剑麻皂甙元资源利用的研究 Ⅲ.哺乳动物信息素5■-雄甾-16-烯-3-酮和3■-羟基-5■-雄甾-16-烯的合成

本文以表雄酮(3)为原料通过溴化铜溴代,四氢硼钠还原和锌粉消除反应得中间体3β-羟基-5■-雄甾-16-烯(5);再经Jones氧化得5■-雄甾-16-烯-3-酮(1)。(5)的对甲苯磺酸酯(6)在二甲亚砜中与亚硝酸钠反应得3■-羟基-5■-雄甾-16-烯(2)。本文还合成了3β,17-二羟基-16-溴-5(?)-雄甾烷的四个立体导构体(8),(9),(10),(14),并确证了它们的结构和构型。     

2-(2-甲氧基苯基)-5-[2’-(2H-四唑-5-基)联苯-4-甲硫基]-1,3,4-噻二唑的合成及抑菌活性

目的研究2-(2-甲氧基苯基)-5-[2’-(2H-四唑-5-基)联苯-4-甲硫基]-1,3,4-噻二唑(化合物4)的合成方法及抑菌活性。方法通过2-(2-甲氧基苯基)-5-巯基-1,3,4-噻二唑(化合物1)与2-N-三苯基甲基-5-(4’-溴甲基联苯-2-基)-四唑(化合物2)在碳酸钾/丙酮体系中进行缩和反应,制得化合物3。化合物3在酸性条件下脱保护,制得化合物4。用元素分析和波谱方法确定化合物3和4的结构,用杯盘培养法测化合物4的抑菌活性。结果经检测确定化合物3和4分别为2-(2-甲氧基苯基)-5-[(2’-三苯甲基四唑-5-基)联苯-4-基]甲硫基-1,3,4-噻二唑和2-(2-甲氧基苯基)-5-[2’-(2H-四唑-5-基)联苯-4-甲硫基]-1,3,4-噻二唑。初步抑菌结果表明化合物4对大肠杆菌、链球菌显示了较好的抑菌活性。结论化合物4有望成为含有联苯四唑的新抗菌药物。     

DNA探针的生物素标记试剂研究——Ⅰ.生物素化2′-去氧核苷酸的合成和应用

5-[3-(生物素酰氨基己酰)-胺基]-丙烯基-2’-去氧-5’-三磷酸脲嘧啶核苷(VI)和5-[3-(生物素酰氨基己酰)-胺基]-丙烯基-2’-去氧-5’-三磷酸胞嘧啶核苷(Ⅶ)从d-CTP原料经四步反应合成。用(Ⅵ)和(Ⅶ)标记的生物素DNA探针已用于检测乙肝病毒,c-Myc基因和人类多瘤病毒等。     

5α -雄甾-2-烯-17-酮羟溴化反应产物的探讨

本文报道了5 -雄甾-2-烯-17-酮(Ⅱ)羟溴化反应产物的分离与结构。除正常产物2β-羟基-3 -溴-5 -雄甾-17-酮(Ⅳ)外,三个付产物(Ⅳa、Ⅳb和Ⅳc)的结构均经波谱及化学方法确证。它们分别为2β.3 -二溴-5 -雄甾-17-酮(Ⅳa),3 -溴-4β-羟基-5 -雄甾-17-酮(Ⅳb)和3 -羟基-4β-溴-5 -雄甾-17-酮(Ⅳc)。实验结果表明表雄酮的3-对甲苯磺酸酯(Ⅰ)经2.4.6-三甲基吡啶热消除法制备Ⅱ时,也生成并伴有5 -雄甾-3-烯-17-酮(Ⅲ)。     

1—乙酰基-3-邻-甲基苯甲酰基-5-氟尿嘧啶的研究——Ⅲ、高效液相色谱法测定小鼠主要代谢物的血药浓度

通过溶剂提取,采用高效液相仪反相色谱法测定了小鼠口服A-OT-FU淀粉液后的主要代谢产物3-邻-甲基苯甲酰基-5-氟尿嘧啶(TFU)和5-氟尿嘧啶(5-FU)的血药浓度曲线,两者达最高血药浓度时间均为0.5小时。     

5-氟尿嘧啶的聚乙二醇-聚乳酸的胶束制备及其体外释药研究

目的 通过化学结合法将药物5-氟尿嘧啶(5-FU)与聚乙二醇-聚乳酸(mPEG-PLA)相连接,制备mPEG-PLA-5-FUA含药聚合物胶束,考察其体外释放性能.方法 在5-FU的N-1位引入乙酸基,通过DCC缩合法,使5-氟尿嘧啶-1-基乙酸(5-FUA)与mPEG-PLA反应,制得含药聚合物mPEG-PLA-5-...     

肺心病患者炎性细胞因子的变化

目的 :研究肺心病患者血液中内皮素 - 1(Endothelin - 1,ET - 1)和白介素 - 8(Interleukin - 8,IL - 8)的演变 ,进一步阐明肺心病发病机制 ,为临床观察病情、评估预后及探讨新治疗手段提供依据。方法 :该文采用放射免疫法及酶联免疫吸附法测定肺心病急性加重期患者 4 5例 ,缓解期 2 0例 ,正常对照者 18例血液中ET - 1及IL - 8。结果 :肺心病急性加重期ET - 1、IL - 8较缓解期及正常对照组高 ,差异显著 ,肺心病缓解期ET -1、IL - 8较正常对照组高 ,差异显著 (均P <0 .0 5 ) ;肺心病急性加重期及缓解期血浆ET - 1与PO2 呈负相关(r =- 0 .72 ,r=- 0 .5 3,均P <0 .0 5 ) ,与PCO2 呈正相关 (r=0 .5 5 ,r =0 .5 3,均P <0 .0 5 ) ;肺心病急性加重期经治疗后 ,随着病情好转 ,ET - 1降低 ,IL - 8降低 (均P <0 .0 5 ) ,病情无好转及死亡者 ,ET - 1、IL - 8水平无明显变化 (P >0 .0 5 ) ;肺心病急性加重期血清IL - 8水平与外周血中性粒细胞计数呈正相关 (r =0 .5 0 ,P <0 .0 5 ) ;肺心病缓解期血浆ET - 1水平与外周血淋巴细胞计数呈正相关 (r =0 .5 7,P <0 .0 5 )。结论 :表明肺心病患者存在有炎性因子与炎性细胞变化 ,ET - 1、IL - 8可作为肺心病病情观察、预后评估的参考指标。     

HPLC-MS测定奥美沙坦酯中有关基因毒性杂质

建立一种直接测定奥美沙坦酯中基因毒性杂质5-(4′-溴甲基联苯-2-基)四氮唑和5-(4′-二溴甲基联苯-2-基)四氮唑的液相色谱-质谱联用方法。采用色谱柱Agilent Zorbax Eclipse Plus C₁₈(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相；在电喷雾正离子模式下，对m/z 315和m/z 395离子进行选择性监测。5-(4′-溴甲基联苯-2-基)四氮唑和5-(4′-二溴甲基联苯-2-基)四氮唑的质量浓度分别在0.009 4~0.561 0 μg/mL和0.018 2~0.547 5 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系；定量限分别为9.35和18.25 ng/mL；检测限分别为3.12和6.08 ng/mL；平均回收率分别为96.5%(n=9，RSD=4.8%)和98.0%(n=9，RSD=5.1%)。本法操作简便、专属性好、准确度高，可用于奥美沙坦酯中基因毒性杂质5-(4′-溴甲基联苯-2-基)四氮唑和5-(4′-二溴甲基联苯-2-基)四氮唑的检测。     

三桠苦的化学成分研究

目的 研究三桠苦Melicope pteleifolia茎的化学成分。方法 运用硅胶柱色谱、反相HPLC、重结晶等方法分离纯化,并通过UV、IR、MS和NMR光谱学方法进行结构鉴定。结果 从三桠苦茎中分离得到了12个化合物,分别鉴定为异吴茱萸酮酚(isoevodionol,1)、3-乙酰基-β-谷甾醇(sitost-5-en-3β-ol acetate,2)、甲基异吴茱萸酮酚(methylevodinol,3)、4-豆甾烯-3-酮(stigmast-4-en-3-one,4)、三桠苦素C(leptin C,5)、三桠苦素A(leptin A,6)、3-异戊烯基伞形花内酯［3-(3-methylbut-2-enyl) umbelliferone,7］、7-去甲基软木花椒素(7-demethylsuberosin,8)、吴茱萸春(evolitrie,9)、5-羟基-6-乙酰基-7-甲氧基色原酮(5-hydroxy-6-acety-7-methoxychromnone,10)、7α-羟基甾醇(7α-hydroxysitosterol,11)和异紫花前胡内酯(nodakenetin,12)。结论 化合物2、4、7、8、10～12为首次从该植物中分离得到,化合物10为一新天然产物。     

1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-(1H)吡啶酮对鼠肾成纤维细胞的影响

目的：探讨1- (3-氟苯基)-5-甲基-2-（1H）吡啶酮对鼠肾纤维化的治疗作用。 方法：采用MTT法和ELISA法分别检测1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-（1H）吡啶酮和pirfenidone对鼠肾成纤维细胞（BHK-21）增殖和分泌纤维结合蛋白（Fn）表达的影响。 结果：1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-（1H）吡啶酮作用于鼠肾成纤维细胞48 h后能明显抑制细胞增殖及分泌Fn,1 000 μg/ml的1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-（1H）吡啶酮作用于BHK-21后24 h即可明显抑制BHK-21细胞增殖。 结论：1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-（1H）吡啶酮可明显抑制鼠肾成纤维细胞增殖,在肾间质纤维化防治药物研制方面显示出良好的前景。     

内皮祖细胞在胶质瘤新生血管中的募集和整合作用

目的 探讨内皮祖细胞(EPCs)在胶质瘤血管新生化过程中的作用.方法 采用密度梯度离心法分离人脐血EPCs.应用人脑胶质瘤细胞系U87细胞建立原位移植动物模型,于瘤细胞接种后第7天将EPCs经尾静脉注入荷瘤鼠,并分别于尾静脉注射后7、14、21d观察EPCs植入后在移植瘤血管新生过程中的募集、整合作用以及对肿瘤生长的影响.结果 胶质瘤原位移植模型成瘤率为100%.在EPCs植入后14、21d被募集和整合到肿瘤血管中的EPCs数量显著多于第7天(P＜0.05),肿瘤微血管密度和移植瘤体积也显著高于对照组(P＜0.05).结论 人脐血EPCs能够被募集并整合到肿瘤血管中促进胶质瘤生长,提示其在胶质瘤血管新生化过程中可能具有重要作用.     

Gd-BOPTA标记对人脐血内皮祖细胞生物学特性的影响与MR成像研究

目的探讨Gd-BOPTA标记人脐血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的方法和对标记EPCs生物活性的影响,观察标记EPCs的体外磁共振成像特点。方法应用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养EPCs。采用jetPEITM-FluoF介导Gd-BOPTA标记EPCs,比较不同标记浓度和标记时间对EPCs生物活性的影响,收集未标记细胞和标记24 h的细胞进行体外MR成像,比较不同浓度标记的细胞在不同扫描序列中的信号强度变化。结果荧光显微镜下观察,标记的EPCs胞质内可见绿色荧光颗粒,透射电镜可见胞质内散在分布许多Gd颗粒,颗粒主要位于胞质的细胞器如高尔基体周围以及附着在细胞膜内层上。Gd-BOPTA标记规律呈"抛物线"样,即随着标记浓度增高和标记时间的延长,细胞内聚集的Gd颗粒增多,细胞的标记率也增高,但在浓度为25μg/ml标记24 h标记率达峰值[(88.2±1.6)%]后,标记率逐渐降低。在标记浓度低于25μg/ml标记24 h时,对细胞的黏附能力、迁移能力及增殖能力均无影响(P>0.05)。在T1 WI序列最大相对信号强度出现在浓度为25μg/ml时,而后信号降低,与对照管相比差异显著(P<0.05),在T2 WI和T2*WI序列上相对信号强度变化无显著性差异(P>0.05)。结论 jetPEITM-FluoF可介导Gd-BOPTA有效地标记EPCs,对MR信号的影响主要为T1WI正性效应,最适标记浓度和最佳标记时间分别为25μg/ml、24 h。     

胰岛素对人脐血内皮祖细胞生物活性的影响

目的探讨胰岛素对人脐血内皮祖细胞增殖、迁移与黏附功能的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法从人脐血中分离单个核细胞,加入EGM-2培养液,接种于包被人纤连蛋白的培养皿中贴壁培养,收集48 h后的悬浮细胞重新贴壁培养至第7天,利用免疫荧光和流式细胞术鉴定。细胞随机分为对照组和不同浓度(0.1、1和10nmol/L)胰岛素处理组干预24 h,分别采用MTT比色法、Transwell法和细胞黏附实验来观察胰岛素对内皮祖细胞增殖、迁移与黏附功能的影响。结果与对照组相比,0.1、1、10nmol/L的胰岛素干预内皮祖细胞24 h能明显增强其增殖、迁移和黏附能力(P<0.05或P<0.01);其中胰岛素浓度为1nmol/L时增殖功能达到峰值,胰岛素浓度为0.1nmol/L时迁移和黏附功能达到峰值。结论生理浓度与较低浓度胰岛素能增强内皮祖细胞的增殖、迁移与黏附能力。     

百里醌对内皮祖细胞的抑制作用

目的探讨百里醌对人脐血来源的内皮祖细胞血管生成的抑制作用及其可能机制。方法采用贴壁选择法培养人脐血内皮祖细胞(EPCs),DiI-ac-LDL吞噬试验及VEGFR-2、Ⅷ因子和CD34细胞免疫组化证实细胞属性;百里醌作用EPCs后,CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室实验测定EPCs体外侵袭能力;小管形成实验检测EPCs体外小管形成能力;Western blotting检测EPCs中MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果体外成功培养出人脐血内皮祖细胞,百里醌可显著抑制体外EPCs增殖,IC50=51.2nmol/L;百里醌可抑制体外EPCs侵袭和小管形成,呈浓度依赖性;百里醌可显著下调EPCs中MMP-2和MMP-9的表达。结论百里醌可能通过抑制EPCs中MMP-2和MMP-9的表达从而抑制EPCs参与的血管生长,从而有望作为有效的血管生成抑制药物。     

人脐血内皮祖细胞的体外培养

目的从人脐带血中分离内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）,建立人脐血内皮祖细胞体外培养的方法,为实现内皮祖细胞的移植及实验研究提供足量的细胞来源。方法采用密度梯度离心法分离人脐带血内皮祖细胞,在EGM-2培养基中培养,采用流式细胞仪、免疫组化和免疫荧光鉴定EPCs。结果脐带血单个核细胞在经EGM-2培养过程中出现梭形贴壁和铺路石样等形态;1周后既分化成EPCs,细胞免疫荧光CD133染色率在培养第7天为（67.2±2.12）%,免疫组化CD34染色率为（89.67±2.05）%,流式细胞仪鉴定该种细胞CD133与KDR的双阳性率达87.8%。可确定该细胞为EPSc。结论采用本培养方法可获得良好的内皮祖细胞用于实验研究。     

内皮祖细胞的生物学特性研究进展

内皮祖细胞在体内外能分化为成熟内皮细胞。目前,内皮祖细胞已被证实存在于成年人外周血,骨髓和人脐带血中。本综述总结了近年来内皮祖细胞的生物学研究进展,并讨论了其在心血管疾病中的潜在的治疗作用。     

Human umbilical cord-derived endothelial progenitor cells promote growth cytokines-mediated neorevascularization in rat myocardial infarction

Background Cell-based vascular therapies of endothelial progenitor cells （EPCs） mediated neovascularization is still a novel but promising approach for the treatment of ischemic disease. The present study was designed to investigate the therapeutic potentials of human umbilical cord blood-derived EPCs （hUCB-EPCs） in rat with acute myocardial infarction. Methods Human umbilical cord blood （hUCB） mononuclear cells were isolated using density gradient centrifugation from the fresh human umbilical cord in healthy delivery woman, and cultured in M199 medium for 7 days. The EPCs were identified by double-positive staining with 1,1＇-dioctadecyl-3,3,3＇,3＇-tetramethylindocarbocyanine percholorate-labeled acetylated low-density lipoprotein （DiI-Ac-LDL） and fluorescein isothiocyanate-conjugated Ulex europaeus lectin （FITC-UEA-I）. The rat acute myocardial infarction model was established by the ligation of the left anterior descending artery. The hUCB-EPCs were intramyocardially injected into the peri-infarct area. Four weeks later, left ventricular function was assessed by a pressure-volume catheter. The average capillary density （CAD） was evaluated by anti-VIII immunohistochemistry staining to reflect the development of neovascularization at the peri-infarct area. The graft cells were identified by double immunofluorescence staining with human nuclear antigen （HNA） and CD31 antibody, representing human origin of EPCs and vascular endothelium, respectively. Expressions of cytokines, proliferating cell nuclear angigen （PCNA）, platelet endothelial cell adhesion molecule （PECAM） and vascular endothelial growth factor （VEGF） were detected to investigate the underlying mechanisms of cell differentiation and revascularization. Results The donor EPCs were detectable and integrated into the host myocardium as confirmed by double-positive immunofluorescence staining with HNA and CD31. And the anti-VIII staining demonstrated a higher degree of microvessel formation in EPCs transplanted rats, associated with a significant improvement of global heart function in terms of the increase of left ventricular end-systolic pressure （LVESP）, ＋dp/dtmax and -dp/dtmax as well as the decrease of LVEDP in rats with EPCs therapy comparing to the control rats （P〈0.05）. Moreover, the expression of the rat PCNA mRNA and PECAM were both enhanced in the EPCs group compared with that of the control group. Conclusions The human umbilical cord blood-derived EPCs could incorporate into new-born capillaries in rat myocardium, induce revascularization and improve the proliferation activity in the peri-infarct area, resulting in the improvement of global heart function. This may indicate a promising stem cell resource in cell-based therapy for ischaemic diseases.     

胎儿生长受限孕妇外周血及新生儿脐血中内皮祖细胞数量与功能的变化

目的:观察胎儿生长受限(FGR)孕妇外周血及新生儿脐血中内皮祖细胞(EPCs)数量与功能的变化.方法:选择FGR孕妇及新生儿15例和对照组健康孕妇及新生儿15例,密度梯度离心法收集外周血及脐血中单个核细胞(MNCs),接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,诱导分化培养9 d后收集贴壁细胞进行细胞化学分析.激光共聚焦显微镜下...     

Angiogenesis and vasculogenesis for therapeutic neovascularization

Peripheral blood of adult species contains endothelial progenitor cells (EPCs) that participate in neovascularization, consistent with postnatal vasculogenesis. EPCs can be isolated not only from peripheral blood but also from bone marrow and human umbilical cord blood. In vitro culture-expanded EPCs participate in endothelial network formation (capillary formation) in vitro, and transplanted EPCs have been incorporated into sites of active neovascularization. For example, transplanted human EPCs formed capillaries among preserved skeletal myocytes in the ischemic hindlimb of athymic nude rats in vivo. Furthermore, transplantation of EPCs functionally augmented neovascularization in response to hindlimb ischemia. Thus, transplantation of EPCs may become a useful strategy to modulate postnatal neovascularization.