大鼠脑干损伤GAP-43、NOS3、HIF-1α的表达及其表达时相的相关性研究

目的探讨大鼠脑干损伤后组织的GAP-43、NOS3、HIF-1α的表达特点及其与不同损伤时间的相关性。方法雄性Wistar大鼠55只,采用撞击法制作大鼠机械性脑干损伤动物模型,采集损伤后1h～14d内9个不同时间点的脑干组织,另设正常对照组及假损伤组。采用免疫组化SP法检测GAP-43、NOS3和HIF-1α不同时间点的表达变化及其时相的相关性。结果 GAP-43阳性表达在脑干损伤后3h表达增高,并与正常对照组和假损伤组比较差异均具有统计学意义。7d达高峰,并与正常对照组、假损伤组及邻近上组比较差异具有统计学意义。14d降至正常,与正常对照组及假损伤组比较差异无统计学意义;NOS3在损伤后1h表达增加,并与正常对照组和假损伤组比较差异具有统计学意义。9h达到高峰,并与正常对照组、假损伤组及邻近上组比较差异具有统计学意义,7d表达至正常,与正常对照组及假损伤组比较差异无统计学意义;HIF-1α在损伤后3h阳性表达增加,并与正常对照组和假损伤组比较差异具有统计学意义,24h达到高峰,并与正常对照组、假损伤组及邻近上组比较差异具有统计学意义,7d降至正常,与正常对照组及假损伤组比较差异无统计学意义。结论大鼠脑干损伤后GAP-43、NOS3、HIF-1α表达均有上调,且各自呈一定的时序性变化规律,可望为法医学脑干损伤早期时间的推断提供参考。     

5-HT在急性原发性脑干损伤组织中表达的临床价值

目的:探讨急性原发性脑干损伤(acute primary brain stem injury)后脑干中5-Ht能神经元内色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase,t PH)含量的变化同伤后神经行为学评分的关联及其临床价值。方法:54只s Pf系列雌性sd大鼠随即分为6组,每组9只,一组为对照组,其余的大鼠用自制自由落体机械打击装置(参照Marmarou’s模型)[1]复制急性原发性脑干损伤大鼠模型,伤后分6h~7 d不同时段的6个损伤组,用免疫组化技术和病理切片分析观察脑干5-Ht能神经元内t PH含量的变化。结果:急性原发性脑干损伤后t PH在大鼠脑干组织中低表达10%(1/10);Hif-1α在sa P组肾组织中高表达分别为60%(6/10)、90%(9/10)、80%(8/10)。差异有统计学意义(P0.05)。实验组中6h组、12h组、24h、3d组中t PH表达量随时间延长,表达有增高趋势,7d后表达开始下降;差异有统计学意义(P0.05)。神经行为学评分、Pt H具有呈负相关关系,差异有统计学意义(P0.05)。结论:急性原发性脑干损伤后5-Ht神经元t PH表达增强,可能与脑损伤后神经元的应激反应有关。可能在急性原发性脑干损伤早期具有准确评估急性肾损伤严重程度的临床价值。     

脑干损伤后脑干中5-羟色胺的表达对继发性脑干损伤的影响

目的:探索5-TH在大鼠脑干损伤模型中不同时间段表达水平的不同对脑干继发性损伤的影响。方法:采用Marmarou自由落体打击装置对实验组雌性SD大鼠复制脑干损伤模型,于伤后6h、12h、24h、3d、7d取脑干组织,经HE染色和免疫组化等技术研究脑干损伤后脑干中5-HT的动态变化规律与脑干继发性损伤关系。结果:5-HT于伤后3h表达开始增强,并在6h达到高峰,在12h之后开始逐渐减少直至恢复。并且相对应的正常的神经元个数和5-HT个数成负相关。且阳性染色见于脑干中缝核群和周围神经网状结构中。结论:5-羟色胺作为神经递质以及炎性反应物只在脑内高表达,并且大部分5-羟色胺神经元局限于脑干中的中缝核群的一些核团。5-羟色胺的蓄积可以导致脑干继发性损伤。     

重度心肌挫伤心肌细胞中HIF-1表达的实验研究

目的大鼠重度心肌挫伤后观察挫伤区周围心肌细胞不同时间段的HIF-1损伤后经过时间与阳性染色强度变化之间的关系。方法结合计算机彩色图像分析技术,运用免疫组织化学技术(SABC法)观察大鼠实验性重度心肌挫伤后HIF-1的染色变化。结果运用免疫组化染色观察,重度心肌挫伤后在挫伤区周围组织HIF-1α在6 h即出现轻微表达,并分别在24 h和2 d达到高峰,此后逐渐下降,至6 d仍有表达,HIF-1α在正常对照组以及死后损伤组为阴性表达。结论重度心肌挫伤后HIF-1α参与了细胞的损伤;重度心肌挫伤时间推断有可能使用HIF-1α作为死后伤和生前伤的鉴别指标。     

大鼠脑挫伤后HIF-1α的时序性表达与挫伤经过时间的推断

目的观察大鼠脑挫伤后不同时间段低氧诱导因子HIF-1α的表达变化规律,探讨其在脑挫伤过程中的作用机制及法医学实践中的应用。方法参照Feeney法建立大鼠闭合性脑挫伤模型,将实验动物分为对照组和挫伤后1h,4h,12h,48h,72h,7d,14d共8组,运用Westernblot方法检测HIF-1α蛋白的表达。结果伤后1h可观察到少量HIF-1α表达,4h后表达开始增加,48h达高峰,到14d时与对照组无明显差异。结论脑挫伤后HIF-1α的表达呈现出一定的时序性规律,有望应用于脑挫伤经过时间的法医学鉴定。     

大鼠额叶创伤后早期神经元型一氧化氮合酶的表达变化

目的观察大鼠额叶创伤后不同时间点创伤区及周边皮质神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的表达变化。方法采用成年健康SD大鼠（76只）脑额叶锐器损伤模型,随机分成空白对照组、假手术组和脑损伤组3组。于伤后0、1、3、6、12、24h等6个时间点分别采用尼氏染色法、免疫荧光组织化学方法、Western blot法来观察创伤区及周边皮质神经元的病理变化、nNOS阳性细胞和nNOS蛋白的表达变化。结果尼氏染色显示创伤区及周边皮质神经元数目减少,胞浆染色加深,尼氏小体减少,神经元突起不明显甚至消失。免疫荧光组织化学、Western blot免疫印迹显示,空白对照组及假手术组额叶皮质中偶见nNOS阳性细胞,nNOS蛋白表达量较低;伤后1h创伤区及周边nNOS阳性细胞表达开始增多,nNOS蛋白表达开始升高,6h达高峰,12h开始下降。结论大鼠额叶创伤后早期创伤区及周边皮质有nNOS的时程表达变化。     

实验性颅脑损伤鼠垂体前叶HIF-1α、Bcl-2/Bax的表达和细胞凋亡的研究

目的：探讨颅脑损伤后垂体前叶细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、Bcl-2和Bax的表达及细胞凋亡情况。方法：采用Feeney自由落体方法制作大鼠颅脑损伤模型,分别于建模后24、72 h和7 d灌注固定取材,同时设立对照组,免疫组化染色法检测HIF-1α、Bcl-2和Bax蛋白的表达,TUNEL染色法检测细胞凋亡。结果：垂体前叶组织于伤后24 h HIF-1α、Bcl-2和Bax蛋白的表达即有升高,72 h达到高峰,一直持续到伤后7 d,与对照组相比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;TUNEL染色显示凋亡细胞明显增多,且凋亡指数与HIF-1α的表达和Bcl-2/Bax的比值成规律性变化。结论：颅脑损伤后垂体前叶组织HIF-1α、Bc1-2、Bax蛋白的表达增加而诱发细胞凋亡,是颅脑损伤后垂体前叶功能紊乱的重要原因。     

HIF-1α在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元necroptosis中的表达

目的 探讨低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）是否参与缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元necroptosis.方法 原代皮质神经元培养14天,予caspase抑制剂Z-VAD-FMK（20 μmol/L）预保护30 min,缺糖缺氧2 h,再灌注0、2、6、12、24、48 h,进行LDH测定;RT-PCR测HIF-1α RNA表达;Western blot检测总HIF-1α蛋白表达情况;分别提取细胞质和细胞核蛋白,Western blot分别检测胞质、胞核内HIF-1α蛋白表达情况.结果 caspase抑制剂Z-VAD-FMK预作用30 min、缺糖缺氧2 h、再灌注2 h后培养基中LDH增加（P＜0.05）,再灌注12 h达高峰;缺糖缺氧后HIF-1α RNA表达无变化（P＞0.05）;HIF-1α总蛋白表达增加（P＜0.05）,再灌注12 h达高峰;再灌注6 h时细胞质HIF-1α蛋白表达达高峰（P＜0.05）,随后降低;再灌注12 h时,细胞核HIF-1α蛋白表达达高峰（P＜0.05）,随后降低.结论 HIF-1α参与缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元necroptosis.     

HIF-1α表达在新生大鼠缺氧/缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡中的作用

目的 探讨缺氧缺血性脑损伤时缺氧诱导因子la(HIF-1a)表达及其与神经元凋亡的关系.推测HIF-1α在神经元凋亡中所起的作用.方法 10日龄SD大鼠分为假手术组、单纯缺氧组和缺氧缺血组,在缺氧后4、8和24 h处死取脑.免疫组织化学方法检测HIF-1α、凋亡标志蛋白activated caspase-3的表达,TUNEL法检测凋亡细胞,HE染色观察脑组织病理改变.结果 单纯缺氧组和缺氧缺血组HIF-1α的表达趋势相似,予缺氧后4 h升高,8 h达到高峰,24 h后下降.Activated caspase-3在两组中的表达趋势也相似,于缺氧后4 h、8 h有少量表达,24 h明显升高,TUNEL染色显示缺氧后随着时间的延长凋亡细胞数逐渐增多,24 h时明显增高.HE染色显示单纯缺氧和缺氧缺血组神经细胞有不同程度的损伤,24 h时细胞损伤程度重,细胞溶解缺失明显.对同一时间点的上述指标进行比较,单纯缺氧组HIF-1α表达高于缺氧缺血组(P<0.05),activated caspase-3表达、TUNEL阳性细胞及细胞损伤程度则低于缺氧缺血组(P<0.05).结论 缺氧缺血脑损伤时,HIF.1α表达与activated caspase.3表达趋势相反,HIF-1α表达量与损伤程度呈反相关关系.推测HIF-1α可能对神经元有保护作用.     

脑干中5-羟色胺的表达对诊断原发性脑干损伤的意义

目的探索5-TH在大鼠脑干损伤模型中不同时间段表达水平的不同及其对脑干损伤的诊断意义和恢复评估。方法采用Marmarou自由落体打击装置对实验组雌性SD大鼠复制脑干损伤模型,于伤后6h、12h、24h、3d、7d取脑干组织,经HE染色和免疫组化等技术研究脑干损伤后脑干中5-HT的动态变化规律。并通过5-HT的表达,研究5-HT表达与脑干损伤后恢复的关系。结果实验组可见典型脑干损伤表现,其病理改变为脑血管收缩与扩张,脑干水肿,细胞周围间隙增宽,脑干实质散在点状出血,微血管充血、管周水肿。5-HT于伤后3h表达开始增强,并在6h达到高峰,在12h之后开始逐渐减少直至恢复。阳性染色见于脑干中缝核群和周围神经网状结构中。结论脑干损伤后病理改变有5-HT的参与,且5-HT的异常表达可以对脑干损伤后的恢复及预后有一定影响,对今后的研究方向有一定指导意义。     

原花青素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后视神经的保护作用

目的探讨原花青素对大鼠高眼压视网膜缺血再灌注损伤后视神经的保护作用。方法用眼内灌注法,前房灌注林格液制成实验性高眼压视网膜缺血再灌注损伤模型。将70只Wistar大鼠随机分为正常对照组(10只)、模型对照组(30只)和原花青素干预组(30只)。模型对照组和原花青素干预组根据再灌注的时间不同分为1、3和7 d组,每组各10只。各组于造模前5 d开始用药,原花青素干预组每天用原花青素混悬液300 mg.kg-1灌胃,正常对照组、模型对照组分别给予灌注等量蒸馏水,每日分2次给药。造模后各组仍继续按原方案给药。造模后分别在1、3、7 d脱颈处死大鼠,迅速摘除眼球取出视网膜。利用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测各组大鼠视网膜中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的表达水平。结果再灌注1 d,模型对照组nNOS的表达水平开始增高,3 d达高峰,7 d后逐渐下降。再灌注各时间点,模型对照组视网膜内nNOS阳性表达明显增多,MDA含量持续升高,SOD活性持续下降,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。各时段原花青素干预组与模型对照组比较,视网膜内nNOS阳性神经元明显减少(P<0.01),MDA含量降低(P<0.01),SOD活性升高(P<0.01);与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论原花青素可通过提高视网膜组织中SOD活性,降低MDA含量,减少视网膜组织中nNOS表达,对大鼠视网膜缺血再灌注损伤有一定的保护作用。     

神经生长因子在病毒性心肌炎心肌中的表达及法医学意义

目的检测病毒性心肌炎(VM)患者心肌组织中神经生长因子(NGF)的表达,探讨其在病毒性心肌炎发病过程中的作用及其在法医学中的意义。方法取10例病毒性心肌炎死者心肌组织为实验组,10例颅脑损伤死者心肌组织为对照组,HE染色并采用免疫组化法(SABC法)检测NGF表达,对其表达水平与心肌病变积分进行相关性分析。结果病毒性心肌炎死者心肌组织与对照组心肌组织中NGF表达有显著性差异(P<0.05),NGF免疫组化阳性颗粒指数与心肌病变积分呈显著正相关(r=0.91,P<0.05)。结论NGF过度表达可能在病毒性心肌炎的发病机制中起重要作用,NGF对病毒性心肌炎猝死有辅助诊断价值。     

冠心病猝死鉴定中VEGF的免疫组化染色观察

目的:探讨血管内皮生长因子(Vascular EndothelialGrowth Factor,VEGF)在人体冠心病猝死(sudden coronarydeath,SCD)尸检心肌组织中的表达及其意义,从而提高SCD法医学鉴定的可靠性和准确性。方法:运用改良的免疫组织化学方法观察20例冠心病猝死组和20例非冠心病猝死对照组尸检心肌组织中VEGF的表达情况。结果:20例SCD组中有3例VEGF染色为阴性,另17例心肌梗死局部均有VEGF阳性表达,而20例非冠心病猝死组仅4例局部散在VEGF弱阳性表达,其余16例均为阴性表达。SCD组VEGF阳性表达率明显高于对照组。结论:VEGF的表达可作为法医病理学诊断SCD较为客观的病理形态学指标之一。     

高脂血症大鼠海马nNOS及NT-3免疫阳性神经元的变化

目的观察高脂血症大鼠海马中神经元型一氧化氮合酶(nNOS)及神经营养因子-3(NT-3)的变化,并探讨其临床意义. 方法采用HE和SABC免疫组织化学染色方法,结合计算机图像分析系统,比较两组海马各区平均光密度(MOD)值. 结果与对照组相比,实验组血清总胆固醇(6.65 mmol/L)及血清低密度脂蛋白胆固醇(4.41 mmol/L)升高明显,差异有显著性.实验组海马各区nNOS免疫阳性神经元MOD升高,尤以CA3区明显;NT-3免疫阳性神经元MOD降低,以CA1区最为显著.结论高脂血症大鼠海马中nNOS表达增强而NT-3表达减弱,表明高脂血症可导致海马神经元功能改变.     

高脂饮食对大鼠大脑皮质神经元型一氧化氮合酶表达的影响

目的观察高脂饮食对大脑皮质神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响。方法雄性SD大鼠60只,随机分为实验组和对照组(n=30);分别于高脂饲料喂养7 d,30 d,90 d时处死动物,测定血清总胆固醇浓度,免疫组织化学法检测nNOS表达,光镜下计数免疫阳性神经元数目。结果高脂饮食7 d,实验组血清总胆固醇浓度、大脑皮质nNOS表达和免疫阳性神经元数目与对照组比较无显著差异(P>0.05);高脂饮食30 d、90 d时,实验组血清总胆固醇浓度显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),大脑皮质nNOS表达与免疫阳性神经元数目显著增多(P<0.05,P<0.01)。结论高脂饮食可导致大脑皮质nNOS免疫阳性神经元数目增多,nNOS表达增强,nNOS可能在高脂血症导致脑皮质损伤中发挥作用。     

大鼠尾核内微量注射L-精氨酸对一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨大鼠尾核内L-精氨酸（L-Arg）、N^ω硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）、亚甲基蓝（MB）等对一氧化氮合酶（NOS）表达的影响。方法动物随机分为L-Arg组、L-NAME组、MB组和生理盐水（NS）组，用免疫组织化学结合计算机图像分析的方法观察给药后6、12、24、48和72h尾核内nNOS表达的变化。结果尾核内nNOS神经元散在表达，阳性部位主要在胞浆，神经纤维也有表达。L-Arg组nNOS神经元较正常表达增强（P〈0．05），且随着时间的延长而增强，48h达最高点。MB和L-NAME组nNOS神经元表达较正常减弱（P〈0．05），随时间延长继续减弱，48h达最低点。结论尾核内L-Arg通过NOS生成NO而发挥痛敏作用，L-NAME和MB通过抑制NOS的功能而减少NO的生成产生镇痛作用，NOS是体内合成NO的关键酶。     

糖尿病对大鼠阴茎组织中eNOS和nNOS的影响及胰岛素的治疗作用

目的:研究糖尿病(DM)对大鼠阴茎组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)蛋白表达的影响及胰岛素的治疗作用。方法:随机选取雄性SD大鼠70只,其中60只以链脲佐菌素(STZ)诱导建立DM模型后,行阿朴吗啡阴茎勃起实验,筛选DM性ED模型。以未加处理因素的10只大鼠作为正常对照组,发生ED者随机分为DM性ED组、胰岛素组,发生DM但未发生ED者作为DM组,未成DM者作为STZ组。各组干预6周后,采用免疫组织化学SP法检测各组大鼠阴茎组织中eNOS、nNOS蛋白表达。结果:DM组、DM性ED组大鼠阴茎组织中eNOS、nNOS蛋白表达水平显著低于正常对照组(P<0.01);胰岛素组显著高于DM组和DM性ED组(P<0.01),其中,eNOS蛋白表达水平接近于正常对照组(P>0.05),nNOS蛋白表达水平低于正常对照组(P<0.01);STZ组与正常对照组之间eNOS、nNOS蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)DM可以显著降低大鼠阴茎组织中eNOS、nNOS蛋白表达水平,提示其可能是DM性ED发病的重要机制之一;(2)胰岛素干预可以减缓DM性ED大鼠阴茎组织中eNOS、nNOS蛋白表达的下降。     

心脏骤停复苏犬脑组织iNOS mRNA nNOS mRNA的表达及中药的干预作用

目的：探讨复苏饮对犬心脏骤停复苏后iNOSmRNA、nNOSmRNA表达的影响。方法：在自主循环恢复180min,以逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测各组海马组织iNOSmRNA、nNOSmRNA表达的情况。结果：iNOSmRNA在假手术组未发现表达,nNOSmRNA有表达,模型组、复苏饮组iNOSmRNA、nNOSmRNA的表达均比假手术组的表达明显增高（P〈0.01,P〈0.05）,模型组iNOSmRNA、nNOSmRNA表达又明显高于复苏饮（P〈0.05）。结论：复苏饮抑制iNOSmRNA、nNOSmRNA的表达,是其脑保护作用机制之一。     

质子磁共振波谱分析在原发性脑干损伤中的应用

目的 通过质子磁共振波谱(1H-proton magnetic resonance spectroscopy,1 H-MRS)研究原发性脑干损伤(primary brain stem injury,PBSI)患者局部神经异常代谢状态及其与预后的关系.方法 36例PBSI患者在伤后3 h～16天行1H-MRS检测,分析...     

关于推进《法医毒理学》教学改革的几点建议

法医毒理学是法医学中重要的一门课程,作为法医学教育的重要组成部分,提高其教学质量对培养合格的法医学人才具有重要意义。它具有内容多、应用性强、学科交叉、更新快等特点。为提升《法医毒理学》的教学,应从着重培养中毒诊断思路、学生自主学习意识、教材及时更新并引进新的研究应用方法这几个方面探索改进。