理化因素对体外培养伊氏锥虫致弱的影响

本试验观察了理化因素（γ－射线、紫外线、低浓度杀虫药）对体外培养伊氏锥虫致弱的影响，结果如下：受γ－射线辐照的伊氏锥虫开始时存活数随辐照剂量的增加而减少，随后表现出无规律性，辐照剂量５万ｒａｄ以下对锥虫的存活影响较小，５～１０万ｒａｄ辐照后２ｄ锥虫的存活数明显减少，对小白鼠的感染性消失。伊氏锥虫受紫外线照射的存活曲线为“Ｃ”型，群体抗辐射不均一，平均致死剂量（Ｄ＿（３７））为波长２６５０Ａ的２０Ｗ紫外灯离样品４０ｃｍ处照射约２ｈ。虫体照射后根据体外跟踪观察，其存活数随照射剂量的增大而减少，照射了３ｈ和４ｈ第３天的活虫数近似１００条或不足１００条，对小白鼠的感染性均消失。用０．１μｇ／ｍｌ的苏拉灭和０．８μｇ／ｍｌ的贝尼尔两种低浓度杀虫药在体外对伊氏锥虫诱导４０ｄ仅造成药敏性的改变，未造成毒力减弱。     

应用质粒PTK探针鉴定锥虫的初步研究

用^32P标记质粒探针PTK1、PTK1.1和PTK1．2，对12株中国伊氏锥虫的斑点杂交试验显示，3个探针均能与8株具有正常动基体的伊氏锥虫杂交，而不与其余4株异常动基体伊氏锥虫杂交，对正常动基体株的敏感度为10^2虫体。探针PTK1亦能与马媾疫锥虫杂交，敏感度为10^2个虫体。但PTK1与布氏锥虫仅发生微弱的杂交反应．敏感度为10^5个虫体。试验表明伊氏锥虫株之间的kDNA微环是同源的，伊氏锥虫与马媾疫锥虫和布氏锥虫的kDNA微环存在着共同序列。     

克隆伊氏锥虫对安锥赛抗药性的培育

为了深入观察伊氏锥虫对安锥赛抗药性的形成,将伊氏锥虫浙江水牛株克隆,克隆繁殖后的虫体一部分作为原种对照组,即C01组;一部分虫体连续经环磷酰胺免疫抑制的小鼠,再用安锥赛亚治疗剂量治疗该小鼠,使其伊氏锥虫对安锥赛产生7个不同程度的抗药性组,即C1～C7组;另一部分虫体也连续经环磷酰胺免疫抑制的小鼠,作为伴随C7的同步繁殖组,即不用药物的C02组.结果C01、C02、C1～C7组所用安锥赛剂量依次为0、0、6、16、40、80、196、406、638mg/kg,它们经小鼠传代数依次为0、28、1、3、6、9、15、22、28代.用体外生长繁殖抑制法测得它们的ICs0值依次为0.015 50、0.016 87、0.082 60、0.102 37、1.409 29、1.922 90、9.923 30、23.563 00、43.84000.结果表明,安锥赛亚治疗剂量与伊氏锥虫抗药性的IC50值呈曲线关系,从C1到C4的IC50值上升较缓慢,从C4后的ICs0值上升较快,并且几乎呈直线上升;伊氏锥虫所经小鼠的代数与它们的IC50值的关系呈抛物线型,从C1到C4的ICs0值上升很慢,C4以后的IC50值上升很快.用体内试验测试C01～C4组的CD100值,每个组感染35只小鼠,每只小鼠接种1.0×104条锥虫,其中30只小鼠分为安锥赛的3个剂量治疗小组,另5只小鼠为不治疗对照组.结果C01组和C1组的CD100值分别为7.0、13.0 mg/kg,这表明C1组只经1代免疫抑制小鼠,注射安锥赛剂量3×2 mg/kg,就使该组伊氏锥虫对安锥赛的抗药性提高了6 mg/kg,并且它们的IC50值C1是C01的6.6倍.C2、C3和C4组由于抗药性程度过高均不能治愈,因此尚未测到它们的CD100值.这些结果表明,伊氏锥虫经免疫抑制小鼠对安锥赛产生抗药性的速度是非常快的.     

实验室豚鼠保种伊氏锥虫毒力致弱株对小白鼠的最低感染量试验

经皮下注射不同数量虫体的方法测定了实验室用豚鼠保种继代至96代广西骡伊氏锥虫株对小白鼠的最低感染虫数。结果为,每只鼠注射10~6个虫组,平均4天镜检出虫,8天死亡;每只注射10~4个虫组,平均6天镜检出虫,10天死亡;每只注射10~2、10、1个虫各组,镜检3个月一直没有出虫,小鼠健活。从而初步认为该株锥虫对小白鼠的最低感染量为10~4个虫/ml左右。     

接种泰氏锥虫及其抗原使家兔和小鼠产生抗伊氏锥虫的交叉免疫力

用培养的泰氏锥虫制备的死、活两种虫体抗原,接种于家兔和小鼠,一定时间后用伊氏锥虫强毒株攻击,观察其血清抗体的变化及交叉免疫保护能力。试验表明,泰氏锥虫虫体抗原可刺激机体产生较高的体液抗体;免疫动物有一定的抵御伊氏锥虫攻击的能力,与对照组相比,免疫动物血液中虫体出现的时间较迟,最初的数量少,临床症状轻。死虫抗原组的交叉免疫保护能力较活虫抗原组强。     

水牛伊氏锥虫间接ELISA检测方法的建立

利用伊氏锥虫的优势变异型虫体作为可溶性抗原,通过试验研究和条件优化,建立了一种水牛伊氏锥虫间接ELISA方法.测试结果表明,该法灵敏度高,特异性强,对实验感染样本的检测获得了较好的效果,为一种有效的ELIAS方法,为广西水牛伊氏锥虫病的诊断奠定了技术基础.     

~(60)Coγ射线照射小冠花干种子的细胞遗传学和辐射损伤效应的研究

用1.0～20.0万拉德~60Coy射线照射9个不同品种的小冠花干种子,对其生物学效应和细胞遗传学效应进行研究。结果指出:9个不同品种小冠花存活率、幼苗高度、胚根长度与剂量呈负相关,染色体畸变和微核率与剂量呈正相关。以存活率为指标,发现小冠花是牧草中辐射抗性较强的牧草,半致死剂量为11.5万拉德。     

伊氏锥虫单一或混合抗原免疫小鼠保护性试验

采用广东克隆（广东水牛伊氏锥虫单虫克隆）、安徽克隆１（安徽水牛伊氏锥虫单虫克隆）、安徽克隆２、新疆克隆（新疆骆驼伊氏锥虫单虫克隆）作单一抗原或混合抗原免疫小鼠试验。用安徽克隆１和新疆克隆单一抗原免疫小鼠，再用相应同株克隆攻击，其保护率在８０％以上，而用异株克隆攻击（安徽克隆１、新疆克隆或广东克隆），保护率低于１７％，表明安徽、新疆和广东伊氏锥虫各株间免疫原性存在差异。用新疆克隆抗原和安徽克隆２抗原混合免疫，再用新疆克隆和安徽克隆２攻击，保护率在８０％以上，用新疆克隆抗原和广东克隆抗原混合免疫，再用新疆克隆和广东克隆攻击，保护率亦在８０％以上，且在免疫后１～２个月仍有效。对新疆克隆抗原和广东克隆抗原混合免疫小鼠脾细胞作体外增殖试验，用不同抗原按５００ｍｇ／Ｌ和１２５ｍｇ／Ｌ高低２种剂量刺激，均产生明显增殖，表明各锥虫抗原存在免疫交叉，但在高剂量组，用同株克隆的刺激增殖效果（ＳＩ）高于异株克隆。     

中国伊氏锥虫的无动基体株

在中国的东洋界，无动基体伊氏锥虫与有动基体虫并存。单虫克隆化的虫体，无动基体株的后代均无动基体，有动基体株的后代均具动基体；作者用电镜和核酸探针技术验证了这一事实。作者认为：我国的无动基体虫株是天然存在的，并认为：中国的无动基体伊氏锥虫可能即南美洲的Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｅｑｕｉｎｕｍ。     

检测伊氏锥虫循环抗原的McAb-RPHA试验

用一株抗伊氏锥虫、马媾疫锥虫和布氏锥虫共同抗原(与泰氏锥虫等抗原无交叉反应)的单克隆抗体建立了检测伊氏锥虫循环抗原(TcA)的反向间接血凝试验。用以检测人工感染兔,于感染后8～10天TcA转阴;如不治疗直至观察期结束持续阳性;治疗后一周即转阴。用以检测疫区36份虫血症阳性水牛血清,25份阳性(69.44％);16份虫血症阴性、IHA阳性水牛血清,3份阳性;25份虫血症和IHA阴性水牛血清,全部阴性。     

猪伊氏锥虫病的诊治

伊氏锥虫病是热带、亚热带地区大家畜常发的一种原虫病。猪的伊氏锥虫病是由锥虫属的伊氏锥虫寄生在猪的血液中和骨髓、淋巴、脾脏等处而引起的。１　病原形态　伊氏锥虫是一种单细胞原生动物。虫体呈纺锤形或柳叶状，体长相当于红血球直径的３～４倍，宽度小于红血球的半径，虫体中央有一个圆形的细胞核。在虫体后端有一个动基体，由动基体中毛基体向前生出一根细长的鞭毛，鞭毛前端伸出虫体之外。沿鞭毛一侧生有薄膜，称为波动膜，虫体在血浆中靠鞭毛运动。２　流行及发病特点　猪对伊氏锥虫有较强的抵抗力，多数猪的发病症状不明显或呈隐…     

单克隆抗体反向间接血凝抑制试验在伊氏锥虫病诊断中的初步应用

<正> 在前文报道的检测伊氏锥虫循环抗原的单克隆抗体-反向间接血凝试验(McAb-RPHA)的基础上,我们又建立了检测伊氏锥虫抗体的单克隆抗体-反向间接血凝抑制试验(McAb-RPHI),用该法检查实验感染家兔的系列血清和疫区水牛血清,并与目前常规使用的间接血凝(IHA)比较,结果较满意,现报道如下:     

间接荧光抗体试验诊断马骡伊氏锥虫病的研究

以人工感染伊氏锥虫的小鼠血液涂片为抗原,建立了IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体的方法,并对伊氏锥虫病马、同群马、健康马、非伊氏锥虫病马血清作了检测。伊氏锥虫病马和无症状同群马的抗体阳性率分别为97％(33/34)和12％(18/150);25匹健康马血清伊氏锥虫抗体均为阴性;84份非伊氏锥虫病马血清的IFA试验均为阴性,未出现交叉反应。多数病马发病一周内的血清IFA试验即为阳性。3匹病马血清抗体消长动态观察结果表明,病马于治疗后110天,血清IFA试验仍为阳性。本试验表明,IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体,敏感性高、特异性强,对无症状的感染马也能检出,可用于本病的早期诊断和血清流行病学调查。     

伊氏锥虫在小鼠体内抗原变异规律及免疫保护试验

为了探索伊氏锥虫抗原的变异规律及其用于免疫预防的可能性，首先对伊氏锥虫安微株单虫克隆2个早期变异体ShTatl.1、ShTat1.2采用蛋白酶抑制剂TLCK处理，分离纯化这2种变异体的VSG，用ShTat1.1 VSG免疫KM小鼠，ShTat1.1锥虫攻击免疫鼠后6d分离锥虫，经间接免疫荧光试验（IFT）和班点酶标记试验（Dot-EIA)鉴定为ShTat1.2，说明同一克隆锥虫感染兔，小鼠第1次发生抗原变异后产生的变异体相同。依据这一规律，设计了免疫预防保护试验，试验小鼠分3组：一组为未免疫对照组，一组为ShTat1.1VSG单一抗原免疫组，另一组为ShTat1.1 VSG,ShTat1.2 VSG混合免疫抗原免疫组，各组均以ShTat1.1锥虫攻击，结果ShTat1.1 VSG ShTat1.2VSG免疫组小鼠全部获得保护，单用ShTat1.1 VSG免疫组小鼠和未免疫小鼠血中全部出虫、死亡，前者比后者出虫时间、存活时间延长。提示运用伊氏锥虫抗原变异这一规律设计的这种复合抗原，能激发宿主克服虫体抗原变异对免疫保护的干扰。     

用泛影葡胺和DEAE—纤维素分离纯化小白鼠伊氏锥虫

用15％的泛影葡胺汉克氏液(MHS),从感染伊氏锥虫的小白鼠血中,分离出不含或含极少红细胞的锥虫、白细胞和血小板混悬液,再经DEAE—纤维素过柱,得到纯的伊氏锥虫。从取血开始,全部过程在1～1.5小时内完成。血液锥虫的总回收率平均74.2％,回收总虫数为2～12×10~8/鼠。过柱后的锥虫运动正常,以1×10~5～1×10~6接种成年小白鼠,一般在6～10天内死亡。用纯锥虫抗原对10匹试验锥虫病马骡的血清做琼脂扩散和对流免疫电泳试验,与分步远心沉降洗出的粗抗原比较,稀释倍数较高,检出阳性的时间相同,或比粗抗原提前1～2天。本法是把梯度分离和离子交换结合在一起的一种快速有效方法。     

布氏锥虫伊氏亚种和马媾疫亚种在不同气相条件下的体外培养

在烛缸和密闭培养的气相下,用我们改良的Baltz无细胞培养系统培养了3个已适应于体外培养的布氏锥虫伊氏亚种虫株、1个布氏锥虫马媾疫亚种虫株和3个未经培养的布氏锥虫伊氏亚种虫株(未适应株),并与常规CO_2培养箱(含5%CO_2的空气)培养作比较。所有适应株和未适应株均可在烛缸和密闭培养条件下正常生长,连续培养1—2月,虫体形态、生长特性和对小白鼠的致病力与CO_2培养箱培养相同。培养物的虫密度,密闭培养明显高于烛缸和CO_2培养箱培养,CO_2培养箱培养一般稍高于烛缸培养。密闭和烛缸培养的成功,对普及锥虫体外培养技术有很大实用价值,也提示应进一步研究培养的最佳气相条件。此外,不经饲养层培养系统适应直接建立3个未适应株的无细胞培养系统的培养也是重要进展。     

水牛伊氏锥虫人工感染抗体规律及其广西地区自然感染状况的初步调查

通过实验感染,研究伊氏锥虫在水牛体内抗体及虫体消长的规律.ELISA检测结果表明,水牛感染伊氏锥虫后第6 d检出抗体,而且在2个多月的监测时间里,抗体都维持在较高水平(OD450nm>0.3),因此可利用ELISA方法对水牛感染伊氏锥虫进行早期诊断和监测;水牛感染伊氏锥虫后,即出现一个2～3周左右的虫血症峰期,然后虫血症峰期迅速下降,在虫血症峰期下降后1个多月的监测时间里,虫血症维持在一个很低的水平(≤1条虫体/视野),水牛感染伊氏锥虫后这种峰期短无明显症状、虫血症水平低的现象,给临床诊断和血液镜检虫体造成了一定的困难.对广西部分地区79份血清样品水牛检测的结果表明,伊氏锥虫抗体阳性率达到29.1%,说明广西各地水牛感染伊氏锥虫的现象普遍存在,而且感染率比较高,为了保证本地区水牛产业的健康发展,有必要对水牛伊氏锥虫感染进行有效的监测.     

泰氏锥虫体外保存时间的研究

本试验测定了泰氏锥虫的含虫血液、培养物在4℃条件下虫体的存活时间以及泰氏锥虫培养物在液氮中的保存时间,结果含虫血液在4℃环境下3日内活力不受影响,到第6日仍可培养成功,对结果影响不大。含虫培养物在4℃可保存活力15天之久。在液氮中可保存2个月或更长,     

家畜伊氏锥虫弱毒株免疫家兔抗体的消长规律及保护作用

以家畜伊氏锥虫弱毒株免疫家兔12只,然后进行攻虫试验。其中11只被保护,1只发病死亡。以BA-ELISA检测家兔免疫后及攻虫后特异性IgG、IgM的变化,发现免疫后IgG、IgM均于第21d达到峰值;攻虫后IgM于第6d达到峰值,IgG于第9d达到峰值。攻虫后,随着免疫组家兔体内特异性IgG、IgM的不断上升,其血液内的锥虫也同时被清除。体外中和试验也表明,特异性抗体对锥虫的感染力具有明显的抑制作用。     

运用伊氏锥虫抗原变异规律进行免疫的初步研究

为了克服锥虫抗原变异对宿主免疫反应的干扰，探索伊氏锥虫病高效保护性抗原，根据伊氏锥虫在宿主体内第一次发生变异产生的变异抗原免疫原性相同的规律，设计了伊氏锥虫变异前抗原（VSG1）和第二次变异所产生的抗原（VSG2）复合物作免疫原，对小鼠进行免疫与单用变异前抗原免疫鼠相比较，两组鼠都用带变异前抗原的虫攻击，另以未免疫的鼠作对照，结果VSG1＋VSG2免疫组小鼠8只全部获得保护，单用VSG1免疫组小鼠10只和未免疫组小鼠10只血中全部出虫而死亡，前者比后者出虫时间和存活时间延长，提示运用伊氏锥虫抗原变异这一规律设计的这种免疫复合物，能激收缩主克服虫体抗原变异对免疫保护的干扰。