支气管哮喘患儿外周血树突状细胞上前列腺素D2受体改变研究

目的 研究不同病期支气管哮喘(简称哮喘)患儿单核细胞衍生的树突状细胞(dendriticcells,DC)上前列腺素D2受体(DP/CRTH2)结合容量改变,探讨其对Th2极化的影响.方法 随机病例对照研究.分哮喘急性发作期组32例.平均年龄(6.1±3.5)岁.缓解期组30例,平均年龄(5.8±2.6)岁,正常对照组34例,平均年龄(7.2±3.8)岁.用放射配体结合分析法测定外周血DC上DP1/CRTH2结合容量;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定外周血白介素4(IL-4)、IL-5和γ干扰素(IFN-γ).结果 哮喘发作期和缓解期组DC上总结合和CRTH2受体结合容量比正常对照组显著增加,DP总结合为:(532.42±123.87)fmol/106细胞、(491.78±110.64)fmol/106细胞、(274.61±87.16)fmol/106细胞;CRTH2为:(355.66±99.19)fmol/106细胞、(316.83±81.42)fmol/106细胞、(123.74±49.27)fmol/106细胞;而DP1差异无统计学意义(P<0.01).发作期和缓解期组Th2细胞因子IL-4、IL-5比正常对照组显著增加,IL-4为:(12.76±3.54)ng/L、(11.44±2.65)ng/L、(7.49±1.45)ng/L;IL-5为:(36.28±10.21)ng/L、(32.11±11.56)ng/L、(18.484±5.65)ng/L(P<0.01);发作期和缓解期组Th1细胞因子IFN-γ比正常对照组显著减少,IFN-γ为:(7.47±2.49)ng/L、(7.56±1.41)ng/L、(13.13±1.44)ng/L(P<0.01).结论 哮喘患儿发作期和缓解期外周血DC上CRTH2受体表达和Th2细胞因子IL-4、IL-5分泌增加.     

支气管哮喘患者外周血嗜酸粒细胞上前列腺素D2受体改变研究

目的了解不同病期支气管哮喘（简称哮喘）患者外周血中嗜酸粒细胞（EOS）上前列腺素D2（PGD2）受体（DP1／CRTH2）结合容量改变情况。方法随机病例对照研究。分为正常对照组24例,平均年龄（5．8±2．7）岁,哮喘急性发作期组18例,平均年龄（4．7±3．8）岁和缓解期组12例,平均年龄（3．9±3．1）岁。用放射配体结合分析法测定外周血EOS上DP1／CRTH2结合容量。结果哮喘急性发作期组和缓解期组患者EOS数显著增加（×10^6／L）（急性发作期组：297±58;缓解期组：157±34和对照组95±26）（P〈0．01）,EOS上CRTH2受体结合容量和总结合容量比正常对照组和缓解期组显著增加（fmol／10^6细胞）（CRTH2分别为：245．58±48．27、154．13±67．25、119．29±53．47;DP总结合分别为：456．14±25．57、337．51±38．52、301．22±39．54）（P〈0．01）。结论哮喘急性发作期组CRTH2受体结合容量增加,PGD2激发的EOS的趋化反应将偏向于CRTH2受体中介的生物学效应。     

支气管哮喘患者外周血嗜酸粒细胞上前列腺素D2受体改变研究

目的 了解不同病期支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血中嗜酸粒细胞(EOS)上前列腺素D2(PGD2)受体(DP1/CRTH2)结合容量改变情况.方法 随机病例对照研究.分为正常对照组24例,平均年龄(5.8±2.7)岁,哮喘急性发作期组18例,平均年龄(4.7士3.8)岁和缓解期组12例,平均年龄(3.9士3.1)岁.用放射配体结合分析法测定外周血EOS上DP1/CRTH2结合容量.结果 哮喘急性发作期组和缓解期组患者EOS数显著增加(×106/L)(急性发作期组:297士58;缓解期组:157士34和对照组95士26)(P<0.01),EOS上CRTH2受体结合容量和总结合容量比正常对照组和缓解期组显著增加(fmol/106细胞)(CRTH2分别为:245.58士48.27、154.13士67.25、119.29士53.47;DP总结合分别为:456.14士25.57、337.51士38.52、301.22士39.54)(P<0.01).结论 哮喘急性发作期组CRTH2受体结合容量增加,PGD2激发的EOS的趋化反应将偏向于CRTH2受体中介的生物学效应.     

支气管哮喘患者急性发作期外周血LncRNA NEAT1表达及与Th1/Th2平衡的关系

目的：探讨支气管哮喘（BA）患者急性发作期外周血长链非编码RNA（LncRNA）核富集转录本1（NEAT1）表达水平及其与辅助性T细胞1（Th1）/辅助性T细胞2（Th2）平衡的关系。方法：选取BA缓解期患者36例（缓解期组）、急性发作期患者44例（急性发作期组）,另选取同期体检健康者50例作为对照组。利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定外周血LncRNA NEAT1表达,应用流式细胞仪测定外周血单个核细胞（PBMC）中Th1、Th2细胞比例,应用ELISA法测定外周血干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）水平;采用Pearson检验分析BA急性发作期患者外周血LncRNA NEAT1表达与Th1/Th2、IFN-γ/IL-4比值的关系,并绘制ROC曲线分析LncRNA NEAT1表达水平对BA患者急性发作的预测价值。结果：急性发作期组患者外周血LncRNA NEAT1表达水平最高,其次为缓解期组,对照组最低,组间比较差异有统计学意义（均P＜0.05）。PBMC中Th1细胞比例及Th1/Th2比值高低依次为对照组、缓解期组、急性发作期组,Th2细胞比例高低依次为急性发作期组、缓解期组、对照组,组间比较差异有统计学意义（均P＜0.05）。外周血IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比值高低依次为对照组、缓解期组、急性发作期组,IL-4水平高低依次为急性发作期组、缓解期组、对照组,组间比较差异有统计学意义（均P＜0.05）。BA急性发作期患者外周血LncRNA NEAT1表达与Th1/Th2、IFN-γ/IL-4比值呈负相关（均P＜0.05）。外周血LncRNA NEAT1表达水平预测BA患者急性发作的曲线下面积为0.903,最佳截断值为1.73,敏感性为81.80%,特异性为88.90%。结论：BA患者急性发作期外周血LncRNA NEAT1高表达,可能与Th1/Th2平衡紊乱有关。     

儿童支气管哮喘血清IL-4、IL-10和IFN-γ浓度的测定及其临床意义

目的探讨血清白介素4（IL-4）、IL-10和干扰素γ（IFN-γ）与支气管哮喘（简称哮喘）的关系及其临床意义。方法随机收集于2008年6月至2009年1月期间在山东大学齐鲁儿童医院就诊的哮喘患儿纳入哮喘组,哮喘诊断全部符合2003年中华医学会儿科分会呼吸学组修订的支气管哮喘诊断标准,共计47例。同时选取性别和年龄与哮喘组匹配的51例健康体检儿童作为正常对照组。收集外周静脉血,采用双抗体夹心ELISA方法测定两组血清IL-4、IL-10、IFN-γ浓度,比较两组之间血清IL-4、IL-10、IFN-γ浓度的差异。结果哮喘组血清IL-4浓度[（346.74±82.92）ng/L]显著高于正常对照组[（199.87±59.25）ng/L]（P〈0.01）;哮喘组血清IL-10浓度[（86.38±58.58）ng/L]与正常对照组[（98.77±37.05）ng/L]的差异无统计学意义（P〉0.05）,哮喘组血清IFN-γ浓度[（94.51±22.92）ng/L]低于正常对照组[（110.75±47.11）ng/L]（P〈0.05）。结论 Th2类细胞因子IL-4在哮喘患儿血清中浓度升高,而Th1类细胞因子IFN-γ浓度下降,哮喘患儿存在Th1/Th2细胞免疫失衡;血清IL-4、IFN-γ浓度检测可以作为儿童哮喘的辅助诊断手段,同时本研究为使用抗IL-4制剂、补充IFN-γ等免疫学方法治疗哮喘提供依据。     

青春型双歧杆菌对哮喘儿童树突状细胞功能的影响

目的研究青春型双歧杆菌对过敏性哮喘儿童外周血单个核细胞来源的树突状细胞（dendritic calls,DC）表面共刺激分子表达及其细胞因子分泌的影响。方法从15例过敏性哮喘儿童和15例非哮喘儿童的外周血单个核细胞诱导生成未成熟DC．与青春型双歧杆菌共培养48小时后．用流式细胞仪检测DC表面CD86和HLA-DR分子的表达,用ELISA方法检测培养上清中自细胞介素（IL）-10、IL-12和IFN-γ的水平。结果经双歧杆菌刺激后,哮喘儿童DC表面CD86表达明显增高（P〈0．05）,DC分泌IL-12和IFN-γ水平明显增高;而双歧杆菌刺激对非哮喘儿童的CD86和HLA-DR表达无明显影响,但可使其DC分泌IL-12及IL-10水平明显增高。结论青春型双歧杆菌既可以通过上调CD86的表达,促进DC成熟;又可刺激DC分泌IL-12和IFN-γ,改变Th2优势分化,纠正Th1/Th2失衡,这可能是益生菌防治变态反应性疾病的机制之一。     

老年慢性心力衰竭患者辅助性T细胞17及白介素-17的检测及临床意义

目的研究老年慢性心力衰竭（chronic heart failure,CHF）患者外周血中辅助性T细胞17（Thl7）的比例及白介素-17（IL-17）的变化及临床意义。方法选择老年CHF住院患者作为CHF组（n=30）,同时设置对照组（n=30）,利用流式细胞技术和ELISA法分别检测2组患者外周血中Thl7细胞比例和IL-17的水平。结果CHF组外周血中Thl7／CD4＋T细胞比例显著高于对照组[（3．83±1．04）％比（2．25±0．78）％,P〈0．05];CHF组患者外周血中IL-17水平显著高于对照组[（8．97±3．06）ng／L比（6．12±2．34）ng／L,P〈0．05]。结论老年C／IF患者外周血中Thl7细胞比例及IL-17水平升高,调节Th17细胞的治疗可能为CHF治疗提供新思路。     

HBV C基因基本核心启动子变异对乙型肝炎患者血清病毒复制和细胞因子水平的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）DNAC基因基本核心启动子（BCP）变异对机体免疫状态及乙型肝炎病毒复制的影响。方法采用PCR微板核酸杂交结合ELISA技术检测HBVDNABCP变异；采用双抗体夹心ELISA法检测患者血清IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10水平；采用荧光定量PCR法测定HBVDNA水平。结果HBVDNABCP变异病人和非变异病人血清IL-2水平分别为61．4±24．7ng／L和65．1±25．3ng／L，IFN-γ为82．0±50．1ng／L和71．8±67．0ng／L，IL-4为62．3±46．0ng／L和59．4±51．0ng／L．IL-10为74．0±88．2ng／L和81．4±67．0ng／L（P均〉0．1）；HBVDNABCP变异病人的HBVDNA水平为1×10^5.82±2.01 copies／ml，明显高于非变异病人的1×10^4.71±1.78 copies／ml（P〈0．01）。结论HBVDNABCP变异对机体血清细胞因子水平无明显影响，但对HBVDNA的复制具有一定的促进作用。     

孟鲁司特钠联合细辛脑注射液治疗小儿毛细支气管炎前后髓系抑制细胞、IL-12、IL-1O水平变化分析

目的观察孟鲁司特钠联合细辛脑注射液治疗小儿毛细支气管炎前后髓系抑制细胞（myeloidderivedsuppressorcells,MDSCs）、IL-10、IL12的变化,探讨药物作用机制。方法2012年1月至2014年4月收治的107例急性发作毛细支气管炎患儿为研究对象,根据有无特应质分为特应质组（52例）、非特应质组（55例）,两组在对症疗法基础上,静滴细辛脑注射液并口服孟鲁司特钠咀嚼片,检测治疗前、治疗5d后、治疗7d后患儿外周血MDSDs占外周血单核细胞比例、血清IL-10、IL-12水平并记录变化情况,治疗7d后判定临床疗效。结果特应质组患儿治疗前、治疗5d、7d后MDSCs分别为（2．87±0．24）％、（1．55±0．20）％、（0．87±0．21）％,IL-10分别为（27．81土4．95）ng／L、（19．64±4．16）ng／L、（13．62±2．97）ng／L;非特应质组MDSC％分别为（1．52±0．25）％、（1．07±0．21）％、（0．84±0．16）％,IL-10分别为（21．56±4．07）ng／L、（18．35±4．24）ng／L、（14．37±3．82）ng／L,特应质组MDSCs、IL-10下降趋势更为明显。特应质组治疗前、治疗5d、7d后IL-12分别为（33．74±7．26）ng／L、（46．53±6．12）ng／L（54．32±8．65）ng／L,非特应质组IL-12水平相对稳定（P〉0．05）。治疗7d后,特应质组与非特应质组患儿总体疗效构成（Z=0．788,P=0．431）及临床总体有效率（96．2％VS92．7％,P=0．679）差异无统计学意义。结论孟鲁司特钠联合细辛脑注射液治疗合胞病毒感染小儿毛细支气管炎可下调MDSCs、IL-10水平,上调IL-12水平,可能通过恢复体内Thl／Th2细胞失衡发挥作用,这种通路机制在特应质患儿表现得更为典型。     

香烟烟雾暴露对支气管哮喘大鼠Th1／Th2细胞因子及转录因子GATA-3表达的影响

目的通过观察香炯烟雾暴露后支气管哮喘（简称哮喘）大鼠Th1／Th2细胞因子及转录因子GATA-3表达的变化,探讨吸烟加重哮喘的免疫学机制。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、烟雾暴露组、哮喘组、哮喘＋烟雾暴露组;建立慢性哮喘大鼠模型和哮喘大鼠香炯炯雾暴露模型,普通病理观察气道壁厚度的变化,酶联免疫吸附试验检测外周血和肺组织γ干扰素（INF-γ）和白介素4（IL-4）含量;免疫印迹检测肺组织GATA-3蛋白表达水平。结果①哮喘＋烟雾暴露组气道壁厚度[（18．34±0．87）μm^2／μm]较哮喘组[（15．72±0．82）μm^2／μm]和对照组[（8．52±0．58）μm^2／μm]均明显增加,差异有统计学意义（P值均〈0．01）;②哮喘＋烟雾暴露组血浆和肺组织IL-4含量[（34．07±6．11）ng／L]、[（1．41±0．31）ng／L]较哮喘组[（22．57±4．32）ng／L]、[（0．80±0．14）ng／L]和对照组[（11．38±2．90）ng／L]、[（0．27±0．08）ng／L]均增高,差异有统计学意义（P值均〈0．05）;哮喘＋烟雾暴露组血浆INF-γ含量[（9．53±3．28）ng／L]较哮喘组[（58．83±19．57）ng／L]和对照组[（150．87±55．54）ng／L]均降低,差异有统计学意义（P值均〈0．05）,肺组织INF-γ含量[（0．48±0．10）ng／L]较哮喘组[（0．58±0．23）ng／L]差异无统计学意义;③哮喘＋烟雾暴露组GATA-3蛋白表达（1．29±0.08）较哮喘组（0．87±0．04）和对照组（0．45±0．06）均增加,差异有统计学意义（P值均〈0．01）。结论香烟烟雾暴露可以通过上调转录凶子GATA3蛋白表达,进而调控Th1／Th2偏移,在哮喘气道炎症及气道重塑的形成中扮演重要角色,为吸烟加重哮喘的免疫学机制之一。     

转化生长因子-β对人Th17细胞增殖的影响

目的探讨转化生长因子（TGF）-β对人Th17细胞的免疫调节作用。方法应用免疫磁珠分离正常人CD4^＋T细胞并随机分为观察组和对照组,均置于含5μg/ml植物凝集素和5 ng/ml人重组IL-2的IMDM培养基中,在此基础上观察组加入100 IU/ml TGF-β,均于37℃、5%CO2孵箱中培养4 d。采用ELISA法检测两组细胞上清中IL-17蛋白水平,流式细胞术检测CD4^＋T细胞内IL-17比例（Th17细胞数量）。结果观察组和对照组CD4^＋T细胞上清中IL-17蛋白水平分别为（6.11±9.20）、（15.07±12.70）pg/ml,观察组低于对照组（P=0.07）;观察组和对照组Th17细胞数量分别为2.45%±0.62%、2.81%±0.44%,观察组明显低于对照组（P〈0.05）。结论 TGF-β在体外能通过抑制人Th17细胞增殖而调节其免疫作用。     

不同条件下尼古丁对致敏大鼠树突状细胞分泌白介素10及白介素12的影响

目的研究不同实验条件尼古丁对致敏大鼠树突状细胞（DC）及白介素10（IL-10）、白介素12（IL-12）表达的影响,从细胞水平探讨尼古丁加重哮喘的免疫学机制。方法制备致敏大鼠模型,培养骨髓来源的DC,接种于6孔培养板中,随机分为对照组及实验组,进行以下研究。①尼古丁作用的浓度依赖性研究：分别用50、100、200、400mg/L的尼古丁孵育细胞,72h后收集各组细胞的上清液;②尼古丁作用的时间依赖性研究：用400mg/L的尼古丁与细胞分别孵育0、4、8、12、24、72h,收集各组细胞的上清液。采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析法测定各组细胞上清IL-10和IL-12的浓度。结果①DC与不同浓度尼古丁孵育72h后,200、400mg/L尼古丁组IL-10的表达较对照组均明显减少,差异有统计学意义（P〈0.01）;400mg/L尼古丁组IL-12较对照组均明显减少,差异有统计学意义（P〈0.01）;②DC与400mg/L的尼古丁分别孵育4、8、12、24、72h,其中12、24、72h组IL-10蛋白均较对照组明显减少,差异有统计学意义（P〈0.01）,12h组IL-12与对照组比较明显升高,72h组IL-12与对照组比较明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论一定浓度的尼古丁可以抑制致敏大鼠DCIL-10及IL-12的表达,并且呈时间依赖性,这可能是吸烟加重和改变哮喘的气道炎症反应的免疫学机制之一。     

前列腺素D2及其受体CRTH2与支气管哮喘的最新研究进展

前列腺素D2（prostaglandinD2,PGD2）是由支气管哮喘（简称哮喘）患者的肥大细胞等分泌的一种主要的前列腺素类物质。尽管它在哮喘发病机制中的作用尚不完全清楚。但大量研究表明PGD2通过相应受体介导参与哮喘的形成。最近,对于新型Th2细胞上表达的化学趋向性受体同种分子（chemoattractantreceptorhomologousmoleculeexpressedonTh2cells,CRTH2）受体的研究取得新进展,前列腺素类受体（dprostanoidreceptor,DP）与CRTH2两者协同作用诱导炎症细胞迁移和细胞因子的产生,介导哮喘等过敏性疾病的发生发展过程。该篇主要综述PGD2及其受体CRTH2在哮喘发病中作用机制的最新研究进展。     

吸入性糖皮质激素对支气管哮喘患儿气道重塑的影响

目的探讨吸入性糖皮质激素对支气管哮喘（简称哮喘）患儿气道重塑的影响。方法对年龄在5～15岁的30例中重度持续哮喘的住院患儿（哮喘组）、30例健康儿童（对照组）、15例经规范化糖皮质激素吸入治疗6个月以上的哮喘缓解期（缓解组）患儿用5％高渗盐水进行超声雾化诱导痰液,以酶联免疫吸附试验（ELISA）测定诱导痰中IL-5水平,免疫细胞化学方法测定诱导痰中转化生长因子β1（TGF-β1）表达,同时进行诱导痰中嗜酸粒细胞（EOS）计数,测定第1秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1％pred）,进行肺部高分辨CT（HRCT）检查,测定肺CT的段及亚段支气管壁厚度／气道外径（T／D）和气道壁面积占气道总面积百分比（WA％）。结果①哮喘组EOS计数为（17．24±12．11）％、IL-5为（25．45±18．05）pg／L;缓解组EOS计数为（3．66±2．13）％、IL-5为（7．33±4．39）pg／L;对照组EOS计数为（1．40±1．27）％、IL-5为（6．49±5．31）pg／L,哮喘组与对照组、哮喘组与缓解组比较差异有统计学意义,P值均〈0．01。②30例哮喘患儿有27例痰液中出现TGF-β1阳性表达,缓解组有2例TGF-β1阳性表达,而对照组中未见有TGF-β1阳性表达。③哮喘组T／D（18．16±2．42）％、WA％（59．25±6．54）％、FEV1％pred（71．82±23．08）％;缓解组T／D（17．17±1．9）％、WA％（56．01±3．91）％、FEV1％pred（96．18±12．8）％;对照组T／D（16．45±2．30）％、WA％（53．91±7．72）％、FEV1％pred（107.46±17．11）％,哮喘组与对照组、哮喘组与缓解组比较差异有统计学意义,P值均〈0．05。结论气道重塑在儿童哮喘中已经形成;吸入糖皮质激素可有效地调控气道炎症的发生、发展,经较长疗程的吸入糖皮质激素治疗后气道重塑部分可以逆转。     

HepG2细胞抗原对脐血CD34^＋造血干细胞诱导分化的树突细胞免疫功能的影响

背景：树突细胞（DC）是体内功能最强的抗原呈递细胞,可激活初始型T细胞,生成辅助性T细胞和杀伤性T细胞。DC具有特异性呈递肿瘤抗原的能力,在肿瘤免疫中发挥重要作用。目的：探讨HepG2细胞抗原对脐血CD34^＋造血干细胞诱导分化的DC免疫功能的影响。方法：分离培养脐血CD34^＋造血干细胞后,加入细胞因子组合诱导生成DC并将其分成HepG2细胞抗原负载组和对照组．以流式细胞仪测定DC生成率和免疫表型,以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测干扰素-γ（IFN-γ）含量,以MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL细胞）对HepG2细胞的杀伤作用。结果：DC生成率为60．2％±9．4％。与对照组相比,HepG2细胞抗原负载组DC免疫表型CD1a^＋／CD40^＋、CD83^＋／CD86^＋、CD14^＋／HLA-DR^＋比例显著增高（57．6％±5．4％对33．2％±6．0％、32．5％±3．9％对26．0％±2．8％、38．1％±2．6％对29．1％±2．1％,P〈0．01）;IFN-γ含量呈时间依赖性增高;CTL细胞对HepG2细胞的杀伤作用显著增强（43.3％±11.3％对13．9％±4．6％,P〈0．01）。结论：应用HepG2细胞抗原孵育脐血CD34^＋造血干细胞可诱导分化成熟DC,DC可促进异基因淋巴细胞活化分泌IFN-γ,并产生特异性CTL细胞,杀伤肝癌HepG2细胞。