼠肝癌H_(22)细胞P53及RB基因的影响

目的:为探明树舌多糖GF对肝癌H22瘤细胞RB基因及P53基因的影响。方法:用ELISA法检测RB基因及P53基因用药前后表达的差异。结果:树舌多糖GF组中P53基因、RB基因的表达量均显著高于荷瘤组(P<0.01)。树舌多糖组、环磷酰胺组无显著差异。结论:树舌多糖GF能使肝癌H22细胞P53及RB基因的表达上调。     

树舌多糖GF抑制肝癌细胞SMMC7721增殖及对CDK2基因表达的影响

目的:探明树舌多糖GF(Ganoderma appanatum polysaccharides GF,GAPSGF)对肝癌细胞SMMC7721增殖及CDK2表达的影响。方法:不同浓度树舌多糖GF处理肝癌细胞SMMC7721,采用MTT法检测树舌多糖GF对肝癌细胞SMMC7721增殖抑制作用;实时定量聚合酶链反应(Real-TimePCR)检测CDK2 mRNA表达;蛋白印迹法(Western blot)检测CDK2蛋白表达情况。结果:树舌多糖GF对肝癌细胞SMMC7721具有明显的生长抑制作用。其中树舌多糖GF2.5μg/mL组与树舌多糖GF10μg/mL组作用显著,且CDK2的mRNA和蛋白表达下降。结论:树舌多糖GF可能通过降低CDK2表达,抑制肝癌细胞SMMC7721增殖。     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞Ras蛋白表达的影响

研究应用免疫组化技术对HepA瘤细胞中Ras蛋白表达量进行分析 ,以进一步探讨树舌多糖抗肿瘤的机制。目的 :为探明树舌多糖GF对HepA瘤组织Ras蛋白表达的影响。方法 :用SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中Ras蛋白的表达。结果 :树舌多糖组、猪苓多糖组中Ras蛋白的表达量均显著低于模型组 (P <0 .0 1) ,树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论 :初步认为树舌多糖GF可通过降低Ras蛋白的表达 ,而抑制HepA瘤细胞的增殖。     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞C-myc基因表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤组织C-myc基因表达的影响。方法:应用免疫组化和原位杂交方法检测小鼠HepA瘤细胞中C-myc基因的mRNA与蛋白的表达情况。结果:与荷瘤组比较,树舌多糖组、猪苓多糖组中C-myc基因的mRNA与蛋白的表达量均明显降低(P﹤0.01),其中树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论:树舌多糖GF可通过降低C-myc mRNA量及C-myc蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖。     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras基因表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras基因表达的影响.方法:运用原位杂交法、SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细包中N-ras mRNA量及N-Ras蛋白的表达量.结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras mRNA量及Ras蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P＜0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:初步认为树舌多糖GF可通过降低N-rasmRNA量及Ras蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞MDM-2基因表达的影响研究

应用免疫组化技术对HepA瘤细胞中MDM-2基因的表达量进行分析,以探讨树舌多糖抗肿瘤的分子机制.目的:研究树舌多糖GF对HepA瘤细胞MDM-2表达的影响.方法:应用SP免疫组化染色技术和多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中MDM-2的表达.结果:树舌多糖组中MDM-2的表达量均显著低于模型组(P＜0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:初步认为树舌多糖GF可通过降低MDM-2的表达而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N—ras、C—myc蛋白表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras、c-myc蛋白表达的影响.方法:运用SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中N-ras、C-myc蛋白的表达量.结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras、C-mye蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P<0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:树舌多糖GF可通过降低N-ras、C-myc蛋白的表达,抑制He-pA瘤细胞的增殖.     

免疫印迹技术分析树舌多糖GF对H22肝癌移植瘤PTEN蛋白表达的影响

目的探明树舌多糖(GAPS)GF对H22肝癌移植瘤PTEN蛋白表达的影响。方法昆明种小鼠随机分为两组:肿瘤组和树舌多糖组,接种后各组肌肉注射给药,分别给与生理盐水和树舌多糖GF。连续10 d,于末次给药24 h,处死小鼠,剥离肿瘤组织。Western blot技术检测各组样品PTEN蛋白的表达量。结果肿瘤组检测结果为阴性,树舌多糖组检测结果为阳性。结论树舌多糖GF抗肿瘤的作用靶点之一可能为抑癌基因PTEN。     

原位杂交法检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞N—ras基因mRNA表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤细胞癌基因N-ras mRNA水平的影响.方法:应用地高辛标记探针原位杂交技术,检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞中癌基因N-ras mRNA丰度的作用.结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中mRNA表达量均显著低于模型组(P<0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:树舌多糖GF可通过调节N-ras基因mRNA的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞Rb基因表达的影响

目的 探讨树舌多糖GF对小鼠HepA瘤细胞Rb基因表达的影响。方法 本实验用链霉菌抗生素蛋白－过氧化酶免疫组化法来测定细胞中Rb蛋白含量，通过多媒体图像分析系统分析实验结果。结果 树舌多糖GF组、猪苓多糖组与荷瘤对照组比较，差异均非常显著（P＜0．01），即树舌多糖GF、猪苓多糖能促使HepA瘤细胞中Rb基因表达明显增强；树舌多糖组与猪苓多糖组比较，差异非常显著（P＜0．01），即树舌多糖GF更能明显增强Rb基因表达，优于猪苓多糖。结论 树舌多糖GF抗瘤作用机理之一是作用于抑癌基因Rb并使之表达增强。     

平调饮对小鼠H_(22)肝癌模型凋亡基因的影响

目的:研究平调饮对H22荷瘤小鼠Bcl-2、P53和Bax凋亡基因的影响,从而探讨平调饮治疗原发性肝癌的作用机制。方法:昆明种雄性小鼠80只,接种H22肝癌细胞后,随机分为生理盐水组、中药组、西药组及中西医结合四组,每组20只。造模第2d灌胃给药,连续7d,第8d脱颈处死。将肿瘤取出制作小鼠肿瘤细胞切片,进行HE染色,观察病理变化;用免疫组织化学方法对肿瘤中的Bcl-2、P53和Bax蛋白进行染色。用SPSS12.0软件统计结果。结果:造模后西药组小鼠状态较差,其体重明显低于中药组及荷瘤组(P0.01)。HE染色中药组的肿瘤细胞体积缩小,核固缩,核分裂相明显少于模型组,肿瘤组织可见片状坏死区。中药组和中西医结合组的Bcl-2和P53蛋白表达率明显降低,Bax蛋白的表达率则明显增高,与对照组比较有显著性差异(P0.01)。结论:平调饮对肝癌细胞具有抑制作用,其机制可能为通过对肿瘤细胞内P53、Bcl-2、Bax蛋白表达的改变,使肝癌细胞发生细胞凋亡,从而抑制肿瘤生长。     

齐墩果酸与环磷酰胺联合应用对H-22荷瘤小鼠P53突变及 TNF-α的影响

目的：探讨齐墩果酸及环磷酰胺对H-22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用机制。方法：肝癌H-22肿瘤细胞的小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组、齐墩果酸组、齐墩果酸组与环磷酰胺联合应用组。连续给药8天后剥离瘤组织,采用免疫组化法检测肿瘤组织中突变型P53蛋白及肿瘤坏死因子（ TNF-α）的含量。结果：齐墩果酸组与环磷酰胺联合应用对H-22荷瘤小鼠TNF-α含量明显提高,与模型组比较差异显著（ P＜0．05）;齐墩果酸组与环磷酰胺联合应用对H-22荷瘤小鼠突变型P53蛋白表达明显降低,与模型组比较差异显著（P＜0．05）。结论：齐墩果酸组与环磷酰胺联合应用能下调H-22荷瘤小鼠肿瘤细胞内突变型P53蛋白的表达,对H-22荷瘤小鼠肿瘤细胞内TNF-α有明显的诱生作用。     

参芪化瘀方对H22肝癌细胞p53基因表达的影响

目的：观察参芪化瘀方对荷瘤小鼠肿瘤组织p53基因表达的影响,探讨参芪化瘀方对H22肝癌细胞作用的机制。方法：将H22肝癌荷瘤小鼠60只随机分为6组各10只：参芪化瘀方高剂量组、中剂量组、低剂量组,环磷酰胺注射用粉针剂（CTX）对照组,模型组,阴性对照组。参芪化瘀方高、中、低剂量组予以0．4mL中药（浓度分别为4．16g／mL、2．08g／mL、1．04g／mL）灌胃,CTX对照组予以0．2mL[小鼠给药剂量为20mg／（kg·d）]腹腔注射,模型组予以0．4mL生理盐水灌胃,每天1次,给药14天。免疫组织化学法检测肿瘤组织p53基因的表达,并观察其对脾脏指数、胸腺指数及肿瘤抑制率。结果：高、中、低剂量参芪化瘀方都能降低H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织中p53基因的表达水平,且能升高小鼠的脾脏指数、胸腺指数。结论：参芪化瘀方对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织中p53基因的表达具有一定抑制作用,且能保护小鼠的免疫器官。     

麝香保心丸对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞增殖及氧化应激的影响

目的麝香保心丸对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖活性、氧化因子丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶亚基gp91、p22 mRNA表达的影响。方法体外胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞;溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）插入法测定细胞增殖活性;RT-PCR法测定NADPH氧化酶亚基gp91、p22 mRNA的表达;比色法检测细胞上清液MDA、SOD含量。结果与对照组相比,H2O2组细胞增殖活性明显降低（P〈0.01）。与对照组相比,1 g麝香保心丸药物血清组细胞增殖活性明显增高（P〈0.01）;与对照组相比,H2O2组人脐静脉内皮细胞上清液MDA含量显著升高,SOD活性明显降低（P〈0.01）,而麝香保心丸药物血清呈浓度依赖性抑制H2O2诱导HUVEC细胞上清液MDA水平升高及SOD活性降低,1 g药物血清组上清液MDA含量显著低于H2O2组（P〈0.01）,SOD活性明显高于H2O2组（P〈0.05）;RT-PCR结果显示：与对照组相比,H2O2组p22 mRNA表达水平明显升高,对照血清组p22 mRNA表达进一步增加;与对照血清组相比,麝香保心丸1 g、2 g药物血清组p22 mRNA的表达显著降低;麝香保心丸药物血清对H2O2诱导HUVEC细胞NADPH氧化酶gp91 mRNA表达无显著影响。结论麝香保心丸保护血管内皮细胞可能与抑制H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化应激有关。     

健脾柔肝汤对荷肝癌H22小鼠肿瘤组织VEGF表达的影响

目的：观察健脾柔肝汤对荷肝癌H22小鼠肿瘤的抑制作用,并初步探索其作用机制。方法：BALB/c荷H22肝癌小鼠50只,随机分为生理盐水对照组,健脾柔肝汤低、中、高剂量组,5-FU组,观察健脾柔肝汤对小鼠肿瘤的抑制作用;采用荧光定量RT-PCR法测定健脾柔肝汤对荷肝癌H22小鼠肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）基因的表达。结果：健脾柔肝汤低、中、高剂量组,5-FU组的抑瘤率分别为20.56%、50.58%、23.34%、77.52%,与生理盐水组比较,健脾柔肝汤中剂量给药组和5-Fu给药组瘤重均有显著性差异（P〈0.05）,健脾柔肝汤低、高剂量给药组无显著性差异（P〉0.05）;健脾柔肝汤中、高剂量组能明显降低BALB/c小鼠H22肝癌肿瘤组织中VEGF的表达水平（P〈0.05）,以中剂量组最明显（P〈0.01）。结论：健脾柔肝汤对H22肝癌荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用,其机理可能是通过下调荷瘤小鼠肿瘤组织VEGF表达,从而抑制肿瘤组织新生血管生成,抑制肿瘤细胞增殖,达到其抗肿瘤作用。     

右归饮对体外培养破骨细胞分化与功能的影响

目的：探讨右归饮对体外培养破骨细胞的分化、凋亡及骨吸收活性的影响。方法：分离培养大鼠破骨细胞,分别以空白对照血清、地塞米松＋对照血清、地塞米松＋右归饮血清的培养液来培养破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色对TRAP阳性多核破骨细胞计数;采用吖啶橙荧光染色法计数破骨细胞的凋亡率;用RT-PCR测定ATPase a3基因相对表达变化分析破骨细胞骨吸收活性。结果：与空白对照血清组和对照血清＋地塞米松组相比,地塞米松＋右归饮血清组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显著减少（分别为P〈0.01,P〈0.05）,破骨细胞的凋亡率明显增加（P〈0.01）,ATPase a3基因表达明显减少（P〈0.01）。结论：右归饮可抑制破骨细胞的形成和分化及骨吸收活性,促进破骨细胞的凋亡,从而发挥其抗激素性股骨头坏死的作用。     

消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响

目的:研究消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响,探讨其可能的抗癌机制。方法:建立小鼠H22移植瘤模型,分对照组和XJR低、中、高剂量(10、30、90g/kg)组及顺铂(0.001g/kg)组进行治疗,流式细胞术检测各组移植瘤细胞周期及凋亡率,Western blot法检测H22移植瘤细胞Survivin蛋白表达。结果:消癌解毒方各剂量组和顺铂阳性对照组的小鼠平均凋亡率均高于模型组小鼠平均凋亡率。二者比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。FCM细胞周期显示,与模型组比较,消癌解毒方中剂量组和顺铂阳性对照组细胞G0/G1期比例相对增加,P<0.05,差别具有统计学意义,S期及G2从期比例相对下降,细胞周期于G0/G1期发生阻滞,P<0.05,差别具有统计学意义。Western blot法检测各组Survivin蛋白表达结果与模型组相比,各组Survivin蛋白表达均有下降趋势,其中DDP阳性对照组Survivin蛋白表达降低最明显,消癌解毒方10mg/kg低剂组、90mg/kg高剂组和30mg/kg中剂组Survivin蛋白表达也依次降低。结论:消癌解毒方能促进肿瘤细胞凋亡,抑制Survivin蛋白表达,是其抗癌作用机制之一。     

罗布麻总黄酮对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨罗布麻总黄酮对过氧化氢（H2O2）所致的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法：采用MTT法观察不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC增殖的影响,流式细胞仪检测不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC细胞周期变化的影响,采用比色法分别检测细胞培养液NO和SOD的活性、MDA和LDH的含量,免疫组化法测定NF-κB的表达。结果：正常细胞组比,200μmol．L—H2O2模型组细胞增殖活性下降,细胞凋亡率明显增加,G0／G1期细胞比率增加,S期细胞和G2／M期细胞比率明显降低,培养上清液中NO和SOD活性明显下降,MDA和LDH的释放量明显增加,NF—κB的表达时明显增加（P〈0．01）。不同浓度的罗布麻总黄酮作用后,与模型组比较,可明显提高细胞增殖活性,降低细胞凋亡率,降低G0／G1期细胞比率,增加S期细胞和G2／M期细胞比率;并可提高细胞上清液中NO水平和SOD活性,降低MDA和LDH的释放,可抑制H2O2引起的NF-κB的过度表达。其中,中、高剂量组有显著性差异。结论：罗布庥总黄酮对H2O2引起HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节有关NF—κB的表达有关。     

三种治法方药对肝癌H_（22）荷瘤小鼠免疫功能影响的比较研究

目的：观察比较活血化瘀方、清热祛湿方和养阴柔肝方三种不同治法中药复方对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：采用皮下接种肝癌H22细胞的方法建立荷瘤小鼠模型,分别用上述三种中药复方水煎液灌胃处理11d,称量各组脾脏重量,计算脾指数;应用双抗体夹心ABC-ELISA法检测荷瘤小鼠血清IL-2、TNF-α含量的变化。结果：活血化瘀、清热祛湿、养阴柔肝方对H22小鼠脾指数无显著影响（P〉0.05）;与正常对照组相比,模型对照组血清IL-2的含量显著降低（P〈0.05）,各用药组与模型对照比较显著升高（P〈0.05）,三个用药组之间两两比较,也具有显著性差异（P〈0.05）;与正常对照组相比,各组血清TNF-α的含量均显著升高（P〈0.05）,与模型对照比较,各用药组显著降低（P〈0.05）。结论：三种治法均可有效提高移植性H22荷瘤小鼠的IL-2水平,提高小鼠的免疫力,从而对机体起到保护作用,这可能是其有效抗肝癌的疗效机制之一;三种治法（尤其是清热祛湿组）具有抑制荷瘤鼠机体TNF-α水平异常升高的作用,使其维持在一定水平而发挥抗肿瘤、调节机体免疫功能等积极作用。