蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的有丝分裂过程

蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的2个细胞核,典型的核膜结构,复杂的细胞骨架系统,并以有丝分裂作为其主要繁殖方式,但在分裂过程中核膜始终不解体,分裂方式为半开放式,加之细胞核的体积微小,细胞分裂速度较快,在细胞分裂过程中能否形成凝集的典型中期染色体,以及染色体的数目、形态等问题尚不明了,成为近年来国内外学者关注的焦点。本文从核分裂和胞质分裂两方面将蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的有丝分裂过程进行了综述。     

体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的形态学观察

目的观察体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体超微结构,探究贾第虫滋养体的核仁。方法用改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,姬姆萨(Giemsa)染色和铁苏木素染色后光镜观察虫体的形态结构;以透射电镜观察虫体的超微结构;以核仁特异性抗体作用虫体产生间接免疫荧光,用激光共聚焦显微镜检测核仁。结果光学显微镜下观察姬姆萨染色后的贾第虫胞质为淡监色,可见1对细胞核,核内有分散的染色体,数目为10条;4对鞭毛、1对半月形的中体、轴柱。铁苏木素染色可见1对椭圆形的泡状细胞核内各有1个细小的核仁。透射电镜观察虫体外观颜面状,呈倒置的梨形:质膜下可见单层排列、大小均匀的小囊泡;可见虫体的细胞器:游离核糖体颗粒、内质网;细胞骨架:腹吸盘、鞭毛、基体、中体的微管结构;核结构:核膜、核孔、核仁、染色体。激光共聚焦显微镜观察发现分裂间期虫体细胞核内有绿色荧光并聚集为核仁,在分裂期虫体内绿色荧光呈弥散分布。结论光镜和电镜观察结果显示体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的形态结构复杂,有典型的核仁、染色体及复杂的细胞骨架结构。     

蓝氏贾第鞭毛虫类高尔基体的研究

目的探讨类高尔基体结构在蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和成囊不同时段的存在情况及其动态变化机理。方法用可特异性标记真核细胞高尔基体的荧光染料C6-NBD神经酰胺，标记有活性的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体及成囊6、12、18h虫体，并用荧光显微镜观察。同时利用半定量RT—PCR方法检测高尔基体膜结合蛋白golgin245和膜泡融合的调节蛋白Rab1在蓝氏贾第鞭毛虫对数生长期滋养体及成囊6、12、24h的虫体中的表达水平。结果极少数蓝氏贾第鞭毛虫滋养体被C6-NBD神经酰胺标记；多数处于成囊6、12、18h时段的虫体均可见被特异标记成亮绿色的核周围区域。golgin245和Rab1在滋养体及成囊诱导6、12、24h的虫体中的表达水平无显著变化。结论蓝氏贾第鞭毛虫在成囊过程中出现类高尔基体结构．而在对数期滋养体中却没有。在蓝氏贾第鞭毛虫成囊过程中，高尔基体结构成分无大量合成，出现的类高尔基体结构可能是各组分临时组装的结果。     

蓝氏贾第鞭毛虫滋养体染色体扫描电镜观察

目的电镜观察蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的染色体数目及形态。方法用改良TYI-S-33培养基培养贾第虫滋养体。制备分散度较好的染色体玻片标本,对玻片标本进行扫描电镜常规处理,扫描电镜观察。结果在扫描电镜下观察到了蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的染色体,染色体数目为2n=10条,1号染色体为亚中央着丝粒染色体,2号、3号、4号、5号为端着丝粒染色体。结论通过电镜观察认为蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的染色体核型公式为2n=10=2sm+8t。     

商品化的免疫球蛋白制剂中抗肠道原虫的抗休

收集人工培养对数生长期的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和溶组织内阿米巴滋养体,PBS 洗涤3次,并取5个商品化的免疫球蛋白(IgG)制剂和6例贾第虫病人血清和1例阿米巴肝脓肿病人血清,进行凝集试验。取96孔微量凝集板分别加入血清样品或免疫球蛋白制剂及活动的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体或溶组织内阿米巴滋养体,室温孵育1h,使之出现凝集反应。并用蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和溶组织内阿米巴滋养体来吸附血清和免疫球蛋白制剂,离心沉淀,吸取上清液,贮存在     

蓝氏贾第鞭毛虫感染鼠的肠上皮及粘膜固有层内淋巴细胞功能的特点

实验动物选4周龄NMRI鼠(15～17g)。蓝氏贾第鞭毛虫滋养体(Portland I株)在TPS-I培养基中纯培养和保存。感染组经食管灌入1×10~7蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,对照组灌入等量TPS-I培养基。从鼠小肠C-环手术移去的片段经切碎、培养、离心、再培养、过滤等方法先分离出肠上皮内淋巴细胞,余液经持续搅拌等法获得粘膜固有层淋巴细胞。用酒精固定吉姆萨染色观察分离细胞形态。用直接免疫荧光技术确定三种T细胞百分比。免疫兔或鼠获得抗蓝氏贾第虫滋养体抗     

蓝氏贾第鞭毛虫染色体核型初步观察

目的初步观察蓝氏贾第鞭毛虫细胞分裂过程中典型凝集染色体的形成及其数目。方法用改良TYI-S-33培养基培养贾第虫滋养体。在结束培养前4h弃去旧培养基,加入事先预热的含有秋水仙素(终浓度为0.2μg/ml)的新鲜培养液。低渗处理55min,用甲醇∶冰醋酸(体积比=3∶1)固定液固定。收集细胞、滴片、Giemsa染液染色,光学显微镜观察结果。结果获得了较好的染色体分裂相。贾第虫染色体的数目多数为2n=8条。50个细胞分裂相中,有35个为8条染色体,10个为9条染色体,5个为10条染色体。染色体微小呈小杆状,有时成对,形态相同。结论蓝氏贾第鞭毛虫在分裂过程中形成典型的凝集染色体,染色体数目为2n=10条。     

用IFA及ELISA检测蓝氏贾第鞭毛虫不同分离株间的交叉反应性

作者用IFA及ELISA来检测蓝氏贾第鞭毛虫,观察其不同分离株间是否存在抗原性的变化。从人及动物身上获得的11个蓝氏贾第鞭毛虫滋养体分离株培养于改良的Diamond's TYI-S-33培养基中,以获得的滋养     

蒙古长爪沙鼠的双糖酶缺乏及其对蓝氏贾第鞭毛虫感染的抗力

腹泻是蓝氏贾第鞭毛虫感染的主要症状,是由双糖吸收障碍引起的高渗性腹泻。本文作者研究了贾第虫感染时双糖酶活性的变化以了解致病机制。 实验包括用活的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体、滋养体可溶性提取物、滋养体排泄或分泌物以及溶组织内阿米巴滋养体提取物分别激发已感染贾第虫的蒙古长爪沙鼠,观察激发     

体外纯培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体异常形态观察

目的观察体外纯培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的异常形态。方法用改良TYI-S-33培养基培养贾第虫,在接种后不同时间取培养管底部虫体涂片,Giemsa’s染色,在显微镜下观察虫体形态并照相。结果除观察到典型的营二分裂法繁殖的贾第虫滋养体外,还可见到多种形态异常的虫体,包括虫体呈非典型二分裂;滋养体胀大,胞质中有团块状和(或)不规则形状的嗜酸性物质;在胀大的贾第虫细胞内含有团块状和(或)不规则形状的嗜酸性物质以及鞭毛;在胀大的贾第虫细胞内含有6或8个核状物以及鞭毛;在一个母体细胞中含有3或4个子体细胞的雏形;胞质互相融合的4个滋养体的雏形;胞质互相融合的3个滋养体;胞质互相融合的4个滋养体;1对营二分裂的滋养体与另一个滋养体互相融合;2对营二分裂的滋养体互相融合;仅有1个细胞核的滋养体。结论在体外纯培养的贾第虫滋养体中发现一些异常形态的虫体,造成这种现象的原因尚不清楚,其发育过程有待进一步研究。     

双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫的损伤

目的 探讨双氢青蒿素（DHA）对蓝氏贾第鞭毛虫的损伤作用。 方法 用含不同浓度DHA的TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体。分别在光镜和电镜下观察药物作用后虫体的形态结构变化。 结果 随着药物作用时间延长和浓度的增加，虫体死亡率增高。在同一时间内随着药物浓度的增高，虫体死亡率升高(P<0.01)。DHA浓度为100 μg/ml, 作用12 h，虫体死亡率为46.6%，浓度增至200 μg/ml时, 虫体死亡率为100%；同一药物浓度随着作用时间延长, 虫体死亡率也升高（P<0.05），当浓度为100 μg/ml,作用12 h，虫体死亡率为46.6%，作用24 h死亡率增至100%。药物作用后24、48和72 h光镜下观察结果显示，虫体变形、肿胀、出现空泡、失去正常的瓢形运动能力；鞭毛摆动迟缓或停止运动。电镜下观察，见虫体变形、肿胀、细胞膜崩解、脱落，表面出现胞质突起；细胞质内核糖体溶解，出现空泡；吸器失去凹状结构，隆起变成大泡；核染色质稀疏，核周间隙变宽，并出现异形核。 结论 DHA对蓝氏贾第鞭毛虫的质膜及细胞骨架有较强的损伤作用。     

甲硝唑对体外蓝氏贾第鞭毛虫形态结构的损伤

用含甲硝唑500 μg/ml（12h LC₅₀）的改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体。分别用光镜和电镜观察药物作用后2、4、8及12 h虫体的形态变化。光镜观察显示：虫体变圆，从培养管壁脱落，鞭毛摆动迟缓或停止，细胞质出现空泡。电镜观察显示：虫体胀大、变圆、细胞质内核糖体溶解，出现大量空泡；核呈锯齿状异形。证实甲硝唑对体外培养的贾第虫滋养体的形态结构有明显的损伤作用。     

PRELIMINARY STUDIES ON THE EFFECTS OF A CHINESE HERB-RADIX SOPHORAE FLA VESCENTIS ON TROPHOZOITES OF GIARDIA LAMBLIA IN VITRO

Objective To investigate the effect and mechanism of radix Sophorae flavescentis on the trophozoites of Giardia lamblia in vitro. Methods Trophozoites of G. lamblia were exposed to aqueous extracts of radix S. flavescentis and then the detachment from the tube wall, the death rate and the morphological changes under light and transmission electron microscope of trophozoites were studied. Results After exposure to 1.6% aqueous extracts of radix S, flarescentis for 6, 8 and 24 h, the detachment rates were 47. 4%, 70. 9% and 80. 2%, and the death rates were 24. 5%,36.1% and 54.2%, respectively. The radix S, flavescentis-treated trophozoites shrinked and became roundish. The rewere also changes in ultrastructure, such as depletion of the contents of cytoplasm, separation of adhesive disk from the cell body and appearance of pit in cell membrane of some treated trophozoites, Conclusion Radix S, flavescentis can kill trophozoites of G, lamblia and lead them to detach from the tube wall in vitro. The induced morphological changes may be partially responsible for the effects of radix S, flavescentis on giardiasis.     

苦参对蓝氏贾第鞭毛虫作用及其机理初步研究

目的研究苦参对蓝氏贾第鞭毛虫的作用及其机理. 方法用苦参作用蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,观察滋养体脱壁及死亡情况,并用光镜和透射电镜观察其形态和内部结构的变化. 结果在作用 6、8和24 h后,滋养体脱壁率分别为47.4%、70.9%和80.2%,死亡率为 24.5%、36.1%和54.2%;形态观察可见,苦参作用的滋养体收缩,胞质内容物减少,吸盘部分脱离胞体,有的滋养体部分胞膜内陷. 结论苦参在体外能引起滋养体脱壁、死亡,其抗虫作用是肯定的,吸盘脱离、质膜凹陷及胞质减少等,这可能是其对贾第虫作用机理所在.     

Disaccharidase activity in the small intestine of gerbils (Meriones unguiculatus) during primary and challenge infections with Giardia lamblia.

The sequence of changes in the activity of six disaccharidases in the small intestine of gerbils during primary and secondary G lamblia infections was examined. The primary G lamblia infection induced a transient reduction in disaccharidase activity which was related to the highest trophozoite burden in the small intestine. During the primary exposure, a 30% to 85% decrease in the activity of enzymes was observed on days 10 and 20 after infection. Secondary exposure of gerbils to G lamblia caused a sharp decrease in disaccharidase activity as early as 24 h after challenge. The reduction in the enzyme activity was not influenced by the size of the challenge inoculum and occurred even when there were no live trophozoites in the small intestine. Disaccharidase deficiency could also be induced by challenge with the soluble extract of the trophozoites. Multiple challenge administrations of G lamblia trophozoites to gerbils induced a persistent disaccharidase deficiency. The results indicate that disaccharidase deficiency associated with the primary G lamblia infection probably represents a direct effect of the parasite on the brush border of the small intestine. On the other hand, the observed disaccharidase deficiency in the secondary G lamblia infection appears to be induced by the local immune responses of the host.     

双氢青蒿素对体外培养阴道毛滴虫作用的电镜观察

目的 观察双氢青蒿素（DHA）对阴道毛滴虫超微结构的影响。 方法 在2.5×10⁶个／ml滴虫培养液中加入双氢青蒿素1 mg／ml。 37 ℃ 培养3 和3.5 h, 进行扫描电镜观察，培养2.5和4 h进行透射电镜观察。 结果 双氢青蒿素作用滴虫后，虫体细胞膜受损明显，表面皱褶加深、表膜凹陷，并出现裂隙。细胞核膜破损，细胞核和细胞质均出现裂隙。内质网呈囊状肿胀，氢化酶体受损、变形。细胞质从细胞膜破裂处溢出。 细胞膜剥脱后细胞核、氢化酶体和盾等结构裸露。最后虫体变性、坏死。 结论 双氢青蒿素能破坏阴道毛滴虫膜系结构并导致虫体裂解死亡。     

Occurrence of specific secretory immunoglobulin A in bile after inoculation of Giardia lamblia trophozoites into rat duodenum

We studied the appearance of specific secretory immunoglobulin A (IgA) antibody in bile after inoculation of live Giardia lamblia trophozoites into rat intestine. Serial bile specimens collected before and after inoculation of trophozoites were assayed for IgA antibodies by indirect immunofluorescence. Secretory IgA antibodies to Giardia lamblia were first detected in bile at 3 days after inoculation, remained elevated through 12 days, and then returned to control levels. Positive immunofluorescence of trophozoites for IgA was observed at bile titers of 1:80 to 1:160, whereas control biles were usually negative at dilutions of 1:10 or less. Scanning electron microscopic examination of Giardia in conjunction with immunocytochemistry revealed IgA antibodies bound to the flagella and surfaces of the trophozoites including the adhesive disk. These data demonstrate the occurrence of a secretory IgA immune response directed against surface antigens of Giardia lamblia trophozoites in the rat.