丹酚酸B对脓毒症小鼠血管平滑肌细胞炎症反应的影响：circACTA2在其中的作用

目的评价丹酚酸B(Sal B)对脓毒症小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)炎症反应的影响及circACTA2在其中的作用。方法在体实验:健康雄性C57BL/6小鼠81只, 6～8周龄, 采用随机数字表法分为3组(n=27):假手术组、脓毒症组和Sal B组。采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症模型。模型制备成功后, Sal B组腹腔注射Sal B 7 mg/kg, 1次/d, 连续2 d。每组随机取20只小鼠用于造模后7 d内测定SBP、DBP、MAP、全血乳酸(Lac)浓度, 记录生存情况。造模后48 h时每组随机取7只小鼠, 取动脉血管组织, 采用免疫荧光染色法测定IL-1β表达, 分别采用Western blot法和qRT-PCR法测定IL-1β、TNF-α、IL-6及其mRNA的表达, 采用qRT-PCR法测定circACTA2的表达。细胞实验:小鼠动脉VSMC培养后, 采用随机数字表法分为6组(n=3):对照组(C组)、LPS组、Sal B组、si-circACTA2+C组、si-circACTA2+LPS组和si-circACTA2+Sal B组。LPS组采用LPS(终浓度1 μg/ml...     

过表达膜联蛋白A1的人脂肪间充质干细胞治疗急性呼吸窘迫综合征小鼠的效果及其机制

目的探索过表达膜联蛋白A1(ANXA1)的人脂肪间充质干细胞(AMSC)治疗急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠的效果及其机制。方法采用实验研究方法。采用流式细胞术鉴定成人AMSC后, 取第3代细胞进行后续实验。采用随机数字表法(分组方法下同), 将细胞分为转染含ANXA1基因RNA序列的质粒的过表达ANXA1组、转染对应空载质粒的空载对照组, 另取细胞分为转染含ANXA1基因小干扰RNA序列的质粒的敲减ANXA1组、转染对应空载质粒的空载对照组, 转染后72 h, 于荧光显微镜成像系统下观察荧光表达情况, 分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测ANXA1的蛋白和mRNA表达(样本数均为3)。取50只6～8周龄雄性C57BL/6J小鼠, 分为假伤组、单纯ARDS组、正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组, 每组10只。将后4组小鼠均用内毒素/脂多糖制成ARDS肺损伤模型, 假伤组小鼠模拟致假伤。伤后即刻, 假伤组、单纯ARDS组小鼠均经尾静脉注射生理盐水, 正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组小鼠对应注射正常AMSC、过表达ANXA1的AMSC、敲减A...     

TRPV4在右美托咪定改善机械通气致脑损伤小鼠认知功能降低中的作用

目的评价瞬时受体电位香草酸4(TRPV4)在右美托咪定改善机械通气致脑损伤小鼠认知功能降低中的作用。方法清洁级健康雄性C57BL6小鼠90只, 体质量20～25 g, 8～12周龄, 采用随机数字表法分为5组(n=18):对照组(C组)、机械通气组(V组)、HC-067047组(H组)、右美托咪定组(D组)和右美托咪定+GSK1016790A组(DG组)。C组不行机械通气, 自主呼吸空气6 h;V组机械通气6 h;H组机械通气3和6 h时分别脑室内注射TRPV4阻断剂HC-067047 10 mmol;D组和DG组机械通气前30 min腹腔注射右美托咪定50 μg/kg;DG组机械通气前60 min脑室内注射TRPV4激动剂GSK1016790A 5 μmol。每组随机取6只小鼠分别于机械通气前1 d、机械通气后3和7 d时行Morris水迷宫实验。机械通气后1 d, 每组随机处死6只小鼠取脑组织, 采用TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡情况, 计算凋亡指数。每组随机处死6只小鼠取海马组织, 采用Western blot法检测TRPV4、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)、p-Akt...     

蛋白酶体抑制剂对骨关节炎大鼠NF-κB信号通路的影响

目的 观察蛋白酶体抑制剂MG-132对骨关节炎软骨及滑膜组织NF-κB信号通路的影响.方法 SD大鼠144只,离断前十字韧带及内侧半月板建立膝关节骨关节炎模型,随机分为四组:MG-132组,造模术后24h于膝关节腔内注射100 μl质量浓度为0.007 g/L的MG-132溶液;DMSO(二甲基亚砜,Dimethyl sulfoxide)组,造模术后24h于膝关节腔内注射100μl体积分数为0.1％的DMSO溶液;假手术组,仅行关节囊切开;正常对照组,仅于膝关节腔内注射100μl质量浓度为0.007 g/L的MG-132溶液.术后2、4和12周处死动物,于膝关节软骨组织及滑膜组织取材,行病理形态学观察,根据Mankin评分标准进行半定量评估;应用RT-PCR法检测NF-κB p65、I-κB、TNF-α、IL-1β等基因mRNA的表达水平;荧光分光光度法检测20S蛋白酶体活性,并行相关性分析.结果 MG-132组各时相的Mankin评分均比DMSO组低,假手术组与正常对照组相近且较前两组低,差异有统计学意义.MG-132组各时相的软骨及滑膜组织中NF-κB p65、IL-1β、TNF-α mRNA表达水平均低于DMSO组,除2周滑膜组织NF-κB p65和12周软骨组织IL-1β mRNA外差异均有统计学意义.MG-132组术后2周软骨组织及4周滑膜组织I-κB mRNA表达水平高于DMSO组,差异有统计学意义.结论 MG-132具有减轻滑膜炎症、保护关节软骨的作用,从而延缓骨关节炎进程.     

白细胞介素4修饰的金纳米酶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损的作用

目的探讨白细胞介素4修饰的金纳米酶颗粒(IL-4-AuNP)对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用及其机制。方法采用实验研究方法。改进文献中的方法合成金纳米酶颗粒(AuNP)及IL-4-AuNP, 采用透射电子显微镜拍摄2种颗粒形貌并计算其粒径, 采用纳米粒度电位仪和粒度分析仪分别检测2种颗粒的表面电位和水合粒径。采用过氧化氢检测试剂盒和超氧阴离子检测试剂盒检测IL-4-AuNP的过氧化氢清除率和超氧阴离子清除率。取小鼠成纤维细胞系3T3细胞, 采用随机数字表法(下同)将其分为空白对照组、仅使用过氧化氢处理的单纯过氧化氢组、先使用IL-4-AuNP处理0.5 h再使用过氧化氢处理的过氧化氢+IL-4-AuNP组, 培养24 h后, 采用免疫荧光法检测细胞活性氧水平, 采用细胞计数试剂盒8检测细胞相对存活率。取Raw264.7小鼠巨噬细胞, 将其分为空白对照组和用IL-4-AuNP处理的IL-4-AuNP组, 培养24 h后, 采用免疫荧光法观测细胞中精氨酸酶1(Arg-1)的表达。取12只8～10周龄雄性BALB/c小鼠(小鼠周龄、性别、品系下同), 分为IL-4-AuNP组和空白对照...     

吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠心肌损伤及线粒体生物合成的影响

目的评价吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠心肌损伤及线粒体生物合成的影响。方法清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠128只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H组)、脓毒症组(Sep组)和脓毒症+氢气组(Sep+H组)。采用盲肠结扎穿孔术建立小鼠脓毒症模型。Sham+H组和Sep+H组分别于术后1和6 h时吸入67%氢气1 h。每组随机取20只小鼠, 观察术后7 d生存情况。剩余小鼠于术后24 h时取血液标本, 采用ELISA法测定血清TNF-α、IL-1β、cTnI和CK-MB浓度;取心肌组织, HE染色后进行心肌病理评分, 采用荧光分光光度法检测线粒体膜电位(MMP), 萤光素酶法检测ATP含量, Western blot法测定过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)、核呼吸因子2 (NRF2)、线粒体转录因子A(TFAM)的表达。结果与Sham组比较, Sep组生存率降低, 血清TNF-α、IL-1β、cTnI和CK-MB浓度和心肌病理评分升高, MMP和ATP含量降低, 心肌组...     

蛋白酶体抑制剂对骨关节炎大鼠NF-κB 信号通路的影响

 目的 观察蛋白酶体抑制剂MG-132 对骨关节炎软骨及滑膜组织NF-κB 信号通路的影响。方法 SD大鼠144 只, 离断前十字韧带及内侧半月板建立膝关节骨关节炎模型, 随机分为四组: MG-132 组, 造模术后24 h于膝关节腔内注射100 μl 质量浓度为0.007 g/L的MG-132 溶液;DMSO(二甲基亚砜, Dimethyl sulfoxide)组, 造模术后24 h于膝关节腔内注射100 μl 体积分数为0.1% 的DMSO溶液;假手术组, 仅行关节囊切开;正常对照组, 仅于膝关节腔内注射100 μl 质量浓度为0.007 g/L 的MG-132 溶液。术后2、4 和12 周处死动物, 于膝关节软骨组织及滑膜组织取材, 行病理形态学观察, 根据Mankin 评分标准进行半定量评估;应用RT-PCR 法检测NF-κB p65、I-κB、TNF-α、IL-1β等基因mRNA的表达水平;荧光分光光度法检测20S 蛋白酶体活性, 并行相关性分析。结果 MG-132 组各时相的Mankin评分均比DMSO组低, 假手术组与正常对照组相近且较前两组低, 差异有统计学意义。MG-132组各时相的软骨及滑膜组织中NF-κB p65、IL-1β、TNF-αmRNA 表达水平均低于DMSO组, 除2 周滑膜组织NF-κB p65 和12 周软骨组织IL-1βmRNA外差异均有统计学意义。MG-132 组术后2 周软骨组织及4 周滑膜组织I-资B mRNA表达水平高于DMSO 组, 差异有统计学意义。结论 MG-132 具有减轻滑膜炎症、保护关节软骨的作用, 从而延缓骨关节炎进程。     

术后认知功能障碍小鼠miR-146a表达的变化

目的观察术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)小鼠术后血清、海马及前额叶皮质中miR-146a表达的变化。方法雄性C57BL/6小鼠50只,12~14周龄,体重25~30g,采用随机数字表法将其分为两组:对照组(C组)和麻醉手术组(AS组),每组25只。AS组在2.1%异氟醚吸入麻醉下行胫骨骨折开放复位内固定术,C组不行麻醉和手术处理。于术前24h及术后6、12、24、48h每组分别取3只小鼠进行摘眼球取血,处死后取海马和前额叶皮质,采用RT-PCR法测小鼠血清、海马和前额叶皮质中miR-146a表达量。于术后第1、3、7天每组各取10只小鼠,进行场景恐惧记忆实验和声音提示恐惧记忆实验,记录僵直时间百分比。结果与C组比较,AS组场景恐惧记忆实验中僵直时间百分比明显降低(P0.05),声音提示恐惧记忆实验中两组僵直时间百分比差异无统计学意义。在血清中,与C组比较,术后6、12、24、48h AS组miR-146a表达量明显升高(P0.05);与术后12h比较,术后6、24、48hAS组miR-146a表达量明显降低(P0.05)。在海马中,与C组比较,术后6、12、24、48h AS组miR-146a表达量明显升高(P0.05);与术后12h比较,术后6、48h AS组miR-146a表达量明显降低(P0.05)。在前额叶皮质中,与C组比较,AS组术后24、48h miR-146a表达量明显升高(P0.05);与术后24h比较,术后48h AS组miR-146a表达量明显升高(P0.05)。结论 POCD小鼠血清、海马及前额叶皮质中miR-146a表达升高,miR-146a表达量的变化可能与POCD的发病机制相关。     

Sirt1在急性炎症状态下糖尿病小鼠肾损伤中的作用

目的 探究Sirt1在急性炎症状态下糖尿病小鼠肾损伤中的作用及分子机制。方法选择SPF级C57BL/6J雄性小鼠40只,8周龄,体重20～25 g。采用随机数字表法将小鼠分为五组：对照组(C组)、糖尿病组(D组)、脂多糖(LPS)+糖尿病组(L组)、LPS+糖尿病+Sirt1阻断剂EX527组(E组)和LPS+糖尿病+Sirt1激动剂银杏黄酮苷元组(G组),每组8只。糖尿病小鼠模型制备成功后,L组腹腔注射LPS 10 mg/kg; E组在糖尿病小鼠给予LPS处理前1 h腹腔注射EX527 5 mg/kg(溶于DMSO 0.2 ml);G组在糖尿病小鼠给予LPS处理前1 h腹腔注射银杏黄酮苷元200 mg/kg(溶于DMSO 0.2 ml);C组和D组在相同时点腹腔注射2%DMSO 0.15 ml。收集24 h尿液测定24h尿量和24 h尿蛋白浓度,眼球取血检测血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)浓度。取肾组织后采用ELISA法检测IL-1β、IL-18浓度,硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量,铁离子抗氧化能力法检测总抗氧能力(T-AOC),qPCR和Western blot法检测Si...     

艾司氯胺酮对小鼠抗抑郁作用的机制与海马GABAB受体的关系

目的评价艾司氯胺酮对小鼠抗抑郁作用的机制与海马γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)的关系。方法雄性C57BL/6J(B6)小鼠54只, 8周龄, 体质量25～30 g, 取40只小鼠采用慢性社会挫败应激法建立抑郁模型, 造模后第11天时采用社交回避实验筛选出26只抑郁易感小鼠, 采用随机数字表法分为2组(n=13):抑郁易感组(Sus组)和抑郁易感+艾司氯胺酮组(Sus+S-ket组);剩余的14只小鼠作为对照组(C组)。造模后第12天开始, Sus+S-ket组连续3 d每天腹腔注射艾司氯胺酮10 mg/kg, C组和Sus组连续3 d每天腹腔注射等容量生理盐水。最后一次腹腔注射后1 h时行旷场实验, 记录运动总距离;旷场实验结束后1 d时行强迫游泳实验, 记录不动时间;强迫游泳实验结束后1 d时行糖水偏好实验, 计算糖水消耗比例。行为学测试结束后1 h时深麻醉下处死小鼠, 取海马组织, 采用Western blot法检测GABABR1、GABABR2、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、磷...     

吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠急性肾损伤及线粒体动力学的影响

目的评价吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠急性肾损伤(AKI)及线粒体动力学的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠128只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H组)、脓毒症AKI组(S-AKI)和脓毒症AKI+氢气组(S-AKI+H组)。采用盲肠结扎穿孔法建立小鼠脓毒症模型。Sham+H组和S-AKI+H组于假手术或造模后1和6 h时分别吸入67%氢气+33%氧气1 h。取20只小鼠观察造模后7 d的生存情况。于造模后24 h时, 取血标本, 采用比色法测定血清BUN和Cr浓度;取肾组织, HE染色后进行肾小管损伤评分, 采用ELISA法测定肾组织TNF-α、IL-1β和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的含量, 采用分光光度法测定SOD和过氧化氢酶(CAT)的活性, 采用Western blot法测定动力相关蛋白1(Drp1)和线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达水平。结果与Sham组比较, S-AKI组生存率降低, 血清BUN和Cr浓度、肾小管损伤评分、肾组织TNF-α、IL-1β和HMGB1含量升高,...     

自噬在氢气减轻脓毒症小鼠心肌损伤中的作用

目的评价自噬在氢气减轻脓毒症小鼠心肌损伤中的作用。方法清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠192只, 6～8周, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为6组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H2组)、脓毒症组(S组)、脓毒症+氢气组(S+H2组)、脓毒症+巴佛洛霉素组(S+BafA1组)和脓毒症+氢气+巴佛洛霉素组(S+H2+BafA1组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症模型。Sham+H2组、S+H2组及S+H2+BafA1组于CLP后1和6 h吸入2%氢气1 h。S+BafA1组和S+H2+BafA1组于CLP后1 h腹腔注射巴佛洛霉素A1 1 mg/kg。每组随机取20只小鼠, 记录CLP后7 d的生存情况。于CLP后24 h处死小鼠, 光镜下观察心肌组织病理学改变, 进行病理学评分, ELISA法检测血清cTnI浓度, 采用Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62表达水平, 计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与Sham组比较, S组生存率降低, 血清cTnI浓度和心肌组织病理学评分升高, 心肌组织P62表达上调...     

c-Jun氨基端激酶介导细胞自噬参与肠缺血再灌注肺损伤

目的探讨c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通路活化在肠缺血再灌注(II/R)肺损伤的作用及其机制。方法夹闭6～8周龄雄性SD大鼠肠系膜上动脉[SCXK(京)2016-006]建立II/R肺损伤模型, 首先用随机数据表法将36只大鼠随机分为假手术组(Sham)及肠缺血45 min后再灌注即刻(0)、2、6、8、16 h组(每组6只), 蛋白质印迹法(Western blot)检测II/R肺组织磷酸化JNK(p-JNK)及活化蛋白-1(AP-1)蛋白表达;然后再取24只大鼠随机分为Sham组, II/R+溶剂对照组(II/R), II/R+JNK抑制剂组(JNK-), II/R+JNK激动剂组(JNK+), 每组6只, JNK抑制剂SP600125或JNK激动剂Anisomycin预处理大鼠, II/R后6 h处死大鼠提取肺组织, Western blot方法检测肺磷酸化JNK(p-JNK)、AP-1蛋白水平, 免疫荧光检测自噬相关蛋白Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)及p62表达, 测量肺组织湿/干重比(W/D)及苏木精-伊红(HE)染色显微镜观察肺组织病理性学改变, ...     

单细胞RNA测序解析普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面中CD34+细胞的类型与功能

目的单细胞RNA测序解析普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面中CD34+细胞的类型与功能。方法该研究为实验研究。构建CD34+细胞谱系追踪小鼠, 实现CD34+细胞在荧光条件下可视化。取6只7～8周龄雄性CD34+细胞谱系追踪小鼠(设为糖尿病组), 腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病模型, 于小鼠13周龄时在其背部制备全层皮肤缺损创面;另取6只13周龄雄性CD34+细胞谱系追踪小鼠(设为对照组), 在其背部制备全层皮肤缺损创面。伤后4 d, 分别收集对照组3只小鼠和糖尿病组2只小鼠创面组织, 消化制备单细胞悬液, 采用荧光活化细胞分选法筛选出CD34+细胞后进行单细胞RNA测序, 采用R语言的Seurat 4.0.2程序通过降维可视化和细胞聚类分析CD34+细胞类型并筛选注释各CD34+细胞亚群的标记基因, 对2组小鼠创面组织间CD34+成纤维细胞(Fb)、平滑肌细胞、角质形成细胞(KC)、类软骨细胞的差异表达基因(DEG)进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)富集分析, 探索细胞功能。结果伤后4 d, 2组小鼠创面组织中CD34+细胞均包含7种细胞类型, 具体为内皮细...     

猪膀胱脱细胞基质对小鼠骨髓源巨噬细胞运动和极化的影响

目的探讨猪膀胱脱细胞基质(UBM)对小鼠骨髓源巨噬细胞的运动和极化情况的影响, 为临床创面修复中支架的合理选用提供依据。方法采用实验研究方法。采用扫描电子显微镜观察猪UBM和可吸收敷料的微观结构。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察2种支架浸提液的蛋白质分布。取6只6～8周龄雄性C57BL/6J小鼠(小鼠周龄、性别、品系下同)并提取骨髓源细胞后诱导原代巨噬细胞并鉴定。取3批次巨噬细胞, 均分为猪UBM浸提液组和可吸收敷料浸提液组, 加入含有相应浸提液的DMEM/F12培养基培养, 行划痕试验检测并计算划痕后1、3、7 d的细胞迁移率;行Transwell实验检测培养12、24 h的细胞迁移数量;培养24 h, 采用流式细胞仪检测CD206或CD86阳性细胞百分比。以上细胞实验样本数均为3。取12只小鼠, 于每只小鼠背部左右两侧各制作1个切口, 左侧切口纳入猪UBM组、右侧切口纳入可吸收敷料组, 分别植入相应支架。术后7、14 d, 行苏木精-伊红染色观测支架中浸润的炎症细胞数量, 采用免疫组织化学法观测支架中F4/80、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白...     

电针对急性术后痛大鼠背根神经节PD-L1/PD-1-SHP-1信号通路的影响

目的评价电针对急性术后痛大鼠背根神经节(DRG)程序性细胞死亡配体1(PD-L1)/程序性细胞死亡受体(PD-1)/含Src-同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)信号通路的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠39只, 体质量220～250 g, 6～8周龄, 采用随机数字表法分为3组(n=13):对照组(C组)、腹部手术组(S组)和腹部手术+电针组(S+EA组)。S组和S+EA组在异氟烷麻醉下行腹部手术。S+EA组于术毕即刻和术后2 h时, 选取双侧足三里和三阴交穴进行电针刺激30 min, 频率为10 Hz连续波, 电流为1 mA。每组取7只大鼠, 分别于造模前1 d(T0)和造模后3、5、7、9、11、24 h时(T1～6), 依次测定机械缩足反应阈(MWT)、机械缩腹反应阈(ACT)、热缩足潜伏期(TWL)和冷缩足潜伏期(CWL)。于造模后5 h每组处死6只大鼠, 取出T12～L4 DRG, 分别采用Western blot法检测IL-6、PD-L1、PD-1和SHP-1的表达, 采用免疫荧光法观察PD-L1在各类神经元的表达情况。结果 3组不同时点TWL和CWL比较差异无统计...     

小鼠真皮毛乳头细胞外囊泡对人增生性瘢痕成纤维细胞的影响及其机制

目的探讨小鼠真皮毛乳头细胞外囊泡(DPC-EV)对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)的影响及其机制。方法该研究为实验研究。取10只6周龄雄性C57BL/6J小鼠, 提取触须的原代真皮毛乳头细胞(DPC)并成功鉴定。取第3～5代DPC, 于培养24 h采用超高速离心法提取DPC-EV, 采用透射电子显微镜观察形态、纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径(样本数为3)。将第3代HSF分为DPC-EV组和磷酸盐缓冲液(PBS)组, 分别加入DPC-EV、PBS培养, 行细胞划痕试验并计算划痕后24 h细胞迁移率(样本数为5), 采用细胞计数试剂盒8检测培养0(行饥饿处理12 h后、加入DPC-EV或PBS前)、24、48、72、96 h细胞增殖水平(样本数为4), 采用免疫荧光法、蛋白质印迹法检测培养24 h细胞中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)的蛋白表达情况, 采用蛋白质印迹法检测培养24 h细胞中Krüppel样因子4(KLF4)的蛋白表达情况。取第3代HSF, 加入DPC-EV培养24 h后, 采用随机数字表法将HSF分为空白对照组、KLF4敲低组和KLF4过表达组, 其中空...     

BNIP3L与脓毒症相关性脑病小鼠海马线粒体功能障碍的关系

目的评价BCL2/腺病毒E1B19 kDa蛋白相互作用蛋白3(BNIP3L)与脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马线粒体功能障碍的关系。方法 SPF级C57BL/6雄性小鼠180只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=45):对照组(C组)、假手术组(Sham组)、SAE组和SAE+BNIP3L激动剂卡非佐米组(SC组)。采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症模型。SC组术后2 h腹腔注射卡非佐米2 mg/kg。各组取20只小鼠, 观察7 d生存情况。术后1周时, 取8只生存的小鼠进行水迷宫实验。其余小鼠术后24 h时处死, 取海马组织, 采用免疫荧光法测定海马组织BNIP3L表达, Western blot法测定线粒体BNIP3L表达, 并观察线粒体超微结构。采用荧光素-荧光酶发光法测定线粒体ATP含量, 荧光分光光度法测定线粒体膜电位(MMP)。结果与C组和Sham组比较, SAE组生存率降低, 逃避潜伏期延长, 目标象限停留时间和穿越原平台区域次数减少, 海马线粒体BNIP3L表达下调, MMP和线粒体ATP含量降低(P<0.05), 海马组织BNIP...     

TIPE2在小鼠脓毒症心肌损伤中的作用：与AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的关系

目的评价肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8样蛋白2(TIPE2)在小鼠脓毒症心肌损伤中的作用及其与丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)/糖原合酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法选择16只雄性野生型C57BL/6N小鼠和16只雄性TIPE2基因敲除C57BL/6N小鼠, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 按照随机数字表法分为野生型假手术组(WT-Sham组)、野生型CLP组(WT-CLP组)、TIPE2基因敲除型假手术组(WT-Sham组)和TIPE2基因敲除CLP组(KO-CLP组), 每组8只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性心肌损伤模型。术后24 h时采集下腔静脉血标本, 采用ELISA法检测血清心肌cTnI浓度, 然后处死小鼠, 取心肌组织, HE染色观察病理学结果, 采用q-PCR法检测TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达, Western blot法检测TIPE2、磷酸化AKT(p-AKT)、磷酸化(p-GSK-3β)及β-catenin表达。结果与相应Sham组比较, 相应CLP组血清cTnI浓度升高, 心肌组织TNF-...     

毛蕊花苷对小鼠异位心脏移植冷缺血再灌注损伤的影响：与NF-κB/NLRP3信号通路的关系

目的评价毛蕊花苷对小鼠异位心脏移植冷缺血再灌注损伤的影响及其与NF-κB/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的关系。方法动物实验:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠18只, 6～8周龄, 体质量24～28 g, 采用随机数字表法分为3组(n=6):对照组(C组)、心脏移植冷缺血再灌注组(I/R组)和心脏移植冷缺血再灌注+毛蕊花苷组(I/R+VB组)。采用cuff套管法颈部异位心脏移植的方法制备小鼠心脏移植冷缺血再灌注损伤模型, C组供体心脏取下后立即移植至受体, I/R组供体心脏于4 ℃保存液保存8 h后移植至受体, I/R+VB组供体与受体小鼠分别于术前3 d时腹腔注射毛蕊花苷20 mg/kg。于再灌注24 h时进行移植物跳动评分后取移植心脏心肌组织, 采用ELISA法检测MDA含量和SOD活性;取部分供体心肌组织, 观察病理学结果;采用Western blot法检测NF-κB、p-NF-κB、NLRP3、ACS和caspase-1的表达;RT-PCR法检测IL-1β、TNF-α及IL-6 mRNA的表达。细胞实验:建立大鼠心肌细胞H9c2冷缺氧复氧模型, 采用随机数字表法将细...