神经肽P物质对糖尿病动物模型伤口愈合影响的研究

目的研究外用神经肽P物质(SP)对糖尿病大鼠动物模型伤口愈合的影响及意义。方法2005年3月至2005年6月对重庆市第三军医大学西南医院中心实验室的外用SP及其拮抗剂,观测不同时相点糖尿病动物模型伤口愈合速度的影响。结果加入SP实验组糖尿病大鼠伤口愈合最快,拮抗剂组伤口愈合更加延迟,与SP结合起作用的主要是NK1受体,加入NK1受体拮抗剂可阻断SP主要作用。结论外用SP可促糖尿病伤口愈合。     

P物质NK1受体对大鼠结肠动力的调节作用

[目的]探讨P物质(substance P,SP)不同受体对大鼠结肠动力的调节作用。[方法]取大鼠近端结肠制备纵行肌(LMS)及环形肌(CMS)肌条,用张力换能器及多通道生理信号采集处理系统观察SP及其受体拮抗剂对SP诱导的LMS和CMS收缩活动的影响。[结果]SP显著促进大鼠结肠LMS和CMS自发性收缩活动[LMS:正常(0.85±0.06)g∶SP(1.02±0.05)g;CMS:正常(0.22±0.03)g∶SP(0.81±0.07)g,P0.01];CMS孵育河豚毒素TTX后加入SP收缩幅度显著增加[正常(1.15±0.11)g∶SP(2.25±0.18)g,P0.05];NK1受体特异性阻断剂L-703孵育肌条后加入SP,平滑肌收缩无显著增强,NK2受体特异性阻断剂GR159孵育后,SP能显著诱导平滑肌收缩增强(P0.05)。[结论]NK1和NK2受体均参与SP对结肠动力的调节,且对CMS的调节过程中,NK1受体发挥更重要的作用,SP对LMS的调节可能主要通过肠神经系统。     

脊髓损伤大鼠体内P物质变化对成骨细胞分化的影响

目的探讨P物质（SP）对脊髓损伤（SCI）大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）源性成骨细胞分化的影响及机制。方法取SCI大鼠双侧胫骨、股骨冲洗髓腔后收集细胞悬液,进行骨髓MSCs源性成骨细胞诱导培养。观察SP不同浓度（10^-12、10^-10、10^-8、10^-7、10^-6M）、不同作用时间（1、2、3周）对成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）活性的影响,观察SP与Spantide（SP抑制剂）、L703606（NK1受体抑制剂）配伍作用后细胞ALP活性。结果与对照组比较,不同浓度的SP作用后细胞ALP活性均明显降低,10^-8M浓度时最低,P均〈0.05;随着作用时间的延长ALP活性降低明显,P〈0.05。与SP单独作用比较,SP与Spantide和L703606配伍后细胞ALP活性均明显升高,P〈0.05。结论SP通过NK1受体对成骨细胞的分化产生影响;SP抑制成骨细胞的分化,使成熟的成骨细胞减少,可导致骨质疏松的发生。     

A型肉毒毒素对P物质引发的离体食管下括约肌收缩的抑制作用

目的观察A型肉毒毒素(BTX-A)对电场刺激(EFS)、内源性及外源性P物质(SP)引发的SD大鼠离体食管下括约肌(LES)收缩的影响。方法 SD大鼠叩击头部致昏后剪取食管下段与贲门交界处组织制备肌条。使用EFS诱发肌条内源性递质释放,阿托品阻断胆碱受体作用后,观察NK1受体拮抗剂(APTL-SP)、BTX-A对LES收缩的影响;观察不同浓度APTL-SP、BTX-A,对外源性SP引发的LES收缩变化影响。采用Biolap BL-420E生物机能实验系统同步记录肌条的收缩变化曲线。结果 EFS可增强LES的收缩张力及振幅(P<0.01),BTX-A、阿托品、APTL-SP均可单独抑制其效应(P<0.05或P<0.01),而阿托品作用后BTX-A可进一步降低LES的收缩张力及振幅(P<0.05);EFS的增强LES收缩效应,在被阿托品抑制后,可被后加入的APTL-SP进一步抑制(P<0.05);阿托品与APTL-SP对EFS引发的LES收缩的协同抑制效应和BTX-A的抑制效应对比,二者无统计学差异(P>0.05)。外源性加入的SP可显著增强LES收缩张力(P<0.01)及振幅(P<0.05)。结论 BTX-A可抑制EFS诱发的内源性SP引发的LES缩增强,其对外源性SP引发的LES收缩也具有抑制效应。     

芦荟凝胶促进糖尿病创面溃疡愈合的机制

目的在分子水平探讨芦荟凝胶促进糖尿病创面溃疡愈合的机制。方法实验分为3组,A组为正常组,B组和C组应用链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型并建立全皮伤口模型,B组给予生理盐水处理创面,C组给予芦荟凝胶干预,4次/d,通过胶原纤维-Masson三色法和免疫组织化学法评估伤口形成后3、7、14 d皮肤组织的组织病理学改变,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠皮肤基质金属蛋白酶(MMPs)-9和金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)-1 mRNA的表达情况。结果 B组大鼠伤口愈合明显迟缓。芦荟凝胶干预可加速糖尿病大鼠大鼠伤口愈合。伤口愈合过程中,B组MMP-9 mRNA水平持续高于A组(P0.01),而TIMP-1 mRNA水平持续低高于A组(P0.01);给予芦荟凝胶干预的C组MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA水平仅在伤口形成第3天与A组相比具有统计学差异,其余时间点均与A组相近。芦荟凝胶干预可降低大鼠伤口组织MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值。结论糖尿病大鼠皮肤伤口愈合速度明显减慢,芦荟凝胶干预可加速糖尿病大鼠伤口愈合,芦荟凝胶的这种作用可能是通过调控MMP-9/和TIMP-l水平实现的。     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对心肌细胞肥大的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、AT1受体拮抗剂氯沙坦和AT2受体拮抗剂PD123177对心肌细胞蛋白质合成速率和AT1受体mRNA表达的影响。方法 采用^3H－亮氨酸掺入法测定培养的心肌细胞蛋白质合成速率，RT－PCR方法检测心肌细胞AT1受体mRNA表达。结果 在培养的心肌细胞中加入AngⅡ可明显增加心肌细胞^3H－亮氨酸的掺入量，并呈剂量依赖性，氯沙旦可显著抑制AngⅡ引起的蛋白质合成增加，而PD123177对其无影响；AngⅡ上调AT1受体基因表达，氯沙坦抑制其上调，PD123177无影响。结论 AngⅡ可通过上调AT1受体引起心肌细胞肥大，氯沙坦下调AT1受体，抑制心肌细胞肥大。     

HCN2对大鼠空肠SP和VIP释放的影响

目的研究超极化激活的环核苷酸门控阳离子通道2(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel 2,HCN2)对大鼠空肠神经丛释放SP及VIP的影响。方法对大鼠空肠离体平滑肌肌条分别给予HCN通道激动剂cAMP和拮抗剂MDL,通过酶联免疫法检测灌流液中给药前后SP和VIP含量的变化情况。结果给予HCN2受体激动剂cAMP后,环形肌和纵形肌中的SP含量均显著增加(P0.05),VIP含量显著减少(P0.05);而给予HCN2受体拮抗剂MDL后,环形肌和纵形肌中的SP含量均显著减少(P0.05),VIP含量显著增加(P0.05)。结论HCN2对大鼠空肠神经丛释放SP起正向调节作用,而对VIP含量起负向调节作用,与SP及VIP对胃肠道的调节相符,提示HCN2可能通过对胃肠激素释放的调节而影响胃肠运动。     

肾脏内皮素B受体参与D_3受体介导WKY大鼠尿钠排泄调节

目的肾脏多巴胺和内皮素(ET)系统通过影响近曲小管尿钠排泄在血压调节中发挥重要作用。敲除 ETB 受体基因或 D_3多巴胺受体基因均形成盐敏感性高血压小鼠,并伴有尿钠排泄能力降低;本试验将探索D_3受体和 ETB 受体之间是否存在相互作用以及该作用对 WKY 大鼠尿钠排泄的影响。方法应用 D_3受体激动剂、拮抗剂和 ETB 受体拮抗剂灌注 WKY 大鼠右肾动脉,观察刺激、抑制 D_3、ETB 受体后 WKY 肾功能尤其是尿钠排泄的变化。结果 PD128907刺激 D_3受体后,WKY 尿钠排泄增加,PD128907介导的促尿钠排泄作用可被 D_3受体拮抗剂 GR103691所阻断;ETB 受体拮抗剂 BQ788本身对尿钠排泄无明显影响,但可部分阻断 D_3受体介导的利钠作用。结论 D_3受体的促尿钠排泄作用部分通过 ETB 受体完成。     

血管紧张素Ⅱ及氯沙坦对糖尿病大鼠心肌成纤维细胞α1(Ⅰ)前胶原mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)及其1型受体阻断剂氯沙坦对糖尿病动物模型心肌成纤维细胞α1(Ⅰ)前胶原mRNA和蛋白表达的作用。方法 用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，饲养12周后分离心肌成纤维细胞进行原代培养。分别将一定浓度的ATⅡ(10^-9～10^-7mmol／L)，和ATⅡ10^-7 mmol／L加上不同浓度ATⅡ受体阻滞剂氯沙坦(10^-7～10^-5mmol／L)加入细胞培养液中刺激48h，分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹方法检测大鼠心肌成纤维细胞α1(I)前胶原的mRNA及蛋白表达。结果体外成功地培养糖尿病心肌成纤维细胞，并经免疫组化染色结果证实。经ATⅡ刺激48h后，α1(Ⅰ)前胶原mRNA和蛋白表达量明显增高，增高程度与ATⅡ浓度呈正比；加入氯沙坦后，前胶原mRNA和蛋白表达量较单用ATⅡ组下降，也呈浓度依赖性。结论 ATⅡ可促进糖尿病大鼠心肌成纤维细胞的胶原合成，可能在糖尿病大鼠心肌纤维化倾向中起重要作用，该作用可能主要通过ATⅡ1型受体介导完成。     

肾脏内皮素B受体参与D3受体介导WKY大鼠尿钠排泄调节

目的 肾脏多巴胺和内皮素(ET)系统通过影响近曲小管尿钠排泄在血压调节中发挥重要作用.敲除ETB受体基因或D3多巴胺受体基因均形成盐敏感性高血压小鼠,并伴有尿钠排泄能力降低;本试验将探索D3受体和ETB受体之间是否存在相互作用以及该作用对WKY大鼠尿钠排泄的影响.方法 应用D3受体激动剂、拮抗剂和ETB受体拮抗剂灌注WKY大鼠右肾动脉,观察刺激、抑制D3、ETB受体后WKY肾功能尤其是尿钠排泄的变化.结果 PD128907刺激D3受体后,WKY尿钠排泄增加,PD128907介导的促尿钠排泄作用可被D3受体拮抗剂GR103691所阻断;ETB受体拮抗剂BQ788本身对尿钠排泄无明显影响,但可部分阻断D3受体介导的利钠作用.结论 D3受体的促尿钠排泄作用部分通过ETB受体完成.