血凝试验检测尘螨致敏豚鼠血清中特异性抗体

将检测哮喘患者血清中尘螨特异性抗体的间接血凝试验用来检测动物血清中特异性抗体。 材料和方法 粉尘螨浸液由本教研室制备,蛋白浓度10mg/ml,实验时用生理盐水稀释至所需含量。 待测豚鼠血清共6组,每组抽血二次。其中4组用粉尘螨浸液分别加不同佐剂免疫及加强免疫,1组用无佐剂的粉尘螨浸液免疫,另1组为不含佐剂和粉尘螨浸液的对照组。 粉尘螨浸液致敏绵羊红细胞的制备:取双醛化固定经鞣化的2％绵羊红细胞悬液20ml,离心沉淀,继用0.1mol/L、pH4.8醋酸缓冲液洗涤1次后,按沉淀细胞4份(0.8ml)加粉尘螨浸液1份(0.2ml,蛋白质含量1mg/ml)立即加入0、1 mol/L、pH4.8醋酸缓冲液5ml,混匀后置37℃作用1h,离心沉淀后,再用1％兔血清磷酸缓冲液反复洗涤5次,最后用同液配制成1％致敏的红细胞液,并加防腐剂NaN_3至万分之一浓度。用生理盐水代替粉尘螨抗原处理绵羊红细胞作为对照。 用常规微量血凝法检测粉尘螨特异性抗体,在96孔V型微量血凝板上,用卡介苗(75mg/ml)0.02％和小牛血清白蛋白0.2％磷酸缓冲液灭活(56℃ 30min),待测血清由第1孔作对倍稀释成1:10～1:5120,然后在各孔中加等量(25μl)粉尘螨致敏的红细胞悬液,置微量振荡器上振荡3min,使     

血涂片标本瑞氏-姬姆萨混合染色方法的探讨

为了使学员在组织学实验教学中观察到效果好、结构清晰的各种血细胞 ,选择良好的血涂片标本染色方法是十分重要的。以往临床上常用瑞氏或姬姆萨两种染色方法 ,其主要特点为操作比较简单、染色时间也较短 ,但易受其ｐＨ、温度、时间等影响 ,往往达不到理想的教学要求。笔者结合教学实践 ,经过反复实验认为 ,应用瑞氏 姬姆萨混合染色法制作教学血涂片标本 ,较单用一种染色方法效果好。1　材料与方法1.1　材　料染液配制 :瑞氏染液 5 .0ｍｌ,姬姆萨原液1.0ｍｌ,加磷酸盐缓冲液 6 .0ｍｌ(ｐＨ 6 .4～ 6 .9)混合 ,如有沉淀生成 ,则应重新配制。1…     

补体有关实验和CIC测定的模拟方法

在免疫学实验中 ,补体有关的实验 ,目前常有 5 0 %溶血测定总补体活性和单向琼脂扩散试验测定 C3。前者需要绵羊红细胞和抗绵羊红细胞抗体 (溶血素 ) ,并且被检补体 ,必需在 2h内完成实验 ,否则补体活性降低 ,影响结果。后者需要抗 C3抗体和标准浓度的 C3。实验经费不足 ,而且因时间的限制 ,很难安排实验。CIC测定有时不容易采到阳性血清标本。为此 ,我们用廉价的材料模拟该三项实验 ,取得了成功。1　总补体溶血活性 ( CH50 )测定的模拟方法1.1　模拟材料 :1∶ 2 0被检血清即补体用新洁尔灭 (5 %新洁尔灭 0 .7g加 10 0 m l蒸馏水 )或胆盐 (10 g/ L胆盐 ,再进行 1∶ 2 0稀释 )代替 ;缓冲液用生理盐水代替 ;溶血素致敏的绵羊红细胞用人红细胞代替。1.2　方法 :具体方法见表 1。表 1　补体 CH5 0测定试管法 (ml)　　成分试管号12 345 6 7 89101∶ 2 0被检血清 0 .10 0 .15 0 .2 0 0 .2 5 0 .30 0 .35 0 .4 0 0 .4 5 0 .5 0 -缓冲液 1.4 0 1.35 1.30 1.2 5 ...     

诱导痰涂片Giemsa染色中时间与浓度关系

目的　探讨诱导痰涂片Giemsa染色中达到相同中染效果时 ,染色原液浓度与染色时间的关系 ,比较 4 %高渗盐水雾化吸入留取诱导痰与自然痰方法的成功率。方法　 5 2例呼吸道疾病患者间隔 4～ 5h先后留取自然痰和诱导痰 ,将 4 1份诱导痰标本涂片随机分为 6组 ,分别以 6种不同浓度Giemsa稀释液进行染色 ,每组内 3张痰涂片 ,以不同时间相同浓度的 1ml配制的Giemsa染色液进行染色 ,直至摸索出显微镜下所见中染痰涂片 ,记录 6组中染痰涂片的染色时间与染色液浓度并对之进行曲线回归分析。结果　留取合格自然痰的成功率为 71 .1 5 %,4 %高渗盐水超声雾化吸入留取诱导痰的成功率为 94 .2 3%,诱导痰较自然痰留取的成功率高 (P <0 .0 1 )。点图显示诱导痰涂片Giemsa染色达到中染效果时染色液的浓度 (Y)与染色时间 (X)呈指数相关 ,通过曲线配合得到回归方程 y =e0 .3 771 59-0 .2 0 81 86X,曲线的拟合度良好 (R =0 .999)。结论　 4 %高渗盐水雾化吸入诱导痰留取的成功率较高 ,诱导痰涂片达到中染时Giemsa染色液的浓度与染色时间呈指数曲线关系 ,曲线的拟合度良好 ,应用 4 %高渗盐水诱导痰方法和Giemsa染色液的时间 -浓度曲线染色可以指导临床实践。     

A-O组合染色法显示神经尼氏小体、髓鞘和红细胞成分的应用

在实验动物和人体的神经组织染色中 ,神经尼氏小体和髓鞘染色应用较广。为了能够在组织中同时显示这些成分 ,我们选用天青 A和橘黄 G进行组合染色 (简称 A- O组合染色 ) ,染色效果满意 ,现报告如下。1　材料和方法1.1　材料及试剂　狗神经脊髓组织 5 0例由本校实验动物中心提供 ,经 15 %中性甲醛固定液 [1 ] 及时固定 ,常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋和切片。天青 A乙醇原液 :天青 A (上海试剂三厂 ) 0 .5 g,2 0 %乙醇 10 0 m l;天青 A乙醇应用液 ,天青A乙醇原液 10 ml,2 0 %乙醇 90 m l,使用临时配制。橘黄 G染色液 :橘黄 G(上海试剂…     

快速姐妹染色单体区别染色法(摘要)

在改进姐妹染色单体区别染色(SCD)法的研究中,我们继用普通高压水银荧光灯代替国外使用的太阳灯后,制成了高压汞灯。在此基础上,我们对荧光加Giemsa(FPG)法作了较大的改进。即将Hoechst 33258染色与灯照步骤合在一起同步进行。其方法是将Brdu标记好的染色体标本载玻片置于铺锡纸的容器上。滴加4滴Hoechst 33258溶液(用磷酸盐缓冲液配成5μg/ml与25μg/ml溶液),加盖盖玻片。用高压汞灯照射3—20分钟,灯下部距离照射面3.5cm。照毕将盖有盖玻片的一面朝下,放入装有磷酸盐缓冲液的平皿中,     

几种血涂片染色方法的比较

血涂片染色广泛应用于医学检验和组织学教学片的制作。传统的染色方法有Wright氏、Giemsa氏和Wright-Giemsa混合法,作为医学检验以简单快捷为首选,而要制作教学标本,则对染色效果、标本存放时间要求更高,对此,我们对各种染色方法进行了长期的探索和比较,以期找到较稳定的、效果满意的染色方法用于制作大批量教学标本。1材料与方法1.1采集标本用消毒采血针头扎刺手指头或耳垂,滴取黄豆大小血滴于洁净载玻片上,推成均匀血膜,自然晾干,用甲醇固定2min~5min。大量制作教学标本可一次推出所需血膜,固定待用。1.2染色1.2.1Giemsa氏染色法将Giemsa原液(配制1年后)分别与pH6.4、6.6、6.7、6.8的磷酸盐缓冲液按1∶10的比例配成工作液;将固定好的血片分别滴染以上4种工作液,每种染液又分别染25min、30min、45min、60min,自来水冲洗、镜检。1.2.2Wright氏染色法染液按传统方法预先配好,我们使用配制1个月后的Wright氏染液,用前用pH7的磷酸盐缓冲液稀释1倍,分别染5min、10min、15min,然后用自来水冲洗干净、镜检。1.2.3Wright-Giemsa...     

绵羊红细胞与鸡红细胞对小白鼠溶血素的影响的探讨

绵羊红细胞 (SRBC)是一种比较好的红细胞性抗原。近年我们做免疫功能测定仍用SRBC作为免疫原。由于SRBC来源比较困难 ,为了探索红细胞抗原问题 ,我们应用绵羊红细胞 (SRBC)与鸡红细胞(CRBC)分别免疫小白鼠 ,进行其血清溶血素 (抗体积数 )测定的比较。现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　实验动物 :选用健康昆明种雄性小白鼠 (清洁级 ) ,体重 (2 0± 1 5g) ,由广西医科大学医学实验动物中心 (桂动许字〈2 0 0 0〉第 0 0 1号 )提供。1 2　SRBC悬液的制备 :选用健康绵羊 ,由广西军区30 3医院动物室提供。从绵羊颈静脉无菌取血 ,…     

改良Giemsa染色在检出胃幽门螺杆菌中的体会

传统姬姆萨(Giemsa)染色试剂配制难保存,操作费时,并且分化不易控制,改良Giemsa染色,在染色时做了一些修改,显示胃幽门螺杆菌(HP)更加清楚,满意。1材料与方法1.1材料延安市人民医院2009-05~2010-04因上消化道症状接受胃镜检查并取胃黏膜组织的活检标本200例。1.2方法1.2.1试剂配制Giemsa粉0.75g、甘油50ml、甲醇50ml,Giemsa粉溶于甘油中,在温箱内55~60℃,不断摇动使染色剂充分溶解,约需5~6h,从温箱取出,加入甲醇稍加摇动过夜,即可使用。1.2.2染色方法200例胃黏膜活检标本用10%福尔马林固定,梯度乙醇脱水,石蜡包埋,常规切一张白片厚     

E-玫瑰花环测试健康献血员外周血T细胞值

检测人体外周血Ｅ -玫瑰花环形成率 ,可了解人体外周血中Ｔ细胞的基本数 ,作为判断人体细胞免疫能力的参考指标。人体Ｔ细胞膜表面有绵羊红细胞受体 ,能与绵羊红细胞结合形成玫瑰花环。本文采取健康献血员的外周血以微量法检测Ｅ -玫瑰花环形成率 ,了解其细胞免疫的状态。1　材料与方法1 1　材料 :(1)微血标本 :无菌技术取 46名健康献血员指端血 0 15ｍｌ,以肝素抗凝 ;(2 )肝素 :以 0 9%氯化钠溶液稀释成每毫升含肝素 12 5Ｕ ;(3)淋巴细胞分层液 :右旋糖酐 -泛影葡胺 ,比重 1 0 80 ;(4 )绵羊红细胞 :新鲜绵羊脱纤维血 ,以 0 9%氯化钠溶液…     

幽门螺旋杆菌的Wathin—Stary法的改进

我室于1992年～1994年共取临床胃镜材料2000余例,进行胃幽门螺旋杆菌的染色比较,对其化学反应过程中的试剂浓度、反应温度进行了实验探讨选择,加以改进。结果稳定,操作简便。 一、材料与方法 (1)无水醋酸钠1.64g,醋酸2.5ml,蒸馏水加至200ml。即为0.2mol/L PH3.6～3.8的醋酸盐缓冲液。以此液配制1％、2％硝酸银液、3％明胶、2％对苯二酚,分别置棕色瓶内避光备用。 (2)切片经水洗后,用1％硝酸银滴染存放60C温箱内1h。 (3)3％明胶4.5ml、2％硝酸银0.9ml、2％对苯二酚0.3ml混合后滴于切片上,室     

介绍一种简易抗酸染色法

A液 :碱性品红 2 5 g ,无水乙醇 5 0ml,石炭酸 2 5 g ,蒸馏水 5 0 0ml,吐温 -80 75滴。将品红粉放在研缶大十 中 ,加乙醇研磨 ,然后加石炭酸和部分蒸馏水 ,混合均匀后倒入一只玻璃烧杯中 ,加水全溶 ,滴加吐温 -80 ,倒入磨口瓶中塞紧 ,静置 2 4小时后过滤。B液 :无水乙醇 ( 4份 ) 2 0 0ml,硫酸 ( 1份 ) 5 0ml,1 %美兰 ( 7份 ) 3 5 0ml(美兰粉 5 g ,蒸馏水 5 0 0ml溶解后密闭保存)。将硫酸逐滴加到乙醇中 ,静置冷却后加入美兰3 5 0ml,密闭避光保存。染色法 :常用方法 ,涂片干后滴加A液 2～ 3滴 ,3分钟后用水冲洗 ,再滴加B液 2～ 3滴染色 1分…     

冰冻切片的附贴法

我们用纤维蛋白原附贴法,用于冰冻切片的各种染色,对染色性均无任何影响,现将方法介绍如下。一、材料10%福尔马林固定的肝、肺、脑、肾等。二、制片方法(一)将纤维蛋白原(天津市生化制品厂生产的人血纤维蛋白原或牛血纤维蛋白原)用枸椽酸磷酸盐缓冲液溶解,配成浓度为1%的附贴液,保存于4℃冰箱内。枸椽酸磷酸盐缓冲液的配制方法:甲液:枸椽酸21.014g。蒸馏水1000ml。此液为0.1M 枸椽酸溶液。乙液:磷酸氢二钠71.632g,蒸馏水1000ml,此液为0.2M 磷酸氢二钠溶液。用时取0.1M 枸椽酸溶液6.15ml,0.2M 磷酸氢二钠13.85ml,混合后即可使用。(二)做冰冻切片时,先在载物玻片上薄薄的涂上一层附贴液。     

介绍一种血片改良瑞氏染色法

传统的瑞氏染液染色时 ,经常遇到着色不良情况 ,给细胞辨认带来困难 ,影响临床诊断 ,本文介绍一种改良瑞氏染色剂 ,经试用近 1a,普遍反映细胞着色快 ,沉渣少 ,背景清晰 ,细胞着色鲜明 ,特别适用临床常规检验。1　试剂甲液 :聚乙烯吡咯酮 9.9g,加于 5 0 0 m L 甲醇中 ,摇匀使其溶解 ,待全部溶解后加入瑞氏染粉 2 g,摇匀 ,溶后即可使用 ;乙液 :p H 6.2磷酸盐缓冲液。2　方法用蜡笔在涂片两端划线 ,滴加甲液两滴 ,用吸耳球吹散使其布满涂片 ,滴加乙液两滴 ,混匀染 2 min,用蒸馏水冲洗 ,干后镜检。3　结果判断红细胞染为橘红色 ,胞浆分别为蓝色…     

影响E活性花环试验因素的探讨

本文对Ea-RFC试验有关实验条件影响因素进行了实验,实验结果表明:无钙镁Hanks液适宜的pH为7.2～7.6。用0.78％NH_4Cl溶液去除淋巴细胞悬液中红细胞优于其它方法。离心速度以500r/min 5min最佳。绵羊红细胞与淋巴细胞比例为15:1～20:1。绵羊红细胞因个体有差异,同一实验室应固定绵羊个体。试验中加入羊、牛、兔、人(AB型)血清可以增加Ea-RFC的形成率。不同种血清结果一致,因而可以任意选择血清品种。     

乳酸环丙沙星液与复方丹参溶液配伍禁忌

1　目的为方便工作 ,减少不必要的浪费 ,同时也为避免引起医疗纠纷 ,现将所做二种药物实验介绍给同行以供参考。2　方法试剂配制 :①取 5 %葡萄糖液 12 5ml +复方丹参针剂10ml(上海中西药业有限公司生产 )即得出临床常用浓度 8%的复方丹参溶液。②环丙沙星液 (四川奇力制药有限公司生产 ) ,每 10 0ml含环丙沙星 2 0 0mg。方法 1:模拟临床静滴法 :取环丙沙星液 10 0ml,5 %葡萄糖液 12 5ml+丹参针剂 10ml,利用静滴法验证 ,不做穿刺。先滴环丙沙星液 ,滴完后更换丹参溶液约 90s ,输液管下部出现混浊及大量白色絮状物。更换输液管改变输液顺序 ,…     

小鼠初级精母细胞染色体的制备

小鼠初级精母细胞染色体制备技术已广泛运用于细胞畸变的检测和医学细胞学实验中,传统的秋水仙素和沉淀软化法分离精原细胞和初级精母细胞尚不够完善,本文介绍不用秋水仙素处理小鼠的改进方法。1 材料与方法试剂:2.2%柠檬酸三钠缓冲液;1%柠檬酸钠低渗液;甲醇:冰醋酸=3:1固定液,Giemsa染色液(pH=6.8,磷酸缓冲液稀释10倍),所用试剂均临用前配制。动物:雄性小鼠8～12周龄。     

萘酚酯酶染色法的改良

氯醋酸AS-D萘酚(Naphthal AS-D Chloroacetate)酯酶(AS-D-CE)对粒系细胞有特异性反应,故又称特异性酯酶。AS-D-CE染色的方法很多,作者基于Higgy等的染色方法,在本室建立起此染色方法,并将Higgy法加以改良,报告如下。1 试剂1.1 孵育液的配制:称取氯醋酸AS-D 萘酚0.25mg,加纯丙酮5滴,待底物溶解后.加 0.067mol/L pH6.4磷酸盐缓冲液 10ml,混匀,加坚牢蓝 BB(Fast Blue BBSalt)15mg,混匀。不过滤。新鲜配制,一次用完。     

肥大细胞标本制作法

1　材料固定液　甲醛酒精 ,配方 :甲醛 1 0ml,无水酒精 80ml,蒸馏水 1 0ml。染色液　甲苯胺蓝液 ,配方 :甲苯胺蓝1 g ,苯胺油 2ml,蒸馏水 50ml,无水酒精50ml;配法 ,将苯胺油加入蒸馏水中 ,煮沸后 ,冷至 4 0℃～ 50℃ ,依次加入甲苯胺蓝 ,无水酒精 ,隔日使用。脱水透明剂　苯酚 1份 ,二甲苯 4份混合即成。实验动物　成年大白鼠。2　方法取材　取成年大白鼠 ,麻醉致死 ,打开胸腔 ,刺破右心房 ,放空血液 ,取皮下疏松结缔组织 (或肠系膜 ) ,制成平铺片。固定　把制成的平铺片入固定液中固定1小时左右。自来水略洗。染色　染色液染 1 - 2分钟自来…     

快速乳胶凝集试验鉴定金黄色葡萄球菌

本文介绍一种兔血浆包被的乳胶试剂,鉴定金黄色葡萄球菌特有的凝集因子和A蛋白的方法。材料与方法乳胶试剂的制备:1)胶乳悬液(四军医大赠)用pH8.0甘氨酸缓冲液作1:8稀释。2)EDTA抗凝的兔血浆用pH8.0甘氨酸缓冲液作1:1000稀释。3)取50ml稀释好的胶乳与等量血浆稀释液混匀,放56℃水溶中30＇摇动使其充分混匀。4)取出后用盐水洗两次。5)沉淀胶粒悬浮于50ml含有0.02％叠氮钠和0.05％兔血浆的pH7.4磷酸盐缓冲盐水中备用。玻片试验方法:在一洁净玻片上加一滴生理盐水,混悬1-2个待检菌落于其中,然后加一滴乳胶试剂,充分混匀,在黑色背景下观察结果。金黄色葡萄球菌在30″-1＇内可见明显凝集。其他种葡萄球菌不出现凝集。