异搏定对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨钙离子通道阻滞剂异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖的作用，为钙离子通道阻滞剂治疗瘢痕过度增生提供依据。方法：实验皮肤标本来源于2002—07／2003—07北京大学第三医院整形外科5例美容手术或植皮手术患者，取冗余全层皮肤组织，患者知情同意。体外培养3～8代的人皮肤正常成纤维细胞，实验分为异搏定组：包括1&;#215;10^-3, 1&;#215;10^-4, 1&;#215;10^-5, 1&;#215;10^-6, 1&;#215;10^-7, 1&;#215;10^-8,1&;#215;10^-9,1&;#215;10^-10mol／L组，分别在细胞培养孔中加入2mL相应浓度异搏定的培养液；氢化可的松组：在细胞培养孔中加入2mL浓度为1&;#215;10^-7mol／L氢化可的松的培养液；对照组：在细胞培养孔中加入2mL体积分数为0．005的新生牛血清的Dulbecco＇s改良的Eade＇s培养基。检测细胞活力采用锥虫蓝染色；细胞增殖状况测定应用^3氚标记的胸腺嘧啶掺入法；观察细胞增殖抑制率[抑制率（1％）=（阴性对照组每分钟脉冲数值-实验组每分钟脉冲数值）／阴性对照每分钟脉冲数值]，取各例样本的平均值。结果：①人皮肤正常成纤维细胞的增殖动力学结果：对照组人皮肤正常成纤维细胞在接种12h开始增殖，24h达到高峰，48h又逐渐降低。②异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的浓度效应：各浓度的异搏定对人皮肤成纤维细胞的增殖均有抑制作用，其中1&;#215;10^-6mol／L异搏定与1&;#215;10^-7mol／L氢化可的松对成纤维细胞增殖的抑制率无显著性差异（t=0．135,P=0．896〉0．05）。③浓度为1&;#215;10^-6mol/异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的时间效应：氢化可的松在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6，12,48h时[（60．67&;#177;18．94）％比（-19．69&;#177;21．26）％，（10．89&;#177;11．61）％，（37．03&;#177;12．17）％，q=10．867．6．732，3．197；P〈0．051；异搏定在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6，12，48h时[（51．42&;#177;15．30）％比（-16．83&;#177;16．90）％．（1．09&;#177;11．62）％，（17．41&;#177;13．41）％，q=10．566，7．791，5．265，〈0．051；在药物作用48时异搏定对人皮肤正常成纤维细胞的抑制作用低于氢化可的松（t=2．423,P=0．042〈0．05）。结论：不同浓度的异搏定对体外培养人正常皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用，异搏定可能通过抑制成纤维细胞的增殖达到治疗瘢痕过度增生的作用。     

蛇床子素对成骨样细胞UMR106增殖和分化的影响

目的：以在某种程度上可反映成骨细胞增殖的成骨样细胞UMR106为靶细胞，考察蛇床子素对其细胞形态、增殖率和分化程度的影响。方法：实验于2003-03／2004—03，在中国人民武装警察部队医学院药物化学教研室药物活性筛选室进行。以大鼠成骨肉瘤细胞系UMR106为靶细胞，以雌二醇1&;#215;10^-8mol／L为阳性对照，同时设空白对照组，蛇床子素干预组分为1&;#215;10^-8mol／L，1&;#215;10^-7mol／L，1&;#215;10^-6mol／L3个浓度组。①调整细胞浓度为4&;#215;10^-7L^-1，接种于12孔培养板上。48h后，倒置显微镜下观察细胞形态变化。②调整细胞浓度为2&;#215;10^7L^-1，接种于96孔培养板，采用四唑盐法测定各孔的吸光度，计算平均增殖率。③调整细胞浓度为2&;#215;10^7L^-1，接种于24孔培养板，磷酸对硝基苯基质动力学法测定细胞内外碱性磷酸酶括性。上述实验每组均设8个复孔。结果：①培养基中加入蛇床子素培养48h后，与对照组相比UMR106细胞数量明显增多，核分裂期多见，1&;#215;10^-6mol／L，1&;#215;10^-7mol／L组可见细胞重叠生长，分泌基质堆积明显。②UMRl06细胞经蛇床子素处理48h后，相对于对照组，1&;#215;10^-6mol／L组增殖率为52％，1&;#215;10^-7mol／L组为37％，1&;#215;10^-8mol／L组为16％。3个给药组与对照组相比差异均有显著性（t=37．36，14．94，6．81，P〈0．01）。③UMR106细胞经蛇床子素1&;#215;10^-6mol／L和经雌二醇1&;#215;10^-8mol／L处理24h和48h后。细胞内碱性磷酸酶活性均显著高于对照组[（825．17&;#177;1234），（775．16&;#177;8．67），（715．14&;#177;14．17）μkat／g；（2415．48&;#177;15．84），（2355．47&;#177;5．67），（2285．49&;#177;7．67）μkat／g；t=16．56，10．22；20．89，34．90，P〈0．01]。④UMR106细胞在浓度为1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-7mol／L的蛇床子素及雌二醇10^-8mol／L培养24h后，细胞外碱性磷酸酶活性显著高于对照组[（781．66&;#177;50），（733．15&;#177;15．34），（728．81&;#177;9．84），（652．80&;#177;11．34）μkat／g；t=22．56，11．9，14.32,P〈0．01]。结论：蛇床子素可剂量依赖地促进UMR106细胞的增殖，刺激UMR106细胞的碱性磷酸酶活性，提示其可能具有直接促进成骨细胞增殖、分化的作用。     

葛根素体外影响小鼠胚胎长骨雌激素受体β表达的作用

目的：以体外培养小鼠胚胎长骨为靶器官，观察葛根素对骺板雌激素受体亚型雌激素受体β分布及含量的影响，并与内源雌激素比较，分析葛根素对骨可能的作用机制。方法：实验于2003-05／2004-05在中国人民武装警察部队医学院药物化学教研室药物活性筛选室进行。以小鼠胚胎长骨为靶器官，以雌二醇1&;#215;10^-6mol／L处理为阳性对照组，同时设空白对照组、葛根素干预组分为1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5，1&;#215;10^-4mol／L 3个浓度组。①小鼠怀孕16d时取出胚胎，剔除雌性胎鼠前肢肌肉和软组织，剥离出尺骨，做为实验靶器官置于BGJb培养基中，葛根素和雌二醇作用48h后，测量长骨总长和骨干长。每组培养长骨8根，重复3次。②长骨固定、脱钙后作石蜡切片，进行免疫组织化学染色，光镜下观察阳性细胞定位，图像分析系统下测定免疫反应阳性细胞数和阳性细胞面积。结果：雌性胎鼠长骨全部进入结果分析，无脱失。①长骨经葛根素和经雌二醇处理48h后，葛根素1&;#215;10^-4，1&;#215;10^-5mol／L组及阳性对照组骨总长及骨干长与空白对照组相比，差异有非常显著性意义[（3．97&;#177;0．12），（1．51&;#177;0．07）；（3．79&;#177;0．06），（1．40&;#177;0．03）；（4．05&;#177;0．1），（1．62&;#177;0．05）；（3．43&;#177;0．05，1．2&;#177;0．04）mm；P〈0．01]，葛根素10^-6mol／L组仅骨总长与空白对照组相比差异有显著性意义[（3．56&;#177;0．06）mm，P〈0．05]；葛根素1&;#215;10^-6mol／L的作用与阳性对照组差异无统计学意义（P〉0．05），1&;#215;10^-5，1&;#215;10^-6moL／L组作用弱于阳性对照组（P〈0．01）。②空白对照组骺板静止区和肥大区雌激素受体β蛋白几乎不表达，仅增殖区有较弱表达。经葛根素和1&;#215;10^-6mol／L雌二醇作用后，增殖区表达明显增强，肥大区和静止区软骨细胞也都出现雌激素受体β蛋白的阳性表达。葛根素1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5，1&;#215;10^-4mol／L组阳性细胞数和阳性细胞面积均小于阳性对照组[29．8&;#177;2．9，43．5&;#177;5．1，63．3&;#177;5．8．833&;#177;6．9，（819．78&;#177;164．53）．（1175．76&;#177;188．73），（1585．15&;#177;198．93），（2036．12&;#177;384．23）μm^2，P〈0．01～0．05]，作用明显弱于雌二醇，并表现出剂量依赖的趋势。结论：葛根素在体外可促进软骨内成骨。同雌激素一样，葛根素也能够上调骺板雌激素受体β的表达。提示葛根素对软骨内成骨的促进作用可能与其上调雌激素受体β在骺板的表达有关。     

红色发光二极管照射对C2C12细胞增殖的光生物调节作用

目的:采用小鼠成肌细胞C2C12作为模型,观察光生物调节作用对他汀类药物引起的肌病的作用。方法:实验于2004-09/2005-01在华南师范大学激光运动医学实验室完成。C2C12细胞用浓度分别为2.0×10-5,2.0×10-6,2.0×10-7,2.0×10-8mol/L的辛伐他汀培养,然后用强度分别为0,0.229,0.506,0.848,1.401,1.670mW/cm2的红色发光二极管[波长(640±15)nm]照射2d,15min/d。用甲基噻唑基四唑比色法评价细胞增殖。结果:浓度为2.0×10-6,2.0×10-7,2.0×10-8mol/L的辛伐他汀对C2C12的增殖没有影响,无光生物调节作用;浓度为2.0×10-5mol/L的辛伐他汀抑制C2C12的增殖,发光二极管强度为0,0.229,0.506,0.848,1.401,1.670mW/cm2时C2C12细胞增殖吸光度百分率分别降为(37.2±8.4)%,(58.4±24.9)%,(37.0±8.6)%,(63.0±8.8)%,(59.2±12.6)%,(28.9±20.3)%。强度为0.848mW/cm2的红色发光二极管照射2d,15min/d可促进被抑制的C2C12增殖效应。结论:红色发光二极管可以促进被辛伐他汀抑制的C2C12细胞的增殖作用,对服用他汀类药物引起的肌病可能有光生物调节作用。     

神经肽P物质促进增生性瘢痕中肥大细胞组胺释放的定量检测

目的：神经肽P物质可以促进入增生性瘢痕中肥大细胞组胺的释放，定量分析在此过程中神经肽P物质浓度因素的作用，探讨增生性瘢痕中神经肽P物质与肥大细胞的相互作用及作用条件。 方法：实验于2005-01／10在解放军第三军医大学西南医院中心实验室进行。将取自于西南医院整形美容外科烧伤患者的增生性瘢痕活体组织块切下后立即处理（患者或监护人同意），修剪成0．5mm&;#215;0．5mm&;#215;0．5mm^-1 mm&;#215;1mm&;#215;1mm大小，将组织块放入0.5mL含10^-6，5&;#215;10^-6．10^-5&;#215;10^-5，10^-4mol／L神经肽P物质的DMEM液中，以0mol／L神经肽P物质为对照组。组织块作用30min后提取上清液，为样品组胺；提取上清液后的组织块分别加入去离子水0．5mL，加热煮沸（破坏细胞，释出组胺）20min，摇匀后离心（1500g，10min），吸出上清液，为剩余组胺。荧光法测定作用后上清液中肥大细胞的组胺释放率f组胺释放率=样品组胺／（样品组胺＋剩余组胺）&;#215;100％]。 结果：神经肽P物质10^-6，5&;#215;10^-6，10^-6，5&;#215;10^-6，l0^-4mol／L组组胺释放率显著高于对照组[（49．78&;#177;3．56）％，（54．56&;#177;1．90）％。（57．12&;#177;1．49）％，（60．49&;#177;1．41）％，（63．16&;#177;2．61）％，（43．96&;#177;3.18）％，P〈0．011，且神经肽P物质浓度越高，组胺释放率越高（P〈0．01或0．05）。 结论：在增生性瘢痕中，神经肽P物质以剂量依赖方式刺激肥大细胞组胺的释放，当神经肽P物质达到10μmol／L时即有肥大细胞组胺的显著释放，随神经肽P物质浓度提高，组胺释放率升高。     

氦氖激光诱导培养瘢痕成纤维细胞的凋亡

目的：氦氖激光重复照射能诱导瘢痕成纤维细胞凋亡，进一步探讨氦氖激光功率密度与培养瘢痕成纤维细胞凋亡之间的关系。方法：实验于1999—02／10在创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。以不同功率密度氦氖激光(10，50，100和150mw／cm^2)照射培养人瘢痕成纤维细胞，照射时间分别为10，30min，1次／d，连续照射3d后24h，采用TUNEL技术、琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡，锥虫蓝染色法检测细胞坏死。结果：10，50mW／cm^2照射细胞10min或30min，无凋亡细胞出现；100mW／cm^2照射细胞10，30min时凋亡率分别为(7．20&;#177;0．43)％，(12．73&;#177;0．75)％；150mW／cm^2照射细胞10，30min时凋亡率为(14．47&;#177;0．68)％，(16．27&;#177;0．96)％，分别大于同期100mW／cm^2照射(t=0．36，P&;lt;0．01，t=0．24，P&;lt;0．001)；DNA裂解片段分析示100，150mW／cm^2照射30min时可见特征性梯带存在；所有功率密度照射培养细胞10min或30min，都无坏死细胞出现。结论：以100mW／cm^2或150mW／cm^2功率密度氦氖激光重复照射能诱导培养瘢痕成纤维细胞凋亡。就诱导细胞凋亡而言，激光的功率密度比能量密度更重要。     

大鼠腹膜间皮细胞CD40表达与阿托伐他汀的干预效应

目的：探讨阿托伐他汀对大鼠腹膜间皮细胞CD40表达的影响。方法：实验于2004-06／2005-03在南京大学生命科学院实验室完成。分离、培养大鼠腹膜间皮细胞，于不含血清的F12培养基中分别加入不同浓度的阿托伐他汀，即2．5％腹透液加入1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5，1&;#215;10^-4，0mol／L阿托伐他汀，其中0mol／L阿托伐他汀为对照组，刺激腹膜间皮细胞，通过反转录-聚合酶链反应检测腹膜间皮细胞的CD40mRNA的表达。结果：①培养的大鼠腹膜间皮细胞呈多边形、菱形、椭圆形，大小不等。细胞融合后，呈典型的鹅卵石状上皮细胞形态。传代后用抗大鼠角蛋白和抗Ⅷ因子抗体检测相关抗原，结果抗角蛋白阳性，抗Ⅷ因子相关抗原阴性。②加入1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5，1&;#215;10^-4mol／L阿托伐他汀后腹膜间皮细胞的CD40mRNA表达量明显低于对照组（分别为0．247&;#177;0．084，0．180&;#177;0．060，0．106&;#177;0．052，0．025&;#177;0．023，0．319&;#177;0．101，P〈0．05）。结论：阿托伐他汀对腹膜间皮细胞细胞CD40的表达有显著的抑制作用。     

睾酮浓度与人脐静脉组织因子途径抑制物的表达

目的：观察生理及超生理浓度睾酮对人脐静脉内皮细胞合成、分泌组织因子途径抑制物的影响。方法：实验于2005-01／06在汕头大学医学院药理实验室完成。将人原代脐静脉内皮细胞复苏后于37℃，体积分数为0．05的CO2培养箱中静置培养，所用细胞为两三代。将消化好的细胞移人96孔板，接种密度为1&;#215;10^8每孔100μL。24h后分为不同浓度睾酮组（3&;#215;10^-9, 3&;#215;10^4, 3&;#215;10^-9, 3&;#215;10^-5 mol/L）及单纯培养液对照组，继续孵育48h，吸取上清，酶联免疫吸附法测定各组组织因子途径抑制物蛋白含量。反转录-聚合酶链反应法观察各组组织因子途径抑制物基因表达水平。结果：①人血管内皮细胞组织因子途径抑制物含量：对照组，3&;#215;10^-9, 3&;#215;10^-8, 3&;#215;10^-6. 3&;#215;10^-5 mol/L睾酮组组织因子途径抑制物含量分别为（6．43&;#177;0．61），（9．8&;#177;1．18），（9．8&;#177;1．05），（6．43&;#177;1．19），（5．43&;#177;0．66）μg／L生理浓度睾酮可明显增加内皮细胞上清液中组织因子途径抑制物含量。而3&;#215;10^-5mol／L组的组织因子途径抑制物含量明显低于对照组（P〈0,05）。②不同浓度睾酮组组织因子途径抑制物mRNA水平：3&;#215;10^-9，3&;#215;10^-8mol／L组组织因子途径抑制物mRNA水平明显高于对照组（P〈0．05）。而3&;#215;10^-5mol／L组组织因子途径抑制物mRNA水平又显著降低（P〈0．05）。结论：生理浓度睾酮通过雄激素受体促进组织因子途径抑制物合成、分泌，增强抗凝系统活性，有利于预防男性冠心病及心肌梗死等血栓性疾病的发生。     

河豚毒素与阿司匹林的协同镇痛作用

目的：对比单独应用河豚毒素和单独应用阿司匹林及与两者合用的镇痛效应。 方法：实验于2003—10／2005—03在北京大学基础医学院药理学系完成。选用昆明健康小鼠230只。随机分为单用河豚毒隶组、单用阿司匹林组和小剂量河豚鼠与阿司匹林联合用药组三大组，共23个亚组，每亚组均为10只。采用小鼠醋酸扭体致痛实验观察合用后是否具有镇痛增强或协同效应。 结果：230只大鼠均进入结果分析。（1）单用河豚毒素组的镇痛作用：河豚毒素组（0．5-4．0）&;#215;10^-3mg／kg时，小鼠扭体半数抑制量为2．1&;#215;10^-3mg/kg；当河豚毒素的剂量用到4．0&;#215;10^-3mg／kg时，小鼠醋酸扭体反应的抑制率为65．2％：（2）单用阿司匹林的镇痛作用：阿司匹林组（12．5-200）&;#215;10^3mg／kg的镇痛半数抑制量为64．0mg／kg，相应的镇痛抑制百分率为15．8％到93．2％。（3）小剂量河豚毒素（即0．79&;#215;10^-3mg／kg，0．39&;#215;10^-3mg／kg）与阿司匹林联合应用时，镇痛作用明显增强，此时阿司匹林的半数抑制量下降至5．8mg／kg和12．6mg／kg。 结论：小剂量河豚毒素和阿司匹林联合应用时能明显提高镇痛疗效。     

胫骨交锁髓内钉远端锁钉最佳效果的生物力学特性

目的：对胫骨交髓内钉远端不同锁钉方式进行生物力学测试，分析锁钉固定最佳效果的力学因素。方法：实验于2001—04／06在第一军医大学生物力学实验室完成，选择成人新鲜尸体胫骨标本6具（第一军医大学生物力学实验室提供），每具标本先后模拟骨折愈合、稳定骨折及不稳定骨折3种状态。4枚锁钉按胫骨自上向下位置分别编为1，2，3，4号。①骨折愈合组：安装交锁髓内钉模拟骨折愈合。②稳定骨折组：中段横行锯断模拟稳定性骨折，分为远端两枚锁钉；远端3号锁钉固定；远端4号锁钉固定。③不稳定骨折组：胫骨中段制成1．5mm骨缺损模拟不稳定性骨折，分为远端两枚锁钉：远端3号锁钉固定；远端4号锁钉固定。采用MTS试验机，轴向加载0-1000N，加载速度为50N／s，按制备顺序先后分别测量不同状态远端两枚锁钉处应力应变情况。结果：6具胫骨标本均进入结果分析。各组胫骨交锁髓内钉远端锁钉的应力应变：分别在4号钉2枚，3号钉2枚，4号钉1枚，3号钉1枚不同状态固定下，不稳定骨折组应力应变显著大于稳定骨折组[（6．47&;#177;0．49）&;#215;10^-4比（4．57&;#177;0．46）&;#215;10^-4mm／N，（8．10&;#177;0．64）&;#215;10^-4比（4．97&;#177;0．05）&;#215;10^-4mm／N，（9．18&;#177;0．65）&;#215;10^-4比（5．82&;#177;0．76）&;#215;10^-4mm／N，（11．10&;#177;1．04）&;#215;10^-4比（6．67&;#177;0．40）&;#215;10^-4mm／N，P〈0．05]；稳定骨折组应力应变大于骨折愈合组。②不同状态锁钉固定应力应变比较：4号钉2枚〈3号钉2枚〈4号钉1枚〈3号钉1枚。结论：在远端两枚锁钉中，靠近侧的锁钉应力应变更大。远端改用一枚锁钉固定后，远端锁钉承受的应力应变进一步显著增加，且以离骨折线较近的一枚锁钉固定应力应变更大，易发生断裂及退钉，故应以两枚锁钉固定远端并远离骨折线。     

Hepatitis C

Hepatitis C virus infection is responsible for significant morbidity and mortality worldwide. Advances in detection and monitoring of hepatitis C virus infection, as well as treatment protocols, have contributed to the medical focus on this high profile disease. Presence of risk factors should increase the clinicians index of suspicion for this symptomatically nonspecific disease.     

Hepatitis C

Hepatitis C virus (HCV) infection is a leading cause of chronic hepatitis, liver cirrhosis, and hepatocellular carcinoma worldwide. Here, we briefly review the virology, diagnosis and therapy of hepatitis C. Standard therapy with pegylated interferon-alpha and ribavirin results in a sustained virological response in 40-50% of genotype 1- and in about 80% of genotype 2- or 3-infected patients. Recent progress has allowed the identification of novel antiviral targets and therapeutic strategies. These will likely complement existing therapeutic modalities in the near future.