鲍曼不动杆菌临床分离株分子生物学鉴定分析

目的了解目前鲍曼不动杆菌临床鉴定分析的准确性及可能存在的问题。方法本研究随机抽取100株临床鉴定为鲍曼不动杆菌的临床分离鉴定株开展了扩增核糖体DNA限制酶切分析,16S rRNA编码基因及16S~23S rRNA间区测序鉴定分析。结果鉴定出5个不动杆菌种,分别为鲍曼不动杆菌(77%),菌种3(9%),菌种10(6%),菌种13TU(3%),琼氏不动杆菌(2%),还有3%为非不动杆菌。结论目前临床实验室对鲍曼不动杆菌的鉴定准确性较低,可能影响对不动杆菌不同种的流行病学特征和临床状况的认知,临床不动杆菌的鉴定能力有待加强。     

儿童血流感染苍白杆菌的鉴定和同源性分析

目的对儿童血液样本中分离的苍白杆菌进行菌种鉴定和同源性分析。方法收集经Vitek 2 Compact仪器鉴定的人苍白杆菌26株,用API微生物鉴定药敏分析系统及配套20非肠杆菌科细菌鉴定试条(20 NE)进行再鉴定,并用手工试验进行生化表型鉴定;PCR扩增16S rRNA基因、rec A基因并进行测序分析;采用Vitek 2 Compact及配套GN13卡进行药敏试验;采用脉冲场凝胶电泳进行同源性分析。结果 26株经仪器鉴定及手工生化鉴定均为人苍白杆菌。16S rRNA基因和rec A基因扩增产物测序分析,25株为解糖假苍白杆菌,1株为假贵格纳苍白杆菌。药敏分析显示以上26株菌株对氨曲南均耐药,对喹诺酮类、氨基糖苷类、复方磺胺甲噁唑、头孢菌素和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率在80%以上。脉冲场凝胶电泳分析显示,该25株解糖精假苍白杆菌为高度同源菌株,仅有1~3条带的差异。结论结合生化表型、基因扩增和测序分析可以将苍白杆菌鉴定至种。检测菌株中解糖精假苍白杆菌高度同源,可能为一次聚集性感染。     

30株苍白杆菌的分离鉴定和药物敏感性分析

目的分析临床苍白杆菌分离株的种型特征和药物敏感性。方法收集临床分离苍白杆菌共30株。用手工生化试验、Vitek 2 Compact GN鉴定卡、API 20NE鉴定试条进行生化鉴定,扩增16S rRNA基因并进行测序鉴定和序列分析。用Vitek 2Compact AST-GN13药敏鉴定卡进行微量稀释法的药敏实验。结果经生化鉴定和基因测序,17株为人苍白杆菌、10株为中间苍白杆菌、1株为嗜血苍白杆菌、1株疑为苍白杆菌属内未分类的新种、1株为解糖精假苍白杆菌。药敏试验显示对喹诺酮类和亚胺培南的敏感率分别为100%和93.3%;对三代头孢类抗菌药物和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为93.3%和96.7%;对氨基糖苷类抗菌药物敏感性因菌种而异,人苍白杆菌对阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素的敏感率分别为94.1%、88.2%和94.1%,而中间苍白杆菌为0%、10%和0%,差异具有统计学意义(χ2=14.50,P0.05)。结论临床苍白杆菌感染主要由人苍白杆菌和中间苍白杆菌引起,二者对氨基糖苷类抗菌药物敏感率的差异可用于其种型的区分。     

1株抗酸阳性丙酸杆菌的分离和鉴定

目的对1株乳腺脓肿标本分离的缓慢生长革兰阳性抗酸杆菌进行菌种鉴定。方法采用细菌的16S核糖体核糖核酸(rRNA)基因测序分析,结合细菌的菌体形态、生长特征、API 20A和手工生化实验进行菌种鉴定。结果该菌为厌氧的、无芽孢、直或弯曲的多形性杆菌,革兰和抗酸染色为阳性。血平板培养5d形成直径大于2mm、米黄色、圆形、光滑、突起、边缘整齐、β溶血性菌落。但16SrRNA基因测序分析发现,该菌与贪婪丙酸杆菌的同源性为100%,API 20A生化编码为44365062,VP试验的阳性,符合贪婪丙酸杆菌的特征。结论该乳腺脓肿的病原菌为贪婪丙酸杆菌,其抗酸染色阳性,为国内首次报道。     

1株脓肿分枝杆菌临床分离株的鉴定

正脓肿分枝杆菌是一种不产色素的快速生长的分枝杆菌,与龟分枝杆菌亲缘关系较近。在快速生长的分枝杆菌引起的疾病中,60%~80%的慢性肺病由该菌导致,该菌也是引起创伤后伤口感染的主要病原体。在我国有脓肿分枝杆菌造成肺部病变和软组织损害的报道[1-3]。1资料与方法1.1一般资料患者,男,74岁。因气短、咳嗽咳痰20余年,     

16S rRNA 测序鉴定1株条件致病性人苍白杆菌

目的：探索一种基于16S rRNA 基因的细菌快速鉴定方法,为临床未知病原菌的诊断及治疗提供科学依据。方法对临床患者的痰标本分离培养纯菌落,直接以菌液为模板,以通用引物 PCR 扩增未知菌的16S rRNA 基因片段,产物直接测序。将测序结果进行 BLAST 比对,根据序列同源性鉴定病原细菌。结果未知病原菌经本实验鉴定为人苍白杆菌,经 ABI 细菌快速鉴定板条检测,确认结果一致。结论该研究简化了临床标本未知病原菌分离培养鉴定的步骤,建立了一种利用16S rRNA 基因扩增快速鉴定病原菌的简便方法。     

一株发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的分离鉴定及其生长特性研究

目的 探索疑似发热伴血小板减少综合征病例中病原体的分离鉴定,了解病毒生长特性。方法 利用非洲绿猴肾细胞Vero E6从患者抗凝血标本中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SFTSV）,并通过血清学、形态学等方法对病毒进行鉴定;将分离的病毒接种不同细胞,利用荧光定量PCR检测不同时间细胞上清中病毒载量的变化。结果 从患者抗凝血标本中分离出SFTSV;免疫荧光显示感染病毒的细胞培养物能与患者血清发生阳性反应;在透射电镜下能观察到布尼亚病毒样颗粒。SFTSV可感染Vero E6、Hep G2、THP-1等多种细胞,但病毒在不同细胞中的复制水平差异明显。其中Vero E6细胞对SFTSV较易感,病毒可增殖至4.89109 copy/ml。而Hep-2和HT29细胞不能被SFTSV感染。结论 从疑似发热伴血小板减少综合征病例血液标本中成功分离出SFTSV。该病毒具有较广泛的细胞嗜性,对肾来源的细胞更易感。这些研究将为后续研究SFTSV的相关基础研究提供重要的线索。     

1株耐碳青霉烯洛菲不动杆菌的鉴定

摘要：目的：探讨1株碳青霉烯耐药洛菲不动杆菌临床分离株（Al 1611）的耐药机制。 方法：用K-B纸片法和琼脂稀释法对其进行药敏分析;ATB 32GN及16S rRNA进行菌株鉴定;改良Hodge试验及双纸片协同试验进行碳青霉烯酶表型筛选;PCR和DNA测序法检测碳青霉烯酶及整合子相关基因;接合试验探讨耐药基因的可传递性。 结果：Al 1611除对包括碳青霉烯类在内的所有β-内酰胺类药物耐药外,对喹诺酮类也呈现耐药;对四环素类、氨基糖苷类、磺胺类以及多粘菌素B显示为敏感;改良Hodge试验阴性;EDTA协同试验阳性;该菌扩增出NDM-1基因,未扩增出其他碳青霉烯酶基因及整合子相关基因;接合试验未获成功。 结论：该菌株对亚胺培南耐药与产NDM 1酶相关,该基因可能并不存在于可经结合传递的质粒上。     

鲍曼不动杆菌院内感染株的耐药及同源性分析

鲍曼不动杆菌（AB）由于其对营养无特殊要求，抵抗力强，在干燥物体表面可存活时间长，在住院病人中定植率为75％，所以极易播散并引起院内感染。同时，由于长期抗生素选择压力使多重耐药株明显增加，特别是对碳青霉烯类的耐药，给临床抗菌治疗带来困难。作者对分离的223株鲍曼不动杆菌进行了抗菌药物敏感性试验，并对27株耐碳青霉烯类抗生素的菌株进行基因分型，结合临床资料分析感染源头及途径，现报告如下。     

呼吸道标本中1株奇异劳特普罗菌的分离及鉴定

目的探讨奇异劳特普罗菌(Lautropia mirabilis)的生物学特性。方法对一住院患者多次合格痰样本中分离的1株奇异劳特普罗菌行革兰染色、抗酸染色等形态学观察;采用微量生化反应管验证其生化反应;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)及16S r DNA测序对其进行鉴定。结果该菌在5%CO235℃血平板上培养24～48 h形成大小不等、白至浅黄色、粗糙、不溶血、干燥、呈"咬琼脂"现象的菌落;革兰染色呈革兰阴性不规则球状体,抗酸染色阴性;主要微量生化反应阳性结果包括脲酶、葡萄糖、麦芽糖、硝酸盐还原试验,阴性结果包括乳糖、蔗糖、苯丙氨酸脱氨酶、VP、吲哚、鸟氨酸、赖氨酸、枸橼酸、甘露醇; MALDI-TOF MS鉴定结果为奇异劳特普罗菌(Lautropia mirabilis,Score 2.130),16S r DNA鉴定确证为奇异劳特普罗菌(Lautropia mirabilis)。结论该菌菌落及镜下菌体形态不规则,目前基于MALDI-TOF MS的鉴定手段快速且准确。     

1株非O1群非O139群霍乱弧菌的错误鉴定和原因分析

<正>霍乱弧菌(Vibrio cholerae)是弧菌科弧菌属中具有相似生化性状、相同鞭毛抗原、不同菌体抗原的弧菌的统称,按照菌体脂多糖抗原的不同,已分离出200余个血清群[1],除O1群和O139群的产毒株会导致霍乱的大流行外,其他非O1群非O139群霍乱弧菌亦可引起感染性腹泻、败血症等[2]。本研究从我院收治的1例腹泻患者粪便标本中分离培养到1株非O1群非O139群霍乱弧菌,然而布鲁克基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Bruker BioT yperTMMALDI-TOF MS)仪却错误鉴定为易北河弧菌(Vibrio albensis)。报道如下。     

肺炎克雷伯杆菌噬菌体的分离鉴定和生物学特性的研究

肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella pneumoniae）为革兰氏阴性杆菌,属于肠杆菌科（Enterobaeteriaceae）克雷伯菌属（klebsiella）,为兼性厌氧菌,广泛分布于自然界,近年来成为仅次于大肠杆菌的最重要的条件致病菌。噬菌体（Bacteriophage）是杀细菌的病毒,依其裂菌特性分为裂解性噬菌体（lytic bacteriophage）和溶原性噬菌体（lysogenic bacteriophage）。     

3种方法对1株临床疑难菌的鉴定及结果比较

目的 通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、16S rRNA序列分析和全基因组测序(WGS)对从临床标本中分离的1株疑似盐单胞菌进行菌种鉴定,比较3种方法的鉴定结果。方法 采用MALDI-TOF MS对待测菌进行蛋白质图谱收集,通过比对图谱特征峰实现菌种鉴定;对菌株进行16S rRNA基因测序,将测序结果与数据库比对;待测菌WGS后进行序列比对分析,具体包括使用ANIm和ANIb 2种方法计算平均核苷酸一致性(ANI)以及与基因组分类数据库(GTDB)进行比对;基于全基因组序列中的16S rRNA序列和看家基因序列构建系统进化树,以及基于COG和KEGG功能对基因组进行聚类分析。结果 MALDI-TOF MS对待测菌株的鉴定结果是Halomonas hamiltonii;经16S rRNA序列分析,发现待测菌株与3种盐单胞菌(Halomonas hamiltonii、Halomonas stevensii和Halomonas johnsoniae)的相似度均>99%,且相似度差异非常小,因此无法进行准确的菌种鉴定;基于WGS的基因序列比对、系统发育树、...     

1例急性坏死性胰腺炎术后伴发鲍曼不动杆菌感染病人的护理

急性胰腺炎是胰腺分泌的消化胰腺本身及其邻近组织而引起的急性炎症,起病急、病情凶险、预后较差、病死率高.术后伴发鲍曼不动杆菌的感染,严重威胁病人生命,因此在诊治和护理方面存在一定的难度.     

从痰中分离出多重耐药的人苍白杆菌1株

患者,男,65岁,2006年9月间突发脑溢血先在某医院行气管切开插管、右侧脑室切开减压引流术,住院一段时间后因继发肺部感染,病情加重转至西南医院,经再度手术治疗、抗感染治疗后,病情稳定.12月间转入本院重症监护室(ICU),继续治疗.2007年1月7日送痰标本至本科微生物室进行细菌培养及药敏试验,分离出人苍白杆菌.     

1例脑脊液中表型特异的地衣芽孢杆菌的生化特征及其分子生物学鉴定

2010年8月本室从1例患儿脑脊液中分离出地衣芽孢杆菌(BL),因该菌的表型特征特别,进一步做了鉴定,现报道如下。临床资料患儿,男,1月龄,因咳嗽10多天,体温37.7℃1 d,抽搐2次入院。手指血白细胞计数12.01×109/L,嗜中性粒细胞6.7%、淋巴细胞68.2%、单核细胞14.1%、嗜酸性粒细胞     

67株鲍曼不动杆菌的分布和耐药分析

目的 了解临床标本中鲍曼不动杆菌的分布特征及耐药特点.方法 SENSITITRE荧光法全自动快速微生物鉴定仪Aris进行菌株鉴定,采用纸片扩散法(KB法)和CLSI2009年的判定标准作药敏试验.应用WHONET软件对标本进行统计学处理.结果 菌株多数来源痰标本,占79.1%(53/67);其次为分泌物和脓标本,分别占7.46%(5/67),5.97%(4/67);引流液标本为4.48%(3/67);尿和其他标本各占1.49%(1/67).菌株非敏感率(耐药率及中敏率)最低分别为亚胺培南7.6%和头孢哌酮-舒巴坦8.8%;其次为米诺环纱为18.7%;替卡西林-克拉维酸、头孢吡肟、哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮非敏感率在26.6%-28.8%之间;头孢西丁、头孢唑林、头孢呋辛非敏感率高达86.2%～100%.多重耐药菌株(MDRAB)占11.94%(8/67).结论 鲍曼不动杆菌是医院感染中重要的条件致病菌,多重耐药不容忽视,应加强对抗生素耐药性监测,促进临床重视抗生素合理应用,减少多重耐药株产生.