Baclofen对机械分离的大鼠海马锥体细胞GABA-激活电流的抑制作用

在机械分离的海马锥体细胞上,应用全细胞膜片钳技术。证明大多数细胞(88.5％,46／52)对GABA敏感。10-5-10-3mol／L的GABA引起一剂量依赖性、有明显去敏感作用的内向电流。预加3×10-5mol／L baclofen(GABAB受体的特异性激动剂)30 s后再加GABA,84.8％(39／46)的细胞GABA-激活电流被抑制,其中仅有一个细胞(2.2％,1／46)GABA-激活电流幅值增强,13％(6／46)的细胞GABA-激活电流幅值无变化。预加baclofen后,GABA-激活电流量-效曲线明显下移。预加baclofen前后IGABA量效曲线的Kd值非常接近(1.0×10-4 vsl.4×10-4 mol／L)。经saclofen预处理可消除baclofen对GABA-激活电流的抑制。这与我室以往在外周神经元上的研究结果一致。本文结果不仅证明了GABAA和GABAB受体在海马锥体细胞上的共存,而且也证明了GABAB受体激活后对GABAA受体功能抑制这一现象无论在外周或中枢神经系统均具有普遍性。     

碱性成纤维细胞生长因子对人卵巢癌CAOV3细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78表达的影响

目的： 研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）与人卵巢癌CAOV3细胞凋亡的关系及葡萄糖调节蛋白78（GRP78）表达的变化,探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖,抑制凋亡的信号机制。方法：利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF组、PKB抑制剂组。应用流式细胞术、Annexin V/PI双荧光染色法观察bFGF对CAOV3细胞增殖及凋亡的影响。利用Western blotting、RT-PCR检测bFGF对PKB、GRP78表达的影响。结果：bFGF呈剂量依赖性激活PKB信号通路,呈时间依赖性促进GRP78 mRNA及蛋白表达（P＜0.01）。与对照组相比,bFGF可加速CAOV3细胞的细胞周期进程,促进细胞增殖,抑制无血清培养诱导的细胞凋亡。PKB特异性抑制剂wortmannin可阻断bFGF的上述作用。结论：bFGF可能通过PKB信号通路上调GRP78的表达,促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。     

碱性成纤维细胞生长因子对人卵丹巢癌CAOV3细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78表达的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）与人卵巢癌CAOV3细胞凋亡的关系及葡萄糖调节蛋白78（GRP78）表达的变化,探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖,抑制凋亡的信号机制。方法：利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF组、PKB抑制剂组。应用流式细胞术、AnnexinV／PI双荧光染色法观察bFGF对CAOV3细胞增殖及凋亡的影响。利用Western blotting、RT—PCR检测bFGF对PKB、GRP78表达的影响。结果：bFGF呈剂量依赖性激活PKB信号通路,呈时间依赖性促进GRV78mRNA及蛋白表达（P〈0．01）。与对照组相比,bFGF可加速CAOV3细胞的细胞周期进程,促进细胞增殖,抑制无血清培养诱导的细胞凋亡。PKB特异性抑制剂wortmannin可阻断bFGF的上述作用。结论：bFGF可能通过PKB信号通路上调GRP78的表达,促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。     

地塞米松对C6胶质瘤细胞细胞周期的影响

目的:研究地塞米松(Dex)对C6胶质瘤细胞细胞周期和增殖的影响。方法:在培养的C6胶质瘤细胞中加入不同浓度(0 mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L和10-3mol/L)的Dex,作用不同的时间(6、12和24 h)后取材,运用细胞计数和流式细胞仪检测C6胶质瘤细胞的增殖情况、细胞周期及凋亡。结果:10-3mol/L的Dex诱发了C6胶质瘤细胞的凋亡。24 h时,4个组的C6胶质瘤细胞凋亡率依次为0.37、0.52、0.39和8.24;4个组的C6胶质瘤细胞个数依次为4.37×106、4.29×106、3.57×106和3.44×106,后3组与第1组有明显的差异;4个组的C6胶质瘤细胞增殖指数依次为17.58、6.79、6.29和22.48,前3组随浓度增加而增加,第4组例外。结论:Dex对C6胶质瘤细胞的细胞周期进程有明显的抑制作用。10-4mol/L以下的浓度抑制其由G1期向S期的转换,10-3mol/L剂量的Dex可能抑制C6胶质瘤细胞由G2期向M期的转换或阻滞细胞在S期。大剂量的Dex(10-3mol/L)可引起C6胶质瘤细胞凋亡。     

bFGF对卵巢癌CAOV3细胞Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad表达的影响

目的研究bFGF调控卵巢癌CAOV3凋亡的信号通路及对Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad表达的影响。方法无血清饥饿诱导细胞凋亡。分为饥饿对照、bFGF、bFGF PD98059、bFGF Wortmannin组。流式细胞术、DNA Ladder检测细胞凋亡;Western印迹法检测ERK、PKB、Bad活性以及Bcl-2、Bax表达,RT- PCR检测Bcl-2、Bcl-xl mRNA变化。结果bFGF促进p-ERK、p-PKB、p-Bad、Bcl-2表达,抑制Bax表达及饥饿诱导的细胞凋亡。激酶抑制剂PD98059可抑制bFGF对ERK、Bcl-2、Bax的调节作用,Wortmannin可抑制bFGF对PKB、Bad、Bax的调控作用,二者均可阻断bFGF对凋亡的抑制作用。bFGF对Bcl-xl表达无影响。结论bFGF可能通过激活MEK/ERK、P13K/PKB信号途径通路调节Bcl-2、Bax、Bad表达,抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。     

AM1241抑制ADPβS诱发培养大鼠脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体表达及炎症因子释放

目的:离体条件下,观察大麻素CB2受体激动剂AM1241对嘌呤P2Y受体激动剂ADPβS诱发的脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA表达以及炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α释放的影响。方法:培养纯化新生SD大鼠(3 d)脊髓背角小胶质细胞,荧光定量PCR技术检测AM1241(10~(-5)mol/L,1 h)对ADPβS(10~(-5)mol/L,3 h)诱发的背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA表达的影响;ELISA技术检测AM1241(10~(-5)mol/L,1 h)对ADPβS(10~(-5)mol/L,3 h)诱发的小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α释放的影响。结果:与正常对照组相比,ADPβS(10~(-5)mol/L,3 h)可以刺激脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体在mRNA水平表达上调(P0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α释放相应增加(P0.05)。AM1241(10~(-5)mol/L,1 h)几乎完全阻断ADPβS刺激小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA表达上调以及IL-1β、IL-6和TNF-α释放的效应(P0.05);AM1241的这种抑制效应可以被CB2受体拮抗剂AM630(10~(-5)mol/L,1 h)反转(P0.05)。结论:大麻素CB2受体激活可以抑制ADPβS诱发的脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA水平表达上调以及IL-1β、IL-6和TNF-α释放。     

环胞素A对IL-4等合成的影响

<正>本文观察环胞素A(C_3A)对哮喘患者PBMC合成IL-4、IL-5、IgE的抑制作用.1 材料和方法1.1 对象 临床确诊为哮喘的病人20例,均为缓解期,1周内均未使用糖皮质激素.β-受体兴奋剂和茶碱类药物.另以10例健康人为对照组.1.2 实验方法1.2.1 单个核细胞(PBMC)的分离和培养:按常规用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,并调整细胞浓度为2×10~6/ml,将健康对照和哮喘患者的PBMC加在含有100mg/L PHA的RPMI-1640培养剂中.此外,在PHA(100mg/L)刺激的同时,将哮喘病人的PBMC分别加在含有1×10~(-6)mol/L、2×10~(-6)mol/L、3×10~(-6)mol/L C_sA的RPMI-1640培养剂中.37℃、5%CO_2温育48h,离心,收集上清,-80℃     

PKB在人上皮性卵巢癌中的表达及P13K抑制剂Wortmannin对细胞增殖的影响

目的检测蛋白激酶B(PKB)在上皮性卵巢癌组织中的表达,以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂wortmannin对卵巢癌细胞株CAOV3细胞增殖的影响,探讨PI3K/PKB信号传导通路在卵巢癌发生发展中的意义。方法应用RT-PCR和western印迹方法对50例上皮性卵巢癌组织PKB的表达进行了分析。通过MTT比色法,观察wortmannin对卵巢癌细胞增殖的影响。流式细胞仪测定wortmannin对细胞周期的影响。结果PKBmRNA在上皮性卵巢癌组织中表达,与正常卵巢、卵巢瘤样病变及卵巢良性肿瘤相比,无显著差异(P>0.05);western印迹检测见上皮性卵巢癌组织中磷酸化PKB蛋白条带深于正常卵巢、卵巢瘤样病变及卵巢良性肿瘤组织,量化后比较差异显著(P<0.05),且在Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌中的表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.0 5)。加入wortmannin后,CAOV3细胞株增殖比明显下降,其增殖下降程度与wortmannin浓度呈显著正相关,在wortmannin的作用下,由GO+G1期进入S和G2+M期的细胞明显减少,并在一定浓度范围内成剂量依赖性,与对照组比较,差异显著。结论磷酸化PKB蛋白与上皮性卵巢癌的发生、发展、浸润呈正相关,wortmannin可有效阻滞此传导途径。     

抗心绞痛药-尼可地尔强化异丙肾上腺素引起大鼠主动脉松驰作用:与cGMP抑制性cAMP磷酸二酯酶的关联

作者观察了尼可地尔对异丙肾上腺素(ISO)引起的大鼠主动脉环松弛作用的影响;发现:ISO(10~(-9)～3×10~(-6)mol/L)可以使苯肾上腺素(3×10~(-7)mol/L)引起收缩的大鼠主动脉环松弛。用尼可地尔(3×10~(-7)mol/L～3×10~(-6)mol/L)进行预处理,ISO的作用被强化,而克罗卡林则无此作用。尼可地尔亦能加强佛司可林(3×10~(-9)mol/L～10~(-6)mol/L)及双丁酰环磷腺苷(3×10~(-6)mol/L,3×10~(-4)mol/L)的血管     

碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌CAOV3细胞cyclin D1及GADDl53表达的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人卵巢癌CAOV3细胞细胞周期调节蛋白cyclinD1及GADD153表达的影响,探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖、抑制凋亡的信号机制。方法:利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF组。分别应用MTT、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察25、50、75μg/L bFGF对CAOV3细胞增殖率、细胞周期及细胞凋亡的影响。利用Western blotting检测bFGF对CA-OV3细胞cyclin D1、GADD153以及转录因子(c-Fos、c-Jun)表达的影响。结果:与对照组相比,bFGF呈剂量依赖性加速CAOV3细胞细胞周期进程,促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的凋亡(P<0.01);呈时间依赖性促进cyclinD1、c-Fos、c-Jun,抑制GADD153蛋白表达(P<0.01)。结论:bFGF可能通过上调cyclin D1、c-Fos、c-Jun,下调GADD153表达促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。     

二丁酰环磷酰苷和氨茶碱对PC12细胞缺氧葡萄糖剥夺保护作用初探

目的探讨二丁酰环磷酰苷（db—cAMP）和氨茶碱分别作用以及联合用药对缺氧葡萄糖剥夺（oxygen—glueose deprivation,OGD）条件下大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞活性和凋亡的影响。方法采用OGD方法建立体外培养的PC12细胞缺氧缺血模型。将PC12细胞分为正常对照组和OGD组,OGD组又分为未用药组,氨茶碱组,db—cAMP组和联合用药组（氨茶碱和db—cAMP）。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法观察不同药物和不同加药时间（0h,1h,2h,4h,8h,16h）对OGD后PC12细胞活性影响;用Hoechst33342荧光染料测定细胞凋亡。结果经OGD4h后,OGD组与正常组相比细胞活性降低和凋亡率增加（P〈0．05）,db—cAMP 1×10^-4μmol／L组与未用药组相比细胞活性增高,凋亡率减低（P〈0．05）;氨茶碱5×10^-2μg／L组与未用药组相比细胞活性和凋亡率无明显差别（P〉0．05）;3×10^-2μg／L氨茶碱和1×10^-5μmol／L的db—cAMP联合用药组与未用药组相比细胞活性增高,凋亡率减低（P〈0．05）;联合用药组与1×10^-4μmol／L的db—cAMP组相比细胞活性和凋亡率无明显差异（P〉0．05）;OGD损伤后4h内加药组较未用药组细胞活性明显增加（P〈0．05）,8h以后加药组与1h和2h加药组相比活性明显降低（P〈0．05）。结论提示db—cAMP对缺氧缺血损伤有保护作用,氨茶碱和db—cAMP两药联合使用有协同作用,OGD损伤后4h内给药可提高细胞活性,其中1—2h内给药效果最好。     

磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶在慢性阻塞性肺疾病患者中的表达

目的观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者中磷脂酰肌醇-3激酶（H3K）、蛋白激酶B（PKB）与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的表达,研究P13K、PKB通路和γ-GCS的关系。方法将手术切馀的肺癌患者肺组织标本（16例）分为COPD组和对照组,每组8例,检测肺组织中γ—GCS活性,原位杂交检测肺组织中γ-GCSmRNA的表达,免疫组化分析肺组织中H3K、PKB与γ-GCS的蛋白水平。结果COPD组中1．GCS活性明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。原位杂交显示COPD组支气管、肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞γ-GCSmRNA广泛表达,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。P13K、PKB与γ-GCS免疫组化在COPD组可见肺泡、支气管壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆中皆有蛋白阳性信号表达,图像定量分析显示COPD组H3K、PKB与γ—GCS蛋白表达显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。直线相关分析得出H3K、P-PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关。结论COPD患者肺组织γ-GCS蛋白和mRNA表达增高,P13K、p-PKB蛋白也有相应高表达,提示P13K、PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中发挥作用,且可能参与了γ-GCS的信号传导通路。     

Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤保护作用的研究

目的研究促生长激素释放肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）体外诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法体外培养的HuVEcs，随机分为6组：正常对照组；Ghrelin（10^-7mol／L）组；AngⅡ（10^-7mol／L）组；AngⅡ（10^-7mol／L）＋Ghrelin不同浓度组：（Ghrelin 10^-7mol／L、10^-7mol／L和10^-7mol／L三个浓度组）。每组设6个复孔。用AngⅡ和Ghrelin联合干预细胞18h后，采用放射免疫方法测定内皮素-1（ET-1）含量；硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）含量；流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平。结果Ghrelin呈浓度依赖性地显著减少AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞的ROS生成及ET-1释放，且明显促进NO生成（P〈0．05）。结论Ghrelin对AngⅡ体外诱导的HUVECs损伤有保护作用。     

慢性铅暴露对小鼠脑海马神经元蛋白激酶B表达的影响

目的 探讨慢性铅暴露对小鼠脑海马神经元蛋白激酶B表达的影响。方法 5～6周龄小鼠交配后,通过饮水饲以终浓度(0,2.4,4.8,9.6mmol·L~-1)醋酸铅制备动物模型。用Western blot法观察各组小鼠脑海马神经元总量PKB(t-PKB)及磷酸化PKB(p-PKB)的表达变化。结果 染铅组小鼠血铅和脑铅浓度明显升高,与对照组比较有统计学意义(p<0.01)。染铅组脑海马神经元p-PKB表达水平比对照组明显降低,并与血铅浓度有效应关系,呈负相关(r=-0.84,p<0.01)。铅对小鼠大脑海马神经元细胞t-PKB的表达水平没有影响。结论 慢性铅暴露导致小鼠脑海马神经元中p-PKB表达的改变可能与小鼠学习记忆功能减退有关。     

宫颈癌患者HPV感染和调节性T细胞的相关性研究

目的 探讨宫颈部位人乳头瘤病毒（HPV）感染与CD4＋ CD25＋ CD127-调节性T细胞（TReg）及机体免疫水平的关系.方法 采用第二代核酸杂交扩增技术（HC2）检测41例正常对照组、50例宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ、42例CIN Ⅱ～Ⅲ和70例感染HPV宫颈癌患者;采用流式细胞术检测外周血CD4＋CD25＋ CD127-TReg、细胞毒性T细胞（CTL）和NK百分率;采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清中TGF-β1和INF-γ的含量.结果 ①HPV感染率随着宫颈病变的加重而升高（P =5.75×10^-19）;②宫颈CIN Ⅱ～Ⅲ组与宫颈癌组外周血CD4＋CD25＋CD127-TReg、CTL、NK、TGF-β1、INF-γ与CIN Ⅰ组及正常对照组比较,差异均 有统计学意义（P=1.03×10^-9）;且在HPV阴阳性组间比较亦有统计学意义（P=2.33×10^-4）;③CTL与NK和Treg呈负相关（P值分别为1.62×10^-6和3.41×10^-5）;INF-γ含量与TReg呈负相关（P=2.11×10^-5）;④HPV与CD4＋ CD25＋ CD127-TReg百分率呈正相关（P =3.02×10^-6）.结论 宫颈HPV感染与TReg密切相关,TReg失调导致的免疫水平下降可能是宫颈癌免疫逃避机制之一.     

肺癌磁共振扩散加权成像与肿瘤细胞密度的相关性研究

目的利用表观扩散系数（ADC）来评价肺癌的组织学特征。方法28例肺癌患者，其中男性18例，女性10例，年龄25～79岁．平均年龄52岁。行扩散加权成像（DWI）检查并测量病灶的ADC，方差分析比较不同组织学类型肺癌ADC问的差别。对11例外科切除的肺癌病灶ADC与细胞密度进行相关性分析。结果鳞癌、腺癌、小细胞癌平均ADC分别为（1．67±020）×10^-3mm2／s、（2．08±0128）×10^-3mm2／s、（1．76±0.21）×10^-3mm2／s，腺癌的ADC明显高于鳞癌及小细胞癌（P〈Q05）。肺癌ADC与细胞密度呈显著负相关（r=-0．71，P=0．015）。结论腺癌的ADC明显高于其他类型肺癌；ADC似乎可以鉴别肺癌的组织学类型。     

AM激活mTOR信号通路对人卵巢癌细胞增殖的影响

目的探讨肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)通过激活mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)信号途径对人卵巢癌细胞HO8910增殖的影响。方法应用AM及mTOR拮抗剂(雷帕霉素)诱导卵巢癌细胞,CCK8法检测AM及雷帕霉素对卵巢癌细胞增殖的影响,进一步采用Western印迹法,测定AM对mTOR磷酸化的激活作用结果 AM可促进卵巢癌细胞的增殖,并呈剂量依赖关系及受体依赖关系,而这种促增殖作用可被mTOR信号通路的拮抗剂雷帕霉素所抑制;随着AM浓度的增加,卵巢癌细胞mTOR磷酸化水平随之升高。结论AM介导的mTOR信号通路促进卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的分子靶向治疗提供新的思路。