低氧环境下三氧化二砷对人肺癌细胞增殖和凋亡的作用

目的：观察常氧和低氧环境下不同浓度的三氧化二砷（arsenic trioxide．As2O3）对人肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。 方法：在常氧（21％O2）和低氧（5％O2）环境下对人肺腺癌细胞A5-19进行体外培养，采用0、1、2、4μmol/L As2O3分别作用A549细胞12、24和48h，甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测A519细胞增殖抑制率；膜连蛋白V（Annexin V）／碘化丙啶（propidium iodide．PI）双标记法检测细胞凋亡。 结果：常氧和低氯环境下．1、2、4μmol／L As2O3均能显著抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡，且会随As2O3浓度的升高和作用时间的延长而增强；该作用在两种环境下的差异无统计学意义。结论：As2O3可抑制A549细胞增殖和促进细胞凋亡；在低氧环境和常氧环境下对A549细胞具有同样的细胞毒性作用。     

替拉扎明联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂对人卵巢癌细胞的抑制作用

目的研究替拉扎明（TPZ）联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂（LY294002）对人卵巢癌细胞株的体外抑制作用。方法乏氧及空气条件下,TPZ单用及联合LY294002在不同药物浓度下分别作用于人卵巢癌细胞株H08910PM和OVCAR-3,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法评价其抑癌效果。结果在乏氧及空气条件下单独使用TPZ对H08910PM的IC50分别为40．6μmol／L和53．0μmol／L,对OVCAR-3的IC50分别为65．9μmol／L和97．4μmol／L;乏氧及空气条件下TPZ联用LY294002,对H08910PM的IC50分别为22．7μmol／L和31．5μmol／L,对OVCAR-3的IC50分别为49.1μmol／L和51．0μmol／L。结论TPZ对人卵巢癌细胞株有抑制作用,抑癌效果在乏氧条件下高于空气条件（P〈0．01）;LY294002对TPZ有协同作用,与TPZ单独用药相比,二者联用显著降低了TPZ对癌细胞的IC50（P〈0．01）。     

磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂对人宫颈癌细胞株生长的影响

目的运用磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K）特异性抑制剂LY294002[2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]作用于宫颈癌细胞株SiHa,探讨其对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法培养宫颈癌细胞株SiHa,分为对照组和LY294002干预组（LY294002 5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L）分别作用6h、12h、24h、48h;MTT比色法检测体外使用抑制剂对宫颈癌细胞株SiHa生长的作用;运用流式细胞技术检测SiHa凋亡抑制率。结果 LY294002能抑制宫颈癌体外培养细胞系SiHa的生长,并以剂量-时间依赖方式诱导凋亡,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 LY294002能有效抑制SiHa细胞的增殖,呈时间-剂量依赖性。PI3K/Akt介导的信号转导通路可能宫颈癌的发生发展起作用。     

油茶籽提取物对体外培养不同肿瘤细胞增殖的抑制作用

目的：观察油茶籽不同溶剂提取物（95％乙醇提取物、水提取物、60％丙酮-水提取物）对体外培养肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法：常规传代培养人肺癌细胞株（A549）、人胃癌细胞株（SGC-7901）和人黑色素细胞瘤（A375）．采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞活性。结果：油茶籽丙酮-水提取物、醇提取物和水提取物对体外培养的A549、SGC-7901和A375细胞在7．8125-500μg／mL范围内均具有剂量依赖性的抑制作用。阳性对照药甲氨蝶呤和硫酸长春新碱在0．1-10μg／mL时亦呈剂量依赖性地抑制3种细胞的增殖。结论：3种肿瘤细胞体外增殖抑制作用强弱为油茶籽丙酮-水提取物〉油茶籽醇提取物〉油茶籽水提取物。     

丙氨瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1A作用的研究

目的 :研究丙氨瑞林对子宫内膜癌直接作用的可能性。方法 :以不同浓度丙氨瑞林 (浓度为 10 - 9～ 10 - 5 mol/ L)与人子宫内膜癌细胞株 HEC-1A(中分化子宫内膜腺癌 )一起进行培养 72 h,观察各浓度下癌细胞的抑制情况。结果 :当丙氨瑞林浓度为10 - 9mol/ L时 ,癌细胞生长即受到抑制 ,抑制率为 3 7.0± 2 6.2 %;随着丙氨瑞林浓度的增大 ,抑制率渐高。结论 :丙氨瑞林在体外对HEC-1A细胞可能有直接抑制作用 ,且呈剂量依赖关系。     

紫杉醇对Caski细胞增殖及APC、DKK-3基因表达的影响

目的 研究紫杉醇对Caski细胞增殖及APC、DKK-3基因表达的影响。 方法 用MTT法、RT-PCR法及甲基化特异性PCR分别检测紫杉醇对人宫颈癌Caski细胞株增殖的影响、APC与DKK-3 mRNA 表达水平、APC与DKK-3启动子甲基化水平。 结果 ≥1 μmol/L紫杉醇能明显抑制人宫颈癌Caski细胞株的增殖 （P<0.05）;从5 μmol/L开始,随着紫杉醇给药剂量的增大,Caski细胞APC、DKK-3 mRNA表达水平明显增加 （P<0.05）,而Caski细胞APC 、DKK-3启动子甲基化水平显著降低 （P<0.05）。 结论 紫杉醇能呈剂量依赖性的抑制Caski 细胞的增殖并上调APC、DKK-3 mRNA的表达,这可能与其诱导APC、DKK-3启动子的去甲基化有关。     

羟基红花黄色素A对常氧/低氧犬胸主动脉内皮细胞增殖的影响

目的 探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对常氧/低氧两种条件下体外培养的犬胸主动脉内皮细胞增殖的影响.方法 采用内膜消化刮取法获取犬胸主动脉内皮细胞;在常氧(21%)/低氧(10%)两种条件下,分别以噻唑蓝(MTT)法观察HSYA对血管内皮细胞(VEC)增殖的影响,血管内皮生长因子(VEGF)作为阳性对照.结果 常氧条件下HYSA 1、0.1 mmol/L在72、96、120 h时对VEC有明显促增殖作用;低氧条件下HYSA 1、0.1、0.01mmol/L在24、48 h时对VEC有明显促增殖作用,且具有浓度和时间依赖性.HYSA 1 mmol/L与VEGF 2.6×10-7mol/L在同样条件下对VEC的促增殖作用强度相当.结论 在常氧/低氧两种条件下,HSYA均具有明显促VEC增殖作用,且在低氧条件更为明显.     

眼氨肽抑制过氧化氢诱发牛晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的观察眼氨肽对细胞的促增殖作用及对过氧化氢(H2O2)诱发牛晶状体上皮细胞(BLEC)凋亡的抑制作用。方法采用不同成分培养液对BLEC体外培养，观察细胞增殖情况；用DNA缺口末端原位标记法(TUNEL)检测眼氨肽对H2O2诱发的BLEC凋亡数量的影响，并进行相关比较及统计学分析。结果眼氨肽能明显的促细胞增殖，在低浓度H2O2(50μmol／L及125μmol／L)时，能明显抑制细胞凋亡；在高浓度H2O2(250μmol/L)时．对细胞凋亡的抑制作用不明显。结论眼氨肽在体外能明显的促进BLEC增殖，并有一定的抗氧化作用。     

胡椒碱-阿霉素复合物合成及抗肿瘤研究

目的合成胡椒碱-阿霉素复合物,并探讨其抗肿瘤活性。方法将胡椒碱-阿霉素复合物制备成纳米混悬体冻干制剂,体外培养肿瘤细胞,用MTT法考察胡椒碱-阿霉素复合物纳米混悬液冻干制剂对HEPG-2细胞株、SMMC-7721/ADM细胞株、MCF-7/ADM细胞株、A549细胞株、B16细胞株、Hela细胞株、K562细胞株的抑制作用,并绘制抑制率-药物浓度曲线。结果对7种肿瘤细胞均有抑制作用,且抑制作用比阿霉素组更强。结论胡椒碱-阿霉素复合物对HEPG-2细胞株、SMMC-7721/ADM细胞株、MCF-7/ADM细胞株、A549细胞株、B16细胞株、Hela细胞株和K562细胞株生长有抑制作用,且抑制效果好于阿霉素。     

低氧增强骨髓间充质干细胞增殖维持分化潜能

目的观察低氧增强人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)体外增殖并维持其多向分化潜能的作用。方法分离10例骨髓血标本BMMSCs,分别进行低氧(低氧组)及常氧(常氧组)培养,观察BMMSCs的形态、增殖能力及成骨、成脂分化能力。结果低氧组BMMSCs保持其长梭形,鱼群样分布,增长状态良好,常氧组BMMSCs形态呈多角形或扁平状,低氧组BMMSCs数量及生长速率较常氧组增加(P0.05),且低氧组BMMSCs具有成骨、成脂分化能力。结论低氧能促进BMMSCs的体外增殖且维持其多向分化潜能。     

鱼藤素抑制MCF-7、H1299增殖及下调微小染色体维系蛋白3、CDC45表达

目的 探究鱼藤素对MCF-7及H1299细胞的增殖作用,并从mRNA水平研究了鱼藤素对微小染色体维系蛋白3(MCM3)和CDC45在MCF-7及H1299细胞中的影响.方法 利用MTT法研究不同浓度的鱼藤素分别处理MCF-7和H1299细胞48、72、96 h后的抑制增殖作用;利用显微镜观察MCF-7和H1299细胞的生长状态;荧光定量PCR探究鱼藤素对MCF-7和H1299细胞中MCM3-CDC45表达的变化.结果 0.25、0.5、1、5、10、30、50μmol/L的鱼藤素作用MCF-7细胞48、72、96 h后,能明显抑制其增殖,且呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用MCF-748、72、96 h的IC50分别为9、3、2μmol/L;0.5、1、5、10、30、50、100μmol/L的鱼藤素作用H1299细胞48、72、96 h,抑制率呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用H1299细胞96 h的IC50为2μmol/L.光学显微镜下,观察到药物处理组中,细胞数目减少,形态皱缩明显.鱼藤素干预MCF-7及H1299细胞,MCM3-CDC45的表达量减少.结论 鱼藤素可抑制MCF-7、H1299细胞增殖,并可下调细胞中MCM3和CDC45的表达.     

塞来昔布抑制人胃癌细胞MGC803细胞增殖及其分子机制

目的：研究塞来昔布在体外对人胃癌细胞MGC803生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法：体外培养人胃癌细胞MGC803,MTT法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算IC50值;RT-PCR法检COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响;结果：MTT结果显示：相同干预浓度塞来昔布抑制人胃癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为：（98.67±11.755）μmol/L、（67.506±6.646）μmol/L、（57.662±15.809）μmol/L;RT-PCR结果显示：人胃癌细胞MGC803正常对照组及塞来昔布干预组COX-2mRNA灰度值分别为：0.918±0.031,0.301±0.002（t=16.037,P=0.000）;MMP-9mRNA灰度值分别为：0.928±0.041,0.360±0.012（t=10.487,P=0.003）;结论：塞来昔布抑制胃癌细胞增殖,塞来昔布抗肿瘤机制可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现的。     

LY294002对人乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用

目的探讨P13K／Akt信号转导通路特异性阻滞剂LY294002在体外对人乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用。方法乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7／ADR各自分为未加LY294002的对照组及加入不同浓度的LY294002组,MTF法观察各组药物的细胞毒作用。选用流式细胞术（FCM）检查细胞凋亡率、细胞分布周期的变化。结果①LY294002在浓度10umol／L以下时对两种细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量。②阿霉素对MCF-7和耐药细胞MCF-7／ADR的半数抑制浓度（IC50）分别为（0．14±0．02）μmol／L和（15．74±0．08）μmol／L,耐药倍数为112倍。③LY294002能够增强阿霉素对MCF-7／ADM的细胞毒作用,LY294002浓度0．1、2．5、5．0、10μmol／L分别作用于MCF-7／ADM细胞48h后,耐药细胞株的IC50分别降至（13．53±0．10）μmol／L、（10．24±0．08）μmol／L、（5．53±0．16）μmol／L、（2．29±0．12）μmol／L,差异有统计学意义（P〈0．01）。④LY294002可显著增加MCF-7／ADR细胞凋亡率（P〈0．01）。细胞周期分布显示,加用LY294002对各个细胞周期影响不明显。结论LY294002能够增加MCF-7和MCF-7／ADR的化疗敏感性,部分逆转耐药细胞MCF-7／ADR的多药耐药性。     

新藤黄酸对人乳腺癌耐药细胞体外作用的研究

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的作用.方法 采用MTT法观察GNA、阿霉素（adriamycin,ADR）及两者联用对MCF-7/ADR细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞仪观察MCF-7/ADR细胞内ADR浓度.结果 GNA能剂量依赖地抑制MCF-7/ADR细胞的生长,作用48 h时,GNA对MCF-7/ADR细胞的IC50为12.88 μmol/L;4 μmol/L GNA可增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性,使ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50由80.22 μmol/L降至12.54 μmol/L;GNA显著增强MCF-7/ADR细胞内ADR的积累,呈剂量依赖关系.结论 低剂量GNA能显著增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性.     

维拉帕米对脑膜瘤生长影响的实验研究

目的探讨钙通道阻滞剂维拉帕米对脑膜瘤细胞增殖的影响.方法将不同浓度的维拉帕米作用于培养的脑膜瘤细胞,MTT法观察其对细胞增殖的抑制作用.建立裸鼠皮下脑膜瘤模型,观察服用维拉帕米后肿瘤的生长情况,免疫组化检测皮下肿瘤增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果维拉帕米浓度呈依赖性地抑制脑膜瘤细胞增殖,浓度为1μ mol/L时即有抑制效应,100μmol/L时抑制作用最明显.服药组肿瘤的体积明显小于对照组(P＜0.01),其PCNA的表达也低于对照组(P＜0.05).结论维拉帕米在体外和体内均可抑制脑膜瘤细胞的增殖和生长.     

青蒿素对乳腺癌多药耐药MCF-7/ADR细胞的逆转作用

目的探讨青蒿素在乳腺癌多药耐药中的应用。方法采用MTT法观察青蒿素联合阿霉素(ADR)对乳腺癌耐药株MCF-7/ADR细胞生长增殖的影响;应用流式细胞技术测定青蒿素联合ADR对MCF-7/ADR细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响。结果 10、20、40μmol/L青蒿素实验组的细胞耐药逆转倍数分别为1.53、1.90和3.62倍。青蒿素联合ADR可抑制MCF-7/ADR细胞膜P-gp蛋白的表达,0、10、20、40μmol/L青蒿素作用后的细胞表面P-gp表达阳性率分别为(33.41±4.63)%、(23.07±5.48)%、(21.82±3.87)%和(16.62±1.27)%,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05);各组细胞内总P-gp的表达水平分别为(37.19±5.16)%(、35.30±4.77)%(、37.45±5.19)%和(34.98±3.50)%,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论青蒿素与ADR同共作用于MCF-7/ADR细胞,使细胞对ADR的敏感性增高,青蒿素具有部分逆转MCF-7/ADR细胞耐药的作用,其逆转作用机制可能是通过影响细胞质和细胞膜之间的P-gp交换,降低细胞膜上P-gp表达水平,提高药物在细胞内的聚集,增强药物对肿瘤细胞的杀伤作用。     

3-溴丙酮酸增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用

目的探讨3-溴丙酮酸（3-BP）增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用及其可能机制。方法MTT法检测3-BP、顺铂对HepG2、
SMMC7721细胞的增殖抑制作用。选择低于半数抑制浓度（IC50）的100 μmol/L的3-BP和8 μmol/L的顺铂单独或联合处理细
胞,PI 单染流式细胞术检测细胞凋亡,caspase 3 活性检测试剂盒测定caspase-3 的活性变化,ATP检测试剂盒测定细胞内ATP
水平,Western blot 检测XIAP、PARP蛋白的表达。结果3-BP 在50~400 μmol/L 浓度范围内对HepG2、SMMC7721 细胞具有
明显的增殖抑制作用（P<0.01）,作用48 h 的IC50分别为238.9±13.9 μmol/L、278.7±11.7 μmol/L;顺铂在2~32 μmol/L 浓度范围
内对HepG2、SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用（P<0.01）,作用48 h的IC50分别为16.4±0.9 μmol/L、20.9±1.8 μmol/L。
100 μmol/L 3-BP与8 μmol/L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48 h 的增殖抑制率分别为（60.6±2.2）%、（56.8±2.3）%,明
显高于对照组和单独用药组（P<0.01）。100 μmol/L 3-BP与8 μmol/L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48 h 的凋亡率
分别为（51.1±4.3）%、（46.5±3.9）%,较单用3-BP、顺铂的凋亡率明显提高（P<0.01）。结论3-BP 能增强肝癌细胞HepG2、
SMMC7721对顺铂诱导的凋亡的敏感性,其机制可能是通过引起细胞内ATP缺乏、下调XIAP蛋白的表达以及增加caspase-3的
活性。     

天花粉多糖诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其Caspase-3和Caspase-8活化对凋亡的影响

目的:研究天花粉多糖(polysaccharide of snakegourd root)对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用、诱导凋亡的作用以及Caspase-3、Caspase-8活化对凋亡的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度天花粉多糖对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用;DAPI染色后荧光显微镜进行细胞凋亡核形态学观察;通过DNA琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析,FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡率,分光光度比色法测定天花粉多糖诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡过程中Caspase-3、Caspase-8活性变化。结果:MTT结果显示,天花粉多糖对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制作用。10.0μmol/L以上浓度的天花粉多糖作用2 d,DAPI染色可见核浓缩及边缘现象,DNA电泳出现特征性的凋亡条带。1.0、5.0、10.0和20.0μmol/L天花粉多糖处理的MCF-7细胞2 d,细胞凋亡率分别为(5.2±1.3)%、(13.1±4.7)%、(27.6±6.8)%和(43.8±9.8)%;10.0μmol/L天花粉多糖处理MCF-7细胞1、2、3 d,Caspase-3活性在2 d达最高(2.32±0.12)U/μg,而Caspase-8活性则在1d达最高(1.92±0.11)U/μg,两者与对照组相比均有统计学显著性差异(P<0.05)。结论:天花粉多糖对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,其诱导凋亡的机制可能与Caspase-3、Caspase-8活化有关。     

五味子乙素对HepG2细胞增殖、凋亡及内化阿霉素效应的影响

目的 分析不同浓度五味子乙素(Sch B)对肝癌细胞(HepG2)凋亡、增殖及内化阿霉素效应的影响.方法 体外培养HepG2细胞,分别加Sch B至不同浓度.采用流式细胞术分析Sch B作用24 h细胞的凋亡率;采用MTT还原实验检测该药物作用72 h增殖抑制率.阿霉素单独(20 μmol/L)或阿霉素与不同浓度的Sch B(0、25、50、75、100和150 μmol/L)共同处理4h,流式细胞术分析HepG2细胞内阿霉素分布.结果 SchB抑制HepG2增殖的IC50值为51.50μmol/L;但其浓度达100 μmol/L时,细胞发生凋亡,细胞凋亡率为(5.56±1.14)％.20 μmol/L阿霉素单独作用组荧光强度为58.30±3.93,而25 μmol/L Sch B同时作用组,荧光强度增加到88.22±4.85;随Seh B浓度增加细胞内荧光逐渐增强.结论 低浓度的Sch B已具有促进阿霉素内化的效应,但其抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的有效浓度则约为此浓度的2倍或4倍.     

三氧化二砷联合非诺贝特对人肺癌A549细胞上皮间质转化及E-cadherin/Snail转化因子的影响

目的观察三氧化二砷和非诺贝特单独及联合运用对人肺癌A549细胞上皮间质转化及相关因子E-cad-herin、Snail的影响。方法体外培养人肺癌A549细胞,根据处理因素不同分为4组,A组:阴性对照组(只含有DMEM培养液);B组:1μmol/L三氧化二砷单药处理组;C组:100μmol/L非诺贝特单药处理组;D组:1μmol/L三氧化二砷+100μmol/L非诺贝特联合处理组。干预A549细胞48 h后,分别运用MTT法检测对A549细胞的抑制作用,流式细胞术检测对A549细胞周期的影响,小室侵袭实验检测对A549细胞侵袭能力的影响,半定量RT-PCR检测对E-cadherin、SnailmRNA表达的影响,Western blot检测对E-cadherin、Snail蛋白表达的影响。结果与阴性对照组及单药组相比,三氧化二砷联合非诺贝特可以明显抑制A549细胞的活性,其中三氧化二砷组的抑制率为(17.62±0.51)%,非诺贝特组的抑制率为(28.30±0.27)%,而联合组的抑制率为(35.19±0.04)%,差异有统计学意义(P<0.05)。两者联合还可以干扰A549细胞的细胞周期,减弱A549细胞的侵袭能力,3组的侵袭抑制率分别为:三氧化二砷组(50.3±0.15)%,非诺贝特组(56.7±0.57)%,联合组(68.1±0.21)%,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot检测结果显示,联合组较阴性组及单药组明显上调E-cadherin mRNA及蛋白的表达,下调Snail mRNA及蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三氧化二砷联合非诺贝特有明显的增效作用,两者联合可以增加影响人肺癌A549细胞的上皮间质转化的效果,其机制可能与E-cadherin及Snail相关。