丹参酮ⅡA对肺爆震伤小鼠保护作用及其机制研究

目的探讨丹参酮ⅡA对肺爆震伤小鼠保护作用及其可能的机制。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、爆震伤组及爆震伤+丹参酮ⅡA组,每组各10只。爆震伤后48 h收集小鼠肺组织标本。采用HE染色、免疫组化和蛋白印迹技术检测丹参酮ⅡA对肺爆震伤的保护作用。结果爆震伤+丹参酮ⅡA组肺重/体质量及湿重/干重比值显著低于爆震伤组,差异有统计学意义(P<0.05)。爆震伤+丹参酮ⅡA组伊文思蓝渗漏量明显少于爆震伤组,差异有统计学意义(P<0.05)。与爆震伤组相比,爆震伤+丹参酮ⅡA组白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、CD44及CD163阳性炎症细胞数量、肺组织p-PI3K及p-Akt蛋白表达均显著降低,IL-10、肺组织p-FoxO1蛋白表达均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA对肺爆震伤的保护作用可能与其抗炎活性有关,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/FoxO1信号通路实现。     

低氧复合运动抑制低氧诱导的骨骼肌NLRP3炎性小体活化

目的:观察低氧复合运动是否能抑制低氧诱导的NLRP3炎性小体活化,并探讨Nrf2在其间的生物角色。方法:32只雄性SD大鼠随机分为常氧组(NC)、常氧运动组(NT)、低氧组(HC)和低氧复合运动组(HT),每组8只。低氧干预为常压低氧帐篷,11.3%氧浓度持续暴露4周。运动干预为跑台训练(5°,15 m/min),60 min/d,5 d/周,共4周。各组大鼠末次低氧后即刻处死,分离双侧股四头肌,单侧肌肉采用差速离心法提取线粒体,二氯荧光素法检测线粒体ROS生成速率,高效液相色谱法检测线粒体DNA中8-oxod G含量,ELISA法检测骨骼肌IL-1β含量,比色法检测骨骼肌Caspase-1活性,Western blot法检测骨骼肌NLRP3、ASC、Nrf2和NQO1蛋白表达。结果:HC组线粒体ROS生成速率和线粒体DNA中8-oxod G含量显著高于NC组(P<0.01),骨骼肌Caspase-1活性和IL-1β含量显著高于NC组(P<0.01),NLRP3和ASC蛋白表达显著高于NC组(P<0.01),Nrf2和NQO1蛋白表达显著低于NC组(P<0.05,P<0.01)。HT组线粒体ROS生成速率和线粒体DNA中8-oxod G含量显著低于HC组(P<0.01),骨骼肌Caspase-1活性和IL-1β含量显著低于HC组(P<0.05,P<0.01),NLRP3和ASC蛋白表达显著低于HC组(P<0.05,P<0.01),Nrf2和NQO1蛋白表达显著高于HC组(P<0.01)。结论:低氧复合运动可上调Nrf2表达,通过减少ROS产生和促进抗氧化酶表达,抑制低氧诱导的NLRP3炎性小体活化。     

丹参酮ⅡA对小鼠肺爆震伤导致的脑损伤的保护作用

 目的 探讨丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对小鼠肺爆震伤导致的脑损伤的保护作用。方法 建立小鼠肺爆震伤致脑损伤模型。将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组(Sham)、肺爆震伤组(Blast)和Tan ⅡA干预组,每组10只。冲击伤后48 h采集标本,通过HE和ROS染色观察脑组织病理改变,Western blot检测脑损伤标志物Tau和S100β,炎性相关因子IL-1β、TNF-α和IL-10,氧化应激相关因子SOD-1、IRE-α和MDA5,以及PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt和NF-κB的表达情况。结果 蛋白结果显示,与Sham组相比,Blast组S100β升高到(31.5±4.19),其他相关促进因子均升高,而通路上NF-κB升高到(12.25±1.92),PI3K和Akt的磷酸化分别升高到(4.36±0.41)和(27.00±0.09),而与Blast组相比,Tan ⅡA组S100β降低到(0.21±0.09),Tan ⅡA恢复了冲击波导致的相关因子改变,NF-κB降低到(0.32±0.02),PI3K和Akt的磷酸化分别降低到(0.47±0.01)和(0.18±0.04),上述差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论 Tan ⅡA对肺爆震伤导致的脑损伤具有保护作用,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路来实现的。     

有氧运动通过激活APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织PI3K/Akt信号通路抑制神经细胞凋亡

目的:探讨有氧运动对APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织神经细胞凋亡的影响,以及是否通过PI3K/Akt信号通路发挥作用,为阐明有氧运动防治阿尔茨海默症提供一定的理论依据。方法:40只雄性APP/PS1小鼠随机分为安静组(T-SE,n=10)、运动组(T-EX,n=10)、GNE-317处理安静组(T-SEG,n=10)和GNE-317处理运动组(T-EXG,n=10)。T-EX和T-EXG组小鼠进行为期8周的跑台训练,T-SEG和TEXG组小鼠给予GNE-317处理8周。最后一次训练结束后48小时,分离所有小鼠大脑皮质和海马组织。通过TUNEL染色观察各组小鼠大脑皮质和海马组织细胞凋亡情况;通过Western blot检测各组小鼠大脑皮质和海马组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关促凋亡蛋白(Bad)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切形式含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Caspase-7、Caspase-9、线粒体细胞色素C(Cytochrome C)蛋白含量及磷酸化水平。结果:(1)8周跑台训练后,T-EX组大脑皮质和海马组织中PI3K p110和p85亚基的蛋白含量及Akt Thr308和Ser473位点的磷酸化水平均高于T-SE组(P<0.01);T-EX组TUNEL染色阳性细胞数量低于T-SE组(P<0.05);T-EX组抗凋亡因子Bcl-2的含量高于T-SE组(P<0.05),而促凋亡因子Bad、Bax、Cytochrome C、Caspase-9、Caspase-7和Cleaved Caspase-3的含量均低于T-SE组(P<0.05)。(2)经GNE-317处理后,TSEG和T-EXG组Akt Thr308和Ser473位点的磷酸化水平分别低于T-SE和T-EX组(P<0.05);T-SEG和T-EXG组TUNEL染色阳性细胞数量分别高于T-SE和T-EX组(P<0.05);T-SEG和T-EXG组抗凋亡因子Bcl-2的含量分别低于T-SE和T-EX组(P<0.05),而促凋亡因子Bad、Bax、Cytochrome C、Caspase-9、Caspase-7和Cleaved Caspase-3的含量分别高于T-SE和T-EX组(P<0.05)。结论:有氧运动通过激活APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织中PI3K/Akt信号通路活性,提高了抗凋亡因子Bcl-2的含量,同时降低促凋亡因子Bad、Bax、Cytochrome C、Caspase-9、Caspase-7和Cleaved Caspase-3的含量,从而有效抑制神经细胞凋亡。     

爆震伤对小鼠多脑区tau蛋白磷酸化水平影响

目的探讨爆震伤后小鼠脑内过度磷酸化tau蛋白的分布规律。方法将12只小鼠随机分为对照组(n=6)及爆震伤组(n=6),进行爆震伤造模。造模后8周对小鼠脑组织进行免疫组织化学检测,以评估过度磷酸化tau蛋白的分布范围及含量。结果免疫组织化学结果提示,爆震伤后8周小鼠海马CA3区及压后皮层tau蛋白Ser404位点磷酸化水平显著高于对照组(P<0.05)。结论爆震伤可导致小鼠海马脑区及压后皮层磷酸化tau蛋白含量升高,并持续至伤后8周,可能与伤后慢性期出现的精神症状及认知功能障碍关系密切。     

姜黄素对胸部爆震致小鼠肺组织氧化应激损伤的影响

 目的 探讨姜黄素对胸部爆震致小鼠肺组织氧化应激损伤的影响。方法 将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、模型+姜黄素组,伤后24 h处死小鼠,左肺进行10%甲醛固定,石蜡包埋切片,右肺-80 ℃保存。HE染色观察肺组织爆震后病理改变;活性氧生成(reactive oxygen species,ROS)检测肺组织氧化应激损伤情况;Western blot检测氧化应激相关蛋白MDA5、SOD-1、IRE-α和信号通路相关蛋白p-PI3K、Nrf2、Keap1的表达。结果 胸部爆震后,模型组肺组织细胞排列明显紊乱、可见细胞变性和炎性细胞浸润;ROS检测显示,在紫外光激发下,模型组与对照组相比肺组织内蓝色荧光减少,红色荧光明显增加;Western blot检测结果显示模型组MDA5、IRE-α、SOD-1、Nrf2和Keap1的灰度值的相对表达分别为0.68±0.08、0.63±0.04、0.38±0.02、0.32±0.03和0.98±0.11,相比于对照组的0.33±0.03、0.29±0.02、0.81±0.09、0.43±0.05和0.44±0.04变化明显,而模型组p-PI3K/PI3K的灰度值的相对表达为0.74±0.05,相比于对照组的0.30±0.02显著升高,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。姜黄素干预后,HE染色显示小鼠肺组织变性坏死明显缓解,炎性细胞浸润减轻;ROS检测显示模型+姜黄素组与模型组相比,肺组织内蓝色荧光增加,红色荧光明显减少;Western blot检测结果显示模型+姜黄素组MDA5、IRE-α、SOD-1、Nrf2和Keap1的灰度值的相对表达分别为0.48±0.07、0.36±0.06、0.51±0.07、0.71±0.08和0.53±0.06,p-PI3K/PI3K的灰度值的相对表达为0.56±0.07,上述差异与模型组两两比较均具有统计学意义(P<0.05)。结论 姜黄素对胸部爆震所致的肺组织氧化应激损伤有保护作用,其机制可能是通过PI3K/Nrf2/Keap1信号通路来实现的。     

丹参酮ⅡA对小鼠压力超负荷诱导 心肌损伤保护作用研究

目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对小鼠压力负荷性心肌损伤保护作用。方法选取30只雄性C57BL/6小鼠为研究对象,将所有小鼠随机分成对照组、模型组及TanⅡA组,每组各10只。采用升主动脉缩窄构建小鼠压力负荷心肌损伤模型,术后TanⅡA组给予TanⅡA,连续3周,第4周处死所有小鼠,收集标本。测量小鼠心脏重量和心脏重量指数,酶联免疫吸附法和蛋白印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠心脏重量和心脏重量指数显著增加,白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,IL-10、Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,TanⅡA组小鼠心脏重量和心脏重量指数显著降低,IL-1β、TNF-α、IL-6、Bax、Caspase-3蛋白表达降低,IL-10、Bcl-2表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TanⅡA处理对小鼠压力负荷性心肌损伤有保护作用,其作用机制可能通过调节炎症反应和凋亡实现。     

白介素17A抑制博来霉素诱导的小鼠NIH/3T3细胞凋亡

目的探讨细胞因子白介素17A对于博来霉素诱导的小鼠成纤维细胞NIH/3T3凋亡的影响。方法使用博来霉素诱导细胞凋亡,使用TUNEL荧光染色试剂盒检测细胞凋亡情况,使用Western blot检测Caspase-3以及Bcl-2的蛋白表达情况。结果博来霉素可以促进NIH/3T3细胞DNA发生断裂,促进活性Caspase-3的蛋白表达,降低Bcl-2蛋白含量;白介素17A可以抑制NIH/3T3细胞DNA断裂,抑制活性Caspase-3的蛋白表达,促进Bcl-2的蛋白含量。结论博来霉素可以诱导小鼠NIH/3T3细胞发生凋亡,白介素17A可以抑制博来霉素诱导的细胞凋亡。     

脂联素对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞凋亡的干预作用

目的 探讨脂联素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的干预作用及其机制.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,采用α-肌动蛋白免疫荧光法进行细胞鉴定.将心肌细胞分为3组:对照组、AngⅡ组、AngⅡ+脂联素组,分别采用流式细胞术检测心肌细胞的凋亡状态及细胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达变化.结果 1μmol/L AngⅡ可明显诱导乳鼠心肌细胞凋亡,凋亡率达26.0%,伴有Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达减少以及ROS水平增高(P<0.05);加入30mg/L的脂联素后可明显抑制细胞凋亡的发生,凋亡率降至8.0%左右,同时伴有Bax表达减少,Bcl-2的表达增加以及ROS水平的降低(P<0.05).结论 脂联素可减轻AngⅡ导致的心肌细胞凋亡,这一作用可能是通过增加心肌细胞Bax和ROS的表达,减少Bcl-2的表达来实现的.     

不同时间一次有氧运动对小鼠骨骼肌Nrf2与Keap1结合作用的影响

目的:探讨不同时间一次有氧运动对小鼠骨骼肌NF-E2相关因子(NF-E2-related factor 2,Nrf2)与Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keapl)结合作用的影响。方法:C57BL/6J小鼠30只,按体重随机分为安静对照组(0 h组)和一次有氧运动3小时组(3 h组)、一次有氧运动6小时组(6 h组),每组10只。0 h组安静饲养,3 h组和6 h组小鼠分别进行3小时和6小时的一次有氧跑台训练,跑速为15 m/min,坡度为0。运动后即刻取后腿骨骼肌。高质荧光测定法检测小鼠骨骼肌活性氧(ROS)水平;免疫共沉淀法测Nrf2/Keap1结合量;Western Blot法测定骨骼肌总Nrf2、Keap1蛋白表达量和细胞核Nrf2蛋白表达量。结果:与0 h组相比,6 h组ROS水平显著高于0 h组(P<0.05);3h、6 h组小鼠骨骼肌中Nrf2/Keap1结合量显著降低(P<0.05);3 h、6 h组小鼠骨骼肌总Nrf2蛋白表达显著升高(P<0.05),6 h组小鼠骨骼肌细胞核Nrf2蛋白表达显著增加且与3h组相比也显著增加(P<0.05);小鼠骨骼肌总Keap1蛋白表达基本无变化。结论:一次有氧运动对小鼠骨骼肌Nrf2与Keap1解绑和Nrf2转位入核的影响与运动时间的长短有关。