喉癌细胞系中抑癌基因MGMT表达与DNA甲基化及组蛋白H3-K9甲基化的关系

目的:探讨喉癌Hep-2细胞中组蛋白H3-K9甲基化与DNA甲基化及抑癌基因MGMT表达的关系。方法:应用去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理体外培养的Hep-2细胞。应用染色质免疫沉淀技术、甲基化特异性聚合酶链反应和实时定量逆转录聚合酶链反应分析药物作用前后MGMT基因启动子区组蛋白H3-K9甲基化、DNA甲基化和MGMT表达情况。结果:①在Hep-2细胞未经药物干预前,MGMT表现为DNA甲基化,组蛋白H3-K9高甲基化,MGMT低表达。②在5-Aza-dC的作用下,Hep-2细胞中MGMT的组蛋白H3-K9甲基化状态被降低;MGMT的DNA甲基化状态得到了逆转;原来低表达的MGMT表达上调。结论:喉癌细胞系中MGMT启动子区甲基化可能是导致其基因失活的主要原因。DNA甲基化可能导致组蛋白H3-K9高甲基化。应用5-Aza-dC能够通过逆转MGMT的DNA甲基化水平从而降低MGMT组蛋白H3-K9甲基化水平来使抑癌基因表达上调,从而抑制肿瘤的发生和发展。     

DNA甲基化在甲状腺肿瘤中的研究进展

甲状腺肿瘤是内分泌系统最常见的肿瘤之一,而甲状腺癌是头颈部最常见的恶性肿瘤,占人类所有恶性肿瘤的1%~5%,且发病呈逐年递增趋势,已成为内分泌系统肿瘤领域的研究重点。临床上分为可分化癌和未分化癌,以可分化癌中的乳头状甲状腺癌多见,占所有甲状腺癌的80%~85%;其次是滤泡状癌,占所有甲状腺癌的10%~15%;未     

喉癌组织RKIP基因甲基化表达调控研究

摘要：目的检测喉癌组织中Raf 1激酶抑制蛋白（ Raf 1 kinase inhibitor protein, RKIP ）基因启动子区域的甲基化状态及其蛋白表达情况,并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP ）技术及免疫组化方法检测53例喉癌组织及34例癌旁组织中RKIP基因启动子区域的甲基化状态及蛋白表达情况。结果喉癌及癌旁组织中RKIP基因启动子甲基化发生率分别为17%、3%,两者比较差异具有统计学意义（P=0.045）。结论RKIP基因启动子区高甲基化状态可能是造成喉癌组织中RKIP表达缺失的分子机制之一,RKIP蛋白表达缺失与喉癌的发生发展及转移有关。     

鼻咽上皮细胞癌变与DNA甲基化特征的相关性研究

目的探讨鼻咽上皮细胞癌变前后DNA甲基化特征。方法 6例鼻咽癌患者作为研究对象(包括鼻咽癌变前后自身对照标本3例),5例鼻咽炎患者作为对照,获取鼻咽组织标本,常规抽提DNA,染色质免疫共沉淀联合芯片技术检测全基因组DNA甲基化状况。结果鼻咽上皮细胞癌变后,CpG岛及启动子区基因发生明显甲基化。癌变组织CpG岛甲基化峰为3258±358个,鼻咽炎组织CpG岛甲基化峰为1974±710个,t=22.32,P<0.001;癌变组织启动子区甲基化基因为1307±484个,鼻咽炎组织启动子区甲基化基因为758±363个,t=6.6,P<0.01。这些甲基化基因涉及抑癌基因、细胞信号传导通路、细胞代谢活性等多个途径。结论 DNA甲基化参与了鼻咽上皮细胞癌变过程。     

喉癌中p16基因突变和甲基化的研究

目的 探讨ｐ１６基因在喉癌发生发展中的作用和在喉癌中的失活机制。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｎａｌｙ－ｓｉｓ,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染方法和ＰＣＲ甲基化敏感内匹酶方法检测３２例喉癌和相应癌旁组织的ｐ１６基因第１,第２外显子突变和甲基化热点区域部分内切酶     

喉癌中p16基因突变和甲基化的研究

目的　探讨p16基因在喉癌发生发展中的作用和在喉癌中的失活机制。方法　应用聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (polymerasechainreaction singlestrandconformationpolymorphismanalysis ,PCR SSCP)银染方法和PCR甲基化敏感内切酶方法检测 32例喉癌和相应癌旁组织的p16基因第 1,第 2外显子突变和甲基化热点区域部分内切酶位点的甲基化情况。结果　 32例喉癌中p16第 1第 2外显子无一例发生突变 ;在第 1外显子CfoⅠ位点有 6例发生甲基化 ,SacⅡ位点有 5例发生甲基化 ,HpaⅡ位点有 4例发生甲基化 ,甲基化发生频率为 (6 /32 ) 18 8%。在第 2外显子HpaⅡ位点有 5例发生甲基化 ,CfoⅠ位点有 6例发生甲基化 ,甲基化发生频率为 (6 /32 ) 18 6 %。结论　喉癌中p16基因的甲基化是该基因失活的重要机制之一 ,p16基因的失活与喉癌的发展和演进密切相关。     

颈静脉球体瘤中多种凋亡相关基因启动子甲基化状态及意义分析

目的探讨颈静脉球体瘤中凋亡相关基因诱捕受体1（decoyreceptor 1,DcR1），诱捕受体2（DcR2），死亡受体4（deathreceptor 4， DR4），死亡受体5（DR5）启动子甲基化状态及其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）检测12例颈静脉球体瘤中四个凋亡相关基因DcR1、DcR2、DR4、DR5启动子甲基化状态。同期收集腮腺良性肿瘤手术切除的正常耳大神经组织作为对照。结果12例颈静脉球体瘤均存在甲基化，DcR1、DcR2、DR4、DR5在颈静脉球体瘤中均存在不同程度的甲基化，甲基化比率为DcR1 36.4%、DcR2 41.7%、DR4 75.0%、DR5 33.3%；正常对照中均无甲基化。且甲基化水平较高（MI＞0.50）的患者较甲基化水平低（MI≤0.05）的患者发病年龄早（P=0.0189）。结论DcR1、DcR2、DR4、DR5在颈静脉球体瘤中均存在甲基化，且与肿瘤的发生相关，甲基化水平高提示患者发病早，疾病较为严重。DNA甲基化是可逆转过程，可能成为今后靶向治疗的有效靶点。     

DNA甲基化在头颈肿瘤中的研究进展[综述]

头颈肿瘤是近年来最常见的恶性肿瘤之一,预后较差,其确切的分子机制和预后因素尚不清楚。识别特异性的生物标志物可使有效的靶向治疗策略应用到头颈肿瘤诊断治疗中,从而改善患者预后。越来越多的证据证实DNA甲基化在肿瘤的起始和进展中起重要作用。本文 就DNA甲基化与头颈肿瘤的关系及研究进展做一综述。     

DNA甲基化与头颈肿瘤

DNA甲基化与头颈肿瘤的发生、发展密切相关。本文就相关基因启动子甲基化与头颈肿瘤发生发展、早期诊断及治疗的关系做一综述。     

喉癌组织中CHFR基因mRNA表达水平及启动子区甲基化的研究

目的:探讨CHFR基因表达水平及启动子区CpG岛过甲基化与喉癌发生发展的关系.方法:采用荧光定量PCR技术和甲基化特异性PCR技术检测50例喉癌组织(喉癌组)和15例正常喉组织(对照组)CHFR基因mRNA表达情况及启动子区CpG岛过甲基化情况.结果:①CHFR基因在对照组mRNA全部表达,在喉癌组mRNA有2例(4%)表达缺失,48例表达量明显下调(相对表达量为0.50±0.12),其中Ⅰ和Ⅱ期相对表达量(0.30±0.04),Ⅲ期和Ⅳ期相对表达量(0.70±0.21),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).②在对照组中未发现CHFR基因启动子区甲基化,在喉癌组中CHFR基因启动子区甲基化率为22%(11/50),其中Ⅰ期和Ⅱ期患者共10例,Ⅲ期1例,Ⅳ期未发现甲基化,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).③甲基化的喉癌标本mRNA相对表达量为0.11±0.05,2例mRNA表达缺失.未甲基化的喉癌标本mRNA相对表达量为0.75±0.13.甲基化和mRNA表达相关,γ=0.387(P<0.05).结论:喉癌组织中CHFR基因mRNA表达缺失或下调,CHFR基因启动子区CpG岛过甲基化在喉癌组织中是频发事件,二者密切相关,可能与喉癌的发生发展有关,有望能成为喉癌的早期诊断及治疗靶点基因之一.     

CHFR基因在鼻咽癌中异常甲基化的研究

目的:检测鼻咽癌中CHFR基因的转录表达及其启动子区甲基化状态,探讨其在鼻咽癌中的转录失活机制及其意义;评价鼻咽拭子检测CHFR基因甲基化状态在鼻咽癌诊断和治疗中的意义。方法:RT-PCR检测鼻咽癌细胞株中CHFR基因的转录表达水平。甲基化特异性PCR检测鼻咽癌细胞株、鼻咽癌活检组织、正常鼻咽组织及配套的鼻咽拭子样本中CHFR基因的甲基化状态。亚硫酸氢盐测序分析鼻咽癌细胞株和鼻咽癌组织、正常鼻咽组织中CHFR基因启动子区的具体甲基化状态。5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)处理鼻咽癌细胞株后观察CHFR基因转录表达水平的改变情况。结果:CHFR基因在鼻咽癌细胞株中转录表达下调或沉默;CHFR基因在鼻咽癌细胞株和鼻咽癌组织中均呈高频率、肿瘤特异性的甲基化。鼻咽癌患者鼻咽癌组织和配套鼻咽拭子样本中CHFR基因的甲基化频率分别为65.5%和63.8%,两者符合率达86.2%。鼻咽癌组织和细胞株中CHFR基因启动子区大部分的CpG位点为甲基化,而正常组织全为非甲基化;5-aza-dC可显著恢复鼻咽癌细胞株中CHFR基因的转录表达。结论:鼻咽癌中CHFR基因由于启动子区CpG岛的DNA甲基化而转录表达下调。鼻咽...     

鉴定头颈部鳞癌中异常甲基化的差异表达基因及其通路

目的 基于头颈部鳞癌(HNSCC)的生物标记物及其通路尚不明确的现状,研究旨在分析和鉴定HNSCC中异常甲基化的差异表达基因,探讨其关键基因和潜在通路。 方法 从GEO数据库下载基因表达的数据集GSE107591和甲基化数据集GSE33202。通过R软件筛选异常甲基化基因和差异表达基因,两者取交集后获得低甲基化高表达基因(Hypo-HGs)和高甲基化低表达基因(Hyper-LGs)。利用Enrichr对两组基因进行功能富集分析。蛋白互作(PPI)网络由STRING构建并在Cytoscape中可视化,最后利用生存分析来鉴定出关键基因。此外,还进行了免疫组化分析,利用CMap寻找可能逆转HNSCC基因表达的候选小分子。 结果 共鉴定出28个低甲基化高表达基因,GO富集分析显示其主要参与T细胞趋化性的正调节,表皮发育、细胞-基底连接组件及调节T细胞趋化性等方面。Wiki通路分析的结果表明,其主要参与典型和非典型TGF-β信号传导、血液凝结级联反应、α6β4信号通路、补体和凝血级联反应及癌症中的衰老和自噬途径。同时,发现了24个高甲基化低表达基因,主要富集于血管生成及发育的调节,对干扰素-γ反应的负调节,对干扰素-γ介导的信号通路的负调节和上皮发育的生物学过程。Wiki通路分析显示其主要参与哺乳动物含黄素单加氧酶(FMOs)的催化循环,HIF1A和PPARG调节糖酵解以及苯和黄曲霉毒素B1的代谢。此外,鉴定出与HNSCC预后相关的关键基因,分别是SERPINE1、PLAU、MMRN1、LAMB3、LAMC2、PDPN和CXCL13。 结论 通过生物信息学分析并鉴定出HNSCC中异常甲基化差异表达的基因和作用途径,为揭示HNSCC发病机制提供了重要的分子学基础。包括SERPINE1、PLAU、MMRN1、LAMB3、LAMC2、PDPN和CXCL13在内的关键基因可能作为基于甲基化的异常生物标志物,为未来寻找HNSCC诊断和治疗靶点提供了新的思路。     

喉癌组织中微小RNA-129-2基因甲基化程度的研究

目的研究喉癌肿瘤组织中微小RNA-129-2基因(MiR-129-2)的甲基化程度及其与患者临床分级和癌组织病理分化程度的关系。方法应用Methyl-ProfilerTM DNA甲基化PCR系统对12例喉癌肿瘤组织和6例癌旁组织进行甲基化分析。结果喉癌组织中MiR-129-2高甲基化率为66.7%(8/12),癌旁组织中MiR-129-2高甲基化率为0(0/6),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。喉癌患者临床分级与MiR-129-2高甲基化率差异无统计学意义(P>0.0 5)。病理分化程度与MiR-1 2 9-2高甲基化率差异无统计学意义(P>0.0 5)。结论 MiR-1 2 9-2基因在喉癌组织中甲基化水平升高,MiR-1 2 9-2高甲基化水平可能与喉癌发生的病理机制有关。     

人头颈鳞癌细胞中CDH13的表达及其甲基化状态研究

目的 研究抑癌基因H-钙黏素(CDH13)在人头颈部鳞癌细胞系SCC10A和PCI-37B中的表达水平及其启动子区域的甲基化状态。 方法 定量 PCR和Western blotting检测CDH13在头颈鳞癌细胞系SCC10A和PCI-37B及两种正常组织中的mRNA和蛋白表达变化,并通过甲基化特异性PCR和硫化测序检测CDH13基因启动子区域的甲基化情况。 结果 与正常组织比较,头颈鳞癌细胞SCC10A和PCI-37B中CDH13的mRNA和蛋白表达水平均降低。SCC10A和PCI-37B细胞中CDH13基因甲基化水平高于口腔黏膜正常组织,人头颈鳞癌细胞系中CDH13基因启动子区域呈高甲基化状态。 结论 CDH13启动子区域高甲基化可能是导致人头颈鳞癌中CDH13表达沉默的重要因素,但其影响肿瘤发生发展的具体机制仍需进一步探究。     

RASSF2A基因甲基化在喉癌组织中的表达及意义

目的 探讨抑癌基因RASSF2A表达水平及其基因异常甲基化与喉癌的关系及意义。 方法 采用RT-PCR及甲基化特异性PCR(MSP)检测50例喉癌组织(实验组)和10例癌旁正常黏膜组织(对照组)中RASSF2A基因mRNA的表达水平及其启动子甲基化状态。 结果 喉癌组织中有54%(27/50)存在RASSF2A基因启动子,而对照组正常黏膜组织中未发现RASSF2A基因甲基化现象,差异有统计学意义(χ2=9.818, P=0.002)。RASSF2A甲基化水平程度与喉癌患者临床病理特征无明显相关性。喉癌组织中RASSF2A基因mRNA的表达水平明显低于正常黏膜组织(χ2=9.818, P=0.002)。RASSF2A基因甲基化的喉癌组织中其mRNA的表达减少,反之亦然。 结论 喉癌组织中RASSF2A基因CpG岛甲基化与其基因表达缺失有关,可能参与了喉癌的发生发展过程。     

喉癌细胞系中RASSF1A基因启动子去甲基化与基因表达的研究

目的:探讨甲基化转移酶抑制剂[5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)]及组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂[曲古抑菌素A (TSA)]对喉癌细胞系中抑癌基因RASSF1A甲基化水平及基因表达的影响.方法:5-Aza-dC及TSA处理体外培养的Hep-2细胞,应用Realtime PCR方法及甲基化特异性PCR(MSP)方法分别检测药物干预前后细胞中抑癌基因RASSF1A表达及甲基化情况.结果:①在Hep-2细胞中未经药物干预前抑癌基因RASSF1A表现为甲基化,抑癌基因RASSF1A弱表达.②在5-Aza-dC及TSA的作用下,Hep-2细胞系中RASSF1A基因的甲基化状态得到了逆转.其中5-Aza-dC及TSA联合应用效果与单独应用5-Aza-dC效果相似,单独应用TSA无明显效果.③在5-Aza-dC及TSA的作用下,Hep-2细胞系中RASSF1A基因表达上调,其中5-Aza-dC作用较TSA作用强,2种药物联合应用起协同增效作用.结论:喉癌细胞系中抑癌基因RASSF1A启动子甲基化可能是导致其基因失活的主要原因但并不是惟一原因.应用5-Aza-dC及TSA能够通过逆转抑癌基因RASSF1A的DNA甲基化水平和组蛋白去乙酰化水平从而使其表达得到了增强.     

蛋白酪氨酸磷酸酶基因启动子过甲基化与喉癌的关系

目的：探讨蛋白酪氨酸磷酸酶（PTEN）基因启动子过甲基化与喉癌的关系。方法：采用过甲基化特异性PCR和RT-PCR法分析喉癌（喉癌组）及正常喉组织（对照组）PTEN基因启动子过甲基化及其mRNA表达情况。结果：喉癌组有16例（40．0％）PTEN基因启动子过甲基化；对照组未发现过甲基化。对照组PTEN基因mRNA的高、中、低表达率及阴性率分别为77．8％（7／9）、22．2％（2／9）、0和0，淋巴结转移组分别为26．7％（4／15）、33．3％（5／15）、26．7％（4／15）和13．3％（2／15），两组比较，PTEN mRNA表达差异有统计学意义（P〈0．05）。病理高分化PTEN基因mRNA高、中、低表达率及阴性率分别为60．0％（6／10）、30．0％（3／10）、10．0％（1／10）和0，病理低分化mRNA分别为16．7％（2／12）、25．0％（3／12）、41．7％（5／12）和16．7％（2／12），两者比较，其mRNA表达差异有统计学意义（P〈O．05）。PTEN基因在喉癌组织中，mRNA呈现低表达的10例中有7例（70．0％）出现启动子过甲基化，mRNA呈现高表达的17例中仅有4例（23．5％）出现启动子过甲基化；PTEN基因mRNA高表达与低表达在启动子过甲基化率的差异有统计学意义（P〈O．05）。结论：PTEN基因启动子过甲基化是该基因在喉癌中失活的原因之一，PTEN基因表达下降与喉癌淋巴结转移及病理低分化有关。     

ECRG4基因甲基化在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)中ECRG4的mRNA和蛋白表达以及其在LSCC肿瘤组织中的甲基化水平,分析其临床意义。方法 从人类蛋白图谱(HPA)以及基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库分析ECRG4在头颈部肿瘤中的表达,收集15例原发LSCC患者的组织样本及癌旁正常组织样本,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测样本中的ECRG4 mRNA表达,Western blot检测组织中的蛋白表达,甲基化特异性PCR(MSP)及测序分析检测ECRG4启动子甲基化水平,比较ECRG4mRNA表达及甲基化水平与LSCC患者临床病理特征之间的相关性。结果 HPA和GEPIA分析结果发现ECRG4在头颈部鳞状细胞癌中表达下降。与癌旁正常组织相比,RT-qPCR和Western blot实验结果表明LSCC患者肿瘤组织中的ECRG4 mRNA和蛋白表达较低(P<0.001),测序分析结果指出LSCC肿瘤组织中ECRG4启动子甲基化水平明显升高(P<0.001)。ECRG4 mRNA高表达水平与LSCC患者Ⅲ、Ⅳ期、存在淋巴转移、复发以及G2、G3期相关(P<0.05),而Ⅲ、Ⅳ期、复发以及G2、G3期的LSCC患者肿瘤组织中的ECRG4启动子甲基化水平升高更明显(P<0.05)。结论 ECRG4在LSCC中表达水平下降,甲基化水平升高,在Ⅲ、Ⅳ期、复发以及G2、G3期的患者中变化更明显,为LSCC后续研究提供理论基础。     

uPA基因启动子甲基化与喉鳞状细胞癌的关系

目的：探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）基因启动子甲基化状况与喉癌侵袭转移的关系。方法：采用RT-PCR法检测40例喉癌组织中uPAmRNA表达；同时用甲基化特异性PCR（MSP）法检测uPA基因启动子甲基化状况。结果：uPA基因表达率为65．0％（26／40）；有颈淋巴结转移的喉癌与无颈淋巴结转移的喉癌比较，uPA基因表达率显著增高（P〈0．01）。uPA基因启动子甲基化率为20．0％（8／40）；有颈淋巴结转移的喉癌与无颈淋巴结转移的喉癌比较，uPA基因启动子甲基化率显著降低（P〈0．01）。甲基化的喉癌组织中均无uPA基因表达。结论：uPA基因启动子甲基化是uPA基因表达缺失的机制之一，uPA基因启动子的去甲基化机制可能与喉癌颈淋巴结转移有关。     

RUNX3基因在脑胶质瘤中的表达和启动子区甲基化的研究

目的研究脑胶质瘤中RUNX3基因的表达以及启动子区CpG岛甲基化情况以及两者的关系。方法用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测35例脑胶质瘤组织和4例正常脑组织中RUNX3基因的mRNA相对表达水平；用甲基化特异性PCR（MSP）方法研究相应标本中的RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果RUNX3在脑胶质瘤中的表达与肿瘤的级别相关，但与肿瘤的病理类型、患者年龄、性别等因素无关。MSP显示35例脑胶质瘤标本中有15例（42．8％）发生甲基化，发生甲基化的脑胶质瘤中mRNA表达水平较未甲基化的脑胶质瘤明显下降。结论RUNX3在脑胶质瘤中表达与肿瘤的恶性程度相关，并且RUNX3启动子区CpG岛高甲基化与RUNX3表达下调相关。推测RUNX3启动子区CpG岛高甲基化是导致RUNX3基因在脑胶质瘤中表达下调的重要因素。