miR-147a靶向ATF2抑制非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移北大核心CSCD

目的:探究miR-147a靶向激活转录因子2(ATF2)对非小细胞肺癌迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。方法:RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织和细胞miR-147a和ATF2 mRNA表达,Western blot检测ATF2蛋白表达。采用miR-NC、pc-NC、miR-147a mimic、pc-ATF2质粒分别或联合转染H1703细胞,双荧光素酶报告验证其靶向关系,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、间质钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和ATF2蛋白表达。裸鼠分为4组:control组、miR-147a mimic组、pc-ATF2组、miR-147a+pc-ATF2组。裸鼠左腋下皮下注射转染后的非小细胞肺癌H1703细胞,第30天颈椎脱位法处死,完整取出皮下肿瘤,免疫组化检测N-cadherin阳性表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果:与正常肺组织和细胞相比,非小细胞肺癌组织和细胞miR-147a表达显著下调,ATF2 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01)。miR-147a靶向下调ATF2表达。与对照组相比,miR-147a mimic组H1703细胞ATF2表达显著下调,侵袭数显著减少,划痕闭合率显著降低,E-cadherin表达显著上调,N-cadherin和Vimentin表达显著下调(P<0.01),共转染pc-ATF2逆转miR-147a mimic对H1703细胞的作用。与对照组相比,miR-147a mimic组移植瘤中N-cadherin阳性细胞百分比降低,E-cadherin表达显著上调,N-cadherin和Vimentin表达显著下调(P<0.01),共转染pc-ATF2逆转miR-147a mimic对H1703移植瘤的作用。结论:miR-147a靶向ATF2可抑制非小细胞肺癌迁移、侵袭和上皮-间质转化。     

PTTG1通过上皮-间质转化促进非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的 研究PTTG1在非小细胞肺癌侵袭转移中的作用.方法 应用免疫组织化学染色法检测80例NSCLC组织中PTTG1、E-cadherin和Vimentin的表达,并分析其相关性.细胞分组:1)A549/con,转染空载的A549,2)A549/PTTG1,转染目的基因的A549,3)Scr/H1299,转染空载的H1299,4)SiPTTG1/H1299,敲除PTTG1的H1299;用Western blot检测细胞中PTTG1、E-cadherin、Vimentin蛋白的表达情况.结果 NSCLC组织中PTG1蛋白的阳性表达率为85％与E-cadherin的表达呈负相关(P＜0.05)而与Vimentin的表达呈正相关(P＜0.05).Western blot结果显示在SiPTTG1/H1299细胞中PTTG1蛋白表达水平明显降低,Vimentin蛋白表达水平降低而E-cadherin蛋白表达水平升高.同时在A549/PTTG1细胞中Vimentin蛋白表达水平升高而E-cadherin蛋白表达水平降低.结论 PTG1能促进NSCLC EMT的发生,从而促进NSCLC的侵袭和转移.     

miR-363-3p 靶向PIK3CA 调节非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探索miR-363-3p靶向作用于磷脂酰肌醇激酶3催化亚单位(PIK3CA)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549增殖、侵袭和迁移的调控作用。方法:RT-PCR检测正常肺组织及NSCLC组织中miR-363-3p和PIK3CA基因表达,Spearman相关分析miR-363-3p和PIK3CA基因表达相关性,荧光素酶报告实验检测miR-363-3p和PIK3CA靶向关系。A549细胞分为mimic NC、miR-363-3p、pc-PIK3CA、miR-363-3p+pc-PIK3CA组,RT-PCR检测PIK3CA基因表达,Western blot检测PIK3CA、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、G1/S特异性周期蛋白D1(Cyclin D1)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达,CCK8法检测细胞增殖,划痕愈合法检测细胞迁移,Transwell法检测细胞侵袭。结果:与正常肺组织相比,NSCLC组织中miR-363-3p表达下调,PIK3CA表达量上调,且miR-363-3p和PIK3CA基因表达呈显著负相关(P0.01)。在荧光素酶报告实验中,相比于WT PIK3CA+mimic NC组,WT PIK3CA+miR-363-3p组中荧光素酶活性显著降低(P0.01)。在细胞实验中,与mimic NC组比较,miR-363-3p组PIK3CA基因和蛋白表达、细胞增殖水平、细胞侵袭和迁移能力、N-cadherin、Cyclin D1蛋白表达水平、p-AKT/AKT比率显著降低,E-cadherin蛋白表达显著升高(P0.01),pc-PIK3CA组PIK3CA基因和蛋白表达、细胞增殖水平、细胞侵袭和迁移能力、N-cadherin、Cyclin D1蛋白表达,p-AKT/AKT比率显著升高,E-cadherin蛋白表达显著降低(P0.01);与pc-PIK3CA组比较,miR-363-3p+pc-PIK3CA组PIK3CA基因和蛋白表达,细胞增殖水平,细胞侵袭和迁移能力,N-cadherin、Cyclin D1蛋白表达,p-AKT/AKT比率显著降低,E-cadherin蛋白表达显著升高(P0.01)。结论:miR-363-3p可靶向作用于PIK3CA,抑制NSCLC细胞A549的增殖、侵袭和迁移。     

miR-34a靶向CD47对弥漫性大B细胞淋巴瘤SU-DHL-2细胞生物学行为的影响

目的：探究miR-34a靶向CD47对弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞生物学行为的影响。方法：体外培养人DLBCL细胞SU-DHL-2,随机分为对照组、miR-34a mimics阴性对照组、miR-34a mimics组,CCK-8和流式细胞术分别测定各组SU-DHL-2细胞活力、凋亡率;细胞划痕和Transwell侵袭实验检测SU-DHL-2细胞迁移、侵袭能力;qRT-PCR检测SU-DHL-2细胞miR-34a和CD47 mRNA表达;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、上皮-间质转化（EMT）相关蛋白Vimentin、E-cadherin和CD47蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-34a对CD47的靶向调节关系。结果：与对照组相比,miR-34a mimics组SU-DHL-2细胞凋亡率、miR-34a表达、E-cadherin及Bax蛋白表达明显升高（P<0.05）,细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数、CD47 mRNA表达及CD47、Vimentin、Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.05）,miR-34a mimics阴...     

miR-377靶向ZEB2调节结肠癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化北大核心CSCD

目的:探讨miR-377对结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及潜在作用机制。方法:RT-qPCR检测结肠癌细胞系HT29、SW480、SW620和HCT116和人小肠上皮细胞HIEC miR-377表达。将miR-377 mimic、阴性对照物、pmirGLO-wt-ZEB2、pmirGLO-mut-ZEB2转染至HCT116细胞,双荧光素酶报告实验检测miR-377与ZEB2的靶向作用,伤口愈合实验、Transwell、Western blot检测miR-377和ZEB2对细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化相关蛋白表达的影响。结果:与HIEC细胞相比,结肠癌细胞系miR-377表达降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-377 mimic和pmirGLO-WT-ZEB2共转染的HCT116细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),但ZEB2结合位点突变逆转了miR-377 mimic对荧光素酶活性的抑制作用(P>0.05);miR-377 mimic显著降低了HCT116细胞ZEB2蛋白表达(P<0.05)。与NC+Vector组相比,miR-377+Vector组细胞划痕愈合率、侵袭细胞数显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P>0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与miR-377+Vector组相比,miR-377+ZEB2组细胞划痕愈合率、侵袭细胞数显著高于miR-377+Vector组(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05),miR-377+ZEB2组与NC+Vector组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-377通过靶向作用于ZEB2调节结肠癌细胞上皮-间质转化相关蛋白表达,进而影响结肠癌细胞迁移、侵袭,为结肠癌临床治疗提供了新的策略。     

miR-149-3p 靶向FOXM1 抑制人胃癌细胞SGC-7901 生长和迁移

目的:探究miR-149-3p靶向FOXM1抑制人胃癌细胞SGC-7901生长和迁移的机制。方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,并分为:Ctrl组、miR-NC组、miR-149-3p mimic组、pLV-FOXM1组和pLV-FOXM1+miR-149-3p mimic组;使用RT-PCR分别检测正常组织、原位肿瘤组织和转移后肿瘤组织中miR-149-3p和FOXM1 mRNA的表达水平并分析miR-149-3p与FOXM1的线性关系;使用miR-NC、miR-149-3p mimic转染细胞后检测miR-149-3p和FOXM1 mRNA表达水平;双荧光素酶检测miR-149-3p与FOXM1的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖情况,体外侵袭实验检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白质印迹检测N-cadherin、E-cadherin、MMP-2、MMP-9、FOXM1、PCNA、p21的表达水平。结果:相比原位肿瘤组织和转移后肿瘤组织,正常组织中FOXM1 mRNA表达较低、miR-149-3p表达较高。荧光素酶报告实验表明miR-149-3p序列上有FOXM1的结合位点。相比空白对照组(Ctrl),miR-149-3p mimic组细胞增长受到显著抑制,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。相比Ctrl组,pLV-FOXM1组细胞生长受到促进,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。相比pLV-FOXM1组,miR-149-3p+pLV-FOXM1组细胞增长受到显著抑制,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:miR-149-3p可以靶向FOXM1抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长侵袭和迁移,其机制与调控细胞生长侵袭和迁移的蛋白有关。     

鞘氨醇激酶1通过ERK1/2信号通路促进非小细胞肺癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨鞘氨醇激酶1(SphK1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:选取31例外科手术切除并经常规组织学检查确诊为NSCLC的肿瘤组织标本和配对癌旁肺组织标本,应用免疫组织化学染色和RT-qPCR检测SphK1的表达。将pcDNA3. 1-SphK1载体(SphK1组)、空白pcDNA3. 1载体对照(NC组)、SphK1 siRNA(siSphK1组)和对照siRNA(siNC组)分别转染人肺腺癌A549细胞,Western blot法检测SphK1、E-cadherin、fibronectin和p-ERK1/2的表达;利用Transwell实验评估过表达SphK1和抑制ERK1/2对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果:SphK1在NSCLC组织中高表达,并与肿瘤分期相关。SphK1过表达可显著促进A549细胞的迁移和侵袭,提高p-ERK1/2和fibronectin蛋白水平,减少E-cadherin蛋白表达(P0. 05),而干扰SphK1则呈现相反的结果。ERK1/2抑制剂U0126可显著抑制SphK1过表达诱导的p-ERK1/2和fibronectin上调及E-cadherin下调,也抑制了SphK1过表达增强的A549细胞侵袭和迁移能力(P0. 05)。结论:SphK1可能通过ERK1/2通路降低E-cadherin蛋白水平、提高fibronectin蛋白水平,并促进NSCLC细胞的侵袭和迁移。     

miR-195-5p 靶向调控ELMO2 抑制IL-17 诱导的胃癌细胞AGS 侵袭和 迁移

目的:研究miR-195-5p调控吞噬细胞运动蛋白2(ELMO2)对白介素17(IL-17)诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移的影响和机制。方法:以胃癌细胞AGS作为实验对象,转染miR-195-5p mimics,给予IL-17处理,qRT-PCR方法测定细胞中miR-195-5p表达;Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力;Western blot测定细胞中E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。生物信息学软件预测miR-195-5p的靶基因可能为ELMO2,双荧光素酶系统鉴定靶向关系。在胃癌细胞AGS中共转染miR-195-5p mimics、pcDNA3.1-ELMO2,检测细胞侵袭和迁移能力变化。结果:IL-17处理后的胃癌细胞AGS中miR-195-5p表达水平下调,细胞侵袭和迁移能力升高,细胞中E-cadherin蛋白表达水平下降,Vimentin蛋白表达水平升高。转染miR-195-5p mimics后的细胞经过IL-17处理以后,细胞中miR-195-5p表达水平升高,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,Vimentin蛋白表达水平降低。miR-195-5p靶向负调控ELMO2表达。pcDNA3.1-ELMO2能够提高转染miR-195-5p mimics后的细胞侵袭和迁移能力。结论:miR-195-5p靶向负调控ELMO2抑制IL-17诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移。     

Ephrin B2上调促进非小细胞肺癌上皮间质转化及转移

目的:探究Ephrin B2上调对非小细胞肺癌(NSCLC)上皮间质转化及转移的影响。方法:选取NSCLC组织和癌旁正常肺组织,免疫组织化学方法检测NSCLC和正常组织中Ephrin B2蛋白阳性表达率。将转染后的细胞分为4组:空白组(Blank组)、阴性对照组(NC组)、Ephrin B2 vector组、sh-Ephrin B2组。qRT-PCR和Western blot检测各组细胞Ephrin B2、Ecadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2的表达水平。划痕实验检测各组转染后细胞迁移能力。结果:NSCLC组织中Ephrin B2蛋白表达显著高于正常肺组织和癌旁组织(P 0. 05)。与Blank组相比,Ephrin B2 vector组细胞迁移能力上升,Ephrin B2、Ncadherin、Vimentin、MMP-2 mRNA表达上升(P 0. 05),E-cadherin mRNA和蛋白表达水平下降(P 0. 05)。sh-Ephrin B2组细胞迁移能力下降,Ephrin B2、N-cadherin、Vimentin、MMP-2 mRNA和蛋白表达水平下降(P 0. 05),E-cadherin mRNA和蛋白表达水平上升(P 0. 05)。结论:Ephrin B2上调促进非小细胞肺癌上皮间质转化及转移。     

BCL6共抑制因子样蛋白1(BCORL1)在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的观察BCL6共抑制因子样蛋白1(BCORL1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,并通过下调肺癌A549细胞中BCORL1的水平观察对A549细胞侵袭和迁移能力的影响。方法收集68例NSCLC组织及对应的癌旁组织,应用免疫组织化学染色分析BCORL1和E钙黏素(E-cadherin)在NSCLC及对应癌旁组织中的表达;采用小干涉RNA(siRNA)下调肺癌A549细胞中BCORL1的水平,TranswellTM小室法检测A549肺癌细胞迁移和侵袭能力。结果 BCORL1蛋白在NSCLC组织中表达水平显著高于对应癌旁组织,而E-cadherin蛋白在NSCLC组织中表达水平则显著低于对应癌旁组织;相关性分析证实BCORL1蛋白与E-cadherin蛋白在NSCLC组织中的表达呈显著负相关;临床相关分析发现BCORL1蛋白表达与淋巴结转移和TNM分期具有显著的相关性;特异性siRNA下调BCORL1水平后,E-cadherin蛋白上调;敲低BCORL1后,明显抑制A549肺癌细胞侵袭和迁移。结论 BCORL1在NSCLC组织中高表达且与E-cadherin表达呈显著负相关,其高表达与NSCLC恶性临床病理特征相关。敲低BCORL1,上调E-cadherin表达并抑制肺癌细胞侵袭和迁移能力。     

lncRNA LSINCT5 通过 miR-451 调控肺癌细胞侵袭、迁移及顺铂敏感性的 实验研究

目的：探讨lncRNA LSINCT5调控miR-451对肺癌细胞侵袭、迁移及顺铂（DDP）敏感性的影响。方法：以肺癌A549细胞为研究对象,使用LSINCT5特异性siRNA、DDP(4μg/ml)、si-LSINCT+DDP+miR-451 inhibitor处理细胞,不经特殊处理的细胞为空白组,qRT-PCR检测LSINCT5和miR-451 mRNA表达;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测E-cadherin、Vimentin和N-cadherin表达;双荧光素酶报告基因检测试剂盒测定LSINCT5和miR-451的靶向关系。结果：在转染LSINCT5 siRNA的A549细胞中,LSINCT基因表达明显降低（P<0.05）。LSINCT5 siRNA及DDP均可明显抑制A549细胞侵袭、迁移能力,上调E-cadherin表达,下调Vimentin和N-cadherin表达（P<0.05）,LSINCT5 siRNA及DDP联合使用对细胞侵袭、迁移及E-cadherin、Vimentin和N-cadherin表达影响明显强于单...     

黄芪多糖抑制多发性骨髓瘤细胞系U266增殖、迁移和侵袭

目的探讨黄芪多糖(APS)对多发性骨髓瘤(MM)细胞系U266增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法培养U266细胞,用不同浓度(6、 8和10 mg/mL)的APS作用U266细胞24、48和72 h,或8 mg/mL的APS作用于转染肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)表达质粒(pcDNA3.1-TRAF6)的U266细胞48 h,CCK-8法检测U266细胞增殖;流式细胞仪检测U266细胞凋亡;Transwell检测U266细胞迁移和侵袭;Western blot检测cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、E-cadherin、MMP-2和TRAF6蛋白表达。结果与对照组相比,APS组U266细胞抑制率、凋亡率、迁移和侵袭细胞数均显著升高(P0.05),cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和TRAF6蛋白表达水平显著降低(P0.05), p21、Bax、和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与APS+pcDNA3.1组比,APS+pcDNA3.1-TRAF6组U266细胞抑制率、凋亡率、迁移和侵袭细胞数均显著降低(P0.05),cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和TRAF6蛋白表达水平显著升高(P0.05), p21、Bax、和E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论 APS可能通过下调TRAF6蛋白表达抑制U266细胞的增殖、迁移和侵袭,促进U266细胞凋亡。     

miRNA-22在卵巢癌组织的表达及其对卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:观察在不同卵巢组织中miRNA-22的表达,并研究上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3增殖、迁移与侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR(q PCR)检测不同卵巢组织样本miRNA-22的表达;随机将SKOV-3细胞分为正常对照组(control组)、空白载体组(miRNA-22-NC组)和转染miRNA-22-mimic组(miRNA-22-m组),q PCR检测各组细胞miRNA-22的表达,CCK-8法检测细胞存活率,划痕实验与Transwell小室法分别检测细胞的迁移与侵袭能力,Western blot法检测VEGF和P53蛋白表达。结果:卵巢癌组织中miRNA-22的水平显著低于正常卵巢组织;与control组相比,miRNA-22-m组细胞miRNA-22的表达显著增加,细胞存活率显著降低,细胞迁移数和侵袭数下降,VEGF和P53的蛋白表达水平显著下降。结论:miRNA-22的低表达可能与卵巢癌的发生发展有关。过表达miRNA-22能够抑制卵巢癌细胞株的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与下调VEGF和P53的蛋白表达有关。     

MicroRNA-200a通过抑制上皮-间充质转化影响乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探讨微小RNA-200a(miR-200a)表达改变对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其调节机制。方法:RT-qPCR法检测人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-468和MCF-7中miR-200a的表达水平与正常人乳腺上皮细胞株MCF-10A的差异。CCK-8法检测转染miR-200a mimic和miR-inhibitor后MDA-MB-231细胞活力的变化。采用流式细胞术及Transwell实验检测转染后MDA-MB-231细胞凋亡及侵袭能力的变化。采用RT-qPCR和Western blot检测上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、SIP1、Snail、Twist、ZEB1和ZEB2 mRNA及蛋白表达的变化。结果:与MCF-10A细胞相比,miR-200a在MDA-MB-231细胞中表达显著降低(P0.05)。过表达miR-200a使MDA-MB-231细胞活力降低(P0.05),凋亡率升高(P0.05),侵袭能力下降(P0.05), SIP1、N-cadherin、Snail、Twist、ZEB1和ZEB2的mRNA及蛋白表达显著下调(P0.05),而E-cadherin的mRNA及蛋白表达显著增加(P0.05);抑制miR-200a的表达使上述结果逆转(P0.05)。结论:上调miR-200a能够抑制MDA-MB-231细胞的活力和侵袭,促进MDA-MB-231细胞的凋亡。miR-200a可能通过抑制上皮-间充质转化调控乳腺癌的恶性生物学行为。     

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响。结果干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P0.05)。结论靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力。     

miR-194-3p调节TGF-β诱导的上皮-间充质转化抑制乳腺癌细胞侵袭

目的研究miRNA-194-3p在TGF-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化(EMT)发生中的作用,探讨miR-194-3p抑制乳腺癌侵袭的机制。方法体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,采用TGF-β1加入人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞培养液中制备细胞模型,RT-PCR检测miR-194-3p在TGF-β1诱导前后的表达变化。采用miRNA拟似物和无关序列分别转染MDA-MB231的方法获得细胞模型。Western blot检测EMT标记分子(E-cadherin、Vimentin)的表达。Trasnwell实验检测miRNA-194-3p拟似物、TGFβ1和共同作用对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。结果 TGF-β1诱导乳腺癌细胞发生EMT,TGF-β组中E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调;过表达miRNA-194-3p抑制了TGF-β对E-cadherin、Vimentin的作用。在侵袭迁移实验中,TGF-β促进细胞的侵袭,过表达miRNA-194-3p可抑制TGF-β的促进作用。结论 MiR-194-3p调节TGF-β诱导的上皮-间充质转化抑制乳腺癌侵袭。     

miR-410通过靶向Snail1抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭

目的分析miR-410通过Snail1蛋白抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭的机制。方法通过双荧光素酶报告验证miR-410靶向Snail1。将宫颈癌HeLa细胞系分为4组:对照组、mimic组、mimic+Snail1组和Snail1组。通过质粒转染技术过表达miR-410和/或Snail1。qPCR和Western blot分别用于检测RNA和蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell实验和细胞共培养检测各组的细胞生长、迁移、侵袭能力和免疫抑制情况。结果 miR-410直接靶向抑制Snail1。Mimic组的Snail1mRNA和蛋白水平显著低于对照组(P0.05),Mimic+Snail1组的Snail1 mRNA和蛋白水平显著高于mimic(P0.05)。mimic组的细胞活力、迁移、侵袭和免疫抑制水平显著低于对照组(P0.05),Snail1组的细胞活力、迁移、侵袭和免疫抑制水平显著高于对照组(P0.05),并且mimic+Snail1组的细胞活力、迁移、侵袭和免疫抑制水平显著高于mimic组(P0.05)。结论 miR-410可通过靶向Snail1蛋白的表达解除免疫抑制并抑制宫颈癌HeLa细胞生长、迁移和侵袭。     

利多卡因通过LncRNA H19/miR-671-5p分子轴调控胃癌细胞增殖、迁移及侵袭北大核心CSCD

目的:探讨利多卡因对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其对LncRNA H19/miR-671-5p的调控机制。方法:体外培养胃癌细胞AGS,使用不同浓度的利多卡因处理细胞;MTT检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;qRT-PCR检测H19及miR-671-5p的表达量;双荧光素酶报告实验验证H19与miR-671-5p的靶向关系;将pcDNA-H19及其阴性对照pcDNA转染至AGS细胞,使用利多卡因处理细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭;Western blot检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量。结果:与Con组相比,利多卡因不同剂量可明显降低细胞活力和Ki-67、PCNA、N-cadherin蛋白水平及H19的表达量(P<0.05),并可减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05),提高E-cadherin蛋白水平及miR-671-5p的表达量(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实H19可靶向结合miR-671-5p;H19过表达可明显逆转利多卡因对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:利多卡因可能通过抑制H19表达及促进miR-671-5p表达从而抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

mi R-100-5p通过靶向FGFR3抑制非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭和糖酵解

目的 探究mi R-100-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭和糖酵解的影响及作用机制。方法 收集NSCLC患者手术切除的癌组织和癌旁组织60对,RT-qPCR检测组织和细胞中mi R-100-5p的表达,利用Lipofectamine 2000将mi R-NC、mi R-100-5p mimic、mi R-100-5p inhibitor、pc-NC、pc-FGFR3质粒分别或联合转染入H1650细胞,划痕实验检测细胞迁移,Transwell实验检测细胞侵袭,相应试剂盒检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成和ATP含量,Seahorse XF糖酵解应激测试试剂盒和Seahorse XF细胞线粒体应激测试试剂盒检测细胞外酸化率(ECAR)和细胞耗氧率(OCR),双荧光素酶实验检测靶向关系,蛋白印迹法检测FGFR3蛋白表达水平。结果 mi R-100-5p表达与NSCLC患者的性别、年龄和病理类型无关(P 0. 05),而与吸烟史、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和分化程度有关(P 0. 05)。mi R-100-5p在NSCLC组织和细胞中低表达。与对照组相比,mi R-100-5p mimic组划痕闭合率显著较低,侵袭细胞数目显著较少,葡萄糖摄取量、乳酸产生量、ATP含量及ECAR显著较低,OCR显著较高(P 0. 01),mi R-100-5p inhibitor组划痕闭合率显著较高,侵袭细胞数目显著较多,葡萄糖摄取量、乳酸产生量、ATP含量及ECAR显著较高,OCR显著较低(P 0. 01)。mi R-100-5p靶向下调FGFR3。共转染pc-FGFR3可逆转mi R-100-5p过表达对NSCLC细胞迁移、侵袭和糖酵解的抑制作用(P 0. 01)。结论 mi R-100-5p通过靶向FGFR3抑制NSCLC细胞迁移、侵袭和糖酵解。     

lncRNA NEAT1靶向miR-497-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化的影响北大核心CSCD

目的:探讨长链非编码RNA核富集转录体1(lncRNA NEAT1)靶向miR-497-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养PANC-1细胞株,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(siRNA-NC组)、沉默NEAT1组(NEAT1-siRNA组)、共转染组(NEAT1-siRNA+miR-497-5p-inhibitor组)。采用实时荧光定量PCR法检测NEAT1、miR-497-5p水平;CCK-8法、流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;Western blot检测增殖细胞核抗原(Ki-67)、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及EMT标志蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(Ncadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况;应用TargetScan数据库预测NEAT1与miR-497-5p靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。结果:与NG组、siRNA-NC组比较,NEAT1-siRNA组PANC-1细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-497-5p及Bax、E-cadherin蛋白表达均显著升高(P<0.05),NEAT1水平、Ki-67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NEAT1-siRNA组比较,NEAT1-siRNA+miR-497-5p-inhibitor组PANC-1细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-497-5p及Bax、E-cadherin蛋白表达均显著降低(P<0.05),Ki-67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-497-5p是NEAT1的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-497-5p-inhibitor-NEAT1-WT组荧光素酶活性显著高于miR-497-5p-inhibitor-NC-NEAT1-WT组(P<0.05)。结论:沉默lncRNA NEAT1表达能够靶向上调miR-497-5p表达,抑制胰腺癌细胞增殖及EMT过程,并诱导细胞凋亡,有望成为胰腺癌新的潜在治疗靶点。