基于纳米技术从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞并进行无创性产前诊断的可行性

目的 建立一种基于纳米技术从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞并进行无创性产前诊断的方法.方法 Percoll 1.077单密度梯度离心法之后,选用抗体CD147修饰到以玻璃为载体的纳米羟基磷灰石基底上,对新生儿脐血中的胎儿有核红细胞进行捕获,利用胎儿特异性抗体HbF、红细胞表面特异性抗体CD71以及细胞核染色剂DAPI对捕获到的新生儿脐血中有核红细胞进行染色标记,进而实现分选.对正常不同孕周孕妇外周血、未孕健康妇女外周血及新生儿脐血中抗体CD147捕获到的有核红细胞进行染色标记分选.抽取10例行常规产检时发现高危因素的孕妇外周血2 mL,用抗体CD147捕获胎儿有核红细胞并用X、Y、18、21染色体探针进行荧光原位杂交.结果 用HbF+CD71双标记染色法的胎儿有核红细胞阳性率与HbF单染和CD71单染标记的细胞阳性率相比差异有统计学意义(P<0.05);HbF单染和CD71单染标记的阳性细胞率之间相比差异无统计学意义(P>0.05);在孕16~20周时孕妇外周血中阳性细胞数目达到顶峰,之后随孕周增加而呈下降趋势.10例高危孕妇外周血标本均成功分离出胎儿有核红细胞,并经过FISH鉴定,本方法对男性胎儿诊断的灵敏度为85.71%,特异度为100.00%,对女性胎儿诊断的灵敏度为100.00%,特异度为85.71%,同时诊断出1例非整倍染色体胎儿,所有结果均经后期随访证实.结论 用纳米材料为基底,抗体CD147捕获,HbF+CD71双染色标记法对孕妇外周血中的胎儿有核红细胞进行识别和富集,可提高胎儿有核红细胞的检出率,可为进一步产前诊断奠定基础,最佳时机应该在孕16~20周.     

母血中胎儿有核红细胞的荧光原位杂交法在产前诊断中的可行性探讨

探讨荧光原位杂交法（FISH）对母血中胎儿有核红细胞（NRBC）进行无创性产前诊断的可行性。20例孕龄15-20周的孕妇外周血经不连续密度梯度离心、制片、显微镜下识别并共计数NRBC及定位，然后行Y染色体的FISH检测。结果发现10例孕男性胎儿的孕妇外周血细胞涂片中每例均有阳性杂交信号出现；阳性率为60％（24/40）。10例孕女性胎儿的孕妇外周血细胞涂片中1例出现阳性杂交信号；阴性率为95％（38/40），假阳性率仅为5％（2/40）。结果提示FISH法对于用母血中分离到的胎儿细胞进行染色体异常的无创性产前遗传学检查具有重要意义。     

荧光原位杂交技术快速产前诊断胎儿常见染色体非整倍体异常研究

目的 探讨荧光原位杂交 (FISH) 技术在产前诊断羊水细胞非整倍体异常中的应用价值.方法 对河北医科大学第二医院100例孕15～22周有产前诊断指征的孕妇进行羊水穿刺,采用13、18、21、X和Y染色体特异性DNA探针对羊水细胞进行FISH检测,同时对所有羊水标本行常规染色体核型分析作为对照.结果 羊水细胞均获得FISH检测结果,染色体数目正常者98例;染色体数目异常者2例,其中1例为21三体综合征,1例为18三体综合征.结论 FISH技术用于产前诊断常见染色体数目异常,具有快速、简便、使用标本量少等优点,尤其对于胎儿非整倍体高危的孕妇,FISH技术值得推广成为一种常规的检查方法.     

联合应用荧光原位杂交与核型分析在产前诊断的对比研究

目的 探讨荧光原位杂交(FISH)和核型分析技术在产前诊断中的优势和不足.方法 在B超引导下抽取150例孕妇的羊水,用特异性探针GLP13/21和CSP18/X/Y对未培养的羊水细胞进行原位杂交;同时培养羊水细胞进行核型分析,并结果对比.结果 150例羊水细胞核型分析和FISH检测结果均成功.核型分析报告时间为10～15 d,而FISH仅为2d.150例羊水细胞,染色体非整倍体46例,结构异常7例.FISH检测出非整倍体45例,敏感性97.83％;未能检测出1例X染色体部分缺失及其他结构多态性;无假阳性结果,特异性保持在100.00％.结论 FISH可以快速、准确地诊断胎儿染色体数目异常,但判断结构异常仍需核型分析.     

应用荧光原位杂交技术对50例羊水标本产前诊断的研究

目的 探讨荧光原位杂交技术诊断未培养羊水细胞非整倍体的临床应用价值.方法 选用X、Y、13、18、2l号特异性探针对50例有产前诊断指征的孕妇进行羊水间期细胞的FISH分析及染色体核型分析.结果 被检50例羊水未培养细胞均获得诊断结果,检测出"21 三体"3例,检测结果与染色体核型分析及随访相符.结论 应用染色体特异性探针对羊水间期细胞进行FISH分析可用于胎儿染色体非整倍体的产前诊断,该方法具有快速、准确、灵敏度高的优点.     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集

目的 :从孕妇外周血中分选富集出胎儿有核红细胞 ,以便用于无创伤性产前诊断。方法从 32例孕 11～ 2 0周的孕妇血中用Histopaque 10 77密度梯度离心富集以及流式细胞仪计数出胎儿有核红细胞 ,并用喹吖因荧光染色检测Y 染色体以及用PCR检测Y -染色体DNA特异序列。结果流式细胞仪计数 ,每毫升孕妇外周血中计数到 0 .93× 10 3 ～ 8.11× 10 3 个GPA阳性细胞 ;PCR结果与产后性别证实 ,符合率为 90 .0 6 %。结论孕妇外周血中的胎儿有核红细胞经密度梯度离心和流式细胞仪分离后 ,可得到一定程度的富集和纯化 ,11～ 2 0周内FNRBCs数与孕期似无相关性 ,为非创伤性产前诊断提供实验数据与方法基础     

荧光原位杂交产前诊断羊水间期细胞非整倍体的临床应用价值

目的 探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)诊断羊水间期细胞非整倍体的临床应用价值.方法 收集547例孕妇中唐氏综合征筛查阳性者28例及3例具有其他产前诊断指征的孕妇,共计31例患者的羊水,应用13/21号染色体特异性双色探针对羊水间期细胞进行FISH检测,以羊水培养细胞常规G显带核型分析作为FISH检测结果对照.结果 31例标本中1例发生母血严重污染,其余30份标本均杂交成功(包括1例混浊羊水).FISH检测结果发现典型21三体1例,未发现13三体.FISH诊断结果与核型分析结果一致.结论 FISH产前诊断羊水间期细胞非整倍体准确率与核型分析一致,与核型分析相比,FISH具有快速、所需样本量少且结果直观易辨的优势,有较高的临床应用价值.     

荧光原位杂交技术快速产前诊断胎儿常见染色体非整倍体异常分析

目的:探究荧光原位杂交技术快速产前诊断胎儿常见染色体非整倍体异常,以供临床参考以及研。方法:本次研究对象从2015年1月~2016年3月于我院诊断有产前指征的孕妇中选取120例,之后对孕妇采用羊膜腔穿刺获得羊水细胞之后,再采用荧光标记的DNA探针对羊水细胞间期核的DNA进行杂交,分析染色体非整倍体异常。结果:通过本文研究结果中可以看出,在120例孕妇的羊水细胞样本中,通过多色荧光原位杂交检验,检出胎儿畸形与不良孕产史患者的核型分析异常为0,荧光原位杂交检出结果同样也为0,而孕妇血清筛查高风险中可以看出,核型分析异常例数为1,荧光原位杂交检出结果为1。结论:采用荧光原位杂交技术快速产前诊断胎儿常见染色体非整倍体异常现象,具有一定的诊断价值,操作简便,诊断迅速,对样本的要求并不高,适用于任何核细胞的检测,值得临床进一步应用以及推广。     

双色FISH检测人精子染色体非整倍体方法的建立

建立：用双色FISH检测人精子染色体非整倍体的方法。方法：采用双色荧光原位杂交（FISH）方法取适量精子标本用EDTA／PBS处理,然后用二硫苏糖醇（DTT）,使精子去凝集。固定后滴片,然后与双色荧光直接标记探针杂交。结果：在OLYMPUS荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的蓝色杂交信号,头部有1个绿色荧光杂交信号的精子为X染色体精子（X精子）,有1个红色荧光杂交信号的精子为Y染色体精子（Y精子）。精子头部有2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子。结论：双色荧光原位杂交（FISH）方法可以用于测定人精子染色体非整倍体率的变化。     

以孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞进行苯丙酮尿症的非损伤性产前基因诊断

中华医学基金会基金;国家杰出青年科学基金从孕妇外周血中分离胎儿细胞进行非损伤性产前基因诊断，对胎儿和孕妇均无损伤，易于被接受与推广，是遗传病产前诊断的发展方向。但是这一领域的研究一直因材料与技术的限制而发展较缓慢。本组采用从孕妇外周血中分离的单个胎儿有核红细胞，对两例苯丙酮尿症（ＰＫＵ）风险胎儿进行产前基因诊断。方法　两例ＰＫＵ携带者孕妇外周血各１０ｍｌ，用三密度梯度离心方法分离获得的有核红细胞，经磁性激活的细胞分离（ＭＡＣＳ）法富集ＣＤ７１＋细胞。后者经免疫组化染色，鉴别出胎儿血红蛋白阳性（Ｈ…     

Clinical use of blood, blood components and blood products.

The goal of modern transfusion therapy is to provide appropriate replacement therapy with blood components as opposed to whole blood for patients with specific hematologic deficiencies. A prerequisite of component therapy is, therefore, correct identification of the deficiency. Appropriate use of components avoids many of the hazards associated with the use of whole blood, and at the same time makes maximal use of this valuable resource. Blood components separated from whole blood soon after collection and appropriately stored can, in combination, provide all the factors present in fresh whole blood. Red cell concentrates prepared from multiple packs have a hematocrit of approximately 70%. They may be stored for up to 3 weeks at 4 degrees C and are recommended for most situations requiring red cell transfusions. Platelet concentrates, which can be stored for up to 72 hours at 22 degrees C, may be used for thrombocytopenic patients. Fresh frozen plasma, stored plasma, cryoprecipitated factor VIII, factor VIII concentrate and factor IX complex concentrate are available for the proper treatment of patients with hemorrhagic disorders due to coagulation factor deficiencies. Similarly, albumin and immune serum globulin are available for their oncotic and antibody properties respectively. Thus, the availability and appropriate use of the various blood products allows not only optimal transfusion therapy for each patient, but also fuller utilization of national blood resources.     

肝移植输用不同血型成分血量分析及血液储备评估

目的通过分析肝移植手术各种成分血液的用量，更好地为临床保障供应所需各种成分血。方法对本院226例肝移植患者术中用成分血进行了回顾性分析。结果血型分布：A型患者占36．28％，B型占25．22％，O型占30．53％，AB型占7．96％；用红细胞与血浆分别所占比例：A型用2000ml以上的占29．27％、21．95％，B型占33．33％、22．80％，0型占40．03％、42．03％，AB型占50％、38．89％。结论O型与AB型总体用血量比A型与B型多；应适当准备一定量的O型红细胞及AB型血浆，术前详细了解患者病情，适当合理准备各种成分血，凝血因子Ⅷ、纤维蛋白原、凝血酶原复合物等。既可防止由于紧急情况造成的血液供给不足，又可避免术前血液储备过剩造成血液资源浪费。     

真空采血器与注射器两种采血方法比较

目的探讨真空采血器与注射器两种采血方法的优缺点。方法真空采血组和注射器采血组各1020例,分析两种采血方法的一次性成功率、采血时间、标本合格率、操作台及操作者污染率。结果负压真空采血器优于注射器采血。结论真空采血器具有干净、安全、准确、快捷、可靠的优点,提高了实验数据的准确性,最大限度地避免了院内感染。     

库血复温后有形成份、生化及血气改变的研究

目的 通过对库血复温前后成份改变的对比观察与研究,为临床大量输入复温库血,更安全有效地抢救病人提供理论依据和有效方法。方法 将每个库血样本分为对照组和复温组。对两组血液在有形成份、生化及血气方面进行比较。结果 复温后血液红细胞、白细胞、红细胞压积、Na^ 、Cl^-、Ca^2 、氧分压、血氧饱和度无明显变化。血小板计数、K^ 、乳酸脱氢酶明显升高。血液pH、二氧化碳分压、剩余碱、缓冲碱、HCO3^-明显降低。结论 库血复温后,对血液有形成份、生化及血气的影响利多弊少,对大失血病人的急救是一种安全有效的方法。     

去白细胞血液的制备及血液质量分析

目的探讨不同白细胞滤除方法对血液质量的影响,选择并建立合适的制备方法。方法采用采血袋与滤器一体的多联采血袋,分别采用直接过滤法、制备后过滤法对采集的全血和制备的悬浮红细胞进行白细胞过滤,制备去白细胞悬浮红细胞。分析过滤后血液相关质量指标。结果制备后过滤法可以制备各种血液成分,保障了血小板和新鲜冰冻血浆的质量。8h后直接过滤法适合用于乡镇或路程较远的县城采血、减少滤器堵塞情况。制备后过滤法、6h内直接过滤法与8h后直接过滤法白细胞残留量、血红蛋白含量、过滤时间差异有统计学意义(P<0.05)。结论三种过滤法制备的去白细胞悬浮红细胞均符合GB18469-2012要求,使血液更安全。     

中心静脉血、肘静脉血与混合静脉血血气指标值相关性研究

目的比较中心静脉血和肘静脉血血气值与混合静脉血正常血气值的相关性。方法监测54名马拉松赛业余选手（活动组）赛前的动脉血、肘静脉血血气和30名无心肺疾患的术后病人（静息组）全麻拔管前动脉血、中心静脉血和肘静脉血血气。比较肘静脉血、中心静脉血血气值与混合静脉血正常血气值的相关性。结果 84名被测者动脉PO2和PaCO2均正常;肘静脉血PO2均值30.1 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）低于混合静脉血氧分压（P vO2）23%,低于中心静脉PO218%左右。结论混合静脉血、中心静脉血和肘静脉的血气三者具有一定的相关性,在无条件监测PvO2时可用中心静脉或肘静脉血气值作参考。