用漏出液代替标准培养基培养人体外周血淋巴细胞

用漏出液代替标准培养基培养人体外周血淋巴细胞生物学教研室肖桂芝，刘朝晖，冯立新关键词培养基，淋巴细胞，有丝分裂指数培养人体外周血淋巴细胞一般是用Ｍ１９９、ＲＰＭＩ１６４０、ＨａｍＦ１０等标准培养基，但标准培养基均由国外购进，价格比较昂贵，不利于基层及...     

胸腹水与血清葡萄糖比值的检测及意义

目的探讨患者胸腹水和血清中葡萄糖浓度联合测定对良、恶性胸腹水及对渗出液、漏出液鉴别的意义。方法将127例胸腹水患者按良、恶性分为两组,良性胸腹水组65例,恶性胸腹水组62例;根据胸腹水形成原因又将127例胸腹水分为渗出液和漏出液两组,渗出液82例,漏出液45例,分别对两组胸腹水和相对应血清中葡萄糖联合测定,并对检测结果进行比较分析。结果良性胸腹水组和恶性胸腹水组中的葡萄糖浓度比较无统计学差异（P﹥0.05）;良性胸腹水组和恶性胸腹水组中胸腹水与血清葡萄糖比值比较有统计学差异（P〈0.05）;渗出液组和漏出液组的葡萄糖浓度比较有统计学差异（P〈0.05）;渗出液组和漏出液组中胸腹水和血清葡萄糖比值比较有统计学差异（P〈0.05）。结论胸腹水中葡萄糖浓度及胸腹水与血清葡萄糖浓度比值联合测定对鉴定胸腹水的性质以及对渗出液和漏出液的鉴别具有一定的价值。     

刺五加皂苷的抗辐射损伤作用

目的：探讨刺五加皂苷 (ASS)对X射线照射小鼠抗辐射损伤的作用。 方法：将小鼠50只随机均分为阴性对照组、阳性对照组及低、中、高剂量ASS实验组。测定小鼠脾指数、胸腺指数、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,并测定淋巴细胞转化率和外周血白细胞数。 结果：3个ASS实验组小鼠各项指标与对照组比较,脾指数差异无显著性（P>0.05）,胸腺指数、淋巴细胞刺激指数、血清SOD和GSH-Px活性差异均有显著性（P<0.05）。 结论：ASS对辐射小鼠具有一定的抗辐射和抗氧化作用。     

胸腹水与血清胆固醇联合测定对胸腹水性质的鉴别诊断意义

目的探讨患者胸腹水和血清中胆固醇浓度联合测定对良、恶性胸腹水以及渗出液、漏出液鉴别的临床意义。方法将127例患者的胸腹水分为两组,良性胸腹水组65例,恶性胸腹水组62例,根据胸腹水形成原因又将127例胸腹水分为渗出液和漏出液两组,渗出液82例,漏出液45例,分别对两组胸腹水和相对应血清中胆固醇测定,并对检测结果进行比较分析。结果良性胸腹水组和恶性胸腹水组中的胆固醇浓度结果比较有统计学差异（P〈0.01）;良性胸腹水组和恶性胸腹水组中胸腹水/血清胆固醇比值比较有统计学差异（P〈0.05）;渗出液组和漏出液组的胆固醇浓度比较有统计学差异（P〈0.01）;渗出液组和漏出液组中胸腹水/血清胆固醇比值比较有统计学差异（P〈0.01）。结论胸腹水中胆固醇浓度和胸腹水/血清胆固醇比值联合测定对鉴定胸腹水的性质以及对渗出液和漏出液的鉴别具有一定的价值。     

新生儿外周血染色体细胞培养技术的适当改良

目的 提高新生儿外周血染色体细胞培养成功率.方法 本文共收集42例新生儿样本.用经适当改良法培养:离心沉淀法获取富集T淋巴细胞全血层;接种量减至0.1 ml/每5ml 1640培养基;延时培养至96h实施阻断(其中前20份样本同时作常规法培养对比).计算淋巴细胞转化率、有丝分裂相比率对培养效果进行评估.结果 常规组淋巴细胞转化率为71.95%,分裂相比率为6.92%;改良组淋巴细胞转化率为86.95%,分裂相比率为9 59%,两种培养效果之间有显著性差异,P<0.05.结论 对新生儿外周血染色体细胞培养经过适当的改良,效果满意.     

腹膜透析液添加丹参酮IIA对氧化应激状态的影响

目的:观察在腹膜透析液中添加丹参酮ⅡA对腹膜透析患者腹腔局部及全身氧化应激状态的影响。方法:将38例终末期肾脏病行持续非卧床腹膜透析治疗的患者随机分为实验组和对照组,每组19例。实验组在腹膜透析液中添加丹参酮ⅡA注射液(每1 L腹膜透析液中加入5 mg丹参酮ⅡA注射液),对照组腹膜透析液中不加丹参酮ⅡA注射液。两组均行标准持续非卧床腹膜透析(每次2 L,每日交换4次)治疗,第23天比较两组患者用药前后血清及透出液氧化应激指标[谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物岐化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)]以及透析充分性等指标的变化。结果:实验组患者血清及透出液中GSH、T-SOD均较用药前显著升高(P<0.01或P<0.05),MDA显著降低(P<0.05),患者血清白蛋白、总肌酐清除率(Ccr)、尿素氮清除指数(KT/V)、超滤无明显变化。实验组与对照组比较,患者血清及透出液中GSH、T-SOD显著升高(P<0.05),MDA显著降低(P<0.05)。结论:在腹膜透析液中短期应用丹参酮ⅡA可以改善患者腹腔局部及全身的氧化应激状态。     

应用DispaseⅡ与淋巴细胞分层液获取高纯度基底细胞

目的　尝试应用DispaseⅡ分离酶获得含有完整基底细胞的表皮 ,再经淋巴细胞分层液收集活性强、生长快的基底细胞。探讨这样的细胞能否加快生长 ,缩短培养周期。方法　取植皮术后所剩中厚皮 ,经Dis paseⅡ处理后 ,用镊子分开表皮与真皮 ,表皮经胰酶进一步消化后 ,把细胞悬液通过淋巴细胞分层液将收集到的细胞作为实验组。以Tr法分离的表皮细胞作为对照组 ,两组间就细胞数、生长速度 ,克隆形成率与成膜时间进行比较。结果　所得数据经统计学处理显示 :实验组细胞的生长速度、克隆形成率与成膜时间比对照组明显加快。两组间有显著差异 (P <0 0 0 1)。结论　应用DispaseⅡ与淋巴细胞分层液能获得纯度高、活性强、增殖快的基底细胞。可以缩短培养周期 ,具有重要的临床意义。     

腹膜透析液添加葛根素对氧化应激状态的影响

目的:观察在腹膜透析(PD)液中添加葛根素对PD患者腹腔局部及全身氧化应激状态的影响。方法:38例终末期肾病连续性非卧床腹膜透析(CAPD)治疗患者,随机分为实验组和对照组,每组19例。实验组在PD液中添加葛根素注射液(50mg/2 L),对照组PD液中不加药,均行标准CAPD治疗,每次2 L,4次/d,观察16 d。比较两组患者用药前后血清及透出液氧化应激指标:谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物岐化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)以及透析充分性指标的变化。结果:用药后实验组患者血清及透出液GSH、T-SOD均较用药前显著升高(P<0.05),透出液MDA在用药后显著降低(P<0.05),患者血清清蛋白、总肌酐清除率(Ccr)、尿素氮清除指数(K t/V)、每天超滤量无明显变化。结论:在PD液中短期应用葛根素,可改善患者腹腔局部及全身的氧化应激状态。     

白血病患者染色体脆性部位的研究

采用低叶酸低小牛血清的培养基,对10例白血病患者和9例正常对照的外周血淋巴细胞染色体畸变率和脆性部位进行了研究。结果在实验组中观察910个中期分裂相有118个畸变位点(畸变率为12.97％),显著高于对照组(7.85％)。实验组脆性部位的表达率为8.3％,而对照组为4.88％,二者比较差异亦具有显著意义(x~2=8.34,P<0.01)。提示白血病患者存在着明显的染色体不稳定性。     

饲用金霉素对实验小鼠免疫器官生长发育及T、B淋巴细胞功能的影响

不同水平金霉素(0,50,150mg/kg) 饲喂BALB/c 小鼠,于第4 周和第8 周测定免疫器官指数和脾脏T、B淋巴细胞在ConA和LPS刺激下的转化率,镜下观察脾脏、胸腺的组织学变化。结果表明:B组(50mg/kg) 脾脏指数和B、C组(150mg/kg)T淋巴细胞转化率高于A组,其余免疫指标试验组与对照组无显著差异。提示用于促生长作用的饲用金霉素(0 ～50mg/kg) 对BALB/c 小鼠免疫器官的生长发育及T、B淋巴细胞功能没有抑制作用     

人脐血T细胞活化的某些可视化特征

目的 探讨人脐血T淋巴细胞活化的可视化特征.方法 将人脐血T细胞在RPM11640完全培养摹中培养,分成两组:实验组加入抗CD3McAb(10 ms/L)和适当浓度的PHA活化;对照组不加CD3McAb和PHA.测定细胞活率,倒置显微镜下观察T细胞活化的特征;制备细胞超薄切片,透射电镜下观察分析并摄影.结果 活化T细胞形态良好,分裂象细胞多数不规则,胞核清晰,体积明显增大;生长旺盛的细胞区域可见到细胞集落.透射电镜下活化T细胞的染色质凝集,核仁数多而明显;典型的活化细胞巾有较多空泡(特征性可视化结构).结论 人脐血T淋巴细胞活化的主要特征是细胞体积增大;染色质凝集,胞质中可出现空泡;形成细胞集落.     

氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸抗辐射损伤作用及其机制

目的探讨氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的抗辐射损伤作用及其机制。方法将培养的人正常肝细胞株L02细胞分为3组:对照组、照射组和照射+NAD+组。对照组细胞不予照射,直接加入不含NAD+的RPMI-1640培养基培养;照射组细胞照射后加入不含NAD+的RPMI-1640培养基培养;照射+NAD+组细胞照射后加入含有NAD+(终浓度1 g.L-1)的RPMI-1640培养基培养。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测NAD+对受照射L02细胞生长活性的影响;应用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白p53、bax、bcl-2阳性表达率和各周期细胞含量;采用Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3活性。结果细胞受照射后加入NAD+能够对抗X射线照射对L02细胞的生长抑制作用,细胞生长活性较照射组细胞活性显著提高;L02细胞在受照射后p53、bax蛋白表达增加,bcl-2表达下调,Caspase-3活性增加,而且细胞周期表现为G1期阻滞;受照射后加入NAD+,则p53、bax蛋白表达下调,bcl-2表达增加,Caspase-3活性下降,G2/M期细胞比例明显增加。结论 NAD+可对抗L02细胞的X线辐射损伤,其作用机制可能通过下调p53、bax与上调bcl-2表达以及抑制Caspase-3活性,抑制受照射细胞凋亡。     

大黄酚对LoVo细胞AQP2表达的调节效应

目的：探讨大黄酚对体外培养LoVo细胞AQP2表达的调节效应.方法：体外培养LoVo细胞,随机分为对照组,大黄酚10,20,40mg/L不同浓度组.间接免疫荧光定性LoVo细胞AQP2表达,WesternBlot、半定量RT-PCR检测药物处理24h后AQP2蛋白及mRNA表达.体外培养LoVo细胞后,随机又将细胞分为对照组,大黄酚40mg/L组,PKA激动剂8-Bromo-cAMP10mg/L组,大黄酚40mg/L＋PKA激动剂8-Bro-mo-cAMP10mg/L组.非放射性法检测药物处理24h后LoVo细胞PKA的活性水平.结果：AQP2表达于LoVo细胞膜,药物处理24h后,大黄酚20,40mg/L组AQP2蛋白分别为（0.64±0.08）,（0.46±0.09）显著低于对照组（0.83±0.05）,（P〈0.01）;AQP2mRNA分别为（0.50±0.12）,（0.39±0.09）,显著低于对照组（0.73±0.08）,（P〈0.01）.40mg/L大黄酚组PKA活性（0.54±0.08）显著低于对照组（0.78±0.10）,（P〈0.05）.结论：大黄酚可抑制LoVo细胞AQP2基因转录与翻译.大黄酚对AQP2表达的调节效应可能与大黄泻下作用有关,其可能是通过PKA信号通路调节AQP2的表达.     

RGD肽保护大鼠胰岛活性和功能的实验研究

目的探讨RGD肽对分离纯化后的胰岛活性和功能的影响。方法将实验大鼠分成两组：1640组和RGD组。采用Ficoll不连续密度梯度离心纯化胰岛,浓度分别为：27％、25％、23％、20．5％和11％。1周后,用丫啶橙／溴乙啶（AO／EB）荧光染色观察RGD肽对胰岛活性的影响。胰岛素分泌功能检测：采用放免法检测培养液中胰岛素含量,计算胰岛素释放指数（SI）。流式细胞仪检测：caspase-9和磷酸化Akt阳性细胞比例,观察RGD肽对caspase-9及Akt的影响。结果采用改良梯度离心法,平均每只大鼠可获约600IEQ～700IEQ胰岛,YO／EB荧光染色,结果显示刚分离后胰岛活率〉95％。1640组培养1周后胰岛分泌指数为1．64±0．28,RGD组胰岛分泌指数为2．28±0．16,较1640组明显增加,差异具有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞仪检测结果表明胰岛1640组培养1周后,激活的caspase-9为（22．66±3．56）％,RGD组激活的caspase-9为（10．54±1．96）％,较1640组明显降低13％,且其差异具有统计学意义（P〈0．05）;检测RGD对Akt磷酸化的影响,胰岛1640组培养1周后,Akt磷酸化占（31．47±4．08）％,RGD组磷酸化Akt占（61．054±6．03）％,较1640组明显升高,其差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论RGD可通过Akt／PKB的磷酸化抑制细胞凋亡。     

含AB型血清培养体系人角质形成细胞培养

目的：探讨人体角质形成细胞的培养技术，观察人角质形成细胞生长的过程，为培养角质形成细胞膜片提供新的方法。方法：采用改良后的含胎牛和人AB型血清培养体系进行人角质形成细胞的培养。结果：含人AB型血清培养体系培养的角质形成细胞5d融合达70％，9d达90％，11d完全融合，细胞分裂指数高峰在9d左右，可达1．1％，而不合AB型血清组培养的细胞5d后即出现退化样生长，不形成细胞膜片。进一步对含A13型血清的不同培养系统进行培养，将增殖高峰期培养的角质形成细胞应用MTT比色法测细胞增殖活性，进行比较，P〉0．05，表明添加F12、TC199、1640后对培养的角质形成细胞增殖作用无差异。结论：人AB型血清能够对体外培养的角质形成细胞生长起到刺激作用。     

Effects of ultraviolet-irradiated urocanic acid on IL-10 secreted by T lymphocytes

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｆｕｒｔｈｅｒｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ（ＵＶ）ｉｒａｄｉａｔｅｄｕｒｏｃａｎｉｃａｃｉｄ（ＵＣＡ）ｏｎＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ,ｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｃｉｓＵＣＡｏｎＴｌｙｍｐｈｏｃ...     

两种不同培养基体外培养阴道毛滴虫的增殖效果比较

目的 筛选阴道毛滴虫体外生长的适宜培养基.方法 分别配制RPMI-1640和半胱氨酸-肝-胨-麦芽糖(肝浸汤)培养基培养基,并接种阴道毛滴虫,接种密度为12.5×104个/mL,pH值为5.8,置37 ℃恒温箱培养.血球计数板计数阴道毛滴虫增殖密度并计算增殖倍数,光镜观察虫体形态.结果 阴道毛滴虫在pH 5.8的环境中...     

尿毒血清对HK-2细胞增殖和胶原蛋白分泌的影响

目的探讨尿毒血清对人肾上管上皮细胞侏（HK-2）增殖和胶原蛋白分泌的影响。方法在HK-2细胞培养液中加入正常人血清及不同浓度的尿毒血清，采用四氮甲基唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术测定HK-2细胞增殖活性的变化；采用消化法检测细胞培养上清中羟脯氨酸的含量，换算成总胶原分泌量。结果5％-20％浓度尿毒血清组A490值均高于正常对照组，10％-20％浓度尿毒血清组G1期细胞均低于正常对照组，P1指数均高于正常对照组，但不同浓度尿毒血清组组间差异无统计意义；各浓度尿毒血清组羟脯氨酸和胶原蛋白含量较正常对照组增高，且随着尿毒血清浓度的升高而增高。结论慢性肾衰竭患者体内蓄积的尿毒症素可能通过促进肾小管上皮细胞增殖，促进细胞外基质的分泌，从而加速肾小管一间质纤维化进程，导致肾功能进行性恶化。     

12-脂氧化酶影响胃癌细胞AGS中P21及bcl-2的表达

目的 研究12-脂氧化酶(12-LOX)对胃癌细胞中P21、bcl-2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2) 表达的影响及与ERK1/2信号传导通路的关系.方法 胃癌细胞AGS常规培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中24 h至对数生长期,改用无血清RPMI-1640培养基培养24 h加入干预药物.P21...     

Release of colony-stimulating activity by resting and activated monocytes, T cells and B cells

Purified populations of monocyte, T lymphocyte, and B lymphocyte from normal human peripheral blood were used for the investigation of elaboration/release of granulocyte-macrophage colony-stimulating activity (GM-CSA). Cell separation was performed by a series of techniques including density-cut centrifugation, adhering incubation, carbonyl iron ingestion and E rosette formation. The purity of the isolated cell population was over 95% with a mean viability of 98%. After collection, the cells were resuspended at a concentration of 1 x 10(6)/ml in RPMI-1640 medium containing 5% fetal calf serum and incubated for 7 days at 37 degrees C to prepare conditioned media (CM) for assay of GM-CSA. The results showed that the monocytes could constitutively secrete a considerable amount of GM-CSA, whereas no CSA was produced by T cells or B cells under normal conditions. All the three cell populations released GM-CSA when activated by mitogen stimulation. Monocyte-derived GM-CSA production was greatly enhanced by zymosan (Zym), lipopolysaccharide (LPS) and concanavalin A (Con A), resulting in an augmentation approaching 3 to 4 times the untreated control. For T lymphocytes, the most contributive stimulants to induce GM-CSA release were phytohemagglutinin (PHA) and Con A, while Zym and LPS were not effective. B lymphocytes, after treatment with pokeweed mitogen (PWM) or PHA, were also capable of releasing large amounts of GM-CSA with a peak level near to PHA-stimulated T lymphocytes. The finding suggested that, when activated, B cells may participate in the inflammatory response and in the regulation of granulopoiesis.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)