海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究．结果表明，最佳提取条件为：pH6．0的磷酸盐浸提液0．05mol／L，NaCl浓度为0．05mol／L，缓冲液体积与海参肠质量之比为4：1，硫酸铵饱和度为80％；该酶最适反应条件为：温度40℃，pH6．0；该酶在10-40℃，pH5．O～6．5酶活力稳定．Mn^2＋对酶具有一定的激活作用，Cu^2＋、Cd^2＋、Mg^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋、Bd^2＋、K^＋、Ag^＋对酶存在不同程度的抑制，其中Cu^2＋对酶的抑制作用最强．     

β-葡萄糖苷酶交联聚合物的制备及酶学性质

对来源于黑布林的β-葡萄糖苷酶进行了交联法制备(CLEAs),并对其酶学性质进行了初步研究。结果发现,当异丙醇为蛋白沉降剂时CLEAs的酶活回收率最高达58.9%;该聚合酶的最适温度为55℃,显示出良好的温度耐受性;CLEAs的Km、Vmax和Ki值分别为5.74 m M、203.4μmol/(min·mg蛋白)和394.03 m M;此外,金属离子Hg2+、Ag+可显著降低CLEAs的酶活。     

黑曲霉As．n.XEC-1液体发酵产β-葡萄糖苷酶条件及酶学性质研究

实验分离得到一株具有较高胞外分泌β-葡萄糖苷酶能力的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株As．n．XEC-1,并对其液体发酵产伊葡萄糖苷酶的条件及酶学性质进行了研究．结果表明,发酵温度32℃,发酵周期7d,摇床震荡频率200r／min,装液量500mL的三角瓶中装量为60mL,接种量8％,伊葡萄糖苷酶的活性最高．经过发酵条件优化后酶活由原来的130u／mL提高到192u／mL．β-葡萄糖苷酶的最适作用温度为50℃,最适作用pH值为4．6,在45℃以下时酶稳定性较好,在pH3．0～6．0之间较稳定．     

黑曲霉液体发酵生产β-葡聚糖酶的工艺条件研究

探讨了黑曲霉-(Aspergillus niger)液体发酵的最适工艺条件，在250mL三角瓶中装液量50mL，摇瓶转数为200r／min，发酵培养基起始pH为5．0，发酵温度为32℃，发酵周期为50h，酶活达到86U／mL。     

燕麦β-葡聚糖水解酶发酵条件的优化及其应用

通过单因素实验和均匀实验确定由黑曲霉3112s产β-葡聚糖水解酶的最佳条件,并初步应用该水解酶水解燕麦β-葡聚糖。结果表明,最佳产酶培养基组成为麸皮15g、豆粕5g、葡萄糖1.2g、硫酸铵0.16g、水20mL。最佳发酵条件为pH 6.5、29℃、发酵6d,此时水解酶的酶活力达到183.27U/mL。用最优条件制备的β-葡聚糖水解酶对燕麦β-葡聚糖进行水解,水解之后燕麦β-葡聚糖的相对分子质量由1.69×106降为6.71×104。     

GS0202菌产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶条件及其酶的反应条件

为提高Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌所产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3的能力,采用单因素研究方法,对菌体发酵条件,及其所产酶的酶反应条件进行了研究。结果表明,菌体发酵的最适培养基组成为胰蛋白胨10 g,酵母粉5 g,氯化钠10 g,水1 L;诱导物为人参总皂苷,其加入量为3.2 mg/mL,培养温度为28℃;酶反应的最适条件为25℃,pH 4,底物质量浓度为3 mg/mL。     

GS0202菌产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶条件及其酶的反应条件

为提高Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌所产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3的能力,采用单因素研究方法,对菌体发酵条件,及其所产酶的酶反应条件进行了研究.结果表明,菌体发酵的最适培养基组成为胰蛋白胨10 g,酵母粉 5 g,氯化钠10 g,水1 L;诱导物为人参总皂苷,其加入量为3.2 mg/mL,培养温度为28 ℃;酶反应的最适条件为25 ℃,pH 4,底物质量浓度为3 mg/mL.     

异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质

采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na~+、K~+、Ca~(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe~(3+)、Cu~(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。     

黑曲霉固体发酵法提取燕麦麸中β-葡聚糖

以燕麦麸为原料,采用黑曲霉固体发酵法提取β-葡聚糖。对黑曲霉的菌龄、接种量、发酵温度、培养时间等条件进行单因素试验,在此基础上通过正交试验确定了燕麦麸中β-葡聚糖的最佳提取工艺条件:燕麦麸用量20g,黑曲霉种子液菌龄10h,接种量15mL,发酵温度30℃,培养时间10h。结果表明,β-葡聚糖的提取率为6.28%,纯度为52.53%,相对分子质量为2.8×106。     

黑曲霉496-1菌株植酸酶的分离纯化及酶学性质

黑曲霉(A.niger)496-1菌株所产胞外植酸酶，经透析浓缩、DEAE-cellulose离子交换层析及Sephadex G-75，Sephacryl 100凝胶过滤，获得了2个植酸酶，其相对分子质量分别为64200及41100该2个植酸酶的最适pH分别为6．0和3．0，最适温度分别为55℃和40℃．初步确定一个是中性植酸酶，另一个为酸性植酸酶．     

天冬氨酸转氨酶及其酶学性质

从大肠杆菌中提取了天冬氨酸转氨酶,并对其酶学性质进行了系统的研究,得出该酶的最适反应温度为３７℃、最佳反应ｐＨ范围为８．０￣８．５、最佳氨基供体为Ｌ－天冬氨酸、转化反应动力学常数Ｋｍ,地影响该酶作用的其它因素（辅酶、金属离子）作了研究。利用几种α－酮酸,考察了该酶在转化制备相应的芳香族Ｌ－氨基酸过程中的作用。为该酶的工业化应用提供了理论上的依据。     

节杆菌10137产β-呋喃果糖苷酶条件及酶学性质

研究表明，节杆茵10137产β-呋喃果糖苷酶的最佳条件为：温度为30℃，pH值7．5，接种体积分数为2％，装液体积为40mL．该条件下β-呋喃果糖苷酶的转移酶活为177．78U／mL，酶作用最适pH值为6．5，最适温度为30℃，在pH值为6．0～8．0和45℃以下稳定．Ag^ 和Cu^2 对该酶有较强烈的抑制作用，EDTA和Mg^2 对酶活也有一定影响。     

β-琼脂糖酶（AgaA7）在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究

为研究重组β-琼脂糖酶（AgaA7）基因的表达产物及其酶学性质,根据GeneBank中β-琼脂糖酶（AgaA7）基因的编码序列合成此基因后,将其克隆到表达载体pET-22b（＋）中,并在大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达.纯化后的表达产物经SDS-PAGE检测其相对分子质量并测定其酶学性质.结果表明：重组酶的相对分子质量为～5.0×10^4,与预期相符.此酶最适反应pH是7.0,在pH58的缓冲液中最稳定;最适反应温度为50℃,在低于50℃时比较稳定.Na^＋,K^＋,Ca^2＋,Mg^2＋对重组酶活性影响不大,而Zn^2＋,Hg^2＋,Pb^2＋则对酶活性具有不可逆抑制作用.     

海参肠道组织蛋白酶B粗酶提取条件的优化

为了获得具有较高活力的海参肠组织蛋白酶B,研究了其粗酶的提取条件。以Z-Arg-Arg-MCA为特异性底物,采用荧光光度法测定了酶活力。对提取海参肠组织蛋白酶B的浸提缓冲液、浸提时间和硫酸铵饱和度进行优化。结果表明,采用含5 mmol/L L-半胱氨酸、1 mmol/L EDTA、0.2%TritonX-100的50 mmol/L pH5.0的NaAc-HAc缓冲液浸提7 h后,选择80%饱和度的硫酸铵进行沉淀,能够有效地从海参肠道中提取组织蛋白酶B;同时研究了巯基保护剂对酶活力的影响。结果表明,巯基保护剂可提高酶的活力,这符合组织蛋白酶B结构中含有巯基的特性。在提取粗酶的过程中,添加巯基保护剂可有效地保证酶活力。     

海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶培养基优化及其酶学性质

以琼胶酶的酶活力为指标,对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养基组分进行优化,并研究琼胶酶粗酶液的酶学性质。通过单因素和正交试验对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养条件进行优化,结果表明最佳营养组分为:酵母膏的质量浓度为12g/L,琼脂粉质量浓度为3g/L,NaCl质量浓度为45g/L,在该条件下酶活力达到7.689U/g。其粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH为7,在pH范围为6~8的内酶活性较稳定,温度在20~40℃时酶的稳定性较好,但温度达到80℃基本失活。     

海参肠道组织蛋白酶B粗酶提取条件的优化

为了获得具有较高活力的海参肠组织蛋白酶B,研究了其粗酶的提取条件。以Z-Arg-Arg-MCA为特异性底物,采用荧光光度法测定了酶活力。对提取海参肠组织蛋白酶B的浸提缓冲液、浸提时间和硫酸铵饱和度进行优化。结果表明,采用含5 mmol/L L-半胱氨酸、1 mmol/L EDTA、0.2%TritonX-100的50 mmol/L pH5.0的NaAc-HAc缓冲液浸提7 h后,选择80%饱和度的硫酸铵进行沉淀,能够有效地从海参肠道中提取组织蛋白酶B;同时研究了巯基保护剂对酶活力的影响。结果表明,巯基保护剂可提高酶的活力,这符合组织蛋白酶B结构中含有巯基的特性。在提取粗酶的过程中,添加巯基保护剂可有效地保证酶活力。     

生孢噬纤维菌内切葡聚糖酶的异源表达及CBM6对其酶学性质的影响

内切葡聚糖酶是纤维素酶系的重要组分之一,但大部分内切葡聚糖酶酸碱耐受性较差。为挖掘新型内切葡聚糖酶,本研究从生孢噬纤维菌CX11基因组中克隆了一个内切葡聚糖酶基因Sm＿1350。该基因大小为2 196 bp,编码732个氨基酸,编码蛋白包含一个分泌信号肽、GH5催化结构域、6家族碳水化合物结合模块(CBM6)和一个C末端结构域(CTD)。利用实时荧光定量PCR技术对Sm＿1350在不同碳源条件下的相对表达水平进行了分析,结果表明,Sm＿1350在纤维二糖和滤纸培养基中的表达水平均显著高于在葡萄糖培养基中的表达水平,推测其在CX11降解纤维素过程中发挥一定作用。本研究构建了Sm＿1350及其3种截短突变体,分别为Sm＿1350、Sm＿1350-GH5-CBM6、Sm＿1350-GH5和Sm＿1350-CBM6,并在大肠杆菌中进行异源表达。结果表明,去除CTD结构域明显提高了目的蛋白的可溶性表达水平。以CMC为底物时,Sm＿1350-GH5-CBM6与Sm＿1350-GH5酶活力分别为(7 000.00±50.00)U/g和(2 542.73±35.03)U/g,表明去除CBM6降低了Sm...     

草菇木聚糖酶的纯化提取和酶学性质

草菇产胞外木聚糖酶通过各级浓缩和纯化，获得接近电泳纯蛋白．通过SDS—PAGE测得相对分子质量为24500．木聚糖酶为糖基化修饰的蛋白，含有质量分数20．24％的糖．O-糖基化能增加木聚糖酶的活性，O-和N-糖基化都能提高木聚糖酶的稳定性．5min反应，草菇木聚糖酶在60℃和pH值5.65时活性最高．在此条件下，该酶的Km值为3．87mg／mL，Vmax为1250IU／mg．纯酶的稳定pH值为6．54，57℃时半衰期为1h。     

木薯醇腈酶部分酶学性质研究

对利用基因重组技术获得的木薯醇腈酶（HNL）的酶学特异性进行研究，确定了其部分酶学性质。重组木薯HNL的最适温度为50℃，最适pH值为5．5。重组木薯HNL在60℃条件下，保温30min后仍具有90％的酶活力，说明温度稳定性较好；在pH4．0～6．0的条件下，获得的相对酶活仍大于80％。