基因芯片技术的应用

基因芯片是20世纪90年代发展起来的一项前沿生物技术,基因芯片又称DNA微阵列,是指按照预定位置固定在固相载体上很小面积内的千万个核酸分子所组成的微阵列.基因芯片技术是将待测样品DNA/RNA通过PCR/RT-PCR扩增,体外转录等技术渗入探针分子后,与位于芯片上的探针分子杂交,再通过扫描系统检测探针分子杂交信号强度,并且以计算机对探针信号进行综合分析后,即可获得样品大量基因序列既表达信息.其基本原理是基于核酸的碱基配对.     

核酸扩增荧光检测乙型肝炎病毒HBV多聚酶YMDD基因变异的结果分析

近几年应用拉米夫定针对HBV进行抗病毒治疗,其作用对HBV抑制效果显著.但在治疗过程中随服药时间的延长,易出现HBV基因组P区中高度保守的YMDD功能区发生变异,而产生对拉米夫定的耐药作用.本文以Roche Light Cycler Tm杂交双探针技术为基础的核酸扩增(PCR)荧光方法来检测乙型肝炎病毒HBV多聚酶YMDD基因变异.     

PCR-荧光探针法检测HBsAg低反应性HBV基因型的初步评估

目的 分析血清HBs Ag呈低反应性时PCR-荧光探针法检测HBV基因型的能力,比较和评价PCR-荧光探针法和测序法2种HBV基因型分型法。方法 采用PCR-荧光探针法对血清HBs Ag定量1 000 COI以及HBV DNA定量≥103IU/ml的51份患者标本进行HBV基因型检测;选取9份特征性标本,分别采用PCR-荧光探针法和测序法进行HBV基因型分型检测并进行HBV S区/前S区143S、118T、120P、145G位点以及Pre-S1缺失突变位点、Pre-S2ATG突变位点检测。结果 51份HBs Ag低反应性标本,成功分型出B型13份、C型38份。9份特征性标本PCR-荧光探针法成功分型5份,测序法分型8份。其中4份标本2种分型法结果一致,1份PCR法检出C型而测序法B型。未发现HBV S区/前S区变异。结论 PCR-荧光探针法检测HBV基因型基本可以满足临床需求,但当血清中HBs Ag呈极低反应性时,即使HBV DNA定量达到分型要求,也容易出现分型失败的情况,考虑联合测序法对低反应性标本进行HBV基因型检测。     

HBsAg与抗-HBs同时阳性者体内S基因序列分析

目的 报告乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）／表面抗体（抗－HBs )同时阳性患血清中S区编码碱基序列及基氨基酸序列的为异特点。方法 以adr亚型的HBV基因序列为依据，设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自2例HBsAg/抗－HBs均阳性的患体内扩增的HBV全S基因片段，克隆入pGEMTasy质粒，DNA测序确定病毒的变异特点。结果 测序结果发现双阳患与HBsAg阳性患血清中的HBV全S基因比较，核苷酸序列有4个核苷酸位点（0．3％）的替换突变，表面抗原氨基酸序列无特异性替换突变，但HBV多聚酶的间隔区氨基酸序列有3个位点的特异性替换突变。结论 HBV长期携带体内有HBV准种共存：HBsAg与抗－HBs同时阳性的原因不能归因于病毒的变异，应归结于患免疫系统的个体化反应。     

多聚酶链反应技术及其临床应用

多聚酶链反应技术及其临床应用江西省九江市传染病医院（江西３３２０００）魏孟贵，陈春晖１多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术原理分子探针技术相当敏感，可以测到Ｐｇ水平；但是，最近发展起来的ＰＣＲ更为敏感，可以使ＤＮＡ检测的灵敏度达到Ｆｇ水平。ＰＣＲ扩增ＤＮＡ的过...     

不同基因型慢性乙型肝炎病人对拉米呋定应答反应的初步观察

[目的 ]　观察拉米呋定治疗B、C基因型慢性乙型肝炎病人的临床疗效。 [方法 ] 3 5例B型慢性乙型肝炎病人及 18例C型慢性乙型肝炎病人同时给予拉米呋定 10 0mg ,每天 1次 ,疗程 1年 ,观察血清病毒学指标、肝功能变化及药物不良反应。　 [结果 ]　B型慢性乙型肝炎病人治疗后HBV -DNA阴转率、ALT复常率均显著高于C型慢性乙型肝炎病人 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。　 [结论 ]　拉米呋定对B基因型的慢性乙型肝炎病人的临床疗效高于C基因型慢性乙型肝炎病人。拉米呋定用于治疗有病毒复制的慢性乙型肝炎病人安全有效     

应用MGB探针检测人乙型肝炎病毒的基因型

目的检测血浆或血清样本中人乙型肝炎病毒HBV的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HBV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的产物纯化后进行基因克隆,克隆成功后提取的质粒制备为阳性质控品,从而建立完整的MGB探针法的荧光定量PCR检测体系,最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HBV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达50 IU/mL;重复性好;特异性良好,以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HBV荧光定量PCR的基因分型检测方法,可以很好地定性的检测血浆或血清样本及血液制品中的人乙型肝炎病毒HBV的基因型及含量,对于该疾病的临床治疗具有重要的意义。     

膜芯片技术诊断乙型和丙型肝炎病毒与基因分型

[目的]利用膜芯片技术建立乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)联合诊断和基因分型新方法。[方法]根据HBV的前C区、X区及HCV的5'端非编码区(5'UTR)基因序列分别设计引物与分型探针。用生物素标记的引物进行HBV-DNA和HCV-cDNA扩增,将活性氨基标记的分型探针依次固定在尼龙膜上,制成HBV和HCV联合诊断和基因分型膜芯片条。扩增产物与膜芯片条杂交后,经过氧化物酶与底物显色,判断有无HBV和HCV感染并同时进行基因分型。通过经荧光定量PCR和基因测序确定的HBV和HCV单项阳性血清各30份以及HBV和HCV混合血清5份验证该方法的有效性。[结果]膜芯片对HBV和HCV单独感染和混合感染的诊断与荧光定量PCR结果相同,基因分型结果与测序分型结果一致。[结论]利用膜芯片技术可实现HBV和HCV联合诊断和基因分型,并具有准确有效和简便经济等特点,适合用于临床诊断和流行病学调查。     

结核分枝杆菌Emb330codon分子信标杂交及荧光显微观测

目的 设计结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB330codon位点分子信标,运用荧光显微镜观测分子DNA探针与embB330codon扩增产物杂交后的荧光信号,比较该位点突变株与标准株.方法 运用软件Beacon designer设计embB基因包含330codon的分子信标,应用荧光显微镜检测embB330codon扩增片段与探针杂交后荧光信号,比较扩增产物测序结果.结果 通过荧光显微镜观测到结核标准株及embB330codon突变株PCR产物与探针杂交后荧光信号差异有统计学意义;33株耐乙胺丁醇组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐乙胺丁醇组embB330codon突变检出率为3%,测序法突变检出率为3%.结论 分子信标技术可以有效检测embB330codon单碱基靶点突变,应用荧光显微镜观测荧光杂交信号非常灵敏.     

细胞中活性氧的荧光探针检测法研究进展

荧光探针法是一种灵敏的、可提供细胞内靶分子时空信息的活性氧(ROS)检测法。目前常用的荧光探针有HE(检测O2.-)、DCFH和DHR(检测H2O2)等。ROS的检测结果易受以下因素影响:基于氧化还原反应的荧光探针选择性差,且反应需要催化剂(过氧化物酶、细胞色素C);细胞内pH值、抗氧化剂影响检测结果;荧光探针在光照条件下可发生自氧化。近期研究主要集中在如何改进荧光探针的上述局限性。本文对荧光探针法检测细胞内ROS的研究进展进行简要介绍。     

对医院护理管理队伍建设的几点思考

文章分析了当前医院护理管理队伍存在的主要问题：知识结构不合理；专业思想不纯正；接受继续教育不足：工作效能低下。提出了建设高素质护理管理人才队伍的思路：严格标准，搞好选才；加强思想教育和引导；加大培养力度；建立科学考评和激励机制；完善人才合理流动措施；合理编制，突出效率。     

医学科技成果信息资源网络开放利用的原则探析

医学科技成果信息资源网络开放利用，为资源的开放共享创造了良好条件，它使医学科技信息得到了高效传播和最大利用。网络开放利用医学科技成果信息资源，利用的主体和核心是其信息内容。信息内容是网络用户从中提取知识和所需资料的主要来源，同时也是信息破坏者发动攻击的主要目标之一，因而，信息内容的安全是信息安全的基本问题，主要包括信息内容的规范性、完整性与真实性、知识产权保护与利用的合理性等。要做好这些工作，应该遵循相应的原则和要求。     

Correlates of stages of change of smoking among inhabitants of deprived neighbourhoods

BACKGROUND: This study examines the prevalence and correlates of stages of change of smoking, in terms of psychosocial, structural and sociodemographic factors, among inhabitants of deprived neighbourhoods. METHODS: Cross-sectional data were obtained from a survey on health related behaviour. Subjects were 2009 current and former smokers, aged 20-46, living in deprived neighbourhoods in Rotterdam, the second largest city in the Netherlands. Three groups of smokers were formed according to the stages of change-definitions of the Transtheoretical Model: smokers not planning to quit (precontemplators), smokers planning to quit (contemplators/preparators) and former smokers (actors/maintainers). Smokers planning to quit and smokers not planning to quit were compared regarding psychosocial factors (attitude, social norm, self-efficacy), structural factors (neighbourhood problems, material deprivation, financial problems, employment status) and sociodemographic factors (age, gender, marital status, cultural background, educational level). Former smokers were compared with smokers planning to quit regarding structural and sociodemographic factors. Logistic regression was used to assess correlates of stages of change. RESULTS: Smokers planning to quit (prevalence = 19%) reported a more positive attitude, stronger social norms and higher self-efficacy expectations in quitting smoking than smokers not planning to quit (prevalence = 57%). Smokers planning to quit less often were Dutch-born, more often had attended higher vocational schooling or university and more often reported experiencing two or more neighbourhood problems compared to smokers not planning to quit. Former smokers (prevalence = 24%) were older, more often Dutch-born, married, employed and higher educated, compared to smokers planning to quit. Furthermore, former smokers less often reported material deprivation and financial problems than smokers planning to quit. CONCLUSION: Among people living in deprived neighbourhoods, different factors correlate with different stages of change of smoking. Implications for health promotion are discussed.     

转基因食品产业化的风险防范及制度构建

风险防范机制的缺失是阻碍转基因食品产业发展的因素之一。基于转基因食品产业对人类健康、物种进化和生态环境的负面影响，及时有效地构建风险防范机制十分必要。我国既有的转基因食品产业风险防范机制存在诸多缺陷：未形成转基因食品全程跟踪制度及安全事故应急处理制度，在安全性评价制度及法律责任体系等方面也有待进一步完善。     

中医药干预治疗不同程度产后抑郁临床研究

目的 观察中药干预不同程度产后抑郁症患者的临床疗效.方法 选择90例产后抑郁症患者,随机平均分为干预组和对照组,每组中又平均各自分为轻度、中度、重度3组.干预组在基础治疗上加中药干预治疗,对照组只进行基础治疗.结果 两组轻度产后抑郁症患者均100％痊愈;中度产后抑郁症患者,痊愈率和有效率差异无统计学意义(P＞0.05);重度产后抑郁症患者中,干预组的痊愈率和有效率均显著高于对照组(P＜0.05).结论 中药干预重度产后抑郁症患者具有一定的疗效.