miR-221 靶向AdipoR1 基因对LPS 诱导的肺泡上皮细胞A549 炎症分泌及凋亡影响

目的:探讨miR-221是否靶向脂联素受体1 AdipoR1基因影响脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549炎症分泌和凋亡。方法:随机将人肺泡上皮细胞A549分为对照组、LPS组和LPS+转染组,RT-qPCR法检测miR-221和AdipoR1 mRNA表达,Western blot法检测AdipoR1蛋白及凋亡相关因子Bax、Bcl-2蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞培养上清液中炎性因子IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,双荧光素酶报告基因检测miR-221是否靶向AdipoR1。结果:与对照组比较,LPS组细胞中miR-221及Bax蛋白表达升高(P0.05),AdipoR1 miRNA和蛋白及Bcl-2蛋白表达降低(P0.05),细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α浓度升高(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-221靶向负调控AdipoR1的表达;抑制miR-221和过表达AdipoR1均能抑制LPS诱导肺泡上皮细胞分泌炎症因子,抑制细胞凋亡;抑制AdipoR1逆转了抑制miR-221对LPS诱导的肺泡上皮细胞炎症分泌和凋亡的影响。结论:miR-221靶向AdipoR1影响LPS诱导的肺泡上皮细胞A549炎症分泌及凋亡。     

miR-29b通过调控Bax基因抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡

目的探讨miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的A549细胞分为对照组、LPS组(给予10 mg/L的LPS处理)、LPS+miR-NC组(转染miR-29b mimics阴性对照后给予LPS处理)、LPS+miR-29b组(转染miR-29b mimics后给予LPS处理);用RT-qPCR检测细胞中miR-29b的表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测Bax和miR-29b的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组、LPS+miR-NC组和LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显降低,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显升高,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实Bax是miR-29b的潜在靶基因。结论miR-29b可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控Bax表达有关。     

LncRNA MINCR靶向miR-223抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞系A549损伤和炎性反应

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MINCR靶向调节微小RNA(miR)-223对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系损伤和炎性反应的影响。方法 将人肺泡上皮细胞系A549随机分为对照组、LPS组、LPS+转染组(Si NC组、Si MINCR组、miR-223 NC组、miR-223 mimic组、Si NC+miR-223 NC组、Si NC+miR-223 antagomir组、Si MINCR+miR-223 NC组、Si MINCR+miR-223 antagomir组)。RT-qPCR检测MINCR、miR-223表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡率；ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平；生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证MINCR与miR-223的靶向关系；Western blot检测细胞中活化的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果 MINCR和miR-223存在靶向关系。LPS组与对照组比较，细胞凋亡率、TNF-α、IL-6水平、MINCR、...     

地佐辛通过上调miR-204-3p减轻LPS诱导的心肌细胞H9C2损伤北大核心CSCD

目的:探讨地佐辛对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的影响及可能机制。方法:体外培养心肌细胞H9C2,分为Con组、LPS组、不同剂量(4、8、16μmol/L)地佐辛组、16μmol/L地佐辛+anti-miR-NC组和16μmol/L地佐辛+anti-miR-204-3p组,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax蛋白表达,试剂盒检测细胞培养上清中LDH水平及细胞中MDA、SOD和GSH-Px水平,RT-qPCR检测细胞miR-204-3p表达。结果:与Con组比较,LPS组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量升高(P<0.05)。与LPS组比较,不同剂量(4、8、16μmol/L)地佐辛组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。与16μmol/L地佐辛+anti-miR-NC组比较,16μmol/L地佐辛+anti-miR-204-3p组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量升高(P<0.05)。结论:地佐辛可能通过上调miR-204-3p表达促进LPS诱导的心肌细胞H9C2增殖,并抑制H9C2细胞凋亡和氧化应激,减轻LPS诱导的H9C2细胞损伤。     

黄芩素通过上调miR-7-5p影响脂多糖诱导的肾小球上皮细胞氧化应激及凋亡

目的:探讨黄芩素(SCU)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小球上皮细胞氧化应激和凋亡的影响及其机制。方法:体外培养人肾小球上皮细胞,LPS(1.0 mg/L)处理建立细胞损伤模型,分为正常对照(NC)组、LPS组、NC+SCU组、LPS+SCU组、LPS+miR-NC组、LPS+微小RNA-7-5p(miR-7-5p)组、LPS+SCU+anti-miR-NC组和LPS+SCU+anti-miR-7-5p组。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;RT-qPCR检测miR-7-5p的表达水平。结果:与NC组比较,LPS组细胞活力、miR-7-5p表达和SOD活性显著降低,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著升高(P0.05);与LPS组比较,LPS+SCU组细胞活力、miR-7-5p表达和SOD活性显著升高,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著降低(P0.05);与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-7-5p组细胞活力和SOD活性显著升高,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著降低(P0.05);与LPS+SCU+anti-miR-NC组比较,LPS+SCU+anti-miR-7-5p组细胞活力和SOD活性显著降低,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著升高(P0.05)。结论:黄芩素通过上调miR-7-5p表达抑制LPS诱导的肾小球上皮细胞氧化应激损伤和凋亡。     

miR-142-3p通过调控Hmgb1抑制雨蛙素诱导的大鼠胰腺外分泌细胞系AR42J凋亡

目的 探讨miR-142-3p调控Hmgb1对大鼠胰腺外分泌细胞系AR42J凋亡的影响。方法 将AR42J细胞分为空白组(blank)、急性胰腺炎模型组(AP,100 nmol/L雨蛙素作用24 h),再分别用miR-142-3p mimics、 mimics NC、miR-142-3p inhibitor和inhibitor NC转染模型组细胞,记为miR-142-3p mimics组、 mimics NC组、miR-142-3p inhibitor组和inhibitor NC组。用RT-qPCR检测细胞中miR-142-3p表达;Western blot检测HMGB1、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达;Hoechst染色测定细胞凋亡;流式细胞测量术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验明确miR-142-3p和Hmgb1的靶向关系。结果 与空白组相比,AP组中miR-142-3p表达水平显著下调(P<0.01),HMGB1、caspase-3蛋白表达量上调(P<0.05),Bax蛋白表达量显著上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达量显著降低(P&l...     

Ghrelin 通过AKT/ ERK 信号通路对LPS 诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的:研究Ghrelin 对内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)所致的肺泡域型上皮细胞(A549)凋亡的影响及其机制。方法:CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测LPS 刺激对A549 的细胞毒性;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞内一氧化氮(NO)的产生;Western blot 检测诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、AKT、ERK、p-AKT、p鄄ERK 信号通路蛋白以及cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2 凋亡相关蛋白的表达。结果:CCK-8 检测结果显示LPS 可显著抑制A549 细胞的增殖,降低细胞活力;TUNEL 检测发现Ghrelin 可显著抑制LPS 导致的A549 细胞的凋亡(P<0.05);LPS 可以促进iNOS 的表达,增加细胞内NO 的产生,并同时抑制AKT、ERK 通路的活性,上调下游促凋亡蛋白Bax 以及终末凋亡蛋白cleaved caspase-3 的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达,而应用Ghrelin 预处理后可以逆转LPS 对AKT、ERK 通路活性的抑制,继而下调Bax 以及cleaved caspase-3 的表达,上调Bcl-2 的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05),但Ghrelin 对细胞内NO 的产生无明显影响。结论:Ghrelin 可以通过上调AKT 及ERK 通路的活性抑制LPS 诱导的肺泡上皮细胞凋亡,但不能降低iNOS 诱导产生NO 的水平。     

miR-486调控PTEN影响LPS诱导的肺泡上皮细胞A549凋亡的实验研究

目的:探讨微小RNA-486(miR-486)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549凋亡的影响和机制。方法:以LPS处理肺泡上皮细胞,RT-qPCR测定miR-486表达变化。在肺泡上皮细胞中转染miR-486模拟物(miR-486 mimics),RT-qPCR检测LPS条件下的转染效果。流式细胞术测定凋亡变化,Western blot检测细胞中cleaved caspase-3(C-caspase-3)和C-caspase-9蛋白表达变化。靶基因预测软件预测第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)可能是miR-486的靶基因,利用萤光素酶报告载体鉴定靶向关系。在肺泡上皮细胞中共转染pcDNA 3.1-PTEN和miR-486 mimics,检测上调PTEN对miR-486 mimics调控LPS诱导的A549细胞凋亡的作用。结果:LPS处理后的肺泡上皮细胞中miR-486的表达水平显著下降(P0.05)。miR-486 mimics可以显著上调LPS条件下肺泡上皮细胞中miR-486的表达水平(P0.05)。LPS处理后的肺泡上皮细胞凋亡率及C-caspase-3和C-caspase-9蛋白表达水平显著升高(P0.05);上调miR-486可以显著下调LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡(P0.05)。miR-486靶向负调控PTEN的表达。pcDNA 3.1-PTEN可以显著提高miR-486 mimics转染后LPS诱导的肺泡上皮细胞中PTEN的表达,促进细胞凋亡和细胞中C-caspase-3和C-caspase-9蛋白的表达(P0.05)。结论:miR-486靶向抑制PTEN的表达,减少LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡。     

白果内酯调控LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴缓解肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的探讨白果内酯对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及其对lncRNA LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴的调控作用。方法用肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞建立细胞损伤模型(感染组);分别转染si-NC、si-LEF1-AS1后,用肺炎链球菌感染细胞(感染+si-NC组和感染+si-LEF1-AS1组);pcDNA、pcDNA-LEF1-AS1分别转染至肺泡上皮细胞后用白果内酯与肺炎链球菌共同处理细胞(感染+白果内酯+pcDNA组和感染+白果内酯+pcDNA-LEF1-AS1组)。ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;q RT-PCR法检测LEF1-AS1、miR-23b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测LEF1-AS1与miR-23b-3p的靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果白果内酯能够降低肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平和LEF1-AS1的表达量(P<0.05),并可降低凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05),还可促进miR-23b-...     

miR-1908抑制高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞系HRECs凋亡

目的探讨miR-1908对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRECs)凋亡的影响及分子机制。方法培养HRECs细胞,分为对照组和高糖组,RT-qPCR检测细胞中miR-1908表达水平。转染miR-1908模拟物(mimics)、整合素连接激酶(ILK)的小干扰RNA至HRECs细胞,qRT-PCR和Western blot分别检测miR-1908和ILK蛋白表达验证转染效率。使用高糖干预过表达miR-1908或ILK表达抑制的HRECs细胞,流式细胞仪检测凋亡率,Western blot检测B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-1908和ILK之间关系。结果与对照组比,高糖组HRECs细胞中miR-1908的表达水平显著降低(P0.05)。过表达miR-1908或ILK表达可降低高糖诱导的HRECs细胞凋亡率(P0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P0.05),下调Bax蛋白表达(P0.05)。miR-1908负调控ILK表达,ILK过表达逆转了miR-1908对HRECs细胞凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结论 miR-1908可能通过负调控ILK表达上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达抑制HRECs细胞的凋亡。     

miR-506-3p通过靶向MTDH增加前列腺癌细胞的化学敏感性

目的研究miR-506-3p对前列腺癌细胞化学敏感性的影响及其作用机制。方法用RT-qPCR检测miR-506-3p和MTDH在前列腺癌细胞系和正常前列腺细胞系中的表达水平;以紫杉醇为诱导药物构建人前列腺癌耐药细胞株PC-3/PTX,将PC-3/PTX细胞随机分为5组对照组、NC mimic组、miR-506-3p mimic组、LV-MTDH组、mimic+MTDH组,利用Lipofectamine 3000转染试剂盒分别转染对应质粒。检测其存活率、IC50值、克隆细胞数目、凋亡率以及凋亡相关蛋白的表达水平;构建MTDH野生型(WT)和突变型(MUT),用双荧光素酶报告基因实验验证miR-506-3p与MTDH之间的靶向关系;Western blot检测miR-506-3p mimic处理后PC-3/PTX细胞中MTDH的蛋白表达水平。结果miR-506-3p在前列腺癌细胞中低表达,而MTDH高表达;miR-506-3p在PC-3/PTX细胞中的表达量显著低于在前列腺癌细胞PC-3中的表达量;相比于对照组和NC mimic组,miR-506-3p mimic组的PC-3/PTX细胞的存活率、IC50值、克隆细胞数目及Bcl-2表达明显降低,凋亡率及Bax表达明显升高;MTDH野生型较突变型能使荧光素酶活性显著下降;miR-506-3p mimic组PC-3/PTX细胞中MTDH蛋白表达水平显著低于对照组和NC mimic组;相比于对照组,miR-506-3p mimic组中PC-3/PTX细胞克隆数目显著减少,凋亡率升高,而LV-MTDH组与之相反;相比于LV-MTDH组,mimic+MTDH组PC-3/PTX细胞中MTDH的表达量显著下降,细胞克隆数目减少,凋亡率升高。结论miR-506-3p通过靶向抑制MTDH的表达能增强人前列腺癌耐药细胞株PC-3/PTX的化学敏感性。     

miR-146a-5p 通过调控Notch2 表达对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌损伤的影响

目的:探究miR-146a-5p调控Notch2表达对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响及作用机制。方法:将大鼠分为Control组、MI/R组、MI/R+mimic mock组、MI/R+mimic组,构建MI/R大鼠模型并使用相应的慢病毒处理,检测各组大鼠心脏LVEDD、LVESD和心肌梗死面积,RT-PCR检测miR-146a-5p基因表达水平,ELISA检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组化检测Ki67阳性细胞率,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Notch2、Hes1蛋白水平。将细胞分为Control组、OGD/R组、OGD/R+mimic mock组、OGD/R+mimic组、OGD/R+pc-Notch2组、OGD/R+mimic+pc-Notch2组,缺糖缺氧复糖复氧诱导心肌细胞损伤并转染对应的mimic,RT-PCR检测miR-146a-5p和Notch2基因表达水平,Western blot检测Notch2蛋白水平,MTT检测细胞活性、Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测SOD和MDA水平,生物信息学及荧光素酶报告实验检测miR-146a-5p和Notch2的靶向关系。结果:在动物实验中,与Control组比较,MI/R组miR-146a-5p基因表达水平降低、LVEDD、LVESD水平升高,心肌梗死面积,CK-MB、CK、LDH水平升高,心肌细胞凋亡率升高,Ki67阳性细胞率升高,SOD、GSH-Px水平降低,MDA水平升高,IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高,Bax、Notch2、Hes1蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低;与MI/R组比较,MI/R+mimic组miR-146a-5p基因表达水平升高、LVEDD、LVESD水平降低,心肌梗死面积、CK-MB、CK、LDH水平降低,心肌细胞凋亡率降低,Ki67阳性细胞率升高,SOD、GSH-Px水平升高,MDA水平降低,IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低,Bax、Notch2、Hes1蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高。在细胞实验中,与Control组比较,OGD/R组miR-146a-5p基因表达水平降低,Notch2基因和蛋白表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R组比较,OGD/R+mimic组miR-146a-5p基因表达水平升高,Notch2基因和蛋白表达水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD水平升高,MDA水平降低,OGD/R+pc-Notch2组Notch2蛋白表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R+mimic组比较,OGD/R+mimic+pc-Notch2组Notch2蛋白水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R+pc-Notch2组比较,OGD/R+mimic+pc-Notch2组Notch2蛋白水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD水平升高,MDA水平降低。在荧光素酶报告实验中,与Notch2 wt组比较,Notch2 wt+miR-146a mimic组荧光素酶活性显著降低。结论:miR-146a-5p能够在大鼠心肌缺血再灌注中减轻心肌损伤,其作用机制与抑制Notch2基因的表达有关。     

lncRNA NEAT1促进脓毒症诱导肝细胞损伤和炎症反应的机制研究

目的 基于lncRNA NEAT1调控的miR-129-5p/TLR4信号轴探讨脓毒症诱导的肝细胞损伤和炎症反应机制。方法 收集15例脓毒症患者外周血（脓毒症组）和15例健康者外周血（健康组）用于检测基因表达。体外实验使用小鼠正常肝细胞株NCTC1469,并用脂多糖（LPS）建立体外脓毒症模型（LPS组）,将LPS刺激下转染mimic NC、mimic、siNC或siNEAT1质粒载体的细胞分别命名为LPS+mimic NC组、LPS+mimic组、LPS+siNC组或LPS+siNEAT1组,将LPS、siNEAT1、TLR4重组蛋白或LPS、mimic、TLR4重组蛋白联合处理的细胞命名为LPS+siNEAT1+TLR4组或LPS+mimic+TLR4组,而对照组不作处理。分别用qPCR和ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA和蛋白表达水平。TUNEL实验检测细胞的凋亡率。双荧光素酶报告基因分析法检测lncRNA NEAT1/miR-129-5p和miR-129-5p/TLR4的结合。Western blot检测细胞中TLR4的表达。结果 在体内实验中,与健康组比...     

微小RNA-486靶向TRIM10抑制帕金森病细胞模型损伤

目的 探讨微小RNA（miR）-486对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的体外帕金森病（PD）PC12细胞模型凋亡的影响和机制。 方法 实验分成对照（control）组、PD组（MPP+诱导PC12细胞）、miR-NC组［MPP+诱导PC12细胞转染模拟（mimics）对照（mimics control）］、miR-486组（MPP+诱导PC12细胞转染miR-486 mimics）、miR-486+载体（vector）组（共转染miR-486 mimics和pcDNA3.1）、miR-486+TRIM10组（共转染miR-486 mimics和pcDNA3.1-TRIM10）,每组n=9。CCK-8法分析细胞增殖变化,流式细胞术分析细胞凋亡水平变化,Western blotting分析Bax和Bcl-2蛋白表达变化,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛（MDA）含量,荧光探针法检测细胞中活性氧簇（ROS）水平,二硝基苯肼分析培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）水平。用生物信息学软件预测miR-486的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测miR-486、TRIM10靶向关系。 结果 与control组比较,PD组细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA、ROS和LDH水平升高。与miR-NC组比,miR-486组细胞存活率、Bcl-2蛋白表达升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA、ROS和LDH水平降低。MiR-486靶向下调TRIM10表达。与miR-486+vector组比较,miR-486+TRIM10组细胞存活率、Bcl-2蛋白水平降低,细胞凋亡率、Bax蛋白水平、MDA、ROS和LDH水平升高。 结论 上调miR-486可通过靶向抑制TRIM10减少MPP+诱导的体外帕金森病PC12细胞模型的凋亡。     

MicroRNA-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应

 目的: 探讨microRNA-132(miR-132)通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法: 向大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中转染miR-132 mimic、mimic阴性对照(NC)、miR-132 inhibitor或inhibitor NC,转染后用脂多糖(LPS)和(或)乙酰胆碱(ACh)处理细胞;采用real-time PCR检测乙酰胆碱酯酶(AChE)的mRNA表达;采用Western blot检测细胞中AChE、信号转导及转录激活因子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3),以及细胞浆和细胞核中核因子κB(NF-κB)蛋白的改变;采用AChE活性测试盒检测细胞上清液中AChE活性的改变;采用免疫荧光检测NF-κB的核移位变化。结果: 上调或下调miR-132不影响AChE的mRNA相对表达水平;上调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著降低(P < 0.05),下调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著升高(P < 0.05)。当给予LPS+ACh作用时,miR-132 mimic组对NF-κB p65核移位的抑制作用较mimic NC组更强(P < 0.05),miR-132 inhibitor组较inhibitor NC组更弱(P < 0.05);miR-132 mimic组对STAT3及p-STAT3蛋白的抑制作用较mimic NC组更强(P < 0.05)。结论: miR-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制可能是miR-132靶向作用AChE,抑制AChE对ACh的水解作用,从而增强ACh的抗炎作用,抑制NF-κB及STAT3的活化。     

过表达PGRN抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的:探讨颗粒体蛋白前体(progranulin,PGRN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺泡上皮A549细胞和HPAEpi C细胞增殖、凋亡及炎症的影响。方法:实验分为4组:对照(control)组为正常培养的细胞;LPS组用LPS(10 mg/L)处理;PGRN+LPS组在转染pc DNA3.1-PGRN质粒后加入LPS处理;pc DNA3.1+LPS组在转染pc DNA3.1-EGFP质粒后加入LPS处理。MTT试剂盒检测细胞活力;Brd U掺入实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-q PCR和Western blot分别检测PGRN的mRNA和蛋白表达;Western blot检测caspase-3、Bcl-2、Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、p65和p-IκB-α的蛋白水平。结果:与对照组相比,LPS组的细胞增殖率下降(P0.05),凋亡率上升(P0.05),caspase-3和Bax的蛋白表达上调(P0.05),Bcl-2的蛋白表达下调(P0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达上调(P0.05),p65和p-IκB-α的蛋白水平增加(P0.05),与LPS组相比,PGRN+LPS组的细胞增殖率上升(P0.05),凋亡率下降(P0.05),caspase-3和Bax的蛋白表达下调(P0.05),Bcl-2的蛋白表达上调(P0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达下调(P0.05),p65和p-IκB-α的蛋白水平降低(P0.05)。结论:PGRN过表达可以减轻LPS诱导的A549细胞和HPAEpi C细胞增殖、凋亡异常及炎症因子产生等损伤,这可能与PGRN参与调控NF-κB信号通路有关。     

circSERPINE2靶向miR-34a-5p调控肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的 探讨circSERPINE2对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎症反应、细胞凋亡的影响及其对miR-34a-5p的调控作用。方法 体外培养肺泡上皮细胞A549,随机分为对照组、感染组、感染+pcDNA组、感染+pcDNA-circSERPINE2组、感染+anti-miR-NC组、感染+anti-miR-34a-5p组、感染+pcDNA-circSERPINE2+miR-NC组、感染+pcDNA-circSERPINE2+miR-34a-5p组;采用qRT-PCR法检测circSERPINE2与miR-34a-5p的表达量;采用ELISA法检测IL-10、IL-6的水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测circSERPINE2与miR-34a-5p的靶向关系。采用Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果 与对照组比较,感染组circSERPINE2的表达水平降低（P<0.05）,miR-34a-5p的表达水平升高（P<0.05）,IL-10的水平和Bcl-2蛋白水平降低（P<0.05）,IL-6的水平、细胞凋亡率和Ba...     

microRNA-499通过靶向调节SOX6抵抗缺氧诱导的神经细胞损伤

目的:探讨microRNA-499(miR-499)在缺氧诱导的PC12细胞损伤中的作用及其调控机制。方法:将PC12细胞随机分为:对照(control)组、缺氧(hypoxia)组、miR-499过表达(miR-499 mimic+hypoxia)组、mimic阴性对照(mimic-NC+hypoxia)组、SOX6过表达(miR-499 mimic+pc DNA3.1-SOX6+hypoxia)组和SOX6阴性对照(miR-499 mimic+pc DNA3.1+hypoxia)组。MTT试剂检测细胞活力;乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)试剂盒检测LDH漏出量;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶活性检测测定miR-499和SOX6的靶向关系;Western Blot检测SOX6的蛋白表达。结果:与对照组相比,缺氧组的miR-499表达下调,细胞活性降低,LDH漏出量增加,细胞凋亡率提高;与缺氧组相比,miR-499过表达组的细胞活性提高,LDH漏出量减少,细胞凋亡率降低。MiR-499直接靶向SOX6,SOX6过表达能够逆转miR-499过表达的作用。结论:MiR-499过表达能够通过直接靶向SOX6来抵抗缺氧诱导的PC12细胞损伤,提高细胞活力,减少LDH漏出量,并降低细胞凋亡率。     

甘草己烷-乙醇提取物通过miR-151a-5p/GABARAPL1轴调控前列腺癌细胞增殖、凋亡北大核心CSCD

目的:探讨甘草己烷-乙醇提取物(HEGU)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及分子机制。方法:人前列腺癌细胞PC-3分为对照(NC)组、不同剂量HEGU组、anti-con组、anti-miR-151a-5p组、HEGU+miR-con组、HEGU+miR-151a-5p组。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达;RT-qPCR检测miR-151a-5p和GABA A型受体相关蛋白样1(GABARAPL1)mRNA表达;双荧光素酶报告实验检测miR-151a-5p与GABARAPL1的靶向关系。结果:与NC组相比,不同剂量HEGU组前列腺癌细胞活性降低,凋亡率升高,CyclinD1、Bcl-2表达降低,p21、Bax表达升高,miR-151a-5p表达降低,GABARAPL1 mRNA表达升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。与anti-con组相比,anti-miR-151a-5p组细胞活性降低,凋亡率升高,CyclinD1、Bcl-2表达降低,p21、Bax表达升高(P<0.05)。miR-151a-5p靶向负调控GABARAPL1表达。过表达miR-151a-5p逆转了HEGU对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响。结论:HEGU可能通过调控miR-151a-5p/GABARAPL1抑制前列腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

下调miR-199a-5p抑制脂多糖诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞系AECⅡ凋亡

目的探讨miR-199a-5p在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清中的表达及其对脂多糖(LPS)诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞系(AECⅡ)凋亡的影响和可能机制。方法选取2017年4月至2018年12月于湖南中医药大学第一附属医院就诊的45例COPD患者和同时期45名健康体检者。体外培养AECⅡ,分为对照组(control)、LPS组(100 ng/mL LPS)、anti-miR-199a-5p+LPS组(转染miR-199a-5p抑制剂后用100 ng/mL LPS培养)、anti-miR-NC+LPS组(转染miR-199a-5p抑制剂阴性对照序列)、anti-miR-199a-5p+si-FZD4+LPS组(同时转染miR-199a-5p抑制剂与FZD4小干扰RNA)和anti-miR-199a-5p+si-NC+LPS组(同时转染miR-199a-5p抑制剂与FZD4乱序无意义阴性序列)。RT-qPCR检测血清和细胞中miR-199a-5p和FZD4 mRNA表达,流式细胞计量术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中FZD4、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a-5p与FZD4靶向关系。结果与对照组比较,COPD患者血清中miR-199a-5p表达水平显著升高(P0.05),而FZD4 mRNA表达水平显著降低(P0.05)。与对照组比较,LPS组细胞中miR-199a-5p表达水平显著升高(P0.05),而FZD4 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。与anti-miR-NC+LPS组比较,anti-miR-199a-5p+LPS组细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。miR-199a-5p靶向调控FZD4,与anti-miR-199a-5p+si-NC+LPS组比较,anti-miR-199a-5p+si-FZD4+LPS组细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论 miR-199a-5p在COPD患者血清及LPS诱导的AECⅡ中表达升高,下调miR-199a-5p表达可能通过上调FZD4表达抑制LPS诱导的AECⅡ凋亡。