空间环境对黑色素瘤B16细胞体内增殖及免疫原性的影响

初步探讨空间环境对黑色素瘤B16细胞增殖及免疫原性的影响。选择4株经体外实验筛选出生物学性状变异明显的第20颗返回式卫星搭载的空间培养B16细胞,检测其体内增殖能力及免疫原性的变化。将筛选出的4株空间培养B16细胞接种于C57BL/6小鼠,其中一组接种于腹腔,观察荷瘤小鼠生存期;另一组接种于腋下皮肤,检测小鼠出瘤时间。接种至2周时,处死,分离荷瘤小鼠移植瘤和血清。称重荷瘤小鼠移植瘤,观察空间培养B16细胞增殖能力;利用HE染色法观察荷瘤小鼠移植瘤切片细胞形态;采用放射免疫分析法(Radioimmunoassay,RIA)测定荷瘤小鼠血清白介素-2(InterLeukin-2,IL-2)浓度,观察空间培养B16细胞免疫原性变化情况。与对照细胞相比,1株空间培养B16细胞的荷瘤小鼠生存期明显缩短,出瘤时间明显延长。HE结果显示:此株空间培养B16肿瘤组织内有淋巴细胞浸润;RIA结果显示:3株空间培养B16细胞荷瘤小鼠血清IL-2浓度明显增加。空间环境的复合因素可诱导B16细胞增殖能力及免疫原性产生变化。     

人淋巴瘤OCI-Ly3细胞的免疫学特性研究和小鼠模型建立

以人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)活化B细胞(activated B-cell,ABC)型细胞株OCI-Ly3为研究对象,探索ABC型的生物学特性及肿瘤相关分子的表达,以及小鼠成瘤条件.对不同条件下培养的OCI-Ly3细胞进行对比分析,观察细胞生长形态及生物学特性;分析肿瘤相关抗原在OCI-Ly3细胞的表达情况;采用皮下和腹腔接种,在SCID小鼠中建立移植瘤动物模型.流式分析显示,体外培养的OCI-Ly3细胞对c-Met、Ki-67和survivin等细胞增殖和凋亡相关标记物具有较高的表达;SCID小鼠皮下接种107 OCILy3细胞,成瘤率87.5%;腹腔接种2×107细胞,成瘤率75%;肿瘤组织符合人DLBCL的组织学特征,且分布弥散,具有较高的侵袭性.成功构建了人ABC型DLBCL的小鼠模型,并对OCI-Ly3细胞的体外培养特性和与肿瘤发生相关的免疫标记物进行了较为系统的检测,为DLBCL的进一步研究提供了参考和工具.     

空间环境对黑色素瘤B16细胞致瘤基因和蛋白质表达的影响

初步探讨了空间环境对黑色素瘤B16细胞致瘤基因和蛋白质表达的影响。选择经第20颗返回式卫星搭载的B16细胞,进行体外和体内实验后,筛选出性状变异明显的空间诱变B16细胞株,检测空间诱变B16细胞基因和蛋白质表达的变化。将筛选出的空间诱变B16细胞接种于C57BL/6小鼠,2周后,处死荷瘤小鼠,取出移植瘤,利用免疫组化方法,检测接种空间诱变B16细胞的荷瘤小鼠移植瘤细胞Melan-A和VEGF蛋白的表达情况;利用RT-PCR方法,检测蛋白质水平上表达变化明显的空间诱变B16细胞melan-a,gp100,bag-3和l-pgds基因的表达情况。与对照细胞相比,1株空间诱变B16细胞荷瘤小鼠移植瘤细胞Melan-A和VEGF蛋白表达明显增加,其他细胞2种蛋白质的表达无明显变化。RT-PCR结果显示:此株细胞的melan-a,gp100和l-pgds基因表达增加,bag-3基因表达降低。空间环境的复合因素可诱导B16细胞基因和蛋白质表达产生变化。     

小动物活体生物发光成像技术在肿瘤转移研究中的应用

建立小动物活体生物发光成像技术,研究三氧化二砷(As2O3)抑制小鼠B16恶性黑色素瘤的肺转移作用的方法,比较活体生物发光成像技术与常规动物实验技术的优劣性;并探讨As2O3抗小鼠恶性黑色素瘤肺转移的可能机制。结果表明,活体生物发光成像技术可以非侵袭性地动态监测黑色素瘤B16细胞在小鼠肺部的转移过程以及评估As2O3的体内抑制B16肺转移的作用,且活体生物发光成像技术的检测灵敏度优于传统肺转移瘤结节计数技术;As2O3主要通过减低肿瘤新生血管形成、促使肿瘤组织坏死而发挥抗小鼠黑色素瘤肺转移的作用。     

佛手挥发油对小鼠体内B16黑色素瘤生长的影响

观察了佛手挥发油对小鼠体内B16黑色素瘤生长的影响．以B16黑色素瘤细胞感染小鼠建立动物肿瘤模型,设正常对照组、阴性对照组和阳性对照组及佛手挥发油低、中、高剂量组,各组荷瘤小鼠予以相应的药物实施干涉14d,每天观察各组荷瘤小鼠的肿瘤生长情况,14d后测定荷瘤小鼠的心、肝、肾中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量．与阴性对照组相比,50mg／kg剂量佛手挥发油能显著抑制雌性荷瘤小鼠移植瘤的增殖（P〈0．05）,显著提高其肝脏中SOD活性（P〈0．01）．表明佛手挥发油对B16移植瘤具有抑制作用．     

桑根酮C体内外抗肿瘤作用研究

目的研究桑根酮C对3种肿瘤细胞增殖的抑制作用及其体内抗肿瘤作用。方法体外实验,选取3种癌细胞,桑根酮C体外共同培养,SRB法测桑根酮C对肿瘤细胞增殖的影响,计算IC50。B16F0、B16F10细胞给予不同浓度桑根酮C,考察对B16F0、B16F10细胞内外黑素色含量的影响。体内实验,建立小鼠H22肿瘤动物模型,3个剂量(12. 5、25、50 mg/kg)桑根酮C腹腔注射于小鼠体内,10 d后,取瘤组织和脏器,考察桑根酮C对荷瘤小鼠肿瘤生长和脏器指数的影响。结果桑根酮C抑制B16F0、B16F10、Hep G2细胞增殖,其中Hep G2最为敏感,IC50为50. 58±0. 03μmol/L。不同浓度的桑根酮C都可使B16F0、B16F10细胞内外黑素色含量增加。桑根酮C高、中、低剂量对移植瘤小鼠肿瘤生长的抑制率为35%～47%,呈剂量依赖性;与模型组比较,均有显著性差异(P0. 05)。而且桑根酮C对荷瘤小鼠脏器指数影响非常小,与空白组比较没有显著性差异。结论桑根酮C对3种肿瘤细胞增殖有抑制作用,其在体内有抗肿瘤作用,且对小鼠脏器不良影响小。     

核糖体蛋白RPL34-PS1对B细胞淋巴瘤的生长促进作用

一种核糖体蛋白RPL34具有促进B细胞淋巴瘤生长的作用,通过分子克隆将RPL34基因的序列克隆到逆转录病毒载体pBABE-Puro上后,包装逆转录病毒并感染Balb/c小鼠来源的B淋巴瘤细胞38B9,经嘌呤霉素筛选后构建稳定过表达RPL34的B淋巴瘤细胞系RPL34-38B9。体外培养计数比较细胞增殖变化情况;流式检测细胞凋亡和细胞周期水平;小鼠皮下荷瘤并测量肿瘤体积。结果表明:过表达的核糖体蛋白RPL34能够显著促进B淋巴瘤细胞的生长速率,减少细胞凋亡,同时能够显著增加B淋巴瘤细胞的成瘤速率。     

空间环境对恶性黑色素瘤血管生成拟态的影响

观察空间诱变后恶性黑色素瘤B16细胞株的在小鼠体内肿瘤组织中血管生成拟态数目的改变,并探讨可能的机理。应用细胞低温长期生存系统,将B16细胞株搭载于中国第20号返回式卫星,返地后单克隆化,从得到的110株单克隆空间诱变B16细胞株中随机选取7株,编号为38#～44#,常规培养6代后和对照细胞株在荧光倒置显微镜下观察肿瘤细胞的形态;同时采用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,又称噻唑蓝)法,检测细胞增殖情况,将增殖差异较大的39#和44#细胞株接皮下种于C57BL/6J小鼠,两周后颈椎脱臼法处死小鼠,取出瘤体,经福尔马林固定后,采用CD31和PAS套染的方法观测肿瘤组织血管生成拟态的情况,并推测其与肿瘤生长速度和转移可能关系。     

Hepa1-6细胞的培养及小鼠皮下移植瘤模型的建立

目的 培养小鼠Hepa1-6细胞,建立小鼠皮下肝癌模型,为后续实验奠定基础.方法 Hepa1-6体外培养,观察细胞生长情况,按2×105/鼠(A组)、2×106/鼠(B组)和4×106/鼠(C组)的细胞量,接种于C57BL/6j小鼠,观察肿瘤生长情况.结果 细胞生长速度较慢,传代第3 d为指数生长期;成瘤率分别为A组30%,B组为80%,C组为100%;A、B组分别在接种肿瘤细胞后12 d和10 d成瘤,而C组在接种肿瘤细胞后7 d成瘤,成瘤速度明显高于前两组;第3周和第4周C组和B组肿瘤生长体积显著高于A组(P<0.01),而C组和B组之间无明显差异.结论 使用Hepa1-6细胞以4×104/鼠的细胞用量在SPF.级雌性C57BL/6j小鼠前肢部皮下成功建立了肝癌移植瘤,完成了小鼠肝癌动物模型的建立.     

黄腐酚逆转B16-F10黑色素瘤细胞恶性表型

本研究从体外增殖、细胞周期分布、克隆形成和迁移能力、黑色素合成以及糖酵解水平等考察了黄腐酚(XN)对B16-F10高转移潜能小鼠黑色素瘤细胞恶性表型的影响。结果表明，XN明显抑制B16-F10细胞增殖、克隆形成和体外迁移，阻滞细胞周期于G0/G1期，并上调细胞黑色素合成水平。同时发现XN下调B16-F10细胞的葡萄糖摄取，降低乳酸脱氢酶和己糖激酶活性及NAD⁺/NADH比率，下调缺氧诱导因子1(HIF-1α)和沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达。另外，XN明显延长荷B16-F10黑色素瘤小鼠生存期。总之，本研究表明XN逆转B16-F10黑色素瘤恶性表型，并发挥抗肿瘤增殖和转移活性，或与其调控肿瘤糖代谢效应相关。     

营养物失衡是维持癌细胞恶性生长的因素之一--DMEM培养基使黑色素瘤B16细胞的恶性生长抑制

对小鼠黑色素瘤B16细胞在DMEM和RPMI1640两种培养基中培养产生的活细胞数和黑色素量进行了检测.结果显示,该癌细胞在DMEM培养基中培养产生的活细胞数比在RPMI1640培养基中培养产生的活细胞数平均减少87.9%,而黑色素量平均增加795%.以"黑色素量/活细胞数"计算分化指数,再以"DMEM中的分化指数/1640中的分化指数"计算DMEM相对于1640的对B16细胞的分化指数,显示DMEM中的分化指数平均是1640中的分化指数的67.8倍.提出营养物失衡是维持癌细胞恶性生长的因素之一.     

呋喃二烯的体内外抗肿瘤作用研究

探讨了呋喃二烯的体内外抗肿瘤作用及作用机理．采用MTT法检测呋喃二烯对10种人肿瘤细胞的体外增殖抑制作用,研究发现呋喃二烯对体外培养的多种肿瘤细胞具有很强的抑制和杀伤效应,其IC50在0．98-4．81μg/mL．并对敏感的白血病细胞HL-60进行初步的作用机制研究,其形态学和流式细胞分析试验均表明它能有效诱导细胞调亡．整体动物试验结果可证实呋喃二烯乳注射液能明显延长荷腹水癌S180小鼠的生存期,生命延长率分别为80mg／kg（91．2％）,30mg／kg（82．4％）,10mg／kg（70．59％）．     

Effects of Genistein on Cell Cycle and Apoptosis of Two Murine Melanoma Cell Lines

The effects of genistein on several tumor cell lines were investigated to study the effects of gen- istein on cell growth, cell cycle, and apoptosis of two murine melanoma cell lines, B16 and K1735M2. These two closely related murine melanoma cell lines, however, have different responses to the genistein treat- ment. Genistein inhibits the growth of both the B16 and K1735M2 cell lines and arrests the growth at the G2/M phase. After treatment with 60 μmol/L genistein for 72 h, apoptosis and caspase activities were de- tected in B16 cells, while such effects were not found in K1735M2. Further tests showed that after genistein treatment the protein content and mRNA levels of p53 increased in B16, but remained the same in K1735M2. The protein content and mRNA levels of p21WAF1/CIP1 increased in both cell lines after treatment. The results show that genistein might induce apoptosis in B16 cells by damaging the DNA, inhibiting topoi- somerase II, increasing p53 expression, releasing cytochrome c from the mitochondria, and activating the caspases which will lead to apoptosis.     

Induction of embryonic stem cells to hematopoietic cellsin vitro

In order to get hematopoietic cells from embryonic stem (ES) cells and to study development mechanisms of hematopoietic cells, the method of inducing embryonic stem cells to hematopoietic cells was explored by differenciating mouse ES cells and human embryonic cells in three stages. The differentiated cells were identified by flow cytometry, immunohistochemistry and Wright’s staining. The results showed that embryoid bodies (EBs) could form when ES cells were cultured in the medium with 2-mercaptoethanol (2-ME). However, cytokines, such as stem cell factor (SCF), thrombopoietin (TPO), interleukin-3 (IL-3), interleukin-6 (IL-6), erythropoietin (EPO) and granular colony stimulating factor (G-CSF), were not helpful for forming EBs. SCF, TPO and embryonic cell conditional medium were useful for the differentiation of mouse EBs to hematopoietic progenitors. Eighty-six percent of these cells were CD34⁺ after 6-d culture. Hematopoietic progenitors differentiated to B lymphocytes when they were cocultured with primary bone marrow stroma cells in the DMEM medium with SCF and IL-6. 14 d later, most of the cells were CD34^－CD38⁺. Wright’s staining and immunohistochemistry showed that 80% of these cells were plasma-like morphologically and immunoglubolin positive. The study of hematopoietic cells from human embryonic cells showed that human embryonic cell differentiation was very similar to that of mouse ES cells. They could form EBs in the first stage and the CD34 positive cells account for about 48.5% in the second stage.     

榄香烯乳对B16细胞株的诱导分化作用

观察榄香烯乳对Ｂ１６黑色素瘤细胞株是否具有诱导分化作用。通过ＭＴＴ显色法测定榄香烯乳在体外对Ｂ１６细胞株的ＩＣ５０,腹腔给药观察榄香烯乳对体内Ｂ１６细胞株皮下、肺转移结节的抑制作用．选取低于ＩＣ５０的药物浓度研究榄香烯乳作用后Ｂ１６细胞株超微结构和成瘤性的改变．榄香烯乳对体内外Ｂ１６细胞株均有抑制作用．药物作用后,瘤细胞生长抑制,增殖减慢,接触抑制恢复,成瘤性降低,电镜观察细胞恶性度下降,出现较为成熟的黑色素颗粒．在低浓度时,榄香烯乳对Ｂ１６细胞株具有诱导分化作用     

金雀异黄素对小鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖、迁移和黏附的影响

利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法、细胞划痕实验和细胞黏附实验等研究了金雀异黄素对小鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖、迁移以及与血管内皮细胞黏附的影响;利用免疫荧光实验观察了金雀异黄素对B16BL6细胞中微管和肌动蛋白分布的影响.结果表明,与对照组相比,金雀异黄素可以抑制B16BL6细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞的黏附,影响B16BL6细胞中肌动蛋白的组装,但不影响细胞中微管的组装.这些结果提示,金雀异黄素抑制B16BL6细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞的黏附可能是通过诱导细胞中肌动蛋白的重排来实现的.     

两种细小病毒MVM宿主细胞的比较研究

ＭＶＭ属自主性细小病毒，对相当多种类的体内外生长的肿瘤细胞和转化细胞有抑制作用，本文对ＮＢＫ细胞的软琼脂克隆形成率和以体进行了分析，确认ＮＢＫ细胞为转化细胞，且对ＭＶＭ敏感。在此基础上，比较了两种细小病毒ＭＶＭ宿主细胞ＮＢＫ和Ａ９的细胞存活率、单位体积培养液中的细胞产量和病毒产量，认为Ａ９细胞更适合于作为细小病毒ＭＶＭ的宿主细胞进行病毒的制备和生产。     

粘细菌AHB125代谢产物的理化特征及其体外抗癌活性

介绍分离的粘细菌AHB125代谢产物的一些理化特征,并以小鼠黑色素瘤（B16）、人胃腺癌细胞（SGC7901）细胞株为模型,对粘细菌AHB125代谢产物的甲醇提取干燥物进行了体外活性试验,结果表明：其IC50分别达到了0.008 2 μg/mL和 0.036 μg/mL,并且对Bel7402、H446、MCF-7也表现出了极高的活性.