miR-526b-3p调控TROAP基因介导Wnt信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的 探究miR-526b-3p调控滋养素相关蛋白(TROAP)基因介导Wnt信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖与侵袭迁移的影响。方法 测定人肺泡上皮细胞及NSCLC细胞系A549、HCC827、NCI-H1299中miR-526b-3p及TROAP、Wnt基因的表达水平。将体外培养的A549细胞随机分为对照组、miR-526b-3p mimic组、miR-526b-3p mimic阴性对照组、miR-526b-3p mimic+TROAP过表达组、miR-526b-3p mimic+Wnt过表达组，分组转染后，测定各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、细胞增殖相关基因(Cyclin D1)、凋亡相关基因(Bax、Caspase-3)、上皮间质转化相关基因(E-cadherin、Vimentin)、TROAP基因、Wnt基因及miR-526b-3p表达、细胞Cyclin D1、Bax、Caspase-3、E-cadherin、Vimentin、TROAP及Wnt蛋白表达、miR-526b-3p对TROAP的靶向调控作用。结果 与对照组相比，miR-526b-3p mimic组细胞呈...     

miR-135b-5p靶向KLF4基因调控胃癌SGC-7901细胞生物学行为的研究

目的 研究miR-135b-5p通过靶向KLF4基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法 通过RT-PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平,将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中,RT-PCR和Western blotting分别检测转染后细胞中miR-135b-5p和KLF4蛋白表达水平,MTT法、流式细胞术、Transwell实验分别检测转染对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。生物信息学软件预测及双荧光素酶报告基因实验验证KLF4是否为miR-135b-5p的靶基因。结果 胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,且胃癌SGC-7901细胞中miR-135b-5p表达水平最高。在SGC-7901细胞中转染miR-135b-5p inhibitor 48 h后,miR-135b-5p的表达水平显著降低,KLF4 mRNA和蛋白表达水平明显升高。下调miR-135b-5p后SGC-7901细胞增殖能力下降,凋亡率升高,侵袭和迁移能力减弱。双荧光素酶报告基因实验结果显示,KLF4是miR-135b-5p靶基因。结论 miR-135b-5p能够通过靶向KLF4抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡。     

miR-199b-5p对阿霉素诱导足细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨miR-199b-5p对阿霉素诱导足细胞凋亡的影响及机制。方法 体外培养小鼠足细胞,用阿霉素构建足细胞凋亡模型。将足细胞随机分成对照组、阿霉素组、阿霉素+miR-199b-5p mimic组、阿霉素+NC mimic组、阿霉素+miR-199b-5p inhibitor组、阿霉素+NC inhibitor组、阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-脂肪细胞质膜相关蛋白（APMAP）组、阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-NC组、阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-APMAP RNAi组和阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-NC RNAi组,分别给予miR-199b-5p mimic/inhibitor、过表达/敲低APMAP腺病毒转染,使miR-199b-5p过表达/沉默表达以及APMAP过表达/沉默表达。用实时荧光定量PCR检测细胞内miR-199b-5p及足细胞标志蛋白（Podocin）、凋亡相关基因（Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3）、APMAP mRNA表达,用Western b...     

miR-34c-3p调控脑胶质瘤细胞增殖、分化、凋亡的机制研究

目的探讨miR-34c-3p调控脑胶质瘤U87细胞增殖、分化、凋亡的机制。方法用脂质体分别将miR-34c-3p mimics和miR-34c-3p inhibitors转入U87细胞中,用RT-PCR检测转染效果;用MTT检测转染miR-34c-3p对U87细胞增殖的影响;用平板克隆法检测转染miR-34c-3p对U87细胞分化的影响;用流式细胞仪检测转染miR-34c-3p对U87细胞凋亡的影响;通过Pic Tar、miRanda和Target Scan靶基因预测库预测miR-34c-3p的靶基因,用双荧光素酶表达系统进行靶基因鉴定,RT-PCR检测转染miR-34c-3p对靶基因mRNA表达的影响,Western-blot检测转染miR-34c-3p对靶基因蛋白表达的影响。结果 miR-34c-3p在U87细胞中的表达显著低于正常胶质细胞,转染miR-34c-3p mimics后,U87细胞miR-34c-3p mRNA的表达上调,细胞存活率降低,细胞形成克隆的能力下降,细胞凋亡率升高,与对照组相比均具有显著性差异;转染miR-34c-3p inhibitors后,U87细胞miR-34c-3p mRNA表达量下降,细胞存活率显著升高,细胞形成克隆的能力上升,细胞凋亡率下降,与对照组相比差异均具有显著性。靶基因库预测Notch2是miR-34c-3p的靶基因,转染miR-34c-3p mimics后,Notch2的mRNA表达和蛋白表达下降,转染miR-34c-3p inhibitors后,Notch2的mRNA表达和蛋白表达上升,共转染miR-34c-3p mimics和wt Notch2后荧光素酶活性显著降低,与对照组相比均具有显著性差异。结论 miR-34c-3p通过靶基因Notch2抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖、分化,促进细胞凋亡。     

普鲁卡因通过miR-15a-5p/PI3K-AKT3途径调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检测迁移和侵袭,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-15a-5p的表达。转染miR-15a-5p mimic至MCF-7细胞,检测细胞增殖、迁移和侵袭。靶基因预测软件预测miR-15a-5p和AKT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-15a-5p inhibitor至MCF-7细胞,并用5.0 mmol/L普鲁卡因处理48 h,检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western印迹检测蛋白激酶B(AKT)3的表达。结果与Con组相比,普鲁卡因能明显抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001),促进细胞中miR-15a-5p的表达(P<0.01)。过表达miR-15a-5p可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-15a-5p和AKT3的靶向结合有关。抑制miR-15a-5p表达减弱了普鲁卡因对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及AKT3表达的抑制作用(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与调控miR-15a-5p/磷脂酰肌激-3-激酶(PI3K)-AKT3途径有关。     

miR-1226靶向MUC1对非小细胞肺癌细胞吉非替尼敏感性的影响

目的研究miR-1226对非小细胞肺癌(NSCLC)吉非替尼敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养NSCLC细胞株人肺癌耐吉非替尼细胞株(PC9GR)和人肺腺癌细胞(PC-9);将PC-9组细胞设置为正常组,PC9GR细胞随机分为对照组、miR-1226 mimic组和miR-1226 NC组,并进行转染;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测转染后各组细胞miR-1226及黏蛋白1(MUC1)mRNA表达情况;采用蛋白印迹分析法检测转染后各组细胞MUC1蛋白表达情况;采用MTT法检测转染后各组细胞对吉非替尼的敏感性;Transwell法检测转染后各组细胞的侵袭能力;采用双荧光素酶报告实验验证miR-1226与MUC1的靶向关系。结果与正常组相比,对照组和miR-1226 NC组PC9GR细胞miR-1226表达水平显著降低(P<0.05),IC50值、MUC1 mRNA及MUC1蛋白相对表达量、细胞侵袭数量显著升高(P<0.05);与对照组和miR-1226 NC组相比,miR-1226 mimic组PC9GR细胞miR-1226表达水平显著升高(P<0.05),IC50值、MUC1 mRNA及MUC1蛋白相对表达量、细胞侵袭数量显著降低(P<0.05);与MUC1-3′UTR-WT+miR-1226 NC组比,MUC1-3′UTR-WT+miR-1226 mimic组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论miR-1226过表达可能通过靶向下调MUC1表达,提高人非小细胞肺癌细胞吉非替尼敏感性。     

miR-107靶向FGFRL1/AKT通路抑制胃癌耐药细胞迁移

目的 检测胃癌敏感和耐药细胞迁移能力的强弱，探究miR-107靶向成纤维细胞生长因子受体样蛋白(FGFRL)1/蛋白激酶B(AKT)通路调节胃癌耐药细胞迁移。方法 利用划痕和transwell小室实验验证胃癌敏感和耐药细胞的迁移；采用荧光定量聚合酶链反应(PCR),Western印迹检测敏感和耐药胃癌细胞中miR-107、FGFRL1/AKT通路活性及迁移相关蛋白[E-钙黏附蛋白(Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶(MMP)9]的表达；利用荧光素酶报告实验鉴定miR-107与FGFRL1之间的靶向关系；将胃癌细胞耐药株分为mimic NC组、miR-107 mimic组、NC组和siFGFRL1组，荧光定量PCR、Western印迹检测胃癌耐药细胞中FGFRL1 mRNA表达水平、FGFRL1/AKT通路活性及迁移相关蛋白表达水平；划痕和transwell小室实验测定胃癌耐药细胞迁移能力的变化。结果 与胃癌敏感细胞相比，胃癌耐药细胞迁移能力更强，且miR-107呈明显低表达，FGFRL1 mRNA和蛋白水平显著高表达，AKT活性(p-AKT水平)与Vime...     

miR-376b-3p通过靶向FGF21加重缺氧复氧心肌细胞的损伤

目的 探讨miR-376b-3p对缺氧复氧(H/R)心肌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 培养心肌细胞H9c2,缺氧复氧法体外模拟H/R细胞损伤,建立心肌细胞损伤模型。用流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附(ELISA)检测正常对照组、H/R组、anti-miR-NC组、anti-miR-376b-3p组、anti-miR-376b-3p+si-NC组、anti-miR-376b-3p+si-成纤维细胞生长因子21(FGF21)组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)情况。双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光活性。结果 成功建立缺氧复氧损伤的细胞模型;模型组细胞中miR-376b-3p表达显著升高,FGF21表达显著降低,并且抑制miR-376b-3p可以减轻损伤细胞的凋亡和TNF-α、IL-6、IL-17的含量,以及上调Bcl-2,下调Bax。此外,miR-376b-3p还可靶向FGF21 mRNA。抑制FGF21后,抑制miR-376b-3p对缺氧复氧损伤的H9c2细胞的保护作用被减弱。结论 miR-376b-3p可促进缺氧复氧心肌细胞的凋亡和炎性反应,其机制与靶向FGF21 mRNA相关。     

miR-181a-5p对人主动脉平滑肌细胞成骨样分化的影响

目的观察miR-181a-5p对动脉钙化细胞模型的影响,探讨其可能的作用机制。方法培养人主动脉平滑肌细胞(HASMC),经成骨样分化诱导后使用茜红素染色检测细胞成骨样分化的程度,采用real-time PCR检测成骨样分化标志基因骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和碱性磷酸酶(ALP)的mRNA表达变化,以及miR-181a-5p的表达变化,分析miR-181a-5p与成骨样分化相关基因表达水平的相关性。miR-181a-5p mimic转染用于上调HASMC内miR-181a-5p的表达。使用TargetScan数据库预测miR-181a-5p发挥作用的靶基因。使用real-time PCR检测miR-181a-5p过表达后对靶基因表达的影响。结果HASMC经诱导成骨样分化后,茜红素染色阳性区域和细胞内钙含量逐渐增加,细胞中成骨样分化相关基因OCN、RUNX2和ALP的表达随时间延长逐渐升高,而miR-181a-5p的表达逐渐下降(P<0.05)。相关性分析显示miR-181a-5p的表达与OCN、RUNX2和ALP的表达均呈负相关(P<0.05)。使用miR-181a-5p mimic转染HASMC后细胞内miR-181a-5p的表达高于对照mimic组,细胞内钙含量及RUNX2和OCN的表达均低于对照mimic组(P<0.05)。TargetScan数据库预测结果显示miR-181a-5p可与促成骨样分化基因丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)和丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)的3′UTR区结合,miR-181a-5p mimic组HASMC中靶基因MAPK1和MAPK8的表达显著下调(P<0.05)。结论血管平滑肌细胞成骨样分化时下降的miR-181a-5p可抑制成骨样分化,其可能的机制是抑制促钙化信号转导分子MAPK1和MAPK8的表达。     

miR-144-3p靶向调控ABCG2信号通路对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

目的研究miR-144-3p靶向调控ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding transporter G family member 2,ABCG2)对胃癌(gastriccancer,GC)HGC-27细胞侵袭和迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法通过qRT-PCR检测人GCHGC-27细胞株和人胃黏膜上皮GES-1细胞株中miR-144-3p和ABCG2的表达情况;通过靶基因预测软件预测miR-144-3p和ABCG2靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向结合关系;通过qRT-PCR检测miR-144-3p mimic或miR-144-3p inhibitor转染GC细胞后miR-144-3p及ABCG2的表达水平;通过明胶酶谱实验检测对转染ABCG2 siRNA的GC细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)活性的影响;通过Transwell侵袭和迁移实验检测转染miR-144-3p mimic、miR-144-3p inhibitor、ABCG2 siRNA对GC细胞侵袭和迁移能力的影响.结果与正常细胞组人胃黏膜上皮GES-1细胞株相比, GC细胞组人GCHGC-27细胞株中miR-144-3p的表达量明显降低, ABCG2的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);靶基因预测miR-144-3p和ABCG2 3’UTR存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实了miR-144-3p和ABCG2靶向结合关系;与对照组相比,转染miR-144-3p mimic组GC细胞中miR-144-3p的表达明显升高, ABCG2的表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力显著降低,差异具有统计学意义(P0.05),转染miR-144-3p inhibitor则表现出相反的作用;明胶酶谱实验检测结果表明ABCG2 siRNA转染可显著抑制GC细胞中MMP-2和MMP-9蛋白活性,抑制GC细胞侵袭和迁移能力,差异具有统计学意义(P0.05).结论 MiR-144-3p能够抑制GC细胞侵袭和迁移能力,其作用机制与靶向调控ABCG2-MMP-2/9信号通路有关.     

大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性变化

目的 观察大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞表型及功能的变化特点. 方法取3、12、24月龄健康雄性Wistar大鼠原代系膜细胞进行培养,MTT法检测细胞增殖能力,进行SA-β-gal染色,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测p21~(WAF1/CIP1/SDI1)基因及蛋白质的表达变化,并用免疫荧光法检测系膜细胞中p21~(WAF1/CIP1/SDI1)的表达与定位. 结果大鼠肾小球系膜细胞增殖能力随增龄逐渐减弱(P<0.05),SA-β-gal染色阳性率随增龄逐渐增加(P<0.05),p21~(WAF1/CIP1/SDI1) mRNA及蛋白质表达随增龄逐渐增加(P<0.05).免疫荧光结果示p21~(WAF1/CIP1/SDI1)主要在细胞核内表达,荧光强度随增龄逐渐增强 (P<0.05). 结论大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞形态、增殖能力与衰老相关蛋白表达发生明显改变,出现了复制性衰老表型.     

苦瓜蛋白通过下调miR-23b-3p促进三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达

目的前期工作发现苦瓜蛋白(MD28)可上调THP-1源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达而减少胞内的脂质蓄积,但其机制不清楚。文章拟从转录后水平分析其作用机制。方法首先用miRNA芯片技术分析经MD28干预后,50 mg/L ox-LDL处理48 h的THP-1源性泡沫细胞miRNA谱中下调1.5倍的micro RNA(miRNA),并与Genecards调控ABCA1基因表达的miRNA比较,找到二者共同miRNA,然后以荧光素酶报告基因系统验证其靶基因关系。qRT-PCR检测ABCA1 m RNA和miR-23b-3p的表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,油红O染色测定胞内脂质蓄积。结果 miR-23b-3p是miRNA芯片和Genecards的交集,靶基因验证实验证实ABCA1是miR-23b-3p的靶基因。MD28剂量(0 g/L、0.4 g/L、1.2 g/L、3.6 g/L、5 g/L)和时间(0 h、6 h、12h、24 h、48 h)依赖性地上调ABCA1 m RNA及蛋白的表达水平,以1.2 g/L作用12 h最为显著。ox-LDL上调miR-23b-3p表达且被MD28抑制,MD28能减少胞内脂质蓄积,miR-23b-3p的抑制剂可拮抗MD28对ABCA1表达和胞内脂质蓄积的作用。结论 MD28通过下调miR-23b-3p介导其促进THP-1源性泡沫细胞ABCA1表达、减少胞内脂质蓄积作用。     

大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白随增龄变化的研究

目的 研究大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)随增龄表达的变化规律. 方法 选取3月龄、12月龄及24月龄健康大鼠,分别取大鼠肾组织及原代系膜细胞做衰老相关β-半乳糖苷酶活性(SA-βgal)染色,采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法(Western blotassay)分别在基因及蛋白质表达水平上检测肾脏组织和细胞中mTOR及磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达变化,采用免疫组化和荧光法分别检测mTOR在肾组织及细胞中的表达与定位. 结果 随增龄,大鼠肾脏组织SA-βgal活性增强,且肾小球系膜细胞SA-β-gal染色阳性率逐渐增加,3、12及24月龄阳性率分别为(11.9±3.6)%,(39.0±4.0)%及(86.9±7.4)%,mTOR mRNA表达随增龄逐渐增强,不间月龄比较差异有统计学意义(P<0.05).Western印迹亦显示mTOR及p-mTOR蛋白表达随鼠龄增加逐渐增强(P<0.05).免疫组化结果 显示,mTOR蛋白表达于大鼠肾小球系膜区,其在肾小管一间质也有表达;随增龄,与增龄所致的肾脏病变呈正相关性(与增龄引起小球及小管-间质病变的相关性分别为r=0.838;r=0.742,均为P<0.01);免疫荧光结果 显示,mTOR在大鼠系膜细胞胞浆及胞核内皆有表达,随增龄表达的荧光强度逐渐升高(P<0.05). 结论 mTOR在大鼠肾组织及肾小球系膜细胞中的表达随龄增加,其可能参与了肾脏衰老的进程.     

白芍总苷通过miR-23b-3p/FoxA1对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨白芍总苷及对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响分子机制.方法 肺泡上皮细胞A549随机分为对照(Con)组、模型(Model)组(1×108 CFU/mL的肺炎链球菌感染)、Model+白芍总苷低、中、高剂量组(17.5 mg/mL、35 mg/mL、70 mg/mL的白芍总苷+1×108 CFU/mL的...     

5-氮杂胞苷上调miR-27b-5p表达对模拟失重下血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探究5-氮杂胞苷（5-azacytidine, 5-AZA）对模拟失重效应下血管内皮细胞miR-27b-5p表达及细胞凋亡的影响。 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）,利用MTT试剂盒检测不同浓度5-AZA（0.1 μmol/L、1 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L）对HUVECs的毒性作用。采用qRT-PCR技术观察模拟失重环境下miR-27b-5p表达的时程变化及5-AZA药物处理对miR-27b-5p表达的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Cleaved Caspase-3的表达,观察5-AZA在回转模拟失重效应下对HUVECs凋亡的影响。 结果 5-AZA对HUVECs的细胞毒性呈浓度依赖性。与对照组相比,0.1 μmol/L、1 μmol/L、5 μmol/L和10 μmol/L组的细胞存活率无统计学差异,50 μmol/L 5-AZA组和100 μmol/L5-AZA组的细胞存活率显著降低（P<0.05）。因此,我们采用10 μmol/L作为后续实验5-AZA的加药浓度。在回转模拟失重效应下,HUVECs的miR-27b-5p表达显著下降（P<0.05）,且随回转时间的延长而下降程度增大（P<0.05）。qRT-PCR检测结果提示,5-AZA可显著上调模拟失重效应下HUVECs中miR-27b-5p表达（P<0.05）。Western blot检测结果提示,5-AZA可显著下调模拟失重效应下HUVECs中Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达（P<0.05）,上调Bcl-2蛋白表达（P<0.05）。 结论 5-AZA通过上调miR-27b-5p表达,抑制模拟失重效应下HUVECs凋亡的发生。     

microRNA-10a抑制结肠癌肝转移肿瘤相关成纤维细胞活性的研究

目的探讨microRNA-10a(miR-10a)对肝脏微环境中肿瘤相关成纤维细胞(TAFs)的增殖、迁移以及促炎性因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素1(IL-1)βmRNA表达水平的影响。方法收集同一结肠癌患者癌旁正常肝组织和转移至肝脏的病灶组织,采用组织块法建立原代人肝正常成纤维细胞(NFs)和原代TAFs。通过形态学观察和细胞免疫荧光染色对NFs和TAFs进行鉴定,并通过流式细胞术鉴定二者的纯度。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NFs和TAFs中miR-10a的表达水平,并在低表达miR-10a的细胞中过表达miR-10a。随后采用CCK-8实验、划痕实验和RT-qPCR分别检测miR-10a对该细胞增殖、迁移能力以及IL-6、IL-8、IL-1βmRNA表达水平的影响。结果细胞免疫荧光染色显示人细胞角蛋白18(CK-18)在NFs和TAFs中均不表达;成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)在两细胞中均表达;α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在NFs中弱表达,在TAFs中强表达。流式细胞术显示NFs与TAFs中α-SMA阳性率为95.0%和95.3%。miR-10a在TAFs的表达水平为NFs的0.65倍(P<0.01)。过表达miR-10a后TAFs在第3、4和5天增殖能力显著低于同时期的阴性对照组细胞(P<0.05,P<0.05,P<0.01);TAFs的迁移能力在24 h和48 h分别较阴性对照组降低25%和15%(P<0.01,P<0.05),TAFs中IL-6、IL-8、IL-1β的表达水平分别较阴性对照组降低54%、27%和42%(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论miR-10a在TAFs中呈低表达,miR-10a过表达抑制了TAFs的增殖和迁移,并降低炎性因子IL-6、IL-8、IL-1βmRNA的表达,这可能是TAFs抑制肝脏形成转移灶的重要因素。     

藤梨根提取物通过调控miR-192-5p/ARPP19轴影响结直肠癌细胞的增殖和凋亡

背景藤梨根提取物(rattan root extract,RRE)可抑制胃癌、肺癌等肿瘤细胞增殖,具有一定抗肿瘤作用,但其是否影响结直肠癌细胞的恶性表型还未知.miR-192-5p在结直肠癌组织中表达降低,且其低表达与肿瘤大小等临床病理特征相关,可作为结直肠癌诊治的潜在生物学标志物.StarBase生物信息学软件预测显示,环腺苷酸调节的磷酸化蛋白19(cAMP-regulated phosphoprotein 19,ARPP19)可能是miR-192-5p的靶基因.本研究假设RRE可通过调控miR-192-5p/ARPP19轴影响结直肠癌细胞增殖和凋亡.目的探讨RRE对结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法RRE干预SW480细胞后,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中CyclinD1、C-caspase-3和ARPP19蛋白水平,RT-qPCR检测细胞中miR-192-5p和ARPP19 mRNA水平.转染miR-192-5p模拟物或ARPP19小干扰RNA至SW480细胞,上述相同方法观察过表达miR-192-5p或抑制ARPP19表达对SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p和ARPP19调控关系.结果RRE可降低SW480细胞存活率及ARPP19 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),增加SW480细胞凋亡率及C-caspase-3蛋白和miR-192-5p的表达(P<0.05).过表达miR-192-5p或抑制ARPP19表达均可降低SW480细胞存活率及CyclinD1蛋白表达(P<0.05),而提高SW480细胞凋亡率及C-caspase-3蛋白表达(P<0.05).miR-192-5p在SW480细胞中靶向负调控ARPP19表达.抑制miR-192-5p表达可逆转RRE对SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.抑制ARPP19表达可逆转抑制miR-192-5p表达对RRE处理的SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.结论RRE可有效抑制结直肠癌SW480细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制与调miR-192-5p/ARPP19轴有关.     

CircRNA_0084927 promotes colorectal cancer progression by regulating miRNA-20b-3p/glutathione S-transferase mu 5 axis

BACKGROUNDColorectal cancer (CRC) is the third most common cancer and the second most common cause of cancer-related death worldwide. The 5-year survival rate of patients with early-stage CRC could reach 90%, but it is very low in patients with advanced-stage CRC. Recent studies have shown that circular RNAs play important roles in regulating the migration and invasion of CRC cells.AIMTo elucidate the role of circRNA_0084927 (circ_0084927) in the migration and invasion of CRC cells and its underlying mechanism.METHODSClinical tissue samples and cells were collected, and the expression of circ_0084927 was detected by quantitative polymerase chain reaction (qPCR). The diagnostic performance of circ_0084927 was assessed by receiver operating characteristic curve analysis. The role of circ_0084927 in CRC cell proliferation, migration, and invasion was determined using cell counting kit-8 assay, wound healing assay, and transwell assay, respectively. The regulatory relationship among circ_0084927, miRNA-20b-3p (miR-20b-3p), and glutathione S-transferase mu 5 (GSTM5) was identified using databases, luciferase reporter assay, qPCR, and Western blot analysis. AKT-mTOR signaling was also verified after circ_0084927 knockdown or miR-20b-3p mimic treatment.RESULTSThe expression of circ_0084927 was significantly increased in CRC tissues and cells, and it was higher in advanced-stage CRC compared with early-stage CRC. The area under the curve (AUC) of circ_0084927 was 0.806 [95% confidence interval (CI): 0.683-0.896]. In addition, the AUC was 0.874 (95%CI: 0.738-0.956) in patients with advanced-stage CRC and 0.713 (95%CI: 0.555-0.840) in those with early-stage CRC. Knockdown of circ_0084927 inhibited the migration and invasion of HCT116 cells. Moreover, circ_0084927 was found to act as a sponge of miR-20b-3p. MiR-20b-3p activation reduced the circ_0084927 level, whereas miR-20b-3p inhibition increased the circ_0084927 level. But the effect was not found after circ_0084927 mutation. In addition, miR-20b-3p expression in CRC patients was also reduced and negatively correlated with circ_0084927 expression. The function of circ_0084927 in HCT116 cells with circ_0084927 knockdown was rescued by miR-20b-3p. Moreover, GSTM5 expression was significantly decreased after overexpressing miR-20b-3p or inhibiting circ_0084927, but its expression was rescued when circ_0084927 and miR-20b-3p were both inhibited. Finally, AKT-mTOR signaling was markedly regulated by circ_0084927 and miR-20b-3p.CONCLUSIONThe expression of circ_0084927 is significantly increased in CRC and higher in advanced-stage CRC than in early-stage CRC. Moreover, circ_0084927 potentially regulates CRC cell migration and invasion via the miR-20b-3p/GSTM5/ AKT/mTOR pathway.