应用实时荧光定量PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒

目的:对疑似甲型H1N1流感患者标本进行病毒核酸检测确诊,探讨实时荧光定量PCR检测方法在流行性感冒检测诊断中的意义。方法:采用WHO标准实时荧光定量PCR方法对2009年6月～12月萧山地区采集的436份疑似甲型H1N1流感患者咽拭子标本进行病毒核酸检测,并对甲型H1N1流感病毒、甲1型流感病毒、甲3型流感病毒和乙型流感病毒进行快速分型。结果:436份咽拭子标本中有144份呈甲型H1N1流感病毒核酸阳性,阳性率33.03%,另检出甲1型流感病毒15份,甲3型流感病毒30份,没有检出乙型流感病毒。结论:实时荧光定量PCR方法操作方便、耗时短、特异性强、灵敏度高,可作为甲型H1N1流感疫情可靠的快速诊断方法。     

茂名市首例甲型H1N1流感病例的实时荧光RT—PCR检测

[目的]对茂名市首例甲型H1N1流感病例进行病毒核酸检测,为甲型H1N1流感疫情的防控提供参考。[方法]采用实时荧光逆转录PCR法对采集的病人咽拭子标本进行甲型H1N1流感病毒核酸检测。[结果]共采集病人2份咽拭子标本,其中1份咽拭子标本的实时荧光RT—PCR检测结果显示H1及N1的RT—PCR反应体系扩增曲线有明显对数增长且Ct值分别为25．21（H1）和25．07（N1）,为甲型H1N1流感病毒核酸阳性;另1份咽拭子标本则呈阴性。后采集第3份咽拭子标本连同第1分标本送广东省疾控中心复检,结果2份标本的甲型H1N1流感病毒核酸检测均为阳性。[结论]这名病人为福建省第2例甲型H1N1流感病毒感染者的密切接触者,由于及时采用灵敏度高,特异性强,检测时间短的实时荧光逆转录PCR方法检测,快速确诊了病例,为疫情的控制争取了时间,防止了2代病例的出现。     

用3种方法检测一起新甲型H1N1型流感病毒感染暴发流行的结果分析

目的探讨用3种方法检测2013年5月赣州市某小学暴发的一起急性上呼吸道病毒感染病原学的检测结果。方法采集患者急性期咽拭子标本进行流感病毒核酸检测(荧光PCR);咽拭子标本用MDCK细胞进行病毒分离;用患者急性期和恢复期双份血清进行新甲型H1N1型流感病毒的红细胞凝集抑制试验(HI)。结果 14份咽拭子标本中用荧光PCR扩增检测到了13份新甲型H1N1型流感病毒核酸,阳性率为92.9%。14份咽拭子标本用MDCK细胞分离到10株新甲型H1N1型流感病毒,阳性率为71.4%。14名患者中有9名患者双份血清的新甲型H1N1型流感病毒HI试验恢复期抗体比较急性期抗体有4倍或以上增长(阳性率为64.3%)。结论该次急性上呼吸道感染是由新甲型H1N1型流感病毒引起的,3种检测方法各有特点。     

清远市2011年流感监测结果分析

目的:分析清远市2011年流感监测结果,了解流感流行特征,为清远市流感防控工作提供科学依据。方法:选择清远市人民医院作为流感监测的哨点医院,采集疑似流感样患者咽拭子标本。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测流感病毒核酸。结果:清远市2011年检测疑似流感样患者咽拭子标本共484份,流感病毒核酸阳性为36份,总阳性率为7.44%。其中新型甲型H1N1和乙型流感分别占69.44%、16.67%;未分离到季节性H1和H3亚型,A通用型未分型占13.89%。清远市2011年流感活动高峰主要集中在1月-3月份和12月份。结论:清远市2011年春季以新型甲型H1N1流感流行为主,然后逐渐过渡为乙型流感。     

实时荧光定量PCR法检测镇江市流感样病例样本的结果与分析

目的建立实时荧光定量PCR快速检测流感病毒核酸的检测方法,并对2009年镇江市流感检测结果进行分析,为流感的预防控制提供科学依据。方法采集镇江市3家哨点医院的流感样病例和暴发疫点现患病例的咽拭子标本,应用实时荧光定量PCR方法进行检测。结果2229份哨点医院采集的标本中检测出流感核酸阳性标本758例,其中423份为新甲型H1N1,242份为H3N2,8份为H1N1,26份为B型;356份暴发疫情采集的标本中检测出流感核酸阳性标本165例,其中112份为新甲型H1N1,51份为H3N2,2份为B型。结论镇江市哨点医院2009年6-7月流感流行为B型流感,8-9月流行H3N2型流感,10-12月流行新甲型H1N1;暴发疫情6月份出现首例新甲型H1N1,7月和8月新甲型H1N1以局部暴发为主要特征,9-12月新甲型H1N1所占流感病毒阳性比例呈明显增加趋势,应重点加强学校以及聚集性地方新甲型H1N1流感的监测和防制工作。     

免疫渗滤法在甲型流感病毒筛查中的应用

目的评价免疫渗滤法在筛查临床甲型H1N1流感病毒感染中的诊断效率。方法收集2009年6月-10月医院发热门诊流感样病例咽拭子标本297例,分别用免疫渗滤法和实时荧光定量PCR检测,以评价免疫渗滤法的诊断效率。结果在297份咽拭子标本中,实时荧光定量PCR法检测为甲型H1N1流感166份,免疫渗滤法检出115份,两种方法检测均为阳性91份,均为阴性107份,灵敏度为54.82%,特异度为81.86%,阳性预测值为79.1%,阴性预测值为58.8%,总符合率66.67%,两种方法在甲型流感病毒检测中差异无统计学意义。结论免疫渗滤法可用于甲型流感病毒筛查,显示出良好的临床应用前景。     

邵阳市2009年流感流行病毒核酸检测结果分析

目的对疑似流感疫情标本进行核酸检测、明确感染因子,为邵阳市流感的防控提供科学依据。方法采用RT-PCR法及Real-Time RT-PCR法对可疑咽拭子标本进行流感病毒核酸分型检测。结果 958份可疑咽拭子标本中有483份流感病毒核酸阳性,阳性率50.42%,其中季节性甲型（甲1亚型/甲3亚型）流感核酸阳性107份,占11.17%;乙型流感核酸阳性13份,占1.36%;甲型H1N1核酸阳性363份,占37.89%.7-24岁年龄段H1N1检测阳性率为73.83%。60岁以上年龄段阳性率仅为1.38%。结论 2009年邵阳市检出的流感流行病毒株以甲型H1N1流感病毒为主。Real-Time RT-PCR技术是流感疫情临床病例诊断可靠的快速诊断方法。     

西宁市首起乡镇中学甲型HIN1流感暴发疫情分析

目的了解甲型H1N1流感暴发疫情的特点,为控制学校甲型H1N1流感暴发疫情提供科学依据。方法采取现场流行病学调查方法,对2009年9月西宁市首起甲型H1N1流感暴发乡镇中学所有病例进行问卷调查。对发病3d内患者采集咽拭子标本,使用荧光定量PCR方法检测甲型H1N1流感病毒核酸,对密切接触者进行7d的医学观察。收集学校所在社区部分流感样病例咽拭子标本,了解甲型H1N1流感病毒感染状况。结果疫情持续14d,共发生流感样病例96例,罹患率为18．46％。采集53份患者咽拭子标本中27份甲型H1N1核酸为阳性,阳性率为50．94％。302名密切接触者未发生被感染病例。275份社区流感样病例咽拭子标本甲型H1N1流感核酸阳性率为10．18％。结论西宁市首起乡镇中学甲型H1N1流感暴发疫情感染来源为社区;甲型H1N1流感疫情流行病学特征与季节性流感相似。     

赤峰市2013-2015年流感病毒核酸检测结果分析

目的 通过分析2013-2015年的疑似流感样本检测结果探讨研究本地区流感病毒流行规律,为赤峰市流感的防控提供科学依据.方法 对赤峰市流感监测哨点医院(赤峰市医院)定期采集并送检的流感样病例咽拭子标本,采用荧光定量PCR法进行流感病毒核酸检测,对结果进行分析,总结本市2013-2015年度流感的流行趋势.结果 1785份咽拭子样本中有253份流感病毒核酸检测呈阳性,阳性率为14.17％,2013、2014、2015年的流感病毒核酸检测总阳性率分别为16.18％、17.78％、8.92％:其中甲型H1N1、乙型、季节性H3N2流感的核酸阳性样本分别为88份、41份、124份,阳性率分别为4.93％、2.30％、6.95％.流感发病率有较明显的季节规律性,以1、2、3、11、12月为流感的高发季节.结论 采用荧光定量PCR法对流感样本进行核酸检测,定期分析本地区流感病毒的流行特点和趋势,对流感的防控具有重要意义.     

2013-2014年北京市门头沟区流感病原学监测

目的通过对2013-2014年北京市门头沟区流感流行季病原学监测分析,明确门头沟区2013-2014年流感流行株、毒株变异情况以及流感病原学的特征,为流感疫情防控提供科学依据。方法将流感样病例(ILI)的咽拭子标本进行流感病毒核酸检测,并利用狗肾细胞(MDCK)进行病毒分离检测,病毒分离后采用血凝试验方法(HA)判断是否有病毒存在,并利用实时荧光定量PCR法进行流感病毒型别的鉴定。结果 2013年10月-2014年4月共检测流感样病例(ILI)咽拭子标本452份,核酸阳性的标本为109例(核酸阳性率为24.11%),其中新甲型H1N1共31株、H3N2型34株、乙型BY44株。细胞分离到流感病毒83株(阳性率18.36%),其中新甲型H1N1共26株、H3N2型28株、乙型BY29株。结论门头沟区流感病毒在2013-2014年新型H1N1、H3N2、乙型BY型别均有流行。     

镇江地区流感哨点对新甲型H1N1流感的预警作用

目的应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)快速检测技术对镇江地区流感哨点医院流感样病例定期检测,为预警疫情提供科学依据。方法每周采集镇江市3家哨点医院的流感样病例和暴发疫区现患病例的咽拭子标本以及部分流感样病例血清标本。应用实时荧光定量PCR方法进行核酸检测,对部分流感样血清标本用血凝抑制试验方法进行H1亚型抗体检测,并对检测结果进行趋势分析。结果 2229份哨点医院采集的标本中检测出流感核酸阳性标本750例,其中423份为新甲型H1N1,293份为H3N2,8份为H1N1,26份为B型;356份暴发疫情采集的标本中检测出流感核酸阳性标本165例,其中112份为新甲型H1N1,51份为H3N2,2份为B型。哨点医院流感时间趋势,2009年6～7月以B型流感为主,8～9月转变为H3N2型流感流行,10～12月新甲型H1N1普遍流行。暴发疫情6月份出现首例新甲型H1N1,7月和8月新甲型H1N1呈现局部暴发,9～12月新甲型H1N1病例显著增加。362份流感样病例检测出H1亚型抗体阳性标本85例,阳性率为23.48%。结论应用哨点医院的流感样病例检测结果,可预测流感的变化趋势,提前采取控制...     

甲型H1N1流感病毒real-time RT-PCR检测方法的研究与应用

[目的]建立一种特异、灵敏、快速的Real-Time RT-PCR方法用于检测甲型H1N1流感病毒核酸.[方法]采用WHO所推荐的引物与探针序列,对Real-Time RT-PCR反应体系和反应条件进行调整优化,检测该方法的特异性和灵敏度.并对疑似甲型H1N1流感病例咽拭子标本进行检测.[结果]该方法对甲型H1N1流感病毒的检测的灵敏度达10-7(HA滴度为1:128),可从疑似甲流感患者咽拭子中直接检测流感病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需2.5 h左右.[结论]建立的TagMan探针法Real-Time RT-PCR是一种检测甲型H1N1流感病毒的快速、特异、敏感的新方法,适合于基层疾控机构及医院开展甲型H1N1流感的应急检测.     

柯桥区哨点医院流行性感冒病原学三年检测结果分析

目的分析2013—2015年绍兴市柯桥区哨点医院流行性感冒(流感)病原学检测结果,为今后流感防控工作提供依据。方法采用实时荧光定量PCR法对流感样病例咽拭子标本进行流感病毒核酸分型鉴定,并对结果进行描述性分析。结果 2013—2015年共采集917份咽拭子标本,流感病毒核酸阳性124份,阳性率为13.52%。其中季节性H3N2病毒阳性38份,新甲型H1N1病毒阳性37份,乙型流感病毒阳性49份。流感流行高峰主要出现在每年12月—次年2月。不同性别病例的流感病毒核酸阳性率比较差异无统计学意义(P0.05)。不同年龄组阳性率比较差异有统计学意义(P0.05),其中60岁~组阳性率最高,为21.74%。结论柯桥区流感流行呈明显季节性,流感病毒阳性率与性别无关,但与年龄有关,应在流行季节加强对老年人群的健康教育。     

实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用效果。方法选取2009年9月—2013年12月在我州采集的流感样病例咽拭子2489件进行分析,采用实时荧光定量PCR对流感病毒核酸进行检测,观察检测阳性率和阳性样本的类型,以分析流感的流行趋势。结果 2009年9月—2013年12月共检出流感病毒核酸阳性676件,检测阳性率为27.16%;其中甲型H1N1病毒472件,占69.82%;季节性甲3亚型病毒126件,占7.54%;季节性甲1型病毒21件,占3.11%;乙型病毒6件,占0.89%;各类型流感病毒发生率之间差异具有统计学意义（P〈0.05）。每年6-9月甲型H1N1病毒流感呈上升趋势,在10-11月达到高峰期;6-9月以季节性甲3亚型病毒为主要流行病株,10-11月甲型H1N1病毒成为主要流行病株。结论实时荧光定量PCR是一种科学有效的检测方法,可对流感病毒核酸进行快速、准确的检测,分析流感病毒的流行规律,有效预防突发公共卫生事件的发生。     

2013年广东省潮州市流行性感冒流行特征分析

目的了解广东省潮州市2013年度流行性感冒流行特征及病毒流行株构成。方法采集监测哨点医院疑似流感样患者咽拭子标本,采用实时荧光PCR(real-time RT-PCR)检测病毒核酸。结果全市流感检测哨点医院共采集标本830份,流感病毒核酸阳性为53份,阳性率为6.39%;其中新甲型H1N1流感占49.06%(26/53)、乙型流感病毒占28.30%(15/53)、季节性流感病毒H3亚型占22.64%(12/53),未分离到季节性流感病毒H1。4月和12月为年度病毒检测高峰。病毒感染率以5¹4岁组(14.12%)最高,与其它组比较存在统计学差异(P<0.05)。结论 2013年度潮州市流感病毒优势株为新型甲型H1N1,全年有2个流行高峰,在4月和12月,主要发病人群为学龄前儿童和小学生。     

九江市首例人感染H7N9禽流感的实验室检测分析

目的对九江市首例人感染H7N9禽流感患者进行实验室检测分析,为禽流感疫情的判定及制定防控措施提供依据。方法提取患者标本、活禽交易市场环境标本的病毒核酸,用荧光定量PCR方法检测甲型、乙型流感病毒核酸片段、季节性流感(包括H1N1、H3N2)、甲型H1N1、禽流感病毒H9、H7和H5核酸片段。结果乙型流感、季节性流感(包括H1N1、H3N2)、甲型H1N1流感、H9和H5高致病性禽流感扩增结果均为阴性;甲型流感通用引物和H7N9亚型流感病毒扩增结果均为阳性。活禽交易市场外环境标本中检出1份H7N9禽流感病毒核酸阳性。结论在日常流感样病例监测中要关注非常见流感病毒型别的监测,为研判我国流感的流行趋势提供依据。     

新型甲型H1N1流感病毒的实验室检测

目的利用RT-PCR技术,建立并优化快速、敏感、特异的检测新型甲型H1N1流感病毒的方法,并进行初步应用。方法设计高度特异性引物,优化常规RT-PCR和Real-time Fluores-cent Quantitative PCR反应体系,并对2009年惠州市流感样病例咽拭子标本进行甲型H1N1流感病毒RNA的检测。结果荧光定量RT-PCR与常规RT-PCR方法均有较高的特异性,与季节性H1N1、H3N2和B型流感病毒等无交叉反应,两种PCR检测结果的一致率达到99.5%以上,均能快速准确检测出患者咽拭子标本的甲型H1N1流感病毒,且荧光定量RT-PCR最低模板检测限在0.5pg以下。结论常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR不仅特异性高,而且比病毒分离法更敏感、简便和快速,适合甲型H1N1流感病毒的快速检测,为早期诊断、定量分析甲型H1N1流感病毒感染程度奠定基础。     

某中学一起流感暴发疫情实验室检测分析

目的分析安阳市北关区暴发流感病例不同标本中流感病毒检测结果,为流感常规检测方案的制定提供依据。方法将我区胜利路中学2017年12月疑似流感疫情暴发中的25名症状严重、体温≥38℃,伴有咳嗽或咽痛之一的学生作为研究对象,同时采集咽拭子、鼻拭子标本,分别以实时荧光定量(RT-PCR)法进行流感病毒核酸检测。一周内,以MDCK细胞培养分离病毒进行分型鉴定。比较RT-PCR法核酸检测中,咽拭子、鼻拭子标本流感病毒阳性检出率。结果RT-PCR法核酸检测中,咽拭子标本流感病毒阳性率72%高于鼻拭子标本56%(P0.05);咽拭子H1Ct平均值为32.02±5.52,小于鼻拭子H1Ct平均值35.34±6.37(P0.05)。MDCK细胞培养病毒样本分离鉴定结果显示,咽拭子标本流感病毒真阳性率100%高于鼻拭子标本真阳性率77%(P0.05)。结论在甲型H1N1流感病毒核酸检测中,鼻拭子检测准确性不及咽拭子,在流感病毒常规检测中,应进行鼻、咽拭子双采样,以确保检测准确性,无法同时采样时,应依据当季流行的主要流感病毒亚型选择采样拭子。     

菏泽市2011年流行性感冒病毒监测分析

目的了解2011年菏泽市人群感染流行性感冒(流感)病毒的情况。方法 2012年1—2月选择2011年在菏泽市立医院就诊的流感样患者鼻、咽拭子标本434份,进行流感病毒分离和PCR核酸检测,并对结果进行分析。结果 2011年共采集并检测434份流感样病例标本,流感病毒阳性28份,其中甲型H1N1流感病毒3份,甲型H3流感病毒3份,乙型流感病毒22份。阳性标本采集于1—4月份和11—12月份。结论 2011年菏泽市人群感染的流感病毒主要是乙型流感病毒,但甲型流感均发生在年初。     

2009年鞍山地区甲型H1N1流感疫情实验室检测

目的:对鞍山市流感样病例采样进行甲型H1N1流感病毒核酸检测,为甲型H1N1流感疫情防控提供依据。方法:采集鞍山地区出现流感样症状的病例采集咽拭子600份,提取标本核酸,采用实时荧光PCR试剂盒检测。疑似病例进行A型/B型流感初筛、H1/H3分型、甲型H1N1检测,出院病人进行甲型H1N1检测。结果:疑似病例600份,确诊新甲型H1N1 135例,重症病例15例,死亡2例,而出院病例标本均为甲型H1N1阴性。结论:实验室检测为鞍山地区甲型H1N1流感疫情的确认、防控以及病人的处理提供了依据,发展实验室检测技术具有重要的意义。