β-D-半乳糖苷酶动力学测定方法探讨及初步临床应用

目的建立β-D-半乳糖苷酶(GAL)自动化分析方法。方法用2-氯-4-硝基苯基-β-D-半乳糖苷(CNP-GAL)为底物,在pH值4.8柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系下,在405 nm处测定产物吸光度值的变化,得出GAL活性。用此方法检测了58名正常体检者及88例患者(包括急性肾功能衰竭15例、尿毒症32例、糖尿病肾病18例、高血压肾病23例)的GAL水平。结果本方法最适pH值为4.8,基质浓度为2.5 mmol/L。批内、批间平均变异系数(CV)分别为3.44%、5.17%。米氏常数(Km)为0.45 mmol/L。正常对照组GAL中位数(范围)为6.2(4.8~7.8)U/gCr,急性肾功能衰竭组为190(74.2~285.6)U/gCr,尿毒症组为39.6(8.9~161.0)U/gCr,糖尿病肾病组为11.3(5.5~67.0)U/gCr,高血压肾病组为16.1(4.1~137.5)U/gCr,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.001、P<0.05)。结论该法简便、快捷、精确,可用于自动化分析,并且留样方便,适宜临床常规应用。GAL可作为评价肾小管疾病及肾实质性疾病的一项指标。     

以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性

目的 评价以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MNP-NAG)为底物的全液体试剂两点终点法测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性.方法 尿样中NAG作用于底物MNP-NAG水解产生游离MNP,其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果 该法显色最大吸收波长为505 nm,试剂1和试剂2最适pH值分别为4.6和10.2,最适底物浓度为16 mmol/L,线性范围达198 U/L,批内变异系数(CV)和批间CV分别为2.2%和3.8%.166例健康体检者尿样NAG活性参考范围为:(6.21±4.53)U/gCr((x)±1.96 s).结论 MNP-NAG底物法测定尿NAG灵敏度高,操作简便,结果可靠,适合临床应用.     

β-D-半乳糖苷酶动力学测定方法探讨及初步临床应用

目的建立β-D-半乳糖苷酶（GAL）自动化分析方法。方法用2-氯4-硝基苯基-β-D-半乳糖苷（CNP—GAL）为底物，在pH值4．8柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系下，在405nm处测定产物吸光度值的变化，得出GAL活性。用此方法检测了58名正常体检者及88例患者（包括急性肾功能衰竭15例、尿毒症32例、糖尿病肾病18例、高血压肾病23例）的GAL水平。结果本方法最适pH值为4．8，基质浓度为2．5mmot／L。批内、批间平均变异系数（CV）分别为3．44％、5．17％。米氏常数（Km）为0．45mmol／L。正常对照组GAL中位数（范围）为6．2（4．8～7．8）U／gCr，急性肾功能衰竭组为190（74．2～285．6）U／gCr，尿毒症组为39．6（8．9—161．0）U／gCr，糖尿病肾病组为11．3（5．5～67．0）U／gCr，高血压肾病组为16．1（4．1～137．5）U／gCr，与正常对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．001、P〈0．05）。结论该法简便、快捷、精确，可用于自动化分析，并且留样方便，适宜临床常规应用。GAL可作为评价肾小管疾病及肾实质性疾病的一项指标。     

以2-甲氧基-4-（2′-硝基乙烯基）酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性

目的 评价以2-甲氧基-4-（2′-硝基乙烯基）酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（MNP-NAG）为底物的全液体试剂两点终点法测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性.方法 尿样中NAG作用于底物MNP-NAG水解产生游离MNP,其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果 该法显色最大吸收波长为505 nm,试剂1和试剂2最适pH值分别为4.6和10.2,最适底物浓度为16 mmol/L,线性范围达198 U/L,批内变异系数（CV）和批间CV分别为2.2%和3.8%.166例健康体检者尿样NAG活性参考范围为：（6.21±4.53）U/gCr（-↑x±1.96 s）.结论 MNP-NAG底物法测定尿NAG灵敏度高,操作简便,结果可靠,适合临床应用.     

糖尿病前期合并高血压患者早期肾损伤的敏感检测指标

目的检测糖尿病前期合并高血压患者早期肾损伤的敏感检测指标。方法选取健康对照(NGT)组、高血压合并糖耐量减低(IGT)组、高血压合并空腹血糖受损且糖耐量减低(IFG/IGT)组,每组各检测100例。测定各受试者尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β-D半乳糖苷酶(GAL)活性,测定尿β2-微球蛋白(β2-MG)、尿半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)、尿微量清蛋白(mALB)浓度、血清尿素氮、肌酐浓度,并镜检尿红细胞数量。结果高血压合并IGT组、高血压合并IFG/IGT组的尿NAG、GAL活性、尿β2-MG浓度、尿Cystatin C浓度均高于NGT组(P值均小于0.05)。并比较IGT组、IFG/IGT组的阳性(异常例数)检出率,发现尿NAG、GAL、β2-MG、尿Cystatin C的阳性检出率均显著大于尿微量清蛋白、尿红细胞、血清尿素氮、肌酐的阳性检出率(P值均小于0.05)。结论联合检测尿NAG、GAL、β2-MG、Cystatin C是发现糖尿病前期合并高血压患者早期肾损伤的敏感检测指标。     

尿NAG测定使用MNP-NAG为底物的全液体试剂评估

目的评价一种以2-甲氧基-4-(2′-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MNP-NAG)为基质的全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性。方法在pH4、6条件下以连续监测法测定尿液NAG并作方法学评价。结果该试剂线性范围198U/L,平均回收率为101.8%,批内变异系数和批间变异系数分别为2.2%和3.8%。CNP-NAG和MNP-NAG基质法有良好的相关性,166例健康体检者尿样NAG活性参考范围为1.59~10.83U/gCr(x±2s)。结论液体MNP-NAG基质液测定尿NAG灵敏度高、操作简便、结果可靠,适合临床应用。     

用国产Glucana测定GGT活性的中止比色法

本文介绍用国产γ-L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(Glucana)作底物测定GGT 活性的中止比色法.以国外文献推荐的连续监测常规法为基础,但改为37℃反应10分钟用1mol/L 盐酸中止反应,410nm 比色,以3-羧基-4-硝基苯胺(Cana)为标准,按U/L 计算结果.Glucana 的Km=0.64mmol/L,最适pH=7.9,10分钟内成零级反应,300U/L 内成线性,批内CV0.26%,天间CV1.9%,平均回收率98.5%,参考范围10～36U/L。用国产底物和进口试剂,用本法和动力学法进行对比试验。实验结果证明:国产Glucana 性能良好;本法快速、简便、精密度及准确度符合临床要求,可在无自动生化分析仪或基层实验室推广。     

全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶：PNP-NAG连续检测法

目的评价一种以PNP-NAG为基质的全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性.方法尿样中NAG作用于底物PNP-NAG水解游离PNP(对硝基酚),其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果该方法线性范围达200U/L,平均回收率为99.5%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为2.7%和4.3%.与CNP-NAG基质法有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=1.004X-0.084,r=0.9972.103例健康体检者尿样NAG活性参考范围为1.33～11.17U/gCr(x+2s).结论全液体稳定试剂(PNP-NAG基质法)测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶具有操作简单、快速灵敏,结果可靠的优点,适合临床应用.     

全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶:PNP-NAG连续检测法

目的评价一种以PNP-NAG为基质的全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性.方法尿样中NAG作用于底物PNP-NAG水解游离PNP(对硝基酚),其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果该方法线性范围达200U/L,平均回收率为99.5%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为2.7%和4.3%.与CNP-NAG基质法有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=1.004X-0.084,r=0.9972.103例健康体检者尿样NAG活性参考范围为:1.33～11.17U/gCr(x+2s).结论全液体稳定试剂(PNP-NAG基质法)测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶具有操作简单、快速灵敏,结果可靠的优点,适合临床应用.     

连续监测法测定血清丙氨酸氨基肽酶

目的　建立血清丙氨酸氨基肽酶 (AAP)连续监测法。方法　以丙氨酰对硝基苯胺 (Ala pNA)为底物 ,研究AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP水平。结果　酶反应最适pH8 0 ,Tris HCl缓冲液的最佳浓度 15 0mmol/L ,Ala pNa浓度以 3mmol/L为宜 ,米氏常数 (Km) 0 74mmol/L ,在 8min观测时间内吸光度变化与时间成比例 ,线性范围可达 180 0U/L ,平均批内、批间CV分别为 1 0 4%和 2 0 2 %。 2 0mmol/L甘油三酯、2g/L血红蛋白、340 μmol/L胆红素对酶活力测定无干扰 ,正常成年人群参考范围 ( x± 2s) 4 1～ 77U/L。肝胆疾病组血清AAP明显高于健康对照组。结论　血清AAP活力是鉴别诊断肝胆疾病的一项特异、灵敏的指标 ;连续监测法适用于各种类型的自动化分析仪 ,便于临床推广     

连续监测法测定尿亮氨酸氨基肽酶及初步临床应用

目的探讨应用连续监测法测定尿亮氨酸氨基肽酶(LAP)及其临床应用价值.方法用连续监测法对检测条件及干扰因素进行试验观察,选择最适反应条件,同时观测121名正常人和61例糖尿病患者尿LAP水平.结果 LAP在1～3 min时间内吸光度变化与时间成比例,线性范围可达400 U/L.批内CV分别为1.68%,0.72%;批间CV分别为2.86%,2.68%.171μmol/L胆红素、1 000 mg/L血红蛋白、30 g/L葡萄糖对LAP测定无干扰,抗坏血酸对LAP有负干扰.正常人尿LAP参考值范围(x±2s)15.5～48.3 U/g·Cr.糖尿病合并肾损伤组尿LAP明显高于正常对照组和未发生肾损伤组,差异有非常显著性意义(P＜0.001).结论连续监测法检测尿LAP简便、快速,测定尿LAP对诊断糖尿病早期肾损害有一定的价值.     

MPT-NAG测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的应用价值

目的 应用新型底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)建立检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的紫外动力学新方法,用于尿液中NAG活性测定.方法 基于NAG催化水解对硝基苯-N-乙酶-β-D-氨基葡萄糖苷生成有色的对硝基酚这一反应,对缓冲液离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了多种病尿样中NAG活活性.结果 该法最低检出限为1.5 U/L,线性范围可达250 U/L(r=0.998 9),批内CV为＜3%,批间CV＜5%,回收率为101.3%.结论 本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,且操作简便快速,适用于全自动生物化学分析仪操作.     

血清γ—谷氨酰移换酶连续监测法

本文参照IFCC推荐的GGT测定参考方法,用γ-L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(Glu CANA)作供体底物,对连续监测法的实验条件进行了探讨。Glu CANA 水溶性好,非酶水解程度小,试剂稳定,易保存.应用RSM 对GGT 的最适测定条件进行分析,确定Glu CANA(A)和双甘肽(B)的最适浓度分别为6mmol/L 和150mmol/L。最适pH7.90(30℃).K_m~A=0.73mmol/L.K_m~B=16.2mmol/L。5-氨基-2-硝基苯甲酸ε_(410nm)=791.66m~2·mol~(-1).实验表明,100mmol/L Tris 对GGT 活性有轻度抑制.OCV=1.72～3.1%,RCV=2.85～4.43%。酶活性在460U/L 内呈线性关系.132名健康成人血清GGT 结果(x±S,30℃)男性(n=70)为16.94±7.9U/L。女性(n=62)为11.57±6.88U/L。男女两组均值差异显著.     

α-淀粉酶连续监测法的建立

[目的]建立以亚乙基封闭的4-硝基酚-1，4-α-D-麦芽七糖苷（EPS-G7）为底物的一种新的α-淀粉酶的测定方法。[方法]在SPS-100全自动分析仪上，研究连续监测法，建立实验参数。[结果]本法测定α-Amy的Km=0．179mmol／L；4-硝基酚（4-NP）在405nm时的摩尔吸光系数1200．9mol／L选取HEPES缓冲液为缓冲体系；延迟时间2min，测量时间2min；线性反应期11min，线性范围0-1400U／L；最适温度37℃；最适pH7．15；精密度实验，批内CVs为1．4％～2．6％，批间CVs为1．9％-2．8％；平均回收率为96．3％；与Boehringer方法比较，相关系数为0．994；血红蛋白、胆红素、葡萄糖、蛋白质对测定结果无影响；本法参考值范围血33．9-96．2U／L，尿65．4～187．6U／L。[结论]此方法重复性好，线性范围广，准确度好，灵敏度高，干扰因素少，适用于常规自动化分析。     

糖尿病患者尿NAG与微量清蛋白、GAL及血糖的关系

目的 探讨糖尿病(DM)患者尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)与尿微量清蛋白(mAlb)、β-D-半乳糖苷酶(GAL)及血糖(GLU)之间的关系.方法 用葡萄糖氧化酶法和免疫比浊法分别检测对照组和DM患者(DM组)空腹GLU和mAlb水平,用酶法检测乳酸(LAC)、β-羟丁酸(β-HB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、糖化血清蛋白(Fruc)含量,用比色法检测NAG和GAL.结果 DM组中NAG与mAlb(r=0.546,P＜0.01)、GAL(r=0.428,P＜0.05)、GLU(r=0.531,P＜0.01)均呈正相关,而与Fruc、LAC、β-HB、BUN、Cr均无相关性(P＞0.05),以NAG为因变量(Y),得到回归方程式Y=-13.128+1.896GLU+0.207GAL+0.084mAlb.对照组中,NAG与mAlb、GAL、GLU、Fruc、LAC、β-HB、BUN和Cr间均无相关性(P>0.05).结论 控制DM患者GLU水平可以减轻肾小管的损伤,从而降低患者肾脏损害的风险.     

N—乙酰—β—D氨基葡萄糖苷酶的基质合成及其动力学法测定

本文应用本室合成的底物2-氯-4-硝基苯基N-乙酰-β-D 氨基葡萄糖苷(CNP-NAG),用动力学法测定N-乙酰-β-D 氨基葡萄糖苷酶(NAG),酶促反应最适pH 值为4.8～5.2,Km 为0.66～0.70mmol/L。用N.N-二甲基甲酰胺和乙二醇等量混合液使基质浓度达到4mmol/L,同时提高了反应的灵敏度和基质液的稳定性.用该法测定不受尿色的干扰.批内CV<3.57%,批间CV>4.04%,与PNP 终点法比较相关系数为0.933,100例尿参考值调查为0.75～23.9u/g.Cr。     

尿NAG和mALB联合检测在诊断早期肾损伤中的价值

目的观察N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、微量清蛋白(mALB)在早期肾损伤患者尿液中的变化情况,进而研究它们对肾脏早期损伤的诊断价值。方法对来自本院体检中心的53例健康体检者,97例病理上无明显肾小管间质病变但可能有早期肾损伤的糖尿病、高血压病患者行尿NAG、mALB及血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)检测并对结果进行相关统计学分析。结果糖尿病、高血压病患者的尿NAG、mALB均有不同程度的升高,两者之间有较好的相关性,且与健康对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论尿NAG可反应肾小管的重吸收功能及其损伤程度,而尿mALB则可作为临床上肾小球滤过膜,尤其是电荷屏障受损的标志,两者同时测定能够为早期肾损伤的预防及诊断提供更好的依据。     

非浓缩尿SDS-琼脂糖凝胶蛋白电泳的临床应用

目的探讨非浓缩尿蛋白电泳对早期肾损伤诊断的应用价值。方法对55例患者尿液标本分别进行尿蛋白半定量及尿蛋白(U-Pr)、尿微量白蛋白(mAlb)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)，G-D-半乳糖苷酶(GAL)定量测定，与非浓缩尿的十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶蛋白电泳(SDS-AGE)结果进行分析比较。结果与SDS-AGE结果相比较，尿常规及全自动生化仪定量测定有关指标的灵敏度相对较低。结论SDS-AGE检测灵敏度高，方法简便，省时，扫描后可得半定量结果，且结果较直观，对早期肾损伤诊断有较大的应用价值。     

α淀粉酶直接测定法

由于测定方法和酶单位定义的不同,血、尿淀粉酶测定是长期以来最难标准化的项目之一,关键问题是没有满意的底物.作者等应用Fathy法人工合成底物2-氯-4-硝基酚-α麦芽糖三甙(CNP-G3),无需任何辅助酶,即可直接被血、尿中的     

尿微量蛋白和尿NAG联合检测在诊断糖尿病早期肾损伤中的临床价值

目的探讨尿蛋白阴性糖尿病患者随机尿中三种微量蛋白和NAG酶联合检测在临床诊断早期肾损伤的应用价值。方法测定73例2型糖尿病患者和40例健康查体者尿中微量白蛋白(MALB)、转铁蛋白(TF)、β2-微球蛋白(β2-MG)和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),同时检测尿肌酐作对比,保证结果准确性。三种微量蛋白采用免疫比浊法,NAG采用终点法。结果糖尿病患者TF、MALB、β2-MG、NAG明显高于正常对照组(P<0.01);四项联合检测阳性率达93.1%,明显高于单项检测。结论TF、MALB、β-MG、NAG检测是诊断糖尿病早期肾损伤的敏感指标,肾小管损伤早于肾小球。