酶联免疫吸附法测定植物油中黄曲霉毒素B1

目的对酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测植物油中黄曲霉毒素B_1进行方法验证,考查植物油中黄曲霉毒素B_1污染情况。方法对酶联免疫吸附法检测植物油中黄曲霉毒素B_1进行了准确性与回收率、重复性、复现性等方法学实验。用验证后的试剂盒检测156份植物油中黄曲霉毒素B_1含量。结果酶联免疫吸附法的回收率在102.8%~113.8%,相对标准偏差为2.0%~6.1%,重复性相对标准偏差为4.3%,复现性相对标准偏差为7.1%和7.6%。156份植物油中黄曲霉毒素B_1检出率为60.90%,其中山茶油的检出率为78.38%,高于平均水平。结论试剂盒检测植物油稳定性较好,定量准确。156份植物油中黄曲霉毒素B_1含量均符合国家标准,花生油中黄曲霉毒素B_1检出浓度最高,其次是玉米油。茶油的加工生产过程可能存在污染黄曲霉毒素B_1的情况,应注意加工过程中黄曲霉毒素B_1的污染。     

酱油中黄曲霉素素B1的酶联免疫检测

本研究将间接竞争ＥＬＩＳＡ用于酱油中ＡＦＢ１的检测。和ＴＬＣ法相比，该法有灵敏、快速、特异等优点。研究中首先对样品毒素的几种提取方法进行了比较，结果表明甲醇－－二甲基甲酰胺提取法是最好的毒素提取方法，它的样品提取液对ＥＬＩＳＡ标准曲线无影响而且毒素的提取时间较短。在此基础上进行了ＡＦＢ１的回收试验，ＡＦＢ１的浓度为３－８０μｇ／ｋｇ时，ＡＦＢ１的ＥＬＩＳＡ回收效果好，回收变异系数都小于１０％。进一     

郫县豆瓣原料蚕豆中黄曲霉毒素B1的提取

郫县豆瓣中所用蚕豆是产自四川省和云南省的优质干蚕豆,经筛选、浸泡、接种、制曲等一系列加工后形成调味豆瓣酱。采用酶联免疫吸附法(ELISA),根据Box-Behnken Design软件的设计原理,检测原料蚕豆中黄曲霉毒素B1。探讨了甲醇浓度、料液比、超声波提取时间等因素对样品中黄曲霉毒素B1提取的影响,以确定检测原料蚕豆中黄曲霉毒素B1含量的最优方案。以黄曲霉毒素B1含量为响应值,利用响应面分析法对提取参数进行优化。结果表明:甲醇浓度43.41%,料液比1∶5.35,超声波提取时间39.89 min是检测原料蚕豆中黄曲霉毒素B1含量的最优条件,以该优化条件检测原料蚕豆中黄曲霉毒素B1其值达到最大,为1.50μg/kg。     

酶联免疫吸附方法测定酱油中黄曲霉毒素B1

到目前为止,食品中黄曲霉毒素Ｂ１的测定方法主要有薄层色谱法〔１〕,气相色谱（ＧＣ）及高级液相色谱（ＨＰＬＣ）法等。国标中食品黄曲霉毒素Ｂ１的测定方法为薄层层析法,该法不仅样品处理繁琐,试剂消耗大,而且在检出阳性或假阳性样品时需在多块薄层板上经反复分离...     

花生粕酶水解液中黄曲霉毒素B1脱除方法的研究

以花生粕为原料,经酶水解制备复合氨基酸水解液,采用石灰水、聚乙烯吡咯烷酮、二氧化氯、次氯酸钠、亚硫酸钠和氨水脱除花生粕酶水解液中的黄曲霉素B1,利用酶联免疫吸附法检测脱毒效果,结果表明：6种化学物质均有一定的脱除黄曲霉毒素的效果,采用石灰水处理花生粕酶水解液8h脱莓效果最好,脱毒率为95．76％,因此,石灰水是本实验中脱除黄曲霉毒素B1的最佳脱毒剂。     

ELISA法检测食醋中黄曲霉毒素B1方法的改进

目的优化试样提取条件,建立测定食醋中黄曲霉毒素B1（AFB1）的新的前处理方法。方法将适量试样调酸后用甲醇＋水直接定容,振荡、离心作为食醋试样的前处理方法,采用酶联免疫吸附法（EUSA）测定。结果改进后方法灵敏度达0．1 μg／kg,平均回收率在79．1％～95.5％,相对标准偏差小于6．4％。结论研究建立的新的前处理方法,简化了提取过程,并获得了优化的实验参数,可满足国标对食醋中的AFB1规定的安全限量的检测要求。     

酶联免疫法检测混合植物油中黄曲霉毒素B1的含量

目的建立酶联免疫法测定混合植物油中黄曲霉毒素B_1含量的分析方法。方法采用直接竞争酶联免疫吸附法对样品进行测定。样品经甲醇溶液提取,提取的抗原及黄曲霉毒素B_1标记物与微孔板上的黄曲霉毒素B_1特异性单克隆抗体竞争结合,洗涤除去未结合杂质。将底物加入孵育,产生蓝色产物,加入终止液终止反应蓝色产物变成黄色产物,450nm处测量吸光度。结果本方法在2h内完成混合植物油中黄曲霉毒素B_1含量的测定。黄曲霉毒素B_1的加标浓度在1.0～20.0μg/kg之间时的回收率为76.5%～120.2%,方法定量限为1.00μg/kg。结论该方法快速、准确、灵敏,适合测定混合植物油中黄曲霉毒素B_1。     

ELISA法检测大米、食用油中黄曲霉毒素B1前处理方法的研究

用酶联免疫吸附法(ELlSA)检测食品中黄曲霉毒素B1(A FB1)含量,关键在于样品的前处理。针对大米、食用油中A FB1的前处理作了一些改进。结果表明改进后的前处理检测灵敏度达0.1ug/kg,平均回收率在78%￣120%之间,相对标准偏差小于5.0%。     

酶联免疫吸附和免疫亲和微柱法快速检测粮油食品中黄曲霉毒素B1的比较分析

用酶联免疫吸附-酶标仪分析法和免疫亲和微柱-荧光仪分析法分别对粮油样品中黄曲霉毒素B1进行测定,对其检测条件和结果进行差异性分析比较,两种检测方法都比较适宜在广大基层实验室推广应用。酶联免疫吸附分析法适宜大批量样品快速筛选;免疫亲和微柱分析法适宜单一样品现场快速检测,特别适宜对食用植物油中AFB1快速检测。     

2015年山东部分地区食用植物油中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮污染状况调查

摘 要：目的 了解山东省部分地区食用植物油中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的污染状况,为食品安全监督管理提供科学依据。方法 在山东省部分市/县采集食用植物油,256份8类植物油,散装油206份,定型包装油59份,其中包括花生油105份、大豆油78份、玉米胚芽油9份、香油46份、调和油10份以及其他食用油17份,酶联免疫吸附法检测AFB1和ZEN的含量,并根据食品安全国家标准食品中真菌毒素限量分析植物油中的AFB1和ZEN污染状况。结果 256份样品中,AFB1和ZEN检出率分别为44.5%、72.1%,超标率分别为7.2%、6.0%,中位数分别为0.0、4.9 μg/kg。定型包装和散装油中,AFB1超标率分别为0.0%、9.2%,差异有统计学意义（?2=4.55,P＜0.05）,中位数分别为0.6 μg/kg、0.0 μg/kg;ZEN超标率分别为10.2%、4.9%,中位数分别为5.1 μg/kg、4.8 μg/kg。各城市间AFB1总体来说差异有统计学意义（?2=32.31,P＜0.05）;ZEN在不同地区间差异无统计学意义（?2=16.06,P＞0.05）。花生油和大豆油中AFB1超标率分别为16.2%、2.6%,差异有统计学意义（?2=8.93,P＜0.05）,其他种类植物油中未发现超标;花生油、大豆油、玉米胚芽油、香油、调和油ZEN的超标率分别为1%、1.3%、100.0%、8.7%、20.0%,各类食用油中ZEN超标率差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 山东部分地区食用植物油中AFB1和ZEN污染严重,其中以散装油污染最为严重。花生油中AFB1、玉米油中ZEN污染严重,建议相关部门加强市场散装油的监管。     

酶联免疫法检测酱油中的黄曲霉毒素B1

目的建立酶联免疫法检测酱油中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)的分析方法。方法酱油样本经纯乙腈(料液比=1:2,V:V)提取,再做1:9稀释,通过酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定样本中AFB_1。结果当加标浓度为2μg/kg和5μg/kg时,纯乙腈对酱油中AFB_1的提取回收率结果分别为121.3%和106.5%;方法检出限为1μg/kg。与国标方法检测结果的相对标准偏差小于10%。结论本方法准确、灵敏度高,可适用于酱油中AFB_1的检测。     

Comparative study on the characterization of antisera of anti‐aflatoxin B1 from rabbit and laying hen

Polyclonal antisera specific for aflatoxin B₁ (AFB₁) were developed in rabbits and laying hens immunized with AFB₁ conjugated to bovine serum albumin (AFB₁‐BSA). During the immunization schedule, AFB₁‐specific antisera from rabbits started to obviously be secreted after 60 days of the first AFB₁‐BSA injection, reached to a peak at day 120, and started to go down at day 135; while in regard to laying hens, antibodies began to largely be produced at day 90, arrived to a peak at day 135, and began to go down at day 165. The rabbits consistently produced anti‐AFB₁ antisera in 2‐fold higher amounts than the laying hens during the antisera production process. But rabbits' and laying hens' antisera to AFB₁ were found not to be apparently different in cross‐reaction with aflatoxin analogs. Both rabbits' and laying hens' antisera could be used as immunological reagents for detecting AFB₁ in agricultural commodities.     

Potential of aflatoxin B1 production by Aspergillus flavus strains on commercially important food grains

In this study, we investigated the potential of aflatoxin B₁ (AFB1) production by five Aspergillus flavus strains previously isolated from sorghum grains on cereals (barley, maize, rice, wheat and sorghum), oilseeds (peanuts and sesame) and pulses (greengram and horsegram). Five strains of A. flavus were inoculated on all food grains and incubated at 25 °C for 7 days; AFB1 was extracted and estimated by enzyme‐linked immunosorbent assay. All A. flavus strains produced AFB1 on all food grains ranging from 245.4 to 15 645.2 μg kg^?1. Of the five strains tested, strain Af 003 produced the highest amount of AFB1 on all commodities ranging from 2245.2 to 15 645.2 μg kg^?1. Comparatively, the AFB1 accumulation was high on rice grains ranging from 3125.2 to 15 645.2 μg kg^?1, followed by peanuts ranging from 2206.2 to 12 466.5 μg kg^?1. Less AFB1 accumulation was observed in greengram and sesame seeds ranging from 645.8 to 2245.2 and 245.4 to 2890.6 μg kg^?1, respectively. Our results showed that all food grains tested are susceptible to A. flavus growth and subsequent AFB1 production.     

应用抗黄曲霉毒素单链抗体检测酱油中黄曲霉毒素B1

利用本实验室制备的抗黄曲霉毒素B1的单链抗体(ScFv),通过棋盘实验确定了抗原抗体的最适工作浓度,在此之上根据间接竞争酶联免疫法(ELISA)绘制标准曲线,检测酱油中AFB1的含量;通过改变样品的盐浓度及pH来确定其对ELISA检测结果的影响。研究结果表明,利用ScFv检测黄曲霉毒素的最小检测值为0.10ng/mL,平均加标回收率在84%～109%之间,本文建立的ELISA方法在pH5～8,盐浓度小于10%时较稳定。本文建立的利用抗AFB1的ScFv检测黄曲霉毒素含量的方法方便快捷,稳定性较好,并且成本较低,适合于食品中黄曲霉毒素的检测。     

酶联免疫法检测复合调味料中黄曲霉毒素B1含量

目的酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)快速检测复合调味料中黄曲霉毒素B_1的含量。方法用70%甲醇水溶液提取非含油型复合调味料中的黄曲霉毒素B_1待测液,含油型复合调味料则首先加入石油醚将油萃取出来,后加入70%甲醇水溶液抽提。使用酶联免疫法进行定量限、回收率与重复性等实验。结果使用不同前处理的检测结果的定量限为3μg/kg,相对标准偏差分别为2.06%和2.73%;回收率范围在90%～110%之间;重复性平均值分别为10.77μg/kg和10.84μg/kg,相对标准偏差分别为3.89%和2.44%。结论复合调味料通过不同的前处理方法,后使用酶联免疫法检测复合调味料中黄曲霉毒素B_1结果准确,重复性较好。     

酶联免疫吸附法测定云南铁皮石斛中黄曲霉毒素B1

目的建立酶联免疫吸附法测定铁皮石斛中黄曲霉毒素B_1(afatoxin B_1, AFB_1)的分析方法,并研究酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)和高效液相色谱法(highperformanceliquid chromatography, HPLC)测定云南铁皮石斛中AFB_1的结果差异性。方法用甲醇+水溶液(50+50, V/V)提取石斛中AFB_1,采用酶联免疫吸附法和高效液相色谱法同时检测云南铁皮石斛(铁皮枫斗)中AFB_1,进行准确性、精密度和回收率等方法学实验,比较2种方法的差异性。结果 ELISA法在测定范围内AFB_1与其对应的吸光度值之间呈良好的线性关系,回归方程Y=-34.798X+18.134,相关系数r~2为0.9967;添加1.0、4.0、10.0μg/kg3个浓度的平均加标回收率为85.3%～94.7%,相对标准偏差为2.57%～4.88%。2种方法的结果符合率为93.2%～117%,相对标准偏差均小于10%。结论 ELISA法具有操作简单、检测速度快、灵敏、特异性好等优点,可同时检测大批量样品中AFB_1的含量。     

2011-2012年食用植物油中黄曲霉毒素B1的调查

为调查我国市场食用植物油油中黄曲礞毒素B1是螽符合国家标准规定,本论义膈两年的时间,对988个传统烹调油样品、342个新兴功放类油样品中的黄曲霉毒素B1进行了检测。结果显示：2011年传统烹调油合格率为99．22％,新必功效类油样,铺及凋味汕合格宰为95．03％;2012年传统烹调油合格率为99．37％,新必功效类油样品及调味油合格半为96．90％。由此可见,食用油产品的合格牢征逐年提高。