转染野生型p53基因介导的HL—60细胞凋亡与p21蛋白表达的关系

目的：探讨野生型p53基因对HL－60细胞的作用机制,并检测p21的表达,探讨二者在白血病中的关系。方法：用脂质体介导的方法将野生型p53基因导入p53基因严重缺失的人髓细胞白血病细胞系HL－60中,用形态学,电镜,流式细胞仪,间接免疫荧光等方法检测p53对HL－60细胞的促凋亡作用及对p21表达的调节作用。结果：野生型p53基因能促进HL－60细胞凋亡及上调p21表达。结论：p21可能在p53促HL－60细胞凋亡中起协同作用。     

急性放射性皮肤溃疡中凋亡细胞及其相关基因变化的意义

凋亡过程受许多基因的调控 ,与凋亡关系最密切的是bcl 2和p53[1 ] 。抗单链DNA(singlestrandedDNA ,ssDNA)单抗法可检测不同阶段的细胞凋亡。该法反应的是凋亡性DNA的变化 ,因而较TUNEL法更为先进[2 ] ,能区分凋亡性细胞死亡与其他类型的细胞死亡。因此 ,本实验用抗ssDNA单抗法及免疫组化方法 ,检测急性放射性皮肤溃疡发生发展过程中凋亡细胞及其相关基因蛋白水平的变化 ,探讨放射性皮肤溃疡难愈合的机理。一、材料和方法1 .材料 :二级Wistar雌性大鼠 43只 (军事医学科学院动物中心提供 )。正常对照 3只 ,40只照射 ,照射前麻醉、固…     

野生型p53基因转染卵巢癌SKOV-3细胞对放疗敏感性的影响

目的 探讨γ射线照射抑制平滑肌细胞（SMC）增殖的信号传递途径。方法 培养的动脉平滑肌细胞分别接受吸收剂量为3.5、7．0、14Gy^60Coγ射线照射后，以^3H-TdR掺入法测定平滑肌细胞增殖程度，放射活性法测定蛋白激酶C（PKC）及丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）活性。结果 7．0、14Gy^60Coγ射线能明显抑制平滑肌细胞增殖，同时有MAPK、PKC活性明显降低。结论 7．0、14Gy^60Coγ射线抑制血管平滑肌细胞增殖可能是通过降低MAPK、PKC活性途径实现的。     

Hypoxia-regulated p53 and its effect on radiosensitivity in cancer cells

Purpose: To determine the response of tumor suppressor p53 to hypoxia in different tumor cell lines and the involvement of p53 activity regulation in the effect of hypoxia on tumor cell sensitivity to radiation and hyperthermia.

Materials and methods: Three tumor cell lines with functional p53 were treated with chronic or cyclic hypoxia followed by radiation or hyperthermia to investigate p53 activity and cell survival. Flow cytometry was used to investigate the effect of hypoxia-induced cell cycle arrest on radiosensitivity in KHT-C (mouse fibrosarcoma) cells. Transient transfection was performed to determine the role of altered p53 activity in KHT-C and SCC VII (mouse squamous-cell carcinoma) radiosensitivity.

Results: Aerobic radiosensitivity was decreased in KHT-C and SCC VII cells after in vitro chronic or cyclic hypoxia pretreatment, but in HT1080 cells, it was slightly increased after chronic hypoxia, and was unchanged after acute hypoxia pretreatment. Decreased radiosensitivity in hypoxia-pretreated KHT-C and SCC VII cells was unlikely due to hypoxia-induced cell cycle arrest, but rather seemed to be associated with increased expression of Mdm2 (mouse double minute-2) and decreased p53. Furthermore, hypoxia pretreatment inhibited the activation of p53 by radiation. Similar results were observed in hyperthermia treated KHT-C cells. Finally, decreased radiosensitivity was observed in both KHT-C and SCC VII cells transiently transfected with Mdm2 or anti-sense p53 cDNA.

Conclusion: We demonstrated that hypoxia may decrease tumor cell radiosensitivity through the suppression of p53 activity in some tumor cell lines. These results suggested the response of p53 to hypoxia can be cell type specific and contribute to radiosensitivity of hypoxic cells.     

腺病毒介导p53基因转染增加人胃癌细胞的放射敏感性

目的评价腺病毒介导p53基因(Adp53)转染对人胃癌细胞的凋亡效应和放射增敏作用。方法以重组腺病毒介导p53基因感染4种不同p53状况的人胃癌细胞，用免疫组织化学法和Western blot法检测P53蛋白在胃癌细胞中的表达；用细胞集落形成法检测细胞存活率；用TUNEL法检测细胞凋亡。胃癌细胞感染Adp53后照射4Gy，用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡；胃癌细胞种植肿瘤内注射Adp53后照射6Gy，以肿瘤相对体积增长曲线观察肿瘤抑制情况。结果1：100效靶比(MOI)Adp53产生细胞高转染率，以及p53基因在4种胃癌细胞中均高表达，并产生G2/M期阻滞、凋亡增加和细胞增殖抑制。如果以凋亡评价放射效应，Adp53转染对4Gy照射4种细胞的凋亡率比值为：W细胞3．0，M细胞3．6，neo细胞2．2，823细胞2．5。体内实验结果显示，Adp53对w细胞肿瘤6Gy照射的抑瘤率比值为1．41，而对M细胞肿瘤为1．91。结论腺病毒介导p53基因转染产生细胞凋亡并提高人胃癌细胞的放射敏感性，这种作用不依赖于细胞内在的p53状况。     

外源性野生型p53基因对不同p53功能状态的人肺腺癌细胞株的放射增敏作用

目的 观察外源性野生型p53基因(wtp53)对人肺腺癌细胞株的放射增敏作用,比较不同p53基因状态对照射的影响。 方法 免疫组织化学法、聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP法)筛选p53基因状态不同的两种人肺腺癌细胞系A549及GLC-82,用腺病毒介导wtp53 (Ad-p53)转染后分别给予0、2和4 Gy照射,测定集落形成率,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡。结果 A549细胞的p53基因正常,而GLC-82细胞的p53基因第7外显子突变,转染后wtp53在两种细胞内均成功表达。Ad-p53对A549及GLC-82细胞抑制率分别为55%和88%,对GLC-82抑制作用较强(P<0.01)。转染Ad-p53后照射,两种细胞集落形成率较对照组明显下降(P<0.001)。流式细胞仪分析Ad-p53使G₁期细胞比例增加和凋亡指数增高,Ad-p53＋照射组最为明显(P<0.001)。结论 Ad-wtp53可以抑制人肺腺癌细胞株的生长,增加其放射敏感性,其放射增敏作用并不依赖于细胞内源性p53基因的状态。     

血根碱对卵巢癌细胞生长及放射敏感性的影响

目的 探讨血根碱对卵巢癌SK-OV-3细胞的生长及放射敏感性的影响.方法 采用MTT法和克隆形成法检测血根碱处理后卵巢癌SK-OV-3细胞的生长;流式细胞仪分析方法观察血根碱对细胞周期分布和细胞凋亡的影响;Annexin V/PI法观察血根碱联合辐照对细胞凋亡的影响.结果 0 ～5 μmol/L血根碱处理24和48 h后,细胞生长的抑制与血根碱处理的剂量和时间成正相关(r=0.96和0.97),半数细胞生长抑制的浓度(IC50)分别为3.02和1.11 μmol/L.血根碱处理导致了包括细胞变圆、皱缩,漂浮细胞增多等细胞形态学的改变.Sub-G1凋亡峰随血根碱浓度上升而增高,并出现G0/G1期细胞周期阻滞.0.5μmol/L血根碱预处理24 h后经6 Gy的X射线辐照,早期凋亡细胞从10.28％增加至43.28％(t=19.41,P＜0.01),晚期凋亡细胞从20.26％增加至30.80％(t=8.78,P＜0.01).采用多靶单击模型拟合曲线发现血根碱+X射线组与X射线单独照射组的放射增敏比(SERD0)达1.625,即低浓度的血根碱可以增加卵巢癌细胞的放射敏感性.结论 血根碱可以显著抑制卵巢癌SK-OV-3细胞的生长,诱导细胞凋亡和周期阻滞,而且在低剂量下,血根碱可以增加卵巢癌细胞的放射治疗敏感性.     

Cks1表达对人食管癌EC9706细胞辐射敏感性的影响

目的 通过多种转染方法改变人食管癌细胞EC9706中Cks1的表达,探究Cks1的表达对细胞辐射敏感性的影响。方法 通过3种转染方式构建人食管癌EC9706细胞模型,分别为Cks1正义转染组（以亲本组和空载组为对照）、Cks1 RNAi组（以亲本组和阴性对照组为对照）和Rescue组（转染了抗Cks1 RNAi的突变载体,以亲本组和RNAi组作为对照）。Western blot法检测转染后EC9706细胞中Cks1蛋白的表达量;6 Gy γ射线照射转染后的EC9706细胞,MTT法和克隆形成实验检测EC9706辐射敏感性的变化。结果 Western blot检测结果表明,转染成功改变了Cks1的表达量。正义转染实验中,相对于亲本组和空载组,Cks1正义转染组Cks1表达量提高（t=17.10、14.95,P<0.05）;RNA干扰实验中,相对于亲本组和阴性对照组,RNAi组表达量降低（t=3.85、6.37,P<0.05）;Rescue实验中,Rescue组较RNAi组表达量明显回升（t=7.72,P<0.05）,接近亲本组的表达水平（P>0.05）。MTT实验结果表明,6 Gy γ射线照射后,Cks1正义转染组细胞的增殖能力显著高于亲本组（t=3.42、4.74、4.02,P<0.05）和空载组（t=3.39、4.44、4.37,P<0.05）。RNAi组细胞的增殖能力显著低于亲本组（t=7.33、8.27,P<0.05）和阴性对照组（t=6.98、7.34,P<0.05）。Rescue组细胞的增殖能力显著高于RNAi组（t=11.61、9.99,P<0.05）,与亲本组相近（P>0.05）。克隆形成实验结果表明,Cks1正义转染组细胞克隆形成能力显著高于亲本组（t=13.95,P<0.05）和空载组（t=14.72,P<0.05）,RNAi组细胞的克隆形成能力显著低于亲本组（t=20.14,P<0.05）和阴性对照组（t=10.01,P<0.05）,Rescue组细胞的克隆形成能力显著高于RNAi组（t=10.57,P<0.05）,与亲本组相近（P>0.05）。结论 Cks1的表达与食管癌细胞辐射敏感性密切相关,Cks1表达量越高,食管癌细胞辐射敏感性越低。     

经导管动脉输送转铁蛋白增强p53基因转染效率的研究

目的 研究转铁蛋白(Tf)对p53基因转染效率的影响,并探讨介入技术与Tf联合应用对基因治疗肝癌的双重靶向作用.方法 应用pCMV-myc-p53质粒与阳离子脂质体LipofectAMINE复合物,转染3种肝癌细胞株LM6、Hep3B、YY以及正常肝细胞株L02,以不同浓度Tf(0、10、25、50及100 μg)介导转染,蛋白印迹法检测各细胞株中p53表达情况,并对Tf影响p53转染效率的关系进行分析.再建立兔VX2肝癌动物模型,经介入导管输注Tf-质粒-脂质体复合物,提取肿瘤组织蛋白,蛋白印迹法检测P53表达.结果 4种细胞应用p53-脂质体复合物以及不同浓度Tf转染后48 h的蛋白印迹法检测,发现Tf在10～100 μg可明显增强p53-脂质体的转染效率,且转染效率随Tf浓度增加而增强.动物模型组织提取蛋白检测结果,显示Tf明显增强P53蛋白表达.结论 Tf能增强脂质体-基因转染,介入技术与Tf联合双重靶向对肝癌的基因治疗具有相当的应用前景.     

抑癌基因p53与肺癌关系的研究进展

肿瘤抑制基因p53是目前研究最为广泛和系统的抑癌基因之一。野生型p53参与了DNA损伤修复、细胞周期调控、细胞凋亡及抑制血管生成等过程。p53基因的点突变、缺失及灭活在肺癌的发生和进展过程中起着关键性的作用。现综述目前p53基因与肺癌关系的研究进展。     

p53基因与肝癌

p53肿瘤抑制基因突变与多数恶性肿瘤的发生发展有关,包括肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)在内的人类恶性肿瘤中至少有50%发生了p53基因改变。因此,以正常p53基因治疗肿瘤就成了研究热点,随着介入放射学(inter-ventional radiology)向纵深发展,经介入放射方法进行肝癌的基因治疗令人关注。本文介绍了p53基因的结构与功能,其与肝癌的病理联系以及在肝癌治疗中的应用。