白藜芦醇衍生物TMS对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞中一氧化氮、血管细胞间黏附分子-1及核转录因子-κB表达的影响

目的探讨白藜芦醇衍生物TMS(trans-3,5,4′-trimethoxystilbene)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中一氧化氮(nitric oxide,NO)、血管细胞间黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达的影响。方法取P3代HUVECs,采用CCK-8法检测不同TMS浓度(0、5、10、20、50、100μmol/L)对HUVECs细胞存活率的影响。将P6代HUVECs分为正常对照组、LPS组、TMS(高、中、低浓度)+LPS组及PDTC+LPS组,Griess法检测各组细胞产生NO浓度;Real-time PCR法检测各组细胞中VCAM-1、NF-κB p65基因m RNA的转录水平;Western blot法检测各组细胞中VCAM-1、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达水平;免疫细胞化学染色法检测各组细胞中VCAM-1和NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 5、10μmol/L浓度组TMS对细胞存活率影响较小,50、100μmol/L浓度组中细胞生存率明显下降(P0.05),且呈时间、剂量依赖性。低、中、高浓度TMS+LPS组与PDTC+LPS组细胞中NO浓度显著下降(P0.05);中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组细胞中VCAM-1、NF-κB p65基因m RNA转录和蛋白表达水平均明显低于LPS组(P0.05),IκBα蛋白表达水平明显高于LPS组(P0.05);正常对照组细胞胞质中有弱VCAM-1蛋白荧光表达,未见NF-κB p65蛋白荧光表达,LPS组可见VCAM-1和NF-κB p65蛋白的强荧光表达,中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中VCAM-1和NF-κB p65蛋白荧光表达均弱于LPS组。结论白藜芦醇衍生物TMS可抑制LPS诱导HUVECs表达NO、VCAM-1和NF-κB p65,且其抑制VCAM-1效应可能是通过NF-κB细胞信号通路而发挥作用的,本研究为临床治疗血管内皮功能紊乱相关疾病提供了实验依据。     

百合知母汤对LPS诱导小鼠急性肺损伤的保护作用

探讨百合知母汤对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用。给予小鼠腹腔注射LPS(5mg/kg)复制ALI模型。将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、地塞米松组(2 mg/kg)和百合知母汤组(6.5、13 g/kg)。观察各药物对小鼠支气管肺泡灌洗液中性粒细胞百分比,肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、炎症因子白介素-6(IL-6)的含量变化;观察各药物对小鼠肺组织中核转录因子(NF-κBp65)和环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达。百合知母汤组(6.5、13 g/kg)可有效降低LPS所致肺泡灌洗液中性粒细胞百分比,显著肺组织中提高SOD活性,能降低MDA含量,可显著下调NF-κBp65和COX-2的蛋白表达。百合知母汤6.5、13 g/kg可减轻LPS所致急性肺组织损伤,对LPS诱导小鼠急性肺损伤具有保护作用。     

姜黄素对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其与Toll样受体4/核因子-κB信号通路的相关性

目的探讨姜黄素对小鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)的保护作用及其与Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)信号通路的相关性。方法取健康C57BL/6小鼠,采用随机区组法分为假手术组(Sham组)、MIRI组及姜黄素预处理的MIRI组(Cur组):使用丝线暂时阻断小鼠冠状动脉前降支(left anterior descending,LAD)血流30 min,再灌注4 h,建立小鼠MIRI模型;假手术组接受相同的手术过程,但未阻断LAD;Cur组在缺血前30 min腹腔注射姜黄素(100 mg/kg)。采用伊文思蓝和氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色评估小鼠心肌梗死面积;电化学发光法检测小鼠血清肌钙蛋白(cardiac troponin T,cTnT)水平;RT-PCR法检测小鼠心肌组织TLR4及肿瘤坏死因子-α(tumor nectosis factor-alpha,TNF-α,)mRNA水平;Western blot法检测小鼠心肌组织NF-κB蛋白表达水平;ELISA法检测小鼠心肌组织TNF-α蛋白表达水平。结果 Cur组小鼠心肌梗死面积及血清cTnT均低于MIRI组(P均0.01);Cur组小鼠心肌组织TLR4、TNF-αm RNA水平及NF-κB、TNF-α蛋白表达水平均低于MIRI组(P均0.05)。结论姜黄素对小鼠MIRI的心肌具有保护作用,可能是通过TLR4/NF-κB信号通路实现的。     

凋亡细胞对巨噬细胞中白细胞介素-27表达的影响

目的探讨凋亡细胞对巨噬细胞中白细胞介素-27(Interleukin-27,IL-27)表达的影响。方法分别将小鼠巨噬细胞系RAW264.7(RAW细胞)和小鼠腹腔巨噬细胞分为6组:空白对照组、LPS刺激组、凋亡细胞刺激组、LPS+凋亡细胞刺激组、IFNγ+LPS刺激组及IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组。用IL-27 p28启动子荧光素酶报告基因瞬时转染RAW细胞,检测各组细胞中IL-27 p28启动子荧光素酶活性;RT-PCR法检测各组RAW细胞中IL-27 p28基因mRNA的转录水平,实时定量PCR法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-27 p28基因mRNA的转录水平;Western blot法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-27的表达水平。结果瞬时转染的RAW细胞中,IFNγ+LPS刺激组中IL-27 p28启动子荧光素酶活性明显高于空白对照组及IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组(P<0.05);RAW细胞与腹腔巨噬细胞中,LPS刺激组和IFNγ+LPS刺激组中IL-27 p28基因mRNA的转录水平明显高于空白对照组、LPS+凋亡细胞刺激组和IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组(P<0.05);LPS刺激组和IFNγ+LPS刺激组细胞中IL-27的表达水平明显高于LPS+凋亡细胞刺激组和IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组。结论巨噬细胞在摄取凋亡细胞后,IL-27 p28亚基的表达水平下降,从而导致IL-27的表达水平下降,为进一步研究其机制及临床应用奠定了理论基础。     

蛋白酶体抑制剂MG132对肿瘤恶病质的作用及其分子机制

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对肿瘤恶病质的作用及其可能的分子机制。方法经小鼠腋窝皮下注射结肠腺癌C26细胞,建立肿瘤恶病质模型,并设正常对照组(HC组)。将模型小鼠分为肿瘤恶病质组(CC组)和MG132治疗组(MG组),待小鼠进入恶病质状态后,CC组小鼠经腹腔注射0.1 ml生理盐水,MG组小鼠经腹腔注射0.1 mg/kg的MG132,7 d后处死小鼠,称量小鼠肿瘤、左侧腓肠肌和附睾脂肪的重量,测量腓肠肌纤维横切面积,ELISA法检测血清中炎性因子TNF-α和IL-6的水平,RT-PCR及Western blot法检测腓肠肌中IKBa、P65、MuRF1和MAFbx基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果与CC组相比,MG组小鼠腓肠肌和附睾脂肪组织的重量分别增加了31.6%和39.5%(P<0.05),腓肠肌纤维横切面积增加了36.1%(P<0.05);血清中TNF-α和IL-6的水平分别降低了20.9%和42.0%(P<0.05);腓肠肌组织IKBa基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别升高了132.7%和56.5%(P<0.05),MuRF1基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了70.1%和42.6%(P<0.05),MAFbx基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了76.8%和47.3%(P<0.05),P65基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了59.1%和53.1%(P<0.05)。结论 MG132改善肿瘤恶病质的分子机制可能与抑制NF-κB途径及MuRF1和MAFbx的表达、抑制炎症反应及肿瘤生长有关。     

姜黄素对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用及对细胞间黏附分子-1和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 研究姜黄素对脓毒症小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)的保护作用及对细胞间黏附分子-1(Intercel-lular adhesion molecule-1,ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法将SD小鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和姜黄素组(Cur组)。采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation andpuncture,CLP)复制脓毒症相关性ALI模型,造模24 h后,Cur组给予200 mg/(kg.d)姜黄素,Sham和Sep组给予等量生理盐水,DMSO组给予等量DMSO,均经腹腔注射给药。HE染色观察小鼠肺组织病理形态学变化;ELISA法检测小鼠血浆中ICAM-1和TNF-α含量的变化;Western blot分析小鼠肺组织中ICAM-1和TNF-α蛋白的表达。结果 Cur组小鼠在给药后12 h肺组织病理变化与Sep组相比有所减轻,48 h姜黄素作用达最强,且各种病理改变明显减轻,部分肺组织已恢复到正常形态;Cur组小鼠血浆中lCAM-1的含量在给药后6、12、24和48 h均明显低于Sep组(P<0.05),Cur组小鼠血浆中TNF-α的含量在给药后24 h明显低于Sep组(P<0.05);给药后24 h,Cur组小鼠肺组织中ICAM-1和TNF-α蛋白的表达水平与Sep组相比明显降低(P<0.05);DMSO组与Sep组各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素能够有效减轻脓毒症所致ALI,这一作用与抑制ICAM-1和TNF-α的过度表达有关。     

肺炎链球菌dnaJ基因缺陷对小鼠肺炎感染模型天然免疫应答的影响

目的探讨肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)dnaJ基因缺陷对肺炎感染模型小鼠天然免疫应答的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为空白对照组、D39感染组和△dnaJ感染组,分别经鼻腔滴注30μl无菌PBS、30μl含2×107cfu的S.pn D39和△dnaJ(dnaJ基因缺陷株)菌液,复制小鼠肺炎感染模型。于感染后6、12、24、36和48 h处死小鼠,取肺组织,匀浆后分离上清,ELISA检测促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IFNγ的表达水平,HE染色观察感染12 h的小鼠肺组织炎症反应变化;将小鼠巨噬细胞株RAW264.7体外感染S.pn D39和△dnaJ,细菌与细胞的比例为100∶1,感染1、2、3 h后分离细胞培养上清液,ELISA检测TNF-α和IL-6的表达水平。实时定量PCR和Western blot分别检测感染12 h的小鼠肺组织中模式识别受体TLRs基因mRNA的转录水平和炎症相关信号p38MAPK的磷酸化水平。结果与D39感染组相比,△dnaJ感染组小鼠肺组织炎症反应强度下降,TNF-α、IL-6和IL-1β等促炎因子水平达峰时间延迟,且峰值降低,RAW264.7细胞感染3 h分泌TNF-α和IL-6显著减少(P<0.01或P<0.05);小鼠肺组织Tlr2和Tlr13基因mRNA转录水平显著降低(P<0.05),p38MAPK的磷酸化水平也明显下降。结论肺炎链球菌dnaJ基因缺陷可下调肺炎感染模型小鼠的炎症反应、促炎因子分泌及胞内信号分子的激活,也可影响小鼠感染后肺组织中Trl2和Tlr13基因mRNA的表达,为进一步研究机体对肺炎链球菌DnaJ蛋白的天然免疫应答分子机制奠定了基础。     

黄芪多糖对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠的保护作用及肿瘤坏死因子-α、细胞间黏附分子-1、白细胞介素-6表达的影响

目的探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠的保护作用及血清和肺组织中肿瘤坏死因子-α(tumor narcosis factor-α,TNF-α)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为对照组、ALI模型组和APS干预组,每组30只,ALI模型组和APS干预组均经腹腔注射LPS 5 mg/kg;对照组经腹腔注射生理盐水5 ml/kg。造模6 h后,APS干预组经尾静脉注射APS 20 mg/kg,对照组和ALI模型组给予等量生理盐水。分别于造模后0、6、12、24和48 h每组各取5只大鼠,计算肺组织湿重/干重比值(W/D),HE染色观察肺组织病理学形态,ELISA法检测血清中细胞因子TNF-α、ICAM-1和IL-6的水平;造模后24 h,每组各取5只大鼠,Western blot法检测肺组织中TNF-α、ICAM-1和IL-6蛋白的表达水平。结果造模后12、24和48 h,对照组W/D比值明显低于ALI模型组和APS干预组(P0.01);APS干预组W/D比值在各时点均明显低于ALI模型组(P0.01)。造模后12 h,与对照组比较,ALI模型组和APS干预组大鼠肺组织均出现较重度的炎性反应,但APS干预组较ALI模型组轻;造模后48 h,ALI模型组大鼠肺组织的炎性反应达高峰,而APS干预组逐渐消退。对照组大鼠血清TNF-α、ICAM-1和IL-6均维持在较低水平;ALI模型组和APS干预组大鼠血清TNF-α、ICAM-1和IL-6水平在造模后12 h开始明显升高,而APS干预组在12 h后各时点浓度均低于ALI模型组,且同一时点与ALI模型组比较,差异均有统计学意义(P0.01)。造模后24 h,ALI模型组和APS干预组大鼠肺组织中TNF-α、ICAM-1、IL-6蛋白的表达水平均较对照组明显上升(P0.01);而APS干预组与ALI模型组相比,明显下降(P0.01)。结论 APS能有效减轻LPS所致的ALI,此作用与抑制TNF-α、ICAM-1和IL-6的过度表达,减轻炎症级联反应有关。     

低剂量蓖麻毒素吸入诱导的小鼠肺损伤及修复

目的分析雾化吸入低剂量蓖麻毒素(ricin toxin,RT)对小鼠肺组织损伤修复的影响。方法采用改良寇氏法检测小鼠雾化吸入不同剂量RT(1. 312、2. 2、3. 704、6. 2、10. 44μg/kg)的LC_(50),确定RT雾化染毒剂量。小鼠雾化吸入1/30 LC_(50)剂量RT后,分别在第0. 5、1、2、3、4、5、6、7天,分离肺组织,HE染色观察小鼠肺组织病理学变化,免疫组化方法检测肺组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果小鼠雾化吸入RT的LC_(50)为(4. 95±0. 14)μg/kg;雾化染毒后,小鼠肺组织损伤程度及MMP-2、MMP-9蛋白的表达趋势一致。第1、2天时,肺组织血管周围弥漫性水肿,MMP-2、MMP-9蛋白的表达高于空白对照组,差异有统计学意义(P 0. 05);第3、4天时,肺泡结构完全破坏,第3天MMP-2蛋白的表达达到最高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P 0. 01),第4天MMP-9蛋白的表达达到最高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P 0. 01);至第7天时,肺损伤程度基本恢复至正常状态,MMP-2、MMP-9蛋白的表达也呈下降趋势。结论雾化吸入1/30 LC_(50)剂量RT后,可引起小鼠肺组织损伤,且损伤可在7 d内修复。     

可溶性白细胞介素-5与白细胞介素-13受体联合应用对哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的影响

目的观察可溶性白细胞介素-5受体α(Soluble interleukin 5 receptorα,sIL-5Rα)与可溶性白细胞介素-13受体α2(sIL-13Rα2)联合应用对哮喘小鼠气道高反应性(Airway hyperresponsiveness,AHR)及气道炎症的影响。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、sIL-5Rα组、sIL-13Rα2组和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组,除正常对照组外,其余各组以鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏和激发,建立哮喘模型,sIL-5Rα、sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组每次激发前30 min分别经腹腔注射sIL-5Rα100μg、sIL-13Rα2 100μg和sIL-5Rα100μg+sIL-13Rα2 100μg,正常对照组及哮喘组则用生理盐水替代。末次激发24 h后,检测各组小鼠经不同浓度氯化乙酰胆碱激发后的肺阻力,对支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavagefluid,BALF)进行细胞计数,HE染色观察肺组织的病理变化,ELISA法检测BALF中IL-5和IL-13水平。结果与正常对照组相比,经氯化乙酰胆碱激发后,哮喘组肺阻力显著增加(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组肺阻力显著降低(P均<0.01),sIL-5Rα+sIL-13Rα2组降低更明显(P<0.01)。与正常对照组相比,哮喘组BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞(Eosinophil,EOS)数均显著增加(P均<0.01),肺组织损害明显;与哮喘组相比,3个治疗组BALF中白细胞总数和EOS数均显著降低(P均<0.01);与sIL-5Rα和sIL-13Rα2组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组BALF中白细胞总数和EOS数进一步降低(P均<0.01);3个治疗组炎症细胞浸润明显减轻,炎症反应轻微,其中sIL-5Rα+sIL-13Rα2组病理变化进一步减轻。与正常对照组比较,哮喘组小鼠BALF中IL-5和IL-13水平显著升高(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组小鼠IL-5和IL-13水平均显著降低(P<0.01)。结论 sIL-5Rα与sIL-13Rα2联合应用可明显降低哮喘小鼠AHR,减轻气道炎症。     

LPS诱导小鼠骨质疏松症模型及其细胞分子机制研究进展

炎症介导的免疫系统功能失常在原发性骨质疏松症的发生过程中具有重要作用。从构建方法、细胞机制、分子机制等三方面对近年来国内外脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠骨质疏松症模型的研究进展进行了综述。LPS不仅对破骨细胞增殖分化具有明显的促进作用,还会对成骨细胞骨架蛋白F-actin造成损伤;LPS通过激活RANKL/RANK/OPG信号通路、TLR4/NF-κB信号通路、Connexin43蛋白和TNF-α因子来诱导破骨细胞增殖分化,从而促进骨吸收;研究LPS诱导的炎症性骨质疏松症的发病机制对发掘骨质疏松症抗炎药物具有重要作用。     

BC02复合佐剂成分协同增强巨噬细胞固有免疫应答的分析

目的初步分析BC02(BCG Cp G DNA combination adjuvants system 02)复合佐剂构成成分在巨噬细胞激活过程中的协同加强作用。方法采用夹心ELISA和RT-PCR法分别检测BC02复合佐剂及其构成成分[Al(OH)3佐剂及BC01(BCG Cp G DNA compound adjuvants system 01)佐剂]对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌的TNF-α及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)细胞因子水平和m RNA转录水平的影响。信号通路蛋白磷酸化芯片检测经BC01和BC02刺激45 min后,RAW264.7细胞中核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的变化情况。结果 BC02对巨噬细胞的刺激存在剂量和时间依赖性,最佳浓度和培养时间分别为1/10人用剂量[(7.5μg/m L BC01+20μg/m L Al(OH)3]和24 h。Al(OH)3无机盐佐剂能协同增强BC01生物佐剂对RAW264.7细胞的刺激活性,同时,TLR-9抑制剂ODN 2088与NLRP3抑制剂MCC 950单独或联合处理RAW264.7细胞,均能显著降低BC02刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1细胞因子的能力。信号通路蛋白磷酸化芯片结果表明,BC02复合佐剂显著上调NF-κB信号通路中NF-κB-p105/p50、NF-κB-p65及NF-κB-p100/p52等关键蛋白分子的磷酸化水平;同时,也能显著上调MAPK信号通路中p38 MAPK、c-Jun、SPAK/JNK及EIK-1等关键蛋白分子的磷酸化水平。结论 BC02复合佐剂中BC01生物佐剂与Al(OH)3无机盐佐剂成分在激活小鼠巨噬细胞参与固有免疫应答中具有协同加强作用。     

橙皮苷对小鼠急性肝衰竭的保护作用及其机制

目的观察橙皮苷对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)联合D-氨基半乳糖(D-Galactosamine,D-GalN)所致小鼠急性肝衰竭(Acute hepatic failure,AHF)的保护作用及其机制。方法小鼠腹腔注射LPS(50μg/kg)和D-GalN(800 mg/kg),复制急性肝衰竭模型,分别用橙皮苷(200 mg/kg)或橙皮苷(200 mg/kg)联合锌原卟啉IX(Zinc protoporphyrin IX,ZnPP)(45 mg/kg)干预。造模后6 h检测肝损伤程度和炎症反应强度,48 h统计小鼠死亡率。结果橙皮苷使AHF小鼠血清转氨酶(ALT和AST)水平下降,肝损伤减轻,生存率提高;血清白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)水平和肝内血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)的表达较AHF小鼠明显增加,肝内HO-1酶活性明显增高;同时,使血清肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平、肝组织中Caspase-3蛋白酶和髓过氧物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性较AHF小鼠明显降低。ZnPP不影响橙皮苷促进肝内HO-1酶表达,但通过抑制HO-1酶活性,使橙皮苷抗炎和肝损伤保护作用显著降低。结论橙皮苷主要通过诱导HO-1蛋白表达,使HO-1酶活性增强,从而使炎症反应和肝损伤减轻,对LPS联合D-GalN诱导的AHF产生保护作用。     

siRNA介导NF-κB p65沉默联合5-Fu诱导胃癌细胞SGC7901凋亡

目的运用siRNA抑制胃癌细胞株SGC7901中NF-κB p65基因的表达,探讨其对细胞增殖和凋亡的影响,并分析该基因对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性的作用。方法将SGC7901细胞分为空白对照组、脂质体组、5-Fu组、siRNA组和联合组,除空白对照组外,各组分别给予相应的药物。Western blot法检测各组细胞NF-κBp65蛋白的表达;Annexin V-PI法检测细胞凋亡;MTT法检测各组细胞的增殖水平。结果NF-κBp65蛋白在空白对照组和脂质体组中高表达,在5-Fu组、siRNA组和联合组中低表达,其中以联合组表达量最低;各组细胞早期凋亡率分别为1.40%±0.20%、2.36%±0.58%、6.68%±0.34%、6.60%±0.64%和21.62%±1.12%,其中以联合组最高;细胞的增殖活性随着siRNA浓度的增加和作用时间的延长而下降。结论siRNA能有效抑制NF-κBp65基因的表达,从而抑制SGC7901细胞增殖,促进其凋亡,并增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

阿奇霉素对人单核白血病细胞THP-1髓系细胞触发受体-1的调节作用

目的 探讨阿奇霉素在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激下对人单核白血病细胞THP-1髓系细胞触发受体-1(Triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)的调节作用及TREM-1调控对炎症反应的意义。方法将THP-1细胞分为LPS组(加入1μg/ml LPS)、LPS+TREM-1/FC融合蛋白组(加入1μg/ml LPS和1μg/ml TREM-1/FC融合蛋白)和LPS+阿奇霉素组(加入1μg/ml LPS和10μg/ml阿奇霉素)。分别于培养4、8、12、24、48 h后,采用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中TREM-1基因mRNA及蛋白的表达,ELISA法检测各组细胞上清液中可溶性TREM-1(Soluble TREM-1,sTREM-1)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的水平。结果 TREM-1/FC融合蛋白和阿奇霉素可抑制在LPS刺激下THP-1细胞TREM-1蛋白的表达,但对其基因表达无抑制作用;二者还可明显抑制炎性细胞因子的分泌,与LPS组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),且TREM-1/FC融合蛋白的抑制作用强于阿奇霉素。结论 TREM-1是调控炎症反应及感染性疾病的重要靶点;阿奇霉素对TREM-1具有调节作用,为其进一步的临床研究提供了实验依据。     

脂多糖刺激对小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1表达的影响

目的观察脂多糖(LPS)刺激对小鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响。方法取正常Swiss小鼠腹腔巨噬细胞,以LPS分别刺激4、8、12、18、24和36h后,RT-PCR法检测小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1基因mRNA的转录水平,Western blot法检测HMGB1蛋白的表达水平,观察LPS刺激与HMGB1释放的时效关系。结果LPS刺激后4～18h,细胞内HMGB1基因mRNA的转录水平无明显变化,24h开始明显增强,刺激24h和36h与对照组相比,差异有统计学意义,HMGB1蛋白在LPS刺激后18h开始表达明显增加,并一直持续至36h。结论LPS可促进小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1的表达,并具有时间依赖性。     

低剂量电离辐射对糖尿病小鼠血清中炎症因子表达的影响

目的探讨低剂量电离辐射(LDR)对链尿佐菌素(STZ)诱导的Ⅰ型糖尿病(DM)小鼠血清中炎症因子表达的影响。方法取健康C57BL/6J小鼠,经腹腔注射STZ复制小鼠糖尿病模型,并设空白对照组。将糖尿病模型小鼠分为DM和DM/LDR组,空白对照组分为LDR组及对照组。DM/LDR组和LDR组给予25mGyLDR,隔日照射1次,共照射4周;DM组和对照组不经LDR照射。分别于照射后2、4、8、12及16周,采用ELISA法检测小鼠血清中不同炎症因子的表达水平。结果LDR照射前,4组小鼠血清中ICAM-1和IL-18的表达水平较为接近,而糖尿病小鼠血清中TNFα和MCP-1的表达水平显著高于非糖尿病小鼠;给予LDR照射后,在不同时间点DM/LDR组小鼠血清中IL-18、MCP-1及TNFα的表达水平与DM组相比,均显著降低,LDR组小鼠血清中IL-18、MCP-1及TNFα的表达水平较对照组明显增加。ICAM-1表达的变化与其他因子不同,LDR照射4周时,糖尿病小鼠显著高于非糖尿病小鼠,但在任何时间点,DM/LDR与DM组、LDR与对照组之间差异均无统计学意义。结论在糖尿病状态下,LDR能有效降低血清中IL-18、TNFα和MCP-1的表达水平,缓解糖尿病肾脏中的炎症反应强度;但在正常机体中表现为提高免疫力,促进免疫相关因子的释放。表明LDR针对机体所处的不同状态发挥着不同的生物调节功能。     

玉米须缓解脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的:探讨玉米须缓解脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用。方法:将60只小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(0. 005g/kg. d)、玉米须低、中、高剂量组(2. 5、5、10 g/kg. d),每组10只。灌胃给药,每天1次,连续给药10 d,末次给药2 h后除正常组小鼠气管滴注等量生理盐水外,其他各组小鼠气管滴注脂多糖(10 mg/kg),12 h后眼球采血,处死小鼠,取新鲜肺组织,ELISA检测血清中TNF-α和IL-1β水平以及肺组织中MPO活性,计算肺组织湿/干重比值,HE检查肺组织的病理变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺组织湿/干比值、血清中TNF-α和IL-1β水平、肺组织中MPO活性均显著性升高(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,地塞米松组、玉米须中剂量和高剂量组小鼠肺组织湿/干比值、血清中TNF-α和IL-1β水平、肺组织中MPO活性均显著性降低(P 0. 05,P 0. 01),并改善了肺组织损伤。结论:玉米须能够对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制体内炎性介质释放有关。     

肝X受体激动剂对大鼠肝移植缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察肝X受体(liver X receptor,LXR)激动剂GW3965预处理对大鼠肝移植缺血再灌注损伤(ischemiareperfution injury,IRI)的影响及其对肝功能的保护作用。方法将雄性SD大鼠随机分为2组,GW3965预处理组于供体大鼠尾静脉注射LXR激动剂GW3965,0.3 mg/kg;对照组于相同部位注射相同剂量的生理盐水。参照改进的Kamada两袖套法建立大鼠原位肝移植模型,分别于肝移植术后3、6、24 h,采用全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量,ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,Western blot法测定移植肝脏组织中白细胞介素-1受体相关激酶-4(interleukin-1 receptor-associated kinase-4,IRAK-4)、干扰素调节因子3(interferon-regulator 3,IRF3)蛋白的表达,凝胶迁移试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)测定核因子-kappa B(nuclear factor-κB,NF-κB)的相对活性度,并观察肝脏组织的病理学变化。结果与对照组比较,GW3965预处理组血清中ALT、TNF-α含量在各时间点均明显降低(P<0.05),肝脏组织中IRAK-4、IRF3蛋白的表达以及NF-κB相对活性度也明显降低(P<0.05);GW3965预处理组各时间点肝组织的损伤均较对照组明显减轻。结论 LXR激动剂GW3965可抑制TLR4信号通路中的IRAK-4、IRF3蛋白的表达水平和NF-κB的活化,从而减轻肝移植IRI,在肝脏移植IRI中起到保护作用。