巴弗洛霉素A1对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及自噬的抑制作用

目的 探讨巴弗洛霉素A1（Baf-A1）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、凋亡及自噬的影响。方法 采用终浓度为0.1、0.5 μmol／L的Baf-A1处理Tca8113细胞,并设不加药的对照组。MTT比色法测定对照组及不同浓度Baf-A1处理0、24、48、72 h细胞的增殖情况,流式细胞仪检测0.5 μmol／L Baf-A1处理72 h的细胞周期,Western blotting、细胞免疫荧光检测自噬标记蛋白LC3B的表达,电子透射显微镜观察细胞自噬体形成情况。结果 Baf-A1呈剂量依赖性抑制Tca8113细胞增殖,05 μmol/L Baf-A1处理72 h时细胞增殖抑制作用最明显。流式细胞仪检测显示,与对照组比较,Baf-A1组sub-G1期、G1期细胞增多（P＜0.05）,S期和G2/M期细胞减少（P＜0.05）。Baf-A1组LC3B-II蛋白的相对表达量为1.83±0.23,高于对照组的0.79±0.18（P＜0.01）;细胞免疫荧光检测显示,对照组中可见少量LC3B表达,而Baf-A1组72 h后可见大量LC3B点状聚集物;电镜观察显示,与对照组比较,0.5 μmol／L Baf-A1处理后可见大量自噬体形成,自噬溶酶体形成增加。结论 Baf-A1对舌鳞癌Tca8113细胞有增殖抑制作用,可能与其阻滞细胞周期和抑制细胞自噬有关。     

顺铂诱导鼻咽癌CNE-2细胞自噬和凋亡的体外研究

目的:研究顺铂在体外应用对人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬的影响,并探讨其可能机制。方法:采用流式细胞术检测细胞周期分布、细胞凋亡率和MDC阳性率;RT-PCR法检测Mcl-1、Bcl-2、Bad、Bax、Caspase-3、Beclin1和LC3 mRNA表达。结果:在实验浓度范围内,顺铂作用CNE-2细胞48h后,2、4、8μg/ml各干预组总凋亡率分别为(8.71±1.03)%、(11.34±1.17)%、(15.30±2.24)%;MDC阳性率分别为(5.36±0.48)%、(7.52±0.32)%、(10.65±0.70)%;与0μg/ml组比较,G2/M期阻滞率分别增加45.97%、73.99%、267.34%;Bcl-2和Mcl-1 mRNA表达剂量依赖性降低,Bax、Bad、Caspase-3、Beclin1和LC3 mRNA表达剂量依赖性增加,且4μg/ml和8μg/ml与0μg/ml组比较,以上研究指标差别均有统计学意义(P<0.05)。结论:顺铂可诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生G2/M期阻滞、细胞凋亡和自噬性细胞死亡,对CNE-2细胞具有杀伤作用,其分子机制可能与Bcl-2表达下调和Caspase-3、Beclin1表达上调有关。     

苹果多酚通过激活AMPK/SIRT1信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞自噬反应的影响

目的:探讨苹果多酚通过调节腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1（AMP-activated protein kinase/Sirtuin1,AMPK/SIRT1)信号通路对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人肺泡上皮细胞（A549）自噬反应的影响。方法:使用不同浓度的苹果多酚提取物（apple polyphenol extract,APE）预处理A549细胞2 h后,LPS诱导A549细胞培养24 h,MTT法检测增殖活性,筛选APE最佳预处理浓度;将A549细胞分为对照组、LPS组（3 mg/L LPS）、LPS+APE组（3 mg/L LPS+20 μg/mL APE）、APE+Compound C组（3 mg/L LPS+20 μg/mL APE+50 μmol/L Compound C）,免疫荧光染色观察A549细胞自噬;流式细胞术检测A549细胞凋亡;Western blot法检测细胞中自噬相关蛋白及AMPK/SIRT1通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,经LPS诱导的A549细胞增殖活性、自噬水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、SIRT1、p-ULK1/ULK1、p-AMPK/AMPK蛋白表达降低,p62蛋白表达及细胞凋亡率升高（P＜0.05）;与LPS组比较,LPS+APE组细胞增殖活性、自噬水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、SIRT1、p-ULK1/ULK1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平显著升高,p62蛋白表达及细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）;与LPS+APE组比较,APE+Compound C组A549细胞增殖活性、自噬水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、SIRT1、p-ULK1/ULK1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平显著降低,p62蛋白表达及细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。结论:苹果多酚通过激活AMPK/SIRT1 信号通路提高LPS诱导的肺上皮细胞自噬,降低细胞凋亡。     

甘草素通过影响鼻咽癌CNE-2 细胞的自噬增强其放疗敏感性

[摘要] 目的：探讨甘草素（licorice）对鼻咽癌CNE-2 细胞放疗增敏的影响及其作用机制。方法：体外培养构建放射抵抗性的鼻咽癌细胞株CNE-2-RR。MTT细胞实验检测不同浓度的甘草素对鼻咽癌细胞增殖活性的影响,透射电镜检测甘草素处理鼻咽癌细胞后自噬体的变化情况,Western blotting 检测甘草素对鼻咽癌细胞自噬蛋白水平的影响,彗星实验检测不同组鼻咽癌细胞DNA损伤修复情况,流式细胞术检测鼻咽癌细胞株凋亡率的变化。结果：成功构建放射抵抗细胞株CNE-2-RR,20 mmol/L甘草素对鼻咽癌细胞的最高抑制率为（58.86±5.02）%。甘草素处理鼻咽癌CNE-2-RR细胞后胞内自噬体数量增加,线粒体和细胞核形态异常;细胞中自噬体蛋白LC3-II 水平升高、LC3-I 水平降低（P<0.05）;甘草素作用CNE-2-RR细胞后彗星尾距长度大于对照组,表明对DNA损伤修复能力明显降低。甘草素作用导致CNE-2-RR细胞的凋亡率明显增加（P<0.05）。结论：甘草素通过影响鼻咽癌CNE-2-RR细胞的自噬行为及DNA修复能力增强其对放疗的敏感性。     

抑制自噬通过促进Caspase依赖性细胞凋亡逆转鼻咽癌紫杉醇耐药性的研究

摘 要：［目的］ 探讨细胞自噬在鼻咽癌紫杉醇耐药中的作用及其机制。［方法］ 以鼻咽癌亲本细胞和紫杉醇耐药细胞为研究对象。自噬抑制剂3-MA抑制自噬,siRNA下调自噬蛋白Beclin-1的表达,分别应用集落形成实验检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测凋亡水平,蛋白印迹分析检测自噬相关蛋白和Caspase蛋白的表达水平,透射电子显微镜和荧光显微镜进行细胞形态学观察。通过基因芯片技术分析Caspase家族基因在亲本和耐药细胞中的不同表达。［结果］ 紫杉醇耐药细胞中自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达水平高于亲本细胞（P<0.05）。用自噬抑制剂3-MA预处理鼻咽癌耐药细胞后,CNE-1/Taxol+3-MA和HNE-2/Taxol+3-MA细胞的IC50值分别为(6.25±1.0)nmol/L、(2.19±0.19)nmol/L,与对照组相比,细胞的生长抑制率明显增加（P<0.01）。鼻咽癌紫杉醇耐药细胞转染Beclin-1-siRNA后,CNE-1/Taxol细胞和HNE-2/Taxol细胞的IC50值分别为(5.69±1.23)nmol/L、(3.08±0.67)nmol/L,转染后的细胞对紫杉醇的敏感性明显高于阴性对照组。通过3-MA和Beclin-1-siRNA抑制自噬能增加紫杉醇诱导的Caspase依赖的细胞凋亡,同时能部分逆转鼻咽癌细胞紫杉醇耐药。［结论］ 紫杉醇诱导的鼻咽癌细胞自噬可能是通过降低Caspase依赖的细胞凋亡,从而部分参与了紫杉醇耐药,抑制自噬能通过促进凋亡从而增加鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

EGCG通过上调MnSOD 表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2 凋亡*

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG）对鼻咽癌细胞株CNE-2 的凋亡诱导作用、以及这个过程中MnSOD的表达变化特点。方法:应用噻唑蓝（MTT）法计算不同浓度EGCG 作用于CNE-2 鼻咽癌细胞后不同时间点的生长抑制率,并通过细胞荧光显微镜观察其凋亡情况,同时应用RT-PCR 法检测这个过程中MnSOD mRNA的表达变化。结果:EGCG 可以诱导CNE-2 细胞凋亡、抑制其生长,而且存在时间和剂量依赖关系,同时伴有MnSOD mRNA的表达上调。结论:EGCG 能通过上调MnSOD mRNA表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2 凋亡。      

Apogossypolone联合神经酰胺诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬

  目的  探讨棉酚衍生物Apogossypolone(ApoG2)联合神经酰胺体外抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖, 并初步探讨其可能机制。  方法  CCK-8测定不同浓度ApoG2和神经酰胺单药毒性及联合应用对CNE-2细胞的抑制作用, 计算CDI判定药物联合效果。Hoechst33258染色观察细胞凋亡, 吖啶橙(AO)染色、透射电镜观察自噬形态学变化, FCM检测凋亡率与自噬荧光强度。Western Blot检测Bcl-2、Beclin1蛋白表达。  结果  CCK-8检测发现ApoG2和神经酰胺单独应用时, 随药物浓度增加, 对CNE-2细胞生长的抑制作用也增加; 低浓度两药联合作用能协同增强单药抑制鼻咽癌细胞CNE-2细胞生长(CDI < 1)。Hoechst33258染色显示联合用药后出现更多的核固缩和碎裂等凋亡现象; 吖啶橙染色显示联合用药后产生更多的亮红色酸性自噬泡。透射电镜观察到联合用药后细胞内大空泡及膜性双层结构增多。FCM检测联合用药组细胞凋亡率和自噬率均较单独处理组升高, 差异具有统计学意义(F_凋亡=106.72, P_凋亡 < 0.001, F_自噬=140.77, P_自噬 < 0.001)。Western Blot检测发现联合用药组Bcl-2蛋白表达较单药处理组降低(F=111.071, P < 0.001), Beclin1蛋白表达较单独处理组升高(F=62.271, P < 0.001)。  结论  低浓度ApoG2与神经酰胺联合共同诱导细胞凋亡与自噬, 协同抑制鼻咽癌细胞生长, 其作用机制可能与下调Bcl-2和上调Beclin1的表达有关。      

二甲双胍诱导自噬的研究进展

近年来,越来越多的学者证实二甲双胍具有多种抗肿瘤作用,如启动LKB1/ AMPK 通路、调控胰岛素/ IGF -1轴、上调或诱导microRNA 的表达、活化Caspase 分子、诱导细胞周期停止或凋亡,其中对于启动LKB1/ AMPK 通路的认识相对全面,AMPK 是机体重要的“能量感应器”,是mTOR 上游重要的抑制剂, mTOR 的抑制和对于自噬的诱导是必不可少的。这些信号联系提示二甲双胍在发挥抗肿瘤作用的同时,与自噬有着千丝万缕的联系;现在,自噬在肿瘤发生、发展中的重要作用也越来越多被重视;本文总结两者的信号交汇,叙述二甲双胍在抗肿瘤中的重要机制,以期为其今后作为抗肿瘤药物应用于临床带来帮助。     

ApoG2诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬的观察

目的:研究新型棉酚衍生物ApoG2在体外应用对鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬的影响。方法:CCK-8检测增殖抑制率;Hoechst 33258染色、吖啶橙(AO)染色、透射电镜观察细胞凋亡与自噬形态学变化;FCM检测凋亡率与自噬荧光强度;蛋白质印迹法检测Bcl-2和Beclin1蛋白表达情况。结果:CCK-8法结果显示,不同浓度的ApoG2作用于CNE-2细胞24、48和72h后,均可见对细胞具有生长抑制作用,且呈剂量-时间依赖性。72h的IC50值为23.61μmol/L。Hoechst33258染色显示,ApoG2作用后可观察到更多的核固缩和碎裂等凋亡现象;AO染色显示,ApoG2作用后可观察到更多的亮红色酸性自噬泡。透射电镜可观察到细胞体内大空泡及膜性双层结构增多。FCM检测显示,对照组和ApoG2组凋亡率分别(3.83±0.23)%和(20.06±2.10)%,差异有统计学意义,F=176.823,P=0.000。FCM检测显示,对照组和ApoG2组自噬荧光强度分别为(1.05±0.54)%和(26.91±7.65)%,差异有统计学意义,F=34.019,P=0.004。蛋白质印迹法显示,Bcl-2蛋白表达下调差异有统计学意义,F=68.909,P=0.001;Beclin1蛋白表达上调差异亦有统计学意义,F=497.906,P=0.000。结论:ApoG2在体外可以抑制鼻咽癌细胞CNE-2增殖并诱导细胞凋亡与自噬。     

EGCG对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及E2F-1表达的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用CCK-8法检测EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2Z增殖的影响;AnnexinV /PI双标记流式细胞术检测EGCG的凋亡诱导作用;实时荧光定量PCR和Western blot检测核转录因子E2F-1及其上游调控蛋白CyclinD1和 p21的表达水平。结果EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖明显受到抑制,其细胞凋亡率亦显著增高,呈量效关系;随着EGCG浓度增高,E2F-1 mRNA和蛋白表达水平明显下降,其上游调控蛋白CyclinD1的表达亦明显下调,而p21的表达则明显上调。结论EGCG可明显抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,可能与其直接或间接下调核转录因子E2F-1有关,CyclinD1和p21参与其调控。     

红景天苷通过miR-99a-5p/IGF-1R信号通路调节鼻咽癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的:探讨红景天苷调节微小RNA-99a-5p（microRNA-99a-5p,miR-99a-5p）/胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R）信号通路对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人鼻咽上皮细胞（NP69）、鼻咽癌细胞系（CNE-2Z、HONE1、6-10B、HNE2）中miR-99a-5p、IGF-1R信使RNA（mRNA）表达水平;将对数期HNE2细胞分为对照组（常规培养HNE2细胞）、红景天苷低浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入0.5 μg/mL的红景天苷）、红景天苷中浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入1 μg/mL的红景天苷）、红景天苷高浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷）、模拟物（mimics）-NC组（HNE2细胞转染miR-99a-5p mimics阴性对照）、miR-99a-5p mimics组（HNE2细胞转染miR-99a-5p mimics）、红景天苷高浓度+抑制剂（inhibitor）NC组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷并转染miR-99a-5p inhibitor阴性对照）、红景天苷高浓度+miR-99a-5p inhibitor组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷并转染miR-99a-5p inhibitor）。qRT-PCR法检测各组HNE2细胞中miR-99a-5p、IGF-1R mRNA表达水平;细胞计数试剂盒-8、流式细胞术、Transwell小室、划痕实验、蛋白免疫印迹法分别检测HNE2细胞增殖能力、凋亡率、侵袭能力、迁移能力、IGF-1R蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a-5p与IGF-1R的靶向关系。结果:与NP69细胞相比,CNE-2Z、HONE1、6-10B、HNE2细胞系中miR-99a-5p表达水平降低,IGF-1R mRNA表达水平升高（P＜0.05）,其中HNE2细胞中miR-99a-5p、IGF-1R mRNA表达水平与NP69细胞差异更明显（P＜0.05）;与对照组相比,红景天苷低、中、高浓度组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率依次升高（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率依次降低（P＜0.05）;与对照组、mimics-NC组相比,miR-99a-5p mimics组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率升高（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率降低（P＜0.05）;与红景天苷高浓度组、红景天苷高浓度+inhibitor NC组相比,红景天苷高浓度+miR-99a-5p inhibitor组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率降低（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率升高（P＜0.05）;miR-99a-5p与IGF-1R存在靶向关系。结论:红景天苷可能通过促进miR-99a-5p表达,靶向抑制IGF-1R表达,参与抑制HNE2细胞增殖、侵袭、迁移,并促进HNE2细胞凋亡。     

AMIGO2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进鼻咽癌细胞的增殖

目的：探讨Ig 样结构域 2 黏附分子（adhesion molecule with Ig like domain 2，AMIGO2）在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）细胞增殖中的作用及其机制。方法: 选用2017年9月至11月福建省肿瘤医院收集的10例NPC组织和10例正常鼻 咽黏膜上皮组织标本，以及NPC细胞系CNE-1、CNE-2、SUNE-1、 6-10B、 C666-1和人永生化鼻咽黏膜上皮细胞株NP69， 用qPCR法 检测NPC组织和细胞中AMIGO2 mRNA的表达。构建慢病毒载体干扰AMIGO2表达， 用qPCR法验证其干扰效率； 用CCK-8 法、克隆形成及流式细胞术检测干扰AMIGO2表达对NPC细胞增殖、克隆形成和凋亡的影响， 用 Western blotting 检测干扰 AMIGO2 表达对 NPC 细胞增殖及 PI3K/AKT/mTOR 信号通路相关标志蛋白表达的影响。结果: AMIGO2在NPC组织和 CNE-2和SUNE-1细胞中高表达（均P<0.01）。慢病毒AMIGO2感染后，CNE-2和SUNE-1细胞的AMIGO2干扰效率均达50%以 上。干扰AMIGO2表达，显著降低CNE-2和SUNE-1细胞增殖及克隆形成能力（均P<0.01）、明显提高细胞的凋亡率（均P<0.01）； 降低 SUNE-1 细胞中PI3K、AKT和mTOR磷酸化蛋白的表达水平 （均P<0.01）、下调survivin 和 PCNA 蛋白的表达水平（均P<0.01）。 结论：AMIGO2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进NPC细胞增殖并抑制其凋亡，提示AMIGO2可能是NPC治疗的潜 在靶点。     

miR-429在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨微小RNA-429（miR-429）在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:选取本院收治的78例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,另选取同期因其他疾病需进行鼻内镜手术患者33例为对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测两组组织中miR-429的表达。体外培养人鼻咽上皮细胞NP69与鼻咽癌细胞株CNE-2,将miR-429阴性对照质粒、miR-429 mimics质粒分别转染至CNE-2细胞,分别命名为阴性转染组、miR-429过表达组,未经处理的细胞命名为空白组,采用qRT-PCR技术检测各转染组细胞中miR-429表达。MTT法检测各转染组细胞增殖情况;平板克隆细胞形成实验检测细胞菌落形成情况;Transwell检测细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹（Western blot）检测E盒结合锌指蛋白（ZEB1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、钙黏附蛋白E（E-cadherin）蛋白表达量。结果:鼻咽癌组织中miR-429表达水平显著低于对照组（P＜0.05）,且CNE-2细胞中miR-429表达水平显著低于NP69细胞（P＜0.05）;miR-429过表达组miR-429表达水平显著高于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞增殖能力显著低于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞菌落形成、迁移细胞及侵袭细胞数量均显著低于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞中ZEB1、MMP-2蛋白表达水平显著低于空白组、阴性转染组,而E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。结论:鼻咽癌细胞中miR-429呈低表达,miR-429过表达后可显著抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

抑制KIF18B分子表达对人急性髓系白血病HL60细胞活性的影响及其机制探讨

目的:探讨抑制KIF18B分子表达后对人急性髓系白血病HL60细胞增殖、凋亡、自噬的影响及其机制。方法:选择HL60细胞随机分为3组,利用脂质体2000分别转染KIF18B-siR、NC-siR及Control组细胞,采用qRT-PCR法验证转染后HL60细胞中KIF18B的表达;CCK-8法检测HL60细胞增殖能力变化;流式细胞技术检测抑制KIF18B表达对HL60细胞凋亡能力及细胞周期的影响;通过透射电镜观察各组细胞溶酶体中自噬小体变化情况;采用Western blot检测与增殖、凋亡、自噬相关的蛋白AMPK、mTOR、P70S6K、4EBP1及ULK1的表达。结果:qRT-PCR结果显示,与Control 和NC-siR组相比,KIF18B-siR组KIF18B mRNA表达水平显著下降（P＜0.05）;CCK-8实验结果表明,siRNA 干扰KIF18B表达后,可以抑制HL60细胞增殖,有统计学差异（P＜0.05）;流式检测结果显示,与Control组和NC-siR组相比,抑制 KIF18B表达能促使HL60细胞G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,阻滞细胞周期,促进HL60细胞大量凋亡;透射电镜观察到,与Control和NC-siR组相比,KIF18B-siR组溶酶体内分布有大量的自噬小泡;Western blot结果表明,KIF18B-siR组p-AMPK和p-ULK1表达上调,p-mTOR、p-P70S6K及p-4EBP1表达下调,结果有显著差异（P＜0.05）。结论:抑制KIF18B表达可以抑制人急性髓系白血病HL60细胞增殖,促使细胞周期发生阻滞,诱导凋亡和自噬,调控机制可能与激活AMPK/mTOR通路有关。     

肿瘤细胞自噬的诱导及其细胞周期分析

背景与目的:自噬作为Ⅱ型程序性死亡——自噬性死亡过程中的主要现象,与细胞的自噬性死亡有着密切的关系。研究者们对凋亡与细胞周期的关系进行了深入而细致的研究,但对自噬性细胞死亡与细胞周期的关系却知之甚少。本研究的目的是探讨不同方法诱导的细胞自噬与细胞周期之间的关系。方法:用Hanks’液替代培养基的饥饿诱导和用长春新碱诱导两种方法分别处理对数生长期的HeLa细胞、SW480细胞以及经过和未经过植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激的健康人外周血淋巴细胞;应用激光共聚焦显微镜和透射电镜检测细胞自噬的发生,兔抗人微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associatedprotein1lightchain3,MAP1-LC3-Ⅱ)/DNA双参数流式细胞术分析自噬细胞的细胞周期。结果:HeLa细胞和SW480细胞用饥饿和长春新碱两种方法诱导的细胞自噬在G1、S、G2/M期均可以发生,且自噬发生率随诱导时间的延长逐渐增加。处于静止期(未经PHA刺激)的外周血淋巴细胞没有自噬的发生,48h时LC3-Ⅱ表达率<2.62%(HanksL液饥饿诱导)或<6.16%(长春新碱诱导);经PHA刺激48h进入细胞周期的外周血淋巴细胞,2h时已有明显的自噬发生。结论:MAP1-LC3-Ⅱ/DNA双参数流式细胞术是对细胞自噬与细胞周期进行同步分析的一种新的简便可靠的方法;细胞自噬只发生在细胞进入周期后,而静止期细胞对自噬诱导因素不敏感。     

赫赛汀对HER-2/neu基因高表达鼻咽癌细胞株生长的影响

目的：探讨赫赛汀(Herceptin)对HER-2／neu基因高表达鼻咽癌细胞株生长的影响及机制。方法：分别采用MTT法、^3H-TdR细胞掺入法检测Herceptin对鼻咽癌细胞株CNE-22和CNE-2体外生长的影响;用流式细胞仪检测Herceptin对CNE-2Z细胞生长、细胞周期和凋亡的影响。结果：Herceptin可抑制CNE-2Z细胞的生长,引起细胞凋亡指数的增加。结论：Herceptin可抑制高表达HER-2／neu基因鼻咽癌细胞株的生长,并诱导细胞凋亡的发生。     

盐霉素增加鼻咽癌CNE-2细胞放疗敏感性的实验研究

目的:探讨盐霉素（Sal）对鼻咽癌CNE-2细胞的放疗增敏作用及其可能的机制。方法:CCK8测定不同浓度盐霉素、不同剂量放疗及联合应用对CNE-2细胞增殖的抑制作用;平板克隆实验观察盐霉素联合放疗后细胞的克隆形成率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化情况。结果:CCK8结果显示,盐霉素和放疗对鼻咽癌CNE-2细胞的生长有显著的抑制作用,呈浓度和剂量依赖性,且联合组抑制作用强于单纯药物组或放疗组。平板克隆实验显示盐霉素联合放疗后能显著降低细胞的克隆形成率;Hoechst33258染色显示盐霉素联合放疗治疗后细胞凋亡现象更明显;细胞流式术检测显示联合组较单纯药物组或放疗组凋亡率增加,盐霉素对放疗具有增敏作用。药物组和放疗组均能使G2/M期细胞比例增加,两者联合效果更明显。结论:盐霉素能增加人鼻咽癌CNE-2细胞的放疗敏感性,其作用机制可能与周期阻滞及其凋亡诱导相关。     

lncRNA AK126393对结肠癌细胞的抑制作用及机制研究

目的:探索长链非编码 RNA（long non-coding RNA,lncRNA）AK126393调控人结肠癌细胞凋亡的作用及其机制。方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应检测人正常结肠上皮细胞和不同结肠癌细胞系中lncRNA AK126393的表达水平,采用pcDNA3.1-AK126393转染HCT116细胞增加AK126393的表达,采用MTT法检测细胞的增殖活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,采用Western blotting检测细胞中目标蛋白的表达水平。结果:与人正常结肠上皮细胞系永生化结肠上皮细胞系NCM460相比,人结肠癌细胞系中AK126393的表达均出现显著下降,其中HCT116细胞中AK126393表达最低;pcDNA3.1-AK126393转染HT116细胞后AK126393的相对表达水平出现显著升高;AK126393 的过表达抑制HCT116细胞的增殖能力,促进其细胞凋亡水平,并且引起细胞自噬的发生;同时AK126393 的过表达显著抑制HCT116细胞内AKT/ERK1/2信号通路的磷酸化水平。结论:LncRNA AK126393具有抑制结肠癌细胞增殖、促进凋亡以及引起细胞自噬的作用,其作用可能是通过抑制AKT/ERK1/2信号通路的激活来实现。