胱硫醚-β-合成酶和胱硫醚-β-裂解酶在颈动脉体中的分布

本研究探讨胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-β-裂解酶(CSE)在颈动脉体中的分布.应用组织化学技术检测CBS和CSE在颈动脉体中的表达分布并进一步用激光共聚焦对该酶在细胞中的分布进行定位研究.结果表明小鼠颈动脉体Ⅰ型上皮细胞表达CBS和CSE免疫活性,主要分布在胞浆的近细胞膜部位.结论为颈动脉体中氧感受器细胞表达CBS和CSE,提示内源性H2S可能影响颈动脉体化学感受器功能.     

炎症介导的PI3K/Akt/Sp1信号通路激活及内源性H_2S生成加剧重症急性胰腺炎肠道损伤

目的:探讨内源性硫化氢(hydrogen sulphide,H_2S)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肠道动力的调控及相关机制。方法:构建SAP大鼠模型,观察大鼠粪便颗粒的排出情况及肠道炎症水平;采用SAP大鼠血浆、TNF-α和IL-6处理大鼠肠道平滑肌细胞,RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色等方法检测H_2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)、胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)、转录因子Sp1和PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达;采用PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞或转染Sp1的干扰序列至细胞中,以验证PI3K/Akt/Sp1信号通路在肠道H_2S产生过程中的调控作用。结果:SAP大鼠排便减少(P0.05),内源性H_2S生成增加(P0.05),血清TNF-α和IL-6含量增加(P0.05)。SAP大鼠血浆、TNF-α和IL-6可诱导肠道平滑肌细胞CSE和CBS的表达上调(P0.05)。阻断PI3K/Akt/Sp1信号通路可以显著抑制肠道平滑肌细胞CSE和CBS的表达(P0.05)。结论:炎症反应介导的PI3K/Akt/Sp1信号通路激活和内源性H_2S产生增多是SAP肠道动力减退的潜在机制。     

胱硫醚-γ-裂解酶在三种微血管内皮细胞上的表达

目的鉴定微血管内皮细胞上是否表达生成硫化氢（H2s）的酶,为深入研究硫化氢的心血管作用提供新线索。方法原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞（CMEC）,设计相应引物后用RT—PCR的方法检测胱硫醚-1-裂解酶（CSE）和胱硫醚-β-成酶（CBS）基因转录情况,进一步用兔抗大鼠CSE和CBS多克隆抗体对CMEC进行蛋白水平的免疫荧光染色。此外对另两种微血管内皮细胞株RF／6A和bEnd．3也检测了H2S生成酶的表达。结果三种微血管内皮细胞都扩增出CSE基因的特异条带,而CBS基因都未扩增出相应产物。CMEC的免疫荧光染色显示CSE抗体染色为阳性,CBS抗体染色为阴性。结论首次发现了微血管内皮细胞上存在CSE的表达,提示内皮细胞可以通过生成硫化氢调节心血管活动。     

内源性硫化氢水平与脑低分化神经胶质瘤患者生存率的相关性分析

目的分析硫化氢H2S合成酶基因表达水平与人神经胶质瘤分化与生存率的相关性。方法从肿瘤基因组图谱(TCGA)的脑低分化神经胶质瘤(BLGG)模块收集神经胶质瘤患者共530例,其中男患者291例,女患者238例,1例性别不详。患者年龄范围14～87岁,确诊为脑低分化神经胶质瘤Ⅱ级248例,Ⅲ级265例。结果在神经胶质瘤Ⅱ级患者,脑H2S合成酶胱硫醚β合成酶(CBS)的基因表达水平明显高于Ⅲ级患者(P0.05)。CBS基因表达水平高于或等于11.63的神经胶质瘤患者的生存率显著高于CBS基因表达水平低于11.63的患者。CBS基因表达水平与神经胶质瘤患者的年龄呈负相关。在神经胶质瘤患者中,另一个H_2S合成酶3硫基丙酸硫基转移酶(MPST)的基因表达水平与CBS的基因表达水平呈正相关。MPST基因表达水平大于10.27的神经胶质瘤患者的生存率明显高于低表达(9.51)组的患者(P0.05)。结论 H2S合成酶的基因表达水平与人神经胶质瘤的分化及生存率密切相关。     

MPP+对PC12细胞内源性H2S生成的影响

目的： 观察1-甲基4-苯基吡啶离子 (MPP+)对PC12细胞内源性硫化氢（H2S）生成的影响,以探讨MPP+损伤PC12细胞的新机制。方法: RT-PCR方法检测PC12细胞胱硫醚-β-合酶（CBS）mRNA 的表达;亚甲基蓝分光光度计法检测PC12细胞内源性H2S的含量及PC12细胞CBS活性;台盼蓝拒染色法观察PC12细胞的存活率。结果：MPP+ 可以抑制PC12细胞CBS的表达及其活性,减少内源性H2S的生成;MPP+可以明显地降低PC12细胞的存活率;H2S的供体硫氢化钠（NaHS）对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有显著的拮抗作用。结论: MPP+能抑制CBS的表达和活性,减少内源性H2S生成,这可能与其损伤PC12细胞的机制有关。     

胱硫醚-β-合成酶在脑缺血-再灌注大鼠模型中表达变化的研究

目的:观察缺血-再灌注(Ischemia-reperfusion,IR)大鼠模型脑组织中胱硫醚-β-合酶(Cystathionineβ-synthase,CBS)表达的变化及意义。方法:采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。分别应用RT-PCR及Western blot法检测SHAM组大鼠、I组大鼠以及IR组3 h、6 h、12 h和24 h大鼠脑内CBS mRNA和CBS蛋白的表达变化;采用ELISA法检测大鼠血中同型半胱氨酸含量变化;采用CBS抑制剂羟胺抑制CBS活性后,Western blot法检测氧化应激相关蛋白HO-1的表达,并用光镜观察脑组织的病理学变化。结果:IR大鼠脑组织CBS mRNA和蛋白表达水平显著高于假手术组(P0.01),于再灌注12 h表达至峰值。和假手术组相比,血中同型半胱氨酸含量在再灌注12 h时水平最低(5.73±1.17 vs 2.88±0.93,F=25.56,P=0.001)。应用HA抑制CBS活性后,CBS及氧化应激相关蛋白HO-1表达显著减少,光镜下神经元损伤进一步加重。结论:缺血-再灌注后,脑组织中CBS表达上调可能对神经元产生保护效应。     

血红素加氧酶-1上调自发性高血压大鼠肝脏MMP-2与MMP-9表达

目的 探讨血红素加氧酶-1 (HO-1)对自发性高血压大鼠(SHR)肝脏基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与-9 (MMP-9)表达的影响.方法 大鼠随机分为4组:Wistar诱导组(WH)与SHR诱导组(SH)按15 mg/kg每天连续4天腹腔内注射浓度为8 g/L的氯化血红素(hemin)诱导HO-1表达;Wistar对照组(W)与SHR对照组(S)腹腔内注射等体积0.1 mol/L NaOH (pH8.3).检测大鼠尾动脉收缩压.免疫组化法分析肝脏HO-1及MMPs表达.明胶酶谱法检测血浆MMP-2及MMP-9的相对活性.结果 WH组与SH组肝脏HO-1、MMP-2与MMP-9表达量均显著高于W组与S组.HO-1诱导可显著降低SHR大鼠血压.S组血浆MMP-2及MMP-9相对活性显著高于W组.WH组与SH组血浆MMP-2及MMP-9相对活性显著高于W组与S组.结论 HO-1可上调SHR肝脏MMP-2与MMP-9表达.     

大鼠肢体缺血-再灌注后脑CBS表达的变化及意义

目的:观察肢体缺血-再灌注(IR)后脑组织内胱硫醚β-合酶(CBS)表达的变化及意义。方法:夹闭大鼠腹主动脉下段4 h、开放3~24 h复制肢体IR模型。采用逆转录多聚酶链反应检测脑内CBS mRNA表达的变化;Western blotting法检测脑内CBS蛋白的表达;采用全自动酶标仪测定脑组织中CBS活性和硫化氢含量;采用CBS抑制剂羟胺抑制CBS活性后,光镜观察脑组织的病理学变化。结果:肢体IR后脑组织CBS mRNA和蛋白表达水平明显高于假手术组,再灌12 h表达至峰值(均P0.01),再灌注至24 h与假手术组比较无显著差异(均P0.05)。肢体IR后脑组织中CBS活性及硫化氢浓度的变化与CBS mRNA和蛋白表达的变化一致;与假手术组相比,单纯缺血组上述各指标均没有明显变化(均P0.05);肢体IR后抑制CBS活性,IR组脑组织损伤加重。结论:肢体IR后,脑组织中CBS表达上调,所诱生的CBS对神经元具有保护效应。     

转化生长因子-β_1在自发性高血压大鼠肾小管的表达及作用

目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在自发性高血压大鼠(SHR)肾小管的表达及其与肾小管间质纤维化的关系。方法:以同龄雄性正常血压大鼠(WKY)和SHR为研究对象,监测实验前后大鼠尾动脉血压、肾功能及β2-微球蛋白(β2-MG),并采用免疫组织化学方法检测TGF-β1在肾小管中的表达。结果:同WKY组比较,SHR大鼠组24周时β2-MG显著增高,尾动脉血压显著性增高,尿素氮和血肌酐的差异无显著性意义。TGF-β1在WKY组肾小管的表达无或极微量,而在SHR组肾小管的表达明显,且随高血压病程的进展显著性增加。结论:TGF-β1在SHR肾小管的表达显著增加,提示其可能是致肾问质纤维化的重要因素。     

胱硫醚β合成酶通过ATG5巯基化促进自噬缓解阿尔茨海默病

目的探究胱硫醚β合成酶(CBS)对阿尔茨海默病的影响及其作用机制。方法用Western blot检测CBS的过表达效果及其对淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的影响,检测CBS对自噬标志物LC3的影响;用ELISA检测CBS对细胞上清中Aβ1-42的影响;用亚甲基蓝法检测H_2S的生成;用生物素转换及Western blot实验验证H_2S对自噬相关蛋白5(ATG5)的巯基化作用。用侧脑室注射质粒的方法在小鼠体内过表达CBS;用Y迷宫实验验证CBS对小鼠学习记忆能力的影响。结果 CBS降低了细胞上清中Aβ1-42的水平(P0.05);抑制了APP的表达(P0.05);CBS促进了H_2S的生成(P0.01),CBS促进了ATG5的巯基化;CBS促进了自噬标志物LC3的表达,抑制了P62的表达,促进了自噬水平;CBS促进阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆能力(P0.05)。结论 CBS通过促进硫化氢生成促进了ATG5第19位半胱氨酸发生巯基化,进而促进自噬,缓解了阿尔茨海默病的病理进程。     

心脏横纹肌中胱硫醚-γ-裂解酶的表达及意义

目的探讨心脏横纹肌中胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达及意义。方法以SD大鼠心肌为研究对象,采用免疫组化SP法观察心脏横纹肌中CSE的表达,棕褐色为阳性表达。结果心脏横纹肌组织中无CSE阳性表达,心脏血管组织中有CSE阳性表达。结论心脏横纹肌不含有CSE。在心血管系统中起重要调节作用的硫化氢不在心脏横纹肌中代谢生成,主要由外源途径生成。     

外源性硫化氢减轻小鼠阻塞性肾损伤

目的:探讨外源性硫化氢(H2S)在小鼠阻塞性肾损伤中的保护作用及可能机制。方法:将8周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、手术组和H2S组,每组5只,单侧输尿管结扎(UUO)构建肾阻塞模型,H_2S组小鼠腹腔注射H_2S供体硫氢化钠(Na HS),手术组和假手术组小鼠注射等体积的生理盐水,每天1次。7 d后处死小鼠,取出肾脏,提取RNA行RT-PCR检测3组小鼠肾脏内源性H_2S催化酶mRNA表达的差异;组织HE染色观察3组小鼠肾脏的组织结构的变化;Masson染色检测3组小鼠肾脏纤维化的差异;检测血浆胱抑素C含量来反映肾小球滤过能力;Western blot检测LC3、beclin-1和纤连蛋白(FN)蛋白表达的变化。结果:与假手术组相比,手术组小鼠肾脏中胱硫醚β-合成酶(CBS)、胱硫醚γ-裂解酶(CSE)和3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-MST)的mRNA表达显著降低,胶原纤维显著增多,而H_2S组小鼠肾组织胶原纤维又比模型组显著减少。与假手术组相比,手术组小鼠肾脏中FN的蛋白表达显著升高,而H_2S组小鼠的FN表达量比手术组小鼠显著降低;与假手术组相比,手术组和H_2S组小鼠肾组织细胞中LC3-II和beclin-1蛋白表达均显著增高,而H_2S组小鼠肾组织细胞中LC3-II和beclin-1蛋白表达又显著高于手术组。结论:外源性H_2S可能通过上调细胞自噬而减轻UUO小鼠的肾纤维化。     

硫化氢通过促进SIRT1硫氢化修饰缓解动脉粥样硬化

<正>本研究探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)是否通过调节SIRT1信号拮抗动脉粥样硬化。在ApoE敲除动脉粥样硬化模型,给予H2S供体,显著减少了斑块面积、斑块中巨噬细胞浸润。在HepG 2细胞、HUVECs以及小鼠腹腔巨噬细胞,H2S供体显著上调SIRT1蛋白表达;腺病毒过表达或siRNA沉默硫化氢生成酶胱硫醚γ-裂解酶也增加或减少SIRT1表达。应用Biotin-     

硫化氢缓解自发性高血压大鼠主动脉重构中胶原堆积

目的以自发性高血压(SHR)大鼠为对象,研究硫化氢(H2S)对血管中胶原堆积的影响。方法SHR大鼠17只,随机分为SHR组(n=6),SHR H2S(n=6)组和SHR PPG组(n=5)。WKY大鼠5只为对照组(n=5)。SHR H2S组每日腹腔注射0.25 mL H2S供体NaHS(56μmol/kg),SHR PPG组每日腹腔注射0.25 mL PPG(37.5 mg/Kg),连续用药5周。WKY对照组及SHR组注射等量注射用水。连续混合喂养5周后测定动脉血压;以胸主动脉组织为对象,用酶促反应法测定CSE活性;用高温裂解法测定羟脯氨酸含量。用酶联免疫法(ELISA)测定Ⅰ型胶原含量。用免疫组化法检测转化生长因子β3(TGF-β3)表达。结果与WKY对照组相比,SHR组大鼠血压升高52%(P<0.01);CSE酶活性降低55%(P<0.01);羟脯氨酸含量增加87%(P<0.01);Ⅰ型胶原含量增加28%;TGF-β3表达增加10%(P<0.05)。给予H2S后缓解了上述指标的变化。结论给SHR大鼠补充外源性H2S能够降低动脉血压,而且使主动脉组织中羟脯氨酸和Ⅰ型胶原含量减少,从而改善SHR大鼠血管中胶原的堆积。     

Expression of cystathionine-γ-lyase and its significance in cardiac striated muscle

目的 探讨心脏横纹肌中胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达及意义.方法 以SD大鼠心肌为研究对象,采用免疫组化SP法观察心脏横纹肌中CSE的表达,棕褐色为阳性表达.结果 心脏横纹肌组织中无CSE阳性表达,心脏血管组织中有CSE阳性表达.结论 心脏横纹肌不含有CSE.在心血管系统中起重要调节作用的硫化氢不在心脏横纹肌中代谢生成,主要由外源途径生成.     

氯沙坦对自发性高血压大鼠左心室肥厚和转化生长因子β_1的影响

目的 :探讨转化生长因子 β1 (TGFβ1 )在自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚中的作用及氯沙坦对左心室肥厚和TGFβ1 水平的影响。方法 :2 0只SHR随机分成氯沙坦治疗组和未治疗组 ,每组10只 ,用免疫组织化学法检测SHR心肌TGFβ1 的表达及氯沙坦治疗后的改变 ,同时观察心肌肥厚的变化 ,并与正常WKY组对照。结果 :正常组心肌细胞胞浆内TGFβ1 表达呈弱阳性 ,SHR对照组呈强阳性 ,氯沙坦治疗组呈阳性反应。用图像分析仪计算其平均吸光度分别为 17.46± 2 .3 8、15 6.81± 2 1.75、67.19± 7.2 4,并且SHR左心室质量指数 (LVWI)高于WKY组 ,氯沙坦治疗组LVWI低于对照组。结论 :TGFβ1 在自发性高血压大鼠心肌中表达增强 ,而氯沙坦治疗可抑制其表达 ,从而可能延缓SHR左心室肥厚的病理学进展。     

2型糖尿病患者胱硫醚-β合成酶的基因多态性研究

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)代谢过程的关键酶之一胱硫醚-β合成酶(CBS)基因多态性与2型糖尿病的关系.方法 PCR扩增52例2型糖尿病和124例正常人的CBS 844ins 68基因突变点,直接行琼脂糖凝胶电泳确定其基因型.结果病例组与对照组CBS基因分布频率和等位基因频数分布差异无显著性(p>0.05).结论 CBS 844ins 68突变可能不足以构成2型糖尿病的独立遗传性危险因子.     

ERK1/2和TGF-β1在自发性高血压大鼠心脏中的表达上调

目的 探讨自发性高血压大鼠(SHR)心脏细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的意义.方法 采用免疫组化和Western blot方法检测心脏ERK1/2和TGF-β1的表达.结果 在SHR8、SHR16、SHR20三个周龄组中,心肌间小动脉内皮细胞中的ERK1/2阳性率分别为15.38%、76.97%和72.72%,SHR16和SHR20组心肌间血管平滑肌细胞(VSMC)ERK1/2染色阳性率为5.49%和6.83%,均显著高于对照组(P＜0.05).在SHR16和SHR20组中ERK1/2蛋白含量明显高于对照组(P＜0.05);心脏中TGF-β1含量明显高于同周龄的SD大鼠(P＜0.05).心脏中ERK1/2和TGF-β1表达量与平均动脉血压正相关(P＜0.05).结论 在SHR心脏组织中TGF-β1表达增加并与ERK1/2相互作用,可能参与了心脏病变的形成.     

PAG双向调节H2S诱导GES-1细胞免疫反应

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)诱导胃黏膜上皮细胞-1(gastric mucosal epithelial-1, GES-1)的免疫反应机制。方法分别设立对照组、炔丙基甘氨酸(propargylglycine, PAG)浓度组(PAG分别为100 μmol/L, PAG 500 μmol/L, PAG 1000 μmol/L)和NaHS(NaHS 400 μmol/L)作用组(NaHS组, NaHS-PAG 100 μmol/L组, NaHS-PAG 500 μmol/L组, NaHS-PAG 1000 μmol/L组)。在不同浓度H2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase, CSE)抑制剂PAG(100 μmol/L, 500 μmol/L, 1000 μmol/L)作用下, 通过添加400 μmol/L外源性NaHS作用于胃黏膜细胞GES-1进行研究。Calcein/PI细胞活性与细胞毒性实验检测NaHS对GES-1细胞膜渗透性的影响;酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,...     

CO上调大鼠胸主动脉中硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系

目的研究一氧化碳(CO)对正常大鼠主动脉中硫化氢(H2S)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)体系的影响。方法取W istar大鼠胸主动脉分为对照组、血红素组(终浓度10-4mol/L)和锌原卟啉组(终浓度10-5mol/L),每组各9例,用硫电极法测定孵育液中H2S含量和组织中H2S生成率。结果与对照组相比,血红素组孵育液中H2S含量明显升高(P<0.01),而锌原卟啉组H2S含量明显降低(P<0.05)。与对照组相比,血红素组胸主动脉组织中H2S生成率明显升高(P<0.01),锌原卟啉组H2S生成率明显降低(P<0.05)。结论在正常大鼠胸主动脉组织孵育中CO上调H2S/CSE体系。