大肠艾希菌的随机扩增多态性DNA基因分型及应用

目的对大肠艾希菌(E.coli)进行随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型并应用于医院感染的判断。方法以优化的随机引物、反应体系和扩增条件对临床分离的161株E﹒coli进行RAPD基因分型并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱,同时对E.coli的医院内感染及个体感染的连续性进行了观察与分析。结果161株临床分离E.coli共得RAPD120型;E.coli的医院内感染确实存在。结论RAPD可将E.coli分为120型并有效应用于E.coli医院内感染的判断。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PFGE分型研究

目的:检测不同医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)优势菌株是否相同。方法:用常规方法对从天津医科大学第二医院及武汉同济医院临床标本中分离的金黄色葡萄球菌进行鉴定,采用头孢西丁纸片扩散法及mecA基因检测筛选出MRSA。采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分型,以了解不同地区两家医院的优势菌株是否相同。结果:共分离出金黄色葡萄球菌127株,MRSA83株,其中天津56株,武汉27株。天津56株MRSA临床株PFGE分型为15型27个亚型,以A1型为主;武汉27株MRSA临床株PFGE分型为6型12个亚型,以A2、A4型为主。结论:2家医院MRSA优势菌株并不相同,尚未发现MRSA流行菌株。     

随机扩增多态性DNA技术分型大肠埃希菌

目的：对大肠埃希菌(E．coli)进行随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型并应用于医院感染的判断。方法：以优化的随机引物、反应体系和扩增条件对临床分离的161株E．coli进行RAPD法基因分型并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱。同时对E．coli的医院内感染进行了观察与分析。结果：161株临床分离E．coli共得RAPD型120种；E．coli的医院内感染确实存在。结论：RAPD法可将E．coli分型120种并有效应用于E．coli医院内感染的判断。     

应用随机扩增多态性DNA技术分型肺炎克雷白菌

目的对肺炎克雷白菌进行随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型。方法以优化的随机引物及反应体系对临床分离的199株肺炎克雷白菌进行RAPD分析并绘制基因分型指纹图谱。结果199株临床分离肺炎克雷白菌共得RAPD型158种。结论本研究为肺炎克雷白菌医院感染的分子流行病学分析提供了重要的参考依据。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型研究

目的:了解并确定临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)型别的特点.方法:用常规方法将从天津医科大学第二医院等天津地区8家医院及武汉同济医院临床标本(痰、尿、血及分泌物)中分离细菌,金黄色葡萄球菌的鉴定采用凝固酶实验、常规生化鉴定、M43葡萄球菌乳胶凝集试剂盒及法国生物梅里埃公司的API staph条确定,MRSA的检测采用头孢西丁纸片扩散法及mecA基因的检测确定.应用10对引物的多重引物聚合酶链反应技术(M-PCR)扩增MRSA葡萄球菌染色体mec盒的基因片段,对其中不能分型的变异株进行mec基因复合体及ccr基因复合体分型,然后根据mec基因复合体及ccr基因复合体的组合情况对MRSA的型别情况作出判断.结果:本实验共分离出金黄色葡萄球菌127株,MRSA78株,其中天津地区51株,武汉地区27株.78株MRSA经过3组M-PCR方法最终得到SCCmec-Ⅰ型1株,SCCmec-Ⅱ型4株,SCCmec-Ⅲ型62株,SCCmec-Ⅴ型3株,未检测出SCCmec-Ⅳ型及SCCmec-Ⅵ型,并且有8株MRSA用本实验方法不能分型.结论:本实验分离的MRSA临床株的SCCmec以Ⅲ型(或SCCmecⅢ+dcs型)为主.     

社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌RAPD基因分型及药敏分析#br#

目的 探讨社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)对临床常用抗菌药物的耐药性及其分子流行病学情况。方法 收集从CA-MRSA感染患者伤口分泌物分离的金黄色葡萄球菌,采用PCR扩增mecA基因确定为MRSA菌株,同时对其进行17种抗菌药物耐药性检测。利用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对51株CA-MRSA进行同源性分析。结果 51株CA-MRSA对红霉素、克林霉素、四环素的耐药率均在30%以上,未发现对莫西沙星、利福平、利奈唑胺、替考拉宁、万古霉素、奎奴普丁/达托霉素以及呋喃妥因的耐药菌株,经RAPD分型可分为I~V个亚型,以I型(53.70%)为主。CA-MRSA感染患者主要分布于普外科(39.22%)和皮肤门诊(27.45%)。结论 为有效预防和控制CA-MRSA的感染,临床应合理选用抗菌药物,采用RAPD技术对MRSA进行同源性分析,可为基层医院控制感染提供流行病学监测。     

嗜麦芽窄食单胞菌基因同源性分析

目的 了解2005-2010年安徽省临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌并通过基因同源性分型,推测菌株地流行性趋势,为控制医院感染的发生提供科学的理论依据.方法 收集安徽省细菌耐药监控网中的34家不同级别医院2005-2010年(每年9月1日-30日)临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌188株,采用全自动微生物分析仪对标本进行重新鉴定.提取全基因组DNA,应用随机引物PCR方法对菌株进行基因分型分析菌株克隆流行传播情况.结果 对188株基因分型,发现2005、2007及2009年的菌株均表现不同的基因亚型;2006年678和702号、2008年的824和826号、2010年的186和18号菌株分别是同一基因亚型,追踪临床资料发现它们均来自于同一医院同一科室,说明可能存在同一克隆株在院内传播的情况.结论 同一克隆株的嗜麦芽窄食单胞菌在同一医院同科室的出现,提示该菌有造成医院感染流行的隐患,因此临床医生在控制基础疾病抗感染的同时,应该高度警惕此菌的存在,及时采取措施,减少该菌的临床感染及流行.     

儿童咽拭子标本406份中EB病毒的检测及其基因型鉴定

目的了解湖南省株洲、湘潭和衡阳地区儿童鼻咽部EB病毒的感染状况及其基因型,为EB病毒的治疗、预防和临床检验提供指导。方法从株洲、湘潭和衡阳部分医院收集疑似EB病毒感染的儿童咽拭子标本406份,采用荧光定量聚合酶联反应（FQ—PCR）检测标本中的EB病毒-DNA;阳性标本分别用特异性引物从中扩增3个目的基因片段,其中PCR扩增的EBNA-3C片段直接电泳以分析1／2分型,BamHI片段和BamHI WI／I1交界区基因片段采用PCR-RFLP分析鉴定F／f和C／D分型,测序和Blast比对验汪分型结果。结果从406份标本中共检出 EB病毒-DNA阳性株159份,株洲74份（38．5％）,其中1型72份（97．3％）,2型2份（2．7％）;湘潭42份（38．9％）,1型40份（95．2％）,2型2份（4．8％）;衡阳43份（40．6％）,1型43份（100％）,2型未发现、从159份阳性株中随机扩增了73份做F／f分型,68份做C／D分型,共检测到F型73份,C型68份,3个地区均未检测到f型和D型。结论株洲,湘潭和衡阳儿童鼻咽部EB病毒感染的检出率分别为38．5％,38．9％,40．6％,且其主要感染的3种独立基因型以1、C、F型为主,3个地区间儿童鼻咽部EB病毒-DNA的检出率及其基因型的差异无统计学意义。     

乙型肝炎病毒基因分型方法的研究进展

目的为建立一种快速、直接、简单以及经济的乙型肝炎病毒基因分型的方法,并且能够便于大批量的标本检测。方法从前S1基因到S基因中的序列设计出10条内外引物,并将其中4条内引物扩增A B C型乙型肝炎病毒,然后将第2轮PCR的产物用1.5%琼脂糖进行电泳,根据凝胶成像分析系统所显示的PCR产物片断大小直接判定HBV基因型。结果本文应用乙型肝炎病毒PCR分型方法,结果可靠。检测以基因C型为主,与文献报道结果一致。PCR扩增结果显示,200例HBV DNA基因分型:B型28例(14%),C型169例(84.5%),B、C混合型1例(0.5%),两例基因型不明。重复性试验:基因分型鉴定结果前后符合率为100%。结论我们采用型特异性引物经两轮PCR分别扩增A-C型HBV,从PCR产物片段的大小即可直接判定HBV基因型,此方法特异性高,简单,容易操作等。     

儿童下呼吸道感染患者痰液耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分离株耐药性及基因分型

目的:研究儿童下呼吸道感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离株的耐药性及基因分型,为临床诊疗提供参考。方法:对2009年1月-2010年12月收治的50例肺炎患儿进行临床调查,采集下呼吸道的痰液标本作细菌培养,用头孢西丁纸片法鉴定MRSA,并用琼脂稀释法测定MRSA对12种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);用多重PCR方法检测MRSA的葡萄球菌染色体盒mec(SCCmec)基因分型。结果:MRSA所致的下呼吸道感染多见于低龄儿童(15 d～6岁),SCCmec基因分型中以Ⅲ型、Ⅳ型和Ⅴ型为主。所有MRSA的分离株都对青霉素和苯唑西林耐药,对万古霉素敏感,对其他抗菌药物的耐药率较高并且存在多重耐药。结论:儿童下呼吸道感染MRSA分离株多见于学龄前的儿童,SCCmec基因分型以Ⅲ型、Ⅳ型和Ⅴ型常见,MRSA对多种抗菌药物具有较高的耐药性并且存在多重耐药。     

随机扩增多态性DNA对新生儿病房产气肠杆菌基因分型

目的：建立产气肠杆菌随机扩增多态性DNA（RAPD）分析技术，用于新生儿病房产气肠杆菌流行病学调查。方法：对从新生儿病房两次集中分离出的产气肠杆菌进行抗生素最低抑菌浓度试验（MIC）和RAPD分析，结合患儿的临床及流行病学资料进行分析。结果：药敏谱分型与RAPD分型不完全一致。16株产气肠杆菌的RAPD分型分为9型。RAPD分型为Ⅰ、Ⅲ、Ⅷ型的10株产气肠杆菌是流行相关菌株，均为医院内获得，分别导致3次各不相关的水平传播。结论：药敏谱分型不能很好地区分菌株的株间差异。RAPD分型准确、操作简便，在48h内可确定流行株，是研究产气肠杆菌分子流行病学的有力工具。     

新的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌染色体基因盒型别与其产毒性和耐药性的研究

目的探讨新的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）染色体基因盒（SCCmec）型别的耐药性和产毒性，进一步明确SCCmec型别的多重耐药模式。方法采用多重聚合酶链反应（PCR）扩增法，对临床分离出的金黄色葡萄球菌菌株进行SCCmec分型及其相关毒力基因耐药性测定。 结果本实验应用9对位点特异性引物对13株MRSA进行了多位点PCR分型测定，共检测到5种不同的测定位点构成图谱，其中3种图谱与已有的ⅢD型、ⅡD型和Ⅳ型相同，2种图谱为未见报道的Ⅱ型和Ⅲ型新亚型。ⅢD型、ⅡD型和Ⅳ型分别发现1株、1株和2株，Ⅱ型新亚型发现6株，Ⅲ型新亚型发现3株，新的SCCmec型别亚型比例较高，占69.2%（913）。新Ⅱ型亚型含有Ⅱ型上游位点B和C,下游位点G，缺乏Ⅱ型下游特异性位点D；新Ⅲ型亚型含有Ⅲ型的上游位点C、E和下游位点F，缺乏下游位点G，多了一个Ⅱ型的下游位点D；其对应菌株的毒力基因检测含有femA、see、etb和tst基因。结论新的SCCmec型别的MRSA，它的基因型与已报道的基因型有所不同，新的菌株同时产3种毒素基因，而且还含有femA基因，故新的菌株不仅是MRSA的高度耐药株，同时产毒性高、耐药性高、抗药谱广，值得引起高度重视和关注。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌qacA基因的检测及分型

目的对我院不同标本中分离的45株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methecillin resistant staphylocccus aureus,MRSA）相关耐消毒剂基因qacA进行检测和类型分析,为我院合理使用消毒剂,阻止多重耐药的MRSA再流行,减少院内感染提供依据。方法收集分离自我院患者的MRSA45株,采用聚合酶链式反应（PCR）对该45株MRSA耐消毒剂基因qacA进行检测并采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法进行类型分析。结果45株MRSA检出qacA基因18株,阳性率为40％,其中呼吸内科、烧伤科标本分离的MRSA中qacA基因检出率较高分别为13％、16％。我院携带qacA基因的MRSA有A～E5个型,主要流行株为A型和B型。结论呼吸内科和烧伤科等科室的MRSA携带的qacA基因是导致胺类、胍类等临床常用消毒剂耐药的主要原因,流行菌株可在各病区之间传播,应引起重视。     

某院150名医务人员鼻腔中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌定植情况及其耐药特征分析

目的:探究医院医务人员鼻腔中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的定植情况及其耐药特征.方法:选取医院2019年6月—12月采集的150名健康医务人员(医师60名、护士 90名)鼻前庭分泌物标本150份的显色琼脂培养基结果,分析其葡萄球菌染色体(SCC)mec基因的分型情况以及MRSA的耐药特征.结果:150份鼻腔分泌物标本中培养分离出MRSA 17株,其定植率为11.33％;经基因分型后发现17株MRSA菌株中,SCC mec基因为Ⅱ型10株(占58.82％)、Ⅲ型5株(占29.41％)、Ⅳ型2株(占11.76％);药敏结果发现17株MRSA菌株对青霉素类药物的耐药率均为100.00％,而对利奈唑、万古霉素、替加环素等药物均无耐药.结论:医院医务人员鼻腔中MRSA定植率较高,且不同SCC mec基因的MRSA菌株均存在,管理部门应引起高度重视.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCC mec基因分型的研究

目的了解安徽省立医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）SCCmec基因分型情况和各种基因型别的耐药特征及分子流行病学特点。方法采用VITEK32全自动微生物分析仪GPS药敏板检测MRSA菌株对14种抗菌药物的敏感性；采用PCR方法对MRSA菌株SCCmec进行基因分型。结果SCCmecⅡ型菌株4株（13．3％），SCCmecⅢ型菌株24株（80％），SCCmecⅣ型菌株2株（6．7％），未发现SCCmecⅠ型菌株。结论SCCmecⅢ菌株为安徽省立医院存在的主要流行菌株，SCCmecⅡ型菌株和SCCmecⅢ型菌株均为多重耐药菌株。     

白色念珠菌耐药性与DNA多态性关系的研究

目的 通过建立白色念珠菌随机扩增多态性DNA（RAPD）分型技术,结合药敏特性,分析白色念珠菌基因组DNA多态性与耐药性的关系。方法 选择随机引物对受试菌株进行RAPD分析,并优化实验条件。采用GIS2010凝胶成像处理系统对得到的DNA指纹图谱进行分析,生物学软件DNAMAN得出各菌株的遗传距离和亲源关系树状图。结果 筛选出3条随机引物,进行RAPD-PCR;白色念珠菌基因组DNA含量在100ng/μl时,得到的指纹图谱最为清晰;DNAMAN软件分析发现临床分离的5株氟康唑耐药菌株的遗传距离指数较小,其亲源关系也较近。结论 白色念珠菌的基因组DNA多态性与耐药性有密切关系,该结果为白色念球菌的临床诊治及流行病学调查提供了理论依据。     

金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因qacA的研究

目的 检测我院近年来临床分离的金葡菌耐消毒剂的qacA基因水平，为动态监测细菌耐药性的变化趋势、有效控制细菌耐药性的传播提供对策。方法 收集我科临床分离的金葡菌共252株，并经本实验室重新鉴定确认。参照美国CLSI／NCCLS标准，用6μg／ml苯唑西林和4％NaCl平板，筛选出耐苯唑西林金葡菌和对苯唑西林敏感的金葡菌。应用PCR基因扩增试验检测金葡菌中耐消毒剂的qacA基因水平。随机抽取一株MRSA阳性株进行基因测序，作qacA基因验证。作qacA基因阳性株的MIC检测，了解阳性株是否有耐药性的表达。结果 共检测金葡菌252株，其中MRSA84株（带有qacA基因4株），MSSA168株（带有qacA基因1株）。MRSA阳性菌株对消毒剂的MIC值明显高于MSSA菌株。结论 携带含有耐消毒剂基因qacA的金葡菌未在我院流行．     

基于巢式PCR的紫草鉴别引物筛选

目的:基于巢式聚合酶链式反应(PCR)理念设计并筛选出可用于高效扩增与鉴别紫草市场样品真伪的特异性引物。方法:针对新疆紫草的ITS序列和紫草非《中华人民共和国药典》品ITS2序列,利用Primer Premier 5软件进行巢式引物设计;比较ITS2通用引物PCR和巢式PCR对紫草药材基因组DNA的扩增效率;基于巢式引物直接扩增紫草基因组DNA,并进行琼脂糖凝胶电泳检测;基于扩增产物片段长度、变异位点覆盖情况对设计的紫草药材特异性引物进行评价。结果:经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出11对引物进行合成;巢式PCR对紫草药材基因组DNA的扩增效率明显优于ITS2通用引物PCR;基于巢式引物直接扩增紫草基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测的结果明显优于ITS2引物直接扩增紫草基因组DNA,且呈单一条带;确定AE-9S/AE-2A、AE-4S/AE-10A、AE-12S/10A、AE-29S/AE-29A共4对引物适用于紫草正伪品鉴定。结论:在DNA条形码鉴定和巢式PCR技术的基础上,确定了4对可以用于有效区分药材市场中主流的新疆紫草和紫草非《中华人民共和国药典》品的特异性...     

镇江地区结核分枝杆菌DNA指纹图谱分型及耐药性分析

目的：分析镇江地区结核分枝杆菌的DNA指纹图谱分型及耐药情况。方法收集174例疑似结核病患者痰液标本,通过鉴别培养基对硝基苯甲酸（ PNB）和噻吩－2－羟酸肼（ TCH）进行分枝杆菌菌型初筛,再通过本室建立的PCR－ELISA法明确鉴定结核杆菌菌种,用比例法进行药敏实验,用DNA随机扩增多态性（ RAPD）指纹分型法,对其中44株耐药人型结核分枝杆菌进行DNA指纹图谱分型。结果从174份标本中分离出人型结核分枝杆菌141株（81．03％）,牛型结核分枝杆菌20株（11．49％）,非结核分枝杆菌13株（7．47％）,总耐药率42．53％;耐药率由高到低依次为异烟肼（INH）＞氧氟沙星（OFX）＞利福平（RFP）＞链霉素（SM）＞乙胺丁醇（EMB）＞卡那霉素（KM）＞卷曲霉素（ CPM）＞阿米卡星（ AKM）;非结核分枝杆菌对EMB、RFP、SM、INH的耐药率显著高于结核分枝杆菌（ P＜0．01）。复治组对EMB、RFP、SM、INH的耐药率显著高于初治组的耐药率（P＜0．01）。中、老年患者耐药率明显高于青年患者（P＜0．05或P＜0．01）。将44株耐药人型结核杆菌,用RAPD－PCR分型,并用NTsys 2．10e软件作聚类分析,共分为5型（Ⅰ型-Ⅴ型）,其中以Ⅰ-Ⅲ型为主,占84．09％。各型的耐药率差异无统计学意义（P＞0．05）。结论本地区肺结核以人型结核分枝杆菌为主,结核杆菌总体耐药率和耐多药率相对较高。 RAPD指纹分型结果显示,该地区结核分枝杆菌具有明显的基因多态性,成簇类型是主要流行菌株。各型与耐药性无明显相关性。     

临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性及分子流行病学研究

目的研究我国临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药性及分子流行病学特点。方法菌株来源于全国17家医院分离的MRSA共计160株,用标准平皿二倍稀释法测定对23种抗菌药物的最低抑菌浓度(M IC);用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对其中133株MRSA菌株进行同源性分析。结果 160株MRSA对多种抗菌药物呈现不同程度的耐药。其中,133株MRSA菌株的PFGE图谱显示,共有A～E 5种类型,以A型为主,为88株(A1型27株,A2型25株,A3型22株,A4型12株,A5型2株);B型为25株(B1型19株,B2型3株,B3、B4和B5型各1株);C型为8株(C1型7株,C2型1株);另有12株为散发菌株。结论临床分离的MRSA呈多重耐药性,我国不同医院流行的MRSA菌株基因型主要为A1、A2、A3和B1型;且不同地区的医院流行的菌株基因型不同,同一医院流行的菌株基因型也不同。