哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与气道炎症反应的关系

目的 观察哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）数量的改变及其与气道炎症反应的关系。方法健康6周龄SPF级BALB/c小鼠20只,随机分为2组：正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）,B组以卵白蛋白（OVA）致敏激发方法建立小鼠哮喘模型;流式细胞术检测小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞的比例;检测小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）炎症细胞数;BALF炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数分别与外周血CD4^＋CD25^＋Treg作相关分析。结果A组、B组小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞比例分别为（5．81±0．76）％、（3．21±0．74）％,差异有统计学意义（P〈0．05）BALF炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数与外周血CD4^＋CD25^＋Treg呈负相关,相关系数分别为-0．929和-0．920。差异有统计学意义（P〈0．001）结论哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞比例较正常对照组显著减少。且与哮喘小鼠气道炎症反应密切相关。     

黄芪对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及IL-4IFN-γIL-10的影响

目的探讨黄芪对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及IL-4、IFN-γI、L-10的影响。方法将BALB/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组和黄芪组。以卵蛋白（OVA）致敏激发法制备小鼠哮喘模型。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、IFN-γ、IL-10及血清中IL-10的含量;流式细胞术（FCM）、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测小鼠脾脏中CD4＋CD25＋调节性T细胞数量及FoxP3 mRNA表达情况。结果哮喘组小鼠BALF中IL-4含量明显高于对照组（P〈0.01）而低于黄芪组（P〈0.01）。与对照组相比,哮喘组小鼠BALF中IFN-γI、L-10、血清中IL-10含量及脾脏中CD4＋CD25＋调节性T细胞数量、FoxP3 mRNA表达水平明显降低（P〈0.01）;而黄芪组的上述改变较哮喘组显著增加（P〈0.05）。结论 CD4^＋CD25^＋调节性T细胞参与了支气管哮喘的发病过程,黄芪可通过上调CD4^＋CD25^＋调节性T细胞、FoxP3 mRNA的表达及增加IL-10含量减轻哮喘炎症。     

霉酚酸酯对哮喘小鼠骨髓CD34+造血细胞的干预作用

目的：研究新型免疫抑制剂霉酚酸酯对哮喘小鼠骨髓CD34^＋造血细胞生物活性的影响。并与糖皮质激素比较．探讨其潜在的治疗哮喘的机制及可能性。方法：以卵白蛋白（OVA）致敏并激发BALB／c小鼠建立哮喘模型。连续激发2周期间分为3组，每组6只，分别给予生理盐水（对照，A组）、泼尼松（B组）及霉酚酸酯（C组）灌胃．末次激发后24h分别取支气管肺泡灌洗液（BALF）、外周血及骨髓，测定BALF、外周血中有核细胞的分类计数及骨髓中有核细胞总数：ELISA方法测定外周血中IL-5水平；流式细胞仪测定外周血及骨髓中CD34^＋造血细胞、CD4^＋T淋巴细胞占有核细胞的比例：免疫组化结合原位杂交法检测骨髓内表达白细胞介素5（IL-5）受体α链mRNA的CD34^＋造血细胞（CD34^＋IL-5Rα mRNA^＋细胞）计数。结果：B、C组哮喘小鼠BALF中细胞总数、EOS计数，外周血中CD34^＋造血细胞计数及外周血中IL-5水平均低于A组相应指标．且差异有显著性（均P〈0．05）；C组BALF及外周血巾EOS计数、骨髓中CD34^＋造血细胞计数及CD34^＋IL-5RαmRNA＋细胞计数与B组相应指标比较，差异有显著性（均P〈0．05）。结论：霉酚酯酸（MMF）可能抑制嗜酸粒细胞（EOS）、T淋巴细胞的肺内浸润，抑制CD34^＋造血细胞从骨髓迁移至外周血，它可能主要通过抑制淋巴细胞增殖，减少IL-5的产生．来影响骨髓EOS祖细胞的分化。     

特异性免疫治疗对哮喘大鼠转化生长因子-β1和CD4＋CD25＋调节性T细胞的影响

目的 探讨特异性免疫治疗（specific immunotherapy,SIT）对哮喘大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）和CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Tr）的影响.方法 40只健康雄性清洁级Wistar大鼠随机分为哮喘组、正常对照组、SIT对照组和SIT治疗组4组,每组10只.通过卵蛋白（OVA）雾吸减敏的方法对致敏大鼠进行SIT,观察各组支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞分类及计数结果、血清和BALF中TGF-β1水平及外周血CD4＋CD25＋Tr百分率变化.结果 哮喘组血清和BALF中TGF-β1水平分别高于正常对照组（均P＜0.01）和SIT治疗组（P＜0.05或0.01）;正常对照组外周血CD4＋CD25＋Tr百分率显著高于哮喘组（P＜0.01）和SIT治疗组（P＜0.01）,而SIT治疗组CD4＋CD25＋Tr百分率高于哮喘组（P＜0.05）.结论 特异性免疫治疗可下调哮喘大鼠体内TGF-β1水平和纠正调节性T细胞的缺失状态.     

重组Der f1变应原诱导小鼠哮喘模型的建立

目的建立重组粉尘螨Ⅰ类变应原（Der f1）诱导BALB/c小鼠哮喘模型。方法 30只BALB/c小鼠随机分成3组：PBS阴性对照组、卵清蛋白（OVA）阳性对照组、重组Der f1模型组。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中IgG1、IgG2α和IgE含量,ELISA法检测脾细胞培养上清液和支气管肺泡灌洗液（BALF）IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ含量,计数BALF中细胞总数,同时切取小鼠未灌洗侧肺组织进行病理学观察。结果 OVA阳性对照组、重组Der f1模型组小鼠血清中IgG1、IgG2a和IgE含量,脾细胞上清液和BALF中IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ含量与PBS阴性对照组相比差异均具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;OVA阳性对照组、重组Der f1模型组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞（EOS）计数显著高于PBS组（P〈0.05或P〈0.01）。OVA阳性对照组和重组Der f1模型组小鼠肺部病理改变呈明显的变态反应性炎症。结论用重组Der f1能成功诱导BALB/c小鼠哮喘模型。     

地塞米松对哮喘小鼠MIP-1α蛋白和mRNA表达的调控

目的:探讨地塞米松对哮喘小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)蛋白和mRNA表达的调控作用.方法:30只二级雄性BALB/C小鼠分为3组:正常小鼠组(A组)、哮喘小鼠组(B组)和地塞米松处理组(C组).以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型.采用免疫组化法和原位杂交法检测MIP-1α蛋白和mRNA在支气管中的表达情况.结果:免疫组化和原位杂交均显示B组支气管MIP-1α蛋白和mRNA的表达显著高于A组(P＜0.01),C组支气管MIP-1α蛋白和mRNA的表达显著低于B组(P＜0.01).结论:MIP-1α参与哮喘发病机制,上皮细胞是主要的表达细胞;地塞米松对哮喘的治疗部分通过抑制MIP-1α等趋化因子起作用.     

叶绿素铜钠联合三黄三仙汤治疗免疫介导再生障碍性贫血的动物实验研究

目的探讨叶绿素铜钠联合三黄三仙汤（YST）对再生障碍性贫血的治疗作用及机制。方法动物实验研究：建立免疫介导再生障碍性贫血（AA）小鼠模型,随机分为空白对照组、模型对照组、CsA对照组、叶绿素铜钠盐组、叶绿素铜钠联合三黄三仙汤（YST）组,每组10只,2周后处死检测血象、骨髓像、骨髓病理切片、外周血CD4＋、CD8＋、TNF-α、IL-6含量。结果YST能延长模型小鼠生存,降低模型小鼠的死亡率;改善模型小鼠的外周血红细胞,白细胞及血小板;提高骨髓有核细胞数;改善骨髓病理改变;降低外周血CD8＋细胞,增加CD4＋细胞比率,提高CD4＋/CD8＋T细胞比值;降低血TNF-α,IL-6水平;与模型组比较有显著性差异（ P＜0.05）。结论YST对AA模型小鼠有较好的治疗作用。     

祛风平喘汤治疗支气管哮喘89例

目的观察祛风平喘汤治疗支气管哮喘的疗效，及对患者肺功能、外周血嗜酸粒细胞记数（EOS）、血清IgE的影响。方法用祛风平喘汤（荆芥、防风、麻黄、黄芩、黄芪、川芎等）治疗支气管哮喘89例。并设对照组（普米克加万托林）。检测患者治疗前后FEV1（第一秒用力呼气容积）、EOS（外周血嗜酸粒细胞记数）、血清IgE（免疫球蛋白E）。结果两组疗效有显著性差异（P〈0．05），治疗后，两组EOS、IgE均明显降低（P〈0．01）。结论祛风平喘汤对支气管哮喘有明确的疗效，并有降低外周血嗜酸粒细胞记数（EOS）、血清IgE水平的功效。     

抗CD1d单克隆抗体对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:观察抗CD1d单克隆抗体对鸡卵清白蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠气道炎症的影响。方法:将15只BALB/c小鼠随机分为抗CD1d单克隆抗体组、哮喘组和对照组,每组5只。抗CD1d单克隆抗体组、哮喘组和对照组分别采用OVA和PBS致敏和激发;抗CD1d单克隆抗体组在激发前1h尾静脉注射抗CD1d单克隆抗体,哮喘组和对照组以等量PBS代替。分别采用HE和PAS染色检测肺组织学和支气管杯状细胞数量;瑞氏-姬姆萨染色检测支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和分类计数;ELISA法检测血清OVA特异性IgE和BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平;流式细胞术检测肺Ⅰ型NKT细胞、IL-4~+和IFN-γ~+Ⅰ型NKT细胞的数量。结果:抗CD1d单克隆抗体组小鼠肺组织炎性细胞和气道基底膜杯状细胞减少;BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞数量明显减少、血清OVA特异性IgE和BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平明显低于哮喘组(均P<0.05)。抗CD1d单克隆抗体组小鼠肺Ⅰ型NKT细胞、IL-4~+和IFN-γ~+Ⅰ型NKT细胞数量明显低于哮喘组(均P<0.01)。结论:抗CD1d单克隆抗体可能通过抑制Ⅰ型NKT细胞活性减轻哮喘小鼠气道炎症。     

三氧化二砷对支气管哮喘小鼠Th17细胞的影响

目的 观察三氧化二砷（ATO）对支气管哮喘小鼠Th 17细胞和IL-17的影响.方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和ATO组.末次激发24小时后,测定气道肺阻力,收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,细胞分类计数,流式细胞仪检测脾脏Th17细胞阳性率.ATO干预20小时后,检测培养上清液及BALF中IL-17及IL-4水平.结果 ①哮喘组BALF中各类炎症细胞均明显高于对照组（P＜0.05）,而ATO组明显低于哮喘组（P＜0.01）.②哮喘组肺阻力、脾脏CD4＋T细胞总数、Th17细胞阳性率、BALF中IL-17及IL-4均明显高于对照组,而ATO组上述指标均明显低于哮喘组（P＜0.05）.③ATO干预组培养上清液中IL-17、IL-4含量显著低于原液组（P＜0.01）.④Th17细胞阳性率、IL-17含量均与中性粒细胞数量呈显著正相关（P＜0.05）.结论 ATO能够抑制Th17细胞、IL-17的表达,减轻哮喘小鼠气道炎症及高反应性.     

转化生长因子-β1、肿瘤坏死因子-α、可溶性白细胞介素2受体及T细胞亚群与肺尘埃沉着病分期和肺功能的关系

目的 探讨外周血和支气管肺泡灌洗液（BALF）中转化生长因子-β1 （TGF-β1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）水平及外周血T细胞亚群与肺尘埃沉着病（简称尘肺）分期和肺功能的关系.方法 选择2010年4月～2012年7月在郑州煤炭工业集团有限责任公司总医院治疗的尘肺患者68例为尘肺组,另选择同期接尘组和对照组各35例,采用酶联免疫吸附法检测三组外周血及尘肺组BALF中TGF-β1、TNF-α、sIL-2R水平,采用流式细胞技术检测三组外周血T细胞亚群并检测尘肺组肺功能.结果 尘肺组、接尘组和对照组血清TGF-β1和sIL-2R水平差异有统计学意义（P＜0.05）,尘肺组不同分期血清TGF-β1、TNF-α、sIL-2R水平差异有统计学意义（P＜0.05）,不同尘肺分期血清TGF-β1、sIL-2R水平均显著高于接尘组和对照组（P＜0.05）,Ⅱ、Ⅲ期血清TNF-α水平显著低于接尘组和对照组（P＜ 0.05）;血清TGF-β1、sIL-2R水平与尘肺分期呈正相关（P＜0.05）,血清TNF-α水平与尘肺分期呈负相关（P＜0.05）.不同分期尘肺患者BALF中TGF-β1、TNF-α、sIL-2R水平差异均有统计学意义（P＜0.05）,尘肺患者BALF中TGF-β1、TNF-α水平与分期无显著相关（P＞0.05）,尘肺患者BALF中sIL-2R水平与分期呈正相关（P＜0.05）.尘肺组、接尘组和对照组外周血CD8＋及CD4＋/CD8＋差异有统计学意义（P＜0.05）,不同尘肺分期外周血CD4＋、CD8＋及CD4＋/CD8＋差异有统计学意义（P＜0.05）,Ⅱ、Ⅲ期尘肺外周血CD4＋及CD4＋/CD8＋显著低于接尘组和对照组（P＜0.05）,Ⅰ、Ⅲ期尘肺外周血CD8＋百分百显著高于接尘组和对照组（P＜0.05）;外周血CD4＋、CD8＋百分百与尘肺分期无显著相关（P＞0.05）,而CD4＋/CD8＋与尘肺分期呈负相关（P＜0.05）.外周血TGF-β1水平与FVC、FEV1/FVC及DLCO呈负相关,sIL-2R与FVC、DLCO呈负相关,TNF-α水平与肺功能无显著相关,CD4＋百分百与FEV1/FVC、DLCO呈正相关,CD8＋百分百与FVC呈负相关,CD4＋/CD8＋与FVC、DLCO呈正相关.外周血TGF-β1水平与CD8＋呈正相关,与CD4＋/CD8＋呈负相关,TNF-α与CD4＋/CD8＋呈正相关,sIL-2R与CD4＋、CD4＋/CD8＋呈负相关,与CD8＋呈正相关.结论 不同分期尘肺患者均可能存在细胞免疫抑制状态,外周血TGF-β1高表达可能参与了尘肺的纤维化过程和肺功能的损害,TNF-α与尘肺分期有关可能与肺功能损害无关,sIL-2R高表达及CD4＋/CD8＋倒置形成的免疫抑制参与尘肺分期进展和肺功能损害.     

咳嗽变异性哮喘患者外周血调节性T细胞和辅助性T细胞表达水平分析

目的 分析咳嗽变异性哮喘（CVA）患者外周血调节性T细胞和辅助性T细胞表达水平.方法 连续选择2011年1月至2012年12月在中国医科大学附属第四医院门诊就诊的CVA患者（CVA组）35例和慢性持续期哮喘患者（哮喘组）21例,另有18例同期参加体检结论健康者为对照组.3组对象同期接受了外周血调节性T细胞（CD4＋CD25＋ Treg和CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg）和辅助性T细胞（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋）检测.结果 CVA患者外周血CD4＋表达水平及CD4＋/CD8＋比值均明显低于对照组,但都明显高于哮喘组（P＜0.05,P＜0.01）.CVA患者外周血CD4＋CD25＋ Treg和CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg均明显低于对照组,但都明显高于哮喘组（P＜0.05,P＜0.01）.CVA咳嗽程度重组外周血CD4＋、CD4＋CD25＋ Treg、CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg表达水平及CD4＋/CD8＋比值都明显低于咳嗽程度轻组（P＜0.05,P＜0.01）.结论 CVA患者存在明确的外周血调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达,且随着症状加重这些异常表达趋于显著.     

生殖器疱疹患者外周血淋巴细胞B7-CD28/CTLA-4的检测分析

目的研究外周血B7-CD28/CTLA-4（CD152）T淋巴细胞活化协同刺激分子在生殖器疱疹（Genital herpes,GH）患者发病机制中的作用。方法用流式细胞仪检测51例GH患者和15例健康体检者外周血淋巴细胞CD80/86及CD4＋/CD8＋T淋巴细胞中B7-CD28/CTLA-4的表达。结果GH患者恢复组与对照组比较,CD80、CD86的阳性表达较对照组明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。其余各组间CD80、CD86比较差异无统计学意义。恢复组CD8＋/CD28阳性表达显著高于非复发组（P〈0.05）;非复发组显著高于对照组（P〈0.05）;复发组的CD4＋/CD152、CD8＋/CD152的阳性表达显著高于非复发组（P〈0.05）。其余各组间CD4＋/CD152、CD8＋/CD152及CD4＋/CD28、CD8＋/CD28表达差异无统计学意义。结论单纯疱疹病毒感染可诱导CD80、CD86、CD28和CD152活化增殖,高表达负性共刺激分子和分泌抑制性细胞因子,通过多种机制抑制机体的抗病毒免疫应答。     

鱼王浆对免疫功能低下模型小鼠相关免疫细胞因子影响的实验研究

目的研究鱼王浆对环磷酰胺致免疫功能低下模型小鼠相关免疫细胞因子的影响及量效关系。方法通过腹腔环磷酰胺（Cy）强化注射制造免疫功能低下模型小鼠,模型小鼠随机分为鱼王浆高、中、低剂量组及模型组,另设1组为空白对照组。观察比较鱼王浆高、中、低剂量对模型小鼠相关免疫因子的影响,检测外周血CD3^＋、CD4^＋,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及干扰素-γ（IFN-γ）含量,脾脏组织TNF-α蛋白表达的变化。结果鱼王浆高、中剂量组CD3^＋、CD4^＋的含量明显高于模型组（P〈0.01）,鱼王浆低剂量组CD3^＋的含量与模型组比较有所升高（P〈0.05）;鱼王浆各剂量组TNF-α、IFN-γ的含量明显高于模型组（P〈0.01）;鱼王浆各剂量组脾组织中TNF-α蛋白的表达明显高于模型组（P〈0.01）。结论鱼王浆能明显提高免疫功能低下模型小鼠外周血中相关免疫细胞因子CD3^＋、CD4^＋及TNF-α、IFN-γ的含量,增强免疫组织器官中TNF-α的表达,并且其作用具有明显的量效关系。     

阳和平喘颗粒早期和晚期干预对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-5和白细胞介素-9的影响

目的 从细胞因子水平研究阳和平喘颗粒防治支气管哮喘的机制。方法 将84只清洁级SD大鼠随机分为正常组,模型组,地塞米松组,阳和平喘颗粒早期干预低剂量组、早期干预高剂量组、晚期干预低剂量组、晚期干预高剂量组,采用卵清白蛋白多点长期致敏及激发的方法复制大鼠哮喘模型。给予相应药物分阶段干预,观察哮喘大鼠肺组织病理形态变化,采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid, BALF）中（interleukin-5, IL-5）和（interleukin-9, IL-9）水平。结果 各给药组大鼠气管壁黏膜与肺周围血管组织的炎性细胞浸润及气管壁增厚均较模型组明显减轻。阳和平喘颗粒早期用药降低BALF中IL-5和IL-9的作用优于晚期用药,高剂量阳和平喘颗粒降低BALF中IL-5和IL-9的作用优于低剂量,阳和平喘颗粒低剂量晚期用药降低BALF中IL-5和IL-9的作用与地塞米松相当。结论 阳和平喘颗粒防治支气管哮喘的机制与其降低BALF中IL-5、IL-9水平有关,早期用药的效应优于晚期用药,其效应具有一定的剂量依赖性。     

哮喘患儿外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的测定及临床意义

目的：探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在哮喘儿童外周血中的比例改变,并探讨其临床意义。方法150例哮喘患儿按临床表现分为急性发作组（50例）、临床缓解期组（50例）和咳嗽变异性哮喘组（50例）,另选择50名健康儿童为正常对照组。应用流式细胞仪检测上述各组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞占CD4＋T细胞的百分比。结果急性发作期组患儿外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞水平较缓解组、咳嗽变异性哮喘组及健康对照组明显下降（P〈0.05）,而缓解期组及咳嗽变异性哮喘组与健康对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论CD4＋CD25＋调节性T细胞可能参与了哮喘的发生与发展,哮喘的严重程度可能与CD4＋CD25＋调节性T细胞的水平相关。