甘露醇促进人脐血CD34^＋细胞通过血脑屏障静脉迁移至高血压脑梗死大鼠脑组织

背景：单纯脐血细胞经静脉移植治疗脑梗死疗效有限,移植细胞经血脑屏障迁入脑内数量不足为重要原因之一。目的：观察血脑屏障开放剂甘露醇对人脐血CD34＋细胞经静脉移植治疗高血压大鼠脑梗死疗效的影响。方法：分离人脐血CD34＋细胞,脂质体方法转染pEGFPF质粒,制备pEGFP-CD34＋细胞;45只雄性SD大鼠经线栓法建立大脑中动脉栓塞模型,造模后24h随机分为3组：实验组注射1×106GFP-CD34＋细胞,继之注射20%甘露醇2g/kg;阳性对照组注射1×106GFP-CD34＋细胞;空白对照组注射等量生理盐水。结果与结论：①荧光显微镜下实验组每张切片脑组织GFP标记阳性的绿色荧光细胞计数平均值显著多于阳性对照组。②移植后第7天治疗组与其他各组神经功能损害评分差异无显著性意义;移植后28d,各组神经功能均有不同程度恢复,实验组神经功能恢复明显优于阳性对照组和空白对照组（P〈0.05）。③实验组与其他两组相比,大鼠脑梗死体积均显著减少。④实验组脑组织匀浆胶质细胞源性神经营养因子水平较阳性对照组、空白对照组明显增高。提示血脑屏障开放剂甘露醇促进静脉移植CD34＋细胞通过血脑屏障迁入至脑组织,并增强静脉移植CD34＋细胞治疗脑梗死的疗效。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰CD34+细胞静脉移植治疗高血压大鼠脑梗死

背景:近年来,已有实验证实经颅直接给予胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF)或携带GDNF基因病毒载体有显著减少脑梗死体积、促进神经功能恢复的疗效,但其治疗方法有创,临床应用有限.目的:观察GDNF基因转染的人脐血CD34+细胞经静脉移植对自发性高血压大鼠脑梗死的疗效,并探讨其机制.方法:分离人脐血CD34+细胞,脂质体方法转染pEGFP-GDNF质粒和pEGFP空载体至CD34'细胞制备pEGFP-GDNF-CD34+和pEGFP-CD34+细胞;制备60只雄性自发性高血压大鼠大脑中动脉栓死模型并随机分为3组:pEGFP-GDNF-CD34+细胞移植组(基因细胞组)、pEGFP-CD34+细胞移植组(单纯细胞组)、生理盐水组.改良神经功能损害评分评价神经功能恢复状况;图像分析法观察TTC染色脑梗死体积;酶联免疫法检测细胞培养液与脑组织匀浆GDNF水平,荧光显微镜及免疫组织化学检测绿色荧光蛋白标记CD34+细胞及其人神经胶质纤维酸性蛋白和人神经元核抗原表达.结果与结论:经静脉移植pEGFP-GDNF-CD34+细胞向自发性高血压大鼠脑缺血区域迁移、存活、并向神经细胞定向分化,促进神经功能恢复.GDNF基因转染CD34+细胞在脑组织存活、向神经细胞分化及对大脑神经功能保护作用优于CD34+细胞.脑组织GDNF水平可能是GDNF基因转染CD34+细胞和单纯CD34+细胞移植治疗自发性高血压大鼠局灶性脑缺血疗效差异机制之一.     

骨髓基质细胞移植缺血性脑梗死大鼠后神经营养因子的表达

背景:骨髓基质细胞在适宜条件下可分化为神经元和星形胶质细胞,分泌可溶性分子促进神经元存活。目的:观察骨髓基质细胞移植后缺血性脑梗死大鼠脑组织神经营养因子表达情况及其对神经功能的影响。方法:改良的Longa栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,1h后再灌注,24h后治疗组尾静脉注射3×106骨髓基质细胞,盐水对照组尾静脉注射1mL生理盐水,空白对照组不进行注射。结果与结论:在梗死后第7,14天治疗组的神经损伤评分明显低于对照组(P<0.05);治疗组神经生长因子和脑源性神经营养因子表达在各时间点均高于对照组(P<0.05)。结果显示静脉移植骨髓基质细胞可改善缺血性脑梗死大鼠神经功能,移植骨髓基质细胞后缺血脑组织中神经生长因子及脑源性神经营养因子表达促进了神经功能的恢复。     

人脐血CD34+细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复的影响

目的:CD34 造血干细胞具有自我更新、多向分化及重建长期造血和免疫的生物学功能,针对心肌缺血性损伤、肢体血管闭塞引起的组织缺血等治疗有显著的疗效.由于中枢神经系统缺血性损伤临床治疗康复效果不佳,观察人脐带血CD34 细胞移植对大鼠大脑中动脉栓塞后神经功能恢复的影响及CD34 细胞的存活、迁移以及向神经细胞分化的情况.方法:实验于2002-05起在天津市中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所进行.①实验材料:雄性SD大鼠由解放军军事医学科学院第四研究所提供,体质量250-350 g,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.人脐带血由天津脐血干细胞库提供,产妇及家属对实验知情同意,并符合医学伦理学标准.②实验方法:将大鼠随机分为3组:CD34 细胞移植组:用线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞模型后24 h移植CD34 细胞:生理盐水组:左侧大脑中动脉栓塞后24 h后注射等量的生理盐水;假手术组:仅行左侧大脑中动脉栓寒.③实验评估:采用改良神经功能损害评分观察大鼠神经功能恢复情况,应用免疫组织化学和免疫荧光双标记技术检测BrdU标记的CD34 细胞存活、迁移及其GFAP蛋白和NeuN蛋白的表达.结果:①CD34 细胞移植组与其它各组在移植完成24h改良神经功能损害评分差异无显著性(P＞0.05);移植后1周到第4周,各组动物均有神经功能不同程度的恢复,CD34 细胞移植组神经功能恢复明显优于另两组(P＜0.05).②CD34 细胞移植组与另两组比较,大鼠脑梗死体积无明显变化.③移植的CD34 细胞可在大鼠脑组织中存活,部分CD34 细胞同时表达GFAP蛋白或NeuN蛋白,并向缺血区域迁移.结论:CD34 细胞可在大鼠脑缺血区域中存活、迁移并向星形胶质细胞或神经元分化,同时促进神经功能恢复.     

骨髓基质细胞移植缺血性脑梗死大鼠后神经营养因子的表达

背景：骨髓基质细胞在适宜条件下可分化为神经元和星形胶质细胞,分泌可溶性分子促进神经元存活。目的：观察骨髓基质细胞移植后缺血性脑梗死大鼠脑组织神经营养因子表达情况及其对神经功能的影响。方法：改良的Longa栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,1h后再灌注,24h后治疗组尾静脉注射3×106骨髓基质细胞,盐水对照组尾静脉注射1mL生理盐水,空白对照组不进行注射。结果与结论：在梗死后第7,14天治疗组的神经损伤评分明显低于对照组（P〈0.05）;治疗组神经生长因子和脑源性神经营养因子表达在各时间点均高于对照组（P〈0.05）。结果显示静脉移植骨髓基质细胞可改善缺血性脑梗死大鼠神经功能,移植骨髓基质细胞后缺血脑组织中神经生长因子及脑源性神经营养因子表达促进了神经功能的恢复。     

不同时间移植人脐血CD34~+细胞可影响心肌梗死大鼠心功能及血管内皮细胞生长因子的分泌

背景:干细胞移植可以改善心脏功能,改善预后。目的:观察不同时间经静脉移植人脐血CD34+细胞对心肌梗死大鼠心功能及细胞因子分泌的影响。方法:结扎冠状动脉左前降支制备Wistar大鼠心肌梗死模型,于梗死后1,5,10,30d经尾静脉注入0.5mL人脐血CD34+细胞(实验组)或磷酸盐缓冲溶液(对照组)。结果与结论:与对照组相比,梗死后5,10d实验组大鼠左室射血分数明显升高(P<0.05),左室收缩末内径明显减小(P<0.05),左室后壁增厚率更高(P<0.05),毛细血管密度明显增加(P<0.05),且以梗死后10d移植大鼠心功能改善效果最明显(P<0.05)。梗死后10d实验组心肌局部血管内皮细胞生长因子最高(P<0.05)。说明大鼠心肌梗死后5,10d经静脉移植脐血CD34+细胞可明显改善心功能,梗死后10d移植血管内皮细胞生长因子分泌更多,血管生成更多,对心功能的改善更明显;同时说明脐血单个核细胞移植可能是通过增加血管内皮细胞生长因子分泌,提高毛细血管密度来改善心功能的。     

人胸腺和脐血造血干/祖细胞联合移植对裸鼠细胞免疫功能的影响

背景:T细胞在抗感染、抗肿瘤和免疫调节等中起重要作用,但T细胞分化发育机制尚未完全阐明.目的:观察人胸腺、人脐血联合移植后裸鼠体内T细胞分布及免疫功能的重建.方法:Balb/c nu/nu裸鼠30 只,随机分为2组:实验组肾被膜下移植胸腺组织,2周后将新鲜分离的脐血CD34+细胞悬液经小鼠静脉输入,对照组不经胸腺移植直接给予CD34+细胞移植,两组小鼠饲养至60 d时检测免疫功能.结果与结论:人胸腺在裸鼠肾被膜下存活并且表达CD3、HLA-DR分子,胸腺与CD34+细胞联合移植组小鼠脾脏可见点块状分布的CD3+细胞.实验组CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞及CD4+CD25+细胞比例均显著高于对照组.实验组裸鼠对移植人胃癌BGC823细胞有排斥作用,而对照组没有.结果显示胸腺和CD34+细胞联合移植能使裸鼠获得T细胞介导的细胞免疫功能,具有抗肿瘤能力.     

注射用七叶皂苷钠联合脐带间充质干细胞移植改善脑梗死大鼠神经功能

背景:单纯的脐带间充质干细胞移植修复受损脑组织的作用并不十分理想.目的:观察脐带间充质干细胞移植联合注射用七叶皂苷钠治疗大鼠脑梗死的效果.方法:应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,随机分为对照组、细胞移植组、七叶皂苷钠+ 细胞移植组,分别尾静脉注射细胞培养液、1×1010 L-1 脐带间充质干细胞悬液、尾静脉1×1010 L-1 脐带间充质干细胞悬液同时经腹腔注射七叶皂苷钠5 mg/(kg·d),连续5 d.结果与结论:移植后1 周,七叶皂苷钠+细胞移植组大鼠神经功能障碍评分低于细胞移植组及对照组(P < 0.05);七叶皂苷钠+细胞移植组大鼠脑梗死周围组织AQP9 及AQP4 mRNA 的表达低于细胞移植组,却高于对照组(P < 0.05);七叶皂苷钠+细胞移植组CM-Dil 阳性细胞和神经元数量多于细胞移植组及对照组(P < 0.05).提示脐带间充质干细胞移植联合注射用七叶皂苷钠治疗大鼠脑梗死可明显改善大鼠的神经功能.     

人胸腺和脐血造血干/祖细胞联合移植对裸鼠T细胞免疫功能影响

目的:建立人胸腺和脐血造血干/祖细胞联合移植裸鼠动物模型,探讨胸腺对造血干细胞发育分化的机制.方法:实验组为人胸腺与脐血CD34+细胞联合移植.对照组只给予人脐血CD34+细胞移植,通过观察裸鼠移植胸腺CD3、HLA-DR的表达、人源CD3+细胞在小鼠脾脏的表达、裸鼠血液CD3+、CD4+、CD8+和CD4+ CD25+细胞的百分比,以及联合移植裸鼠对移植肿瘤的排斥能力,判断联合移植对裸鼠免疫功能的影响.结果:移植胸腺在裸鼠肾被膜下存活,表达CD3和HLA-DR分子;裸鼠脾脏中检测到人源CD3+T细胞呈点块状分布;裸鼠血液中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+细胞均增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);联合移植组能抵抗肿瘤细胞的生长,单独脐血造血干/祖细胞移植组不能抑制肿瘤生长.结论:裸鼠移植人胸腺能促进人脐血造血干/祖细胞向T细胞分化、促进免疫功能重建.     

静脉移植脐血干细胞可抑制脑缺血大鼠的神经细胞凋亡

背景：已有实验证实脐血干细胞移植后可迁移至脑损伤区域,存活并分化为神经细胞。目的：探讨经静脉移植脐血干细胞治疗大鼠脑缺血的疗效以及对神经细胞凋亡的影响。方法：改良线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,48只大鼠随机数字表法分成治疗组和对照组,分别在造模1d后经尾静脉注射脐血干细胞和PBS进行观察。结果与结论：治疗后3,7d两组神经功能评分比较,差异无显著性意义（P〉0.05）;14,21d治疗组神经功能评分明显低于对照组（P〈0.05）。对照组未见BrdU阳性细胞,治疗组大鼠脑组织切片中可见BrdU阳性细胞,对侧半球也可见少量BrdU阳性细胞。对照组大鼠缺血侧凋亡细胞显著多于治疗组（P〈0.05）。提示经静脉移植的脐血干细胞可迁移至大鼠缺血侧脑组织,抑制神经细胞凋亡,并显著改善大鼠神经功能。     

Resuscitation from experimental heatstroke by transplantation of human umbilical cord blood cells

OBJECTIVE: Human umbilical cord blood cells (HUCBCs) are effective in the treatment of conventional stroke in experimental models. In the study described herein, we administered HUCBCs into the femoral vein or directly into the cerebral ventricular system and assessed their effects on circulatory shock, cerebral ischemia, and damage during heatstroke. DESIGN: Controlled, prospective study. SETTING: Hospital medical research laboratory. SUBJECTS: Sprague-Dawley rats (287 +/- 16 g body weight, males). INTERVENTIONS: Anesthetized rats, immediately after the onset of heatstroke, were divided into four major groups and given the following: a) normal saline or AIM-V medium intravenously (0.3 mL) or intracerebroventricularly (10 microL); b) peripheral blood mononuclear cells (5 x 10 in 0.3 mL AIM-V medium, intravenously, or 5 x 10 in 10 microL AIM-V medium, intracerebroventricularly); or c) HUCBCs (5 x 10 in 0.3 mL AIM-V medium, intravenously, or 5 x 10 in 10 microL AIM-V medium, intracerebroventricularly). Another group of rats, under urethane anesthesia, were exposed to room temperature (26 degrees C) and used as normothermic controls. Urethane-anesthetized animals were exposed to an ambient temperature of 43 degrees C to induce heatstroke. Their physiologic and biochemical parameters were continuously monitored. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: When the vehicle-treated rats underwent heat exposure, their survival time values were found to be 21-23 mins. Resuscitation with intravenous or intracerebroventricular doses of HUCBCs, but not peripheral blood mononuclear cells, immediately at the onset of heatstroke significantly improved survival during heatstroke (61-148 mins). As compared with values for normothermic controls, the vehicle-treated heatstroke rats had lower mean arterial pressure, cerebral blood flow, and brain PO2 values but higher intracranial pressure and cerebral ischemia values and more injury markers. The circulatory shock, intracranial hypertension, cerebral hypoperfusion and hypoxia, increment of cerebral ischemia, and damage markers during heatstroke were all significantly attenuated by intravenous or intracerebroventricular delivery of HUCBCs but not peripheral blood mononuclear cells. CONCLUSIONS: We successfully demonstrate that HUCBC therapy may resuscitate heatstroke victims by reducing circulatory shock and cerebral ischemic injury; central delivery of HUCBCs seems superior to systemic delivery of HUCBCs in resuscitating patients with heatstroke.     

脐血单个核细胞移植治疗老年急性广泛前壁心肌梗死后心源性休克合并重度心力衰竭1例(英文)

背景:人脐血单个核细胞作为一类移植细胞日益引起关注,但多为基础研究。目的:就脐血单个核细胞移植治疗老年急性广泛前壁心肌梗死后心源性休克合并重度心力衰竭1例进行报道。方法:急性广泛前壁心肌梗死后心源性休克合并重度心力衰竭女性患者1例,经冠心病介入治疗置入3枚支架及内科药物系统治疗,仍有反复发作性呼吸困难等心力衰竭症状。使用冠脉微导管经左冠前降支将含有脐血单个核细胞2.4×108个,总计50mL干细胞悬液注射到梗死相关血管。结果与结论:干细胞移植后随访近4个月,患者无不良反应发生,心力衰竭症状明显好转。射血分数从术前22%,移植后42%,到移植后21d升高至53%。血脑钠肽从术前1730ng/L,移植后854ng/L,到移植后21d降低至264ng/L。移植后4个月患者无胸闷、气短、乏力、呼吸困难发生,可以从事日常活动。说明脐血单个核细胞移植治疗急性心肌梗死后心源性休克合并心力衰竭安全、有效。     

异体脐血干细胞移植导致胃肠移植物抗宿主病的实验研究

目的观察心肌梗死(MI)大鼠接受静脉异体脐血干细胞(HUCBC)移植后发生腹胀的原因。方法大鼠于心肌梗死后5 d经尾静脉注入0.5 ml脐血[含单个核细胞(1～3)×107]或0.5 ml磷酸缓冲盐溶液(PBS)。不使用免疫抑制剂。观察8周,入选移植后发生腹胀的大鼠、未腹胀大鼠、对照(PBS)组大鼠(每组n=8),行超声心动图和血流动力学检查,同时对扩张肠道进行HE染色明确腹胀原因。结果梗死后移植大鼠心功能明显优于PBS大鼠,而腹胀与非腹胀大鼠相比,射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、左室压力最大变化率(±dp/dtmax)、左室舒张末压(LVEDP)没有显著差异,因此腹胀的发生与心功能恶化及移植效果没有关系。肠道大体解剖和病理分析显示移植大鼠(包括腹胀和未腹胀大鼠)均存在肠道扩张,以回肠周围最为明显,组织学表现符合肠道移植物抗宿主病。结论异体脐血单个核细胞移植可以导致胃肠道移植物抗宿主反应。     

脐血单个核细胞移植治疗老年急性广泛前壁心肌梗死后心源性休克合并重度心力衰竭1例（英文）

背景：人脐血单个核细胞作为一类移植细胞日益引起关注,但多为基础研究。目的：就脐血单个核细胞移植治疗老年急性广泛前壁心肌梗死后心源性休克合并重度心力衰竭1例进行报道。方法：急性广泛前壁心肌梗死后心源性休克合并重度心力衰竭女性患者1例,经冠心病介入治疗置入3枚支架及内科药物系统治疗,仍有反复发作性呼吸困难等心力衰竭症状。使用冠脉微导管经左冠前降支将含有脐血单个核细胞2.4×108个,总计50mL干细胞悬液注射到梗死相关血管。结果与结论：干细胞移植后随访近4个月,患者无不良反应发生,心力衰竭症状明显好转。射血分数从术前22%,移植后42%,到移植后21d升高至53%。血脑钠肽从术前1730ng/L,移植后854ng/L,到移植后21d降低至264ng/L。移植后4个月患者无胸闷、气短、乏力、呼吸困难发生,可以从事日常活动。说明脐血单个核细胞移植治疗急性心肌梗死后心源性休克合并心力衰竭安全、有效。     

可溶性血管细胞黏附分子-1及凝血因子Ⅶ与脑梗死的相关性研究

目的分析可溶性血管细胞黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-1,sVCAM-1)与凝血因子Ⅶ(coagulation factorⅦ,FⅦ)与脑梗死发生、发展的相关性。方法分别采用双抗体夹心ABC-ELISA法和全自动血凝仪CA500的一阶段凝固法动态检测30例急性脑梗死患者血清sVCAM-1及血浆FⅦ:C水平,以26例脑动脉供血不足患者和30例健康老年人为对照组。结果血清sVCAM-1水平在脑梗死发生第1d显著高于脑供血不足对照组和正常人对照组(P<0.01),1~7d呈增高趋势,7~14d呈下降趋势。脑梗死体积越大,sVCAM-1水平越高(P<0.01)。脑梗死患者血浆FⅦ:C水平两对照组无统计学差异(P>0.05)。结论sVCAM-1与急性脑梗死密切相关,与脑梗死的发生、发展有一定的联系,可用作脑梗死病程进展的监测指标。FⅦ与急性脑梗死的发生及进程均无显著相关性。     

高压氧治疗脑梗死疗效观察

Background:Hypoxia and ischemia resulting from cerebral infarction can further cause a series of pathological changes such as hydrocephallus.Drug therapy can improve cerebral blood circulation and enhance flow volume and decrease infarction area.If hyperbaric oxygen is added,pathophysiological changes such as ischemia and hypoxia can be improved and normal metabolism of brain cells be restored.     

外周血有核细胞中t-PA mRNA的表达与脑梗死患者的相关性研究

目的：探讨脑梗死患者与t—PA mRNA表达的关系。方法：用逆转录-PCR（RT—PCR）法检测40例脑梗死患者和40例正常对照者外周血有核细胞中t—PA mRNA的表达。结果：脑梗死患者组外周血有核细胞中t—PA mRNA的表达明显增强，同正常对照组比较差异有显著性（P〈0．01）。结论：外周血有核细胞中t—PA mRNA的表达增强与脑梗死密切相关，可作为脑梗死的辅助诊断指标；并有可能作为脑梗死疗效的动态监测指标。     

Stromal cell-derived factor-1 alpha promotes neuroprotection, angiogenesis, and mobilization/homing of bone marrow-derived cells in stroke rats

Stromal cell-derived factor (SDF)-1alpha is involved in the trafficking of hematopoietic stem cells from bone marrow to peripheral blood, and its expression is increased in the penumbra of the ischemic brain. In this study, SDF-1alpha was found to exert neuroprotective effects that rescued primary cortical cultures from H(2)O(2) neurotoxicity, and to modulate neurotrophic factor expression. Rats receiving intracerebral administration of SDF-1alpha showed less cerebral infarction due to up-regulation of antiapoptotic proteins, and they had improved motor performance. SDF-1alpha injection enhanced the targeting of bone marrow (BM)-derived cells to the injured brain, as demonstrated in green fluorescent protein-chimeric mice with cerebral ischemia. In addition, increased vascular density in the ischemic cortex of SDF-1alpha-treated rats enhanced functional local cerebral blood flow. In summary, intracerebral administration of SDF-1alpha resulted in neuroprotection against neurotoxic insult, and it induced increased BM-derived cell targeting to the ischemic brain, thereby reducing the volume of cerebral infarction and improving neural plasticity.     

腔隙性脑梗塞MRI与临床的对照分析

目的:通过腔隙性脑梗塞的MR表现与临床体征的对照研究,进一步提高对腔隙性脑梗塞的认识。材料与方法:采用MR常规轴位自旋回波(SE)序列,T1,T2加权像及快速液体衰减翻转恢复(FLAIR)序列扫描的病例,回顾性分析198例腔隙性脑梗塞病人的MR及临床表现,把有明确卒中病史的128例归为第一组;未发现有神经学体征的70例归为第二组,进行对比分析。结果:腔隙性脑梗塞分布在大脑深部的位置,包括放射冠、基底节、内囊、丘脑区及脑干等。较多病例为多发性病灶,病灶发生在脑内重要的功能位置,可表现出典型的临床症状。T1WI呈等或稍低信号,T2WI和FLAIR呈高信号。结论:MRI是诊断腔隙性脑梗塞的最有效方法,FLAIR成像能获得比SE T2WI更重的T2加权图像,还抑制了脑脊液信号,提高对脑室周围病灶的检出率。同时认为,弥漫性脑血流减少是产生腔隙性脑梗塞的原因之一。