槟榔多酚对大鼠肺微血管内皮细胞低氧损伤的保护作用

目的：探究槟榔多酚对大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）低氧损伤的保护作用。 方法：采用氧化应激指标丙二醛和超氧化物歧化酶筛选肺部缺氧损伤细胞模型最适条件;采用细胞计数试剂盒法筛选槟榔多酚最适给药剂量。将PMVEC分为常氧对照组、模型对照组和槟榔多酚组,采用BCA法检测蛋白浓度并测定PMVEC中的氧化应激水平,蛋白质印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白的表达,免疫荧光染色法检测闭合蛋白和闭锁小带1等紧密连接蛋白的表达,Transwell小室实验检测跨内皮细胞膜电阻,罗丹明荧光染料检测PMVEC屏障的通透性。 结果：1%氧浓度培养PMVEC细胞 48?h后成功构建肺部缺氧损伤细胞模型 ;20?μg/mL的槟榔多酚可以显著逆转缺氧损伤细胞模型中PMVEC的存活率下降以及氧化应激水平的升高（均 P<0.05）;槟榔多酚对于低氧诱导下PMVEC中炎症相关蛋白核因子κB（NF-κB）和核因子E2相关因子（Nrf）2的上调有显著抑制作用（均P<0.05）;槟榔多酚可以下调低氧诱导下PMVEC中凋亡相关蛋白胱天蛋白酶（caspase）3、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达（均P<0.05）,从而减轻低氧诱导下细胞的凋亡;槟榔多酚显著上调低氧诱导下PMVEC闭合蛋白和闭锁小带1的表达（均P<0.05）,提高跨膜电阻值并降低罗丹明透过量,改善肺微血管内皮屏障的通透性。结论：槟榔多酚可以通过减轻PMVEC的氧化应激损伤、降低炎症相关蛋白表达、减少细胞凋亡及提高细胞屏障的通透性,改善PMVEC的低氧损伤。     

新型氦氧潜水减压表安全性实验验证

目的 以猪模型验证新型氦氧潜水减压表的安全性,初步探索用动物实验结果评估潜水减压方案安全性的方法。方法 模拟潜水在专门建造的大动物加压舱内进行,按系统分层抽样法对常规作业深度每隔6 m、训练深度和例外暴露深度每隔9 m从新型氦氧潜水减压表中选取潜水方案进行验证,每个方案验证4～6次,观察模拟潜水期间动物的表现及减压后减压病症状、流经心脏的气泡,通过检测血液相关指标评估内皮损伤、炎症反应和氧化应激水平。结果 全部14个验证方案无氧中毒和减压病症状,出舱后未见循环气泡。比较模拟潜水前和减压后即刻、6 h、24 h的炎症反应指标（IL-1β、TNF-α）、内皮损伤指标［细胞间黏附分子 1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子 1（VCAM-1）］和氧化应激指标（H2O2）,结果显示差异均无统计学意义（P均＞0.05）。结论 就猪潜水模型而言,新型氦氧潜水减压表具有优良的安全性,初步建立的实验评估潜水减压方案安全性方法需要更多的数据验证。     

藻酸双酯钠对脂多糖所致小鼠肺微血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的：研究藻酸双酯钠（PSS）对脂多糖（LPS）所致的小鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）损伤的保护作用。方法体外培养PMVEC ,随机将细胞分为空白对照组（C组）、LPS刺激组（L组）、PSS+ LPS组（LP组）。采用MTT 法检测 PSS对LPS刺激PMVEC的细胞活力的影响,虎红染色法测定中性粒细胞（PMN）对PMVEC黏附数量的影响,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测3组培养上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的浓度。结果 PSS能抑制LPS所致的 PM-VEC细胞活力下降（P＝0.001）;与C组比较,L组的PMVEC与PMN的黏附数量明显增加（P＝0.000）,TNF-α和ICAM-1的表达显著增加（P＝0.000）;与L组比较,PSS预处理1 h能显著降低 LPS所致的 PMVEC与 PMN的黏附（P＝0.000）,LP组的TNF-α和ICAM-1表达显著降低（P＜0.05）。结论 PSS能抑制LPS对PMVEC的损伤及PMVEC与PMN的黏附,其作用机制可能与降低ICAM-1和TNF-α的表达有关。     

LPS直接诱导的肺微血管内皮细胞与PMN的粘附作用及核因子κB调控机理的实验研究

目的：研究细菌脂多糖（LPS）诱导的肺微血管内皮细胞（PMVEC）与多形核中性粒细胞（PMN）的粘附作用及调控机制。方法：100ng/ml LPS刺激PMVEC0h,2h,4h,6h,8h或10ng/ml,50ng/ml,100ng/ml LPS刺激6h，检测PMVEC－PMN粘附率，PMVEC细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的表达，凝胶电泳迁移率变化分析（EMSA）方法检测核因子kB（NF－kB）的活化，并通过加入Anti-ICAM-1抗体或活化阻断剂观察对PMVEC－PMN粘附率的影响。结果：PMVEC ICAM－1的表达及与PMN的粘附与LPS的刺激呈时相－剂量依赖方式，LPS的刺激迅速活化NF－kB，60min达到高峰，后逐渐下降，Anti-ICAM-1抗体、PDTC能显著降低PMVEC－PMN粘附（P＜0．001）；结论：LPS刺激诱导NF－kB的活化，启动ICAM－1的合成表达，从而导致PMVEC－PMN的粘附增加。     

兔减压病模型及其评估体系的建立

目的 建立潜水减压病新西兰白兔模型及其评估体系。方法 选取25只新西兰白兔建立潜水减压病模型,采用DWC150型动物实验加压舱模拟潜水,压缩空气加压至500 kPa暴露60 min后,以200 kPa/min匀速减至常压。选取6只正常新西兰白兔置于加压舱内给予常压通气,作为正常对照组。减压出舱后,采用超声检查观察流经右心室的气泡量,对气泡量、后肢功能状态、呼吸功能、肺和脊髓组织病理检查结果进行评分,并检测血常规和凝血功能。结果 采用本减压方案,新西兰白兔减压病的发病率为76%（19/25）,死亡率为28%（7/25）。造模后,超声检查发现动物静脉系统内存在大量气泡,且气泡量评分高于正常对照组（Z=-3.702,P=0.002）;新西兰白兔减压病模型的后肢运动功能和呼吸功能发生改变,其Tarlov评分、呼吸功能评分均差于正常对照组（Z=-2.172、-3.702,P均<0.05）;肺湿干质量比较正常对照组增加（t=4.52,P<0.01）。H-E染色结果示,减压后24 h新西兰白兔肺组织可见肺泡腔出血、肺泡间隔增厚,脊髓组织可见空泡样改变。与高气压暴露前比较,减压出舱后6 h、12 h减压病新西兰白兔的白细胞计数均增加（t=3.933、2.838,P=0.003、0.019）,减压后1 h红细胞计数、红细胞比容均减少（t=-2.606、-2.481,P=0.031、0.038）;血小板计数呈先降后升的趋势（F=3.024,P=0.039）,减压后12 h时与高气压暴露前比较差异有统计学意义（t=2.545,P=0.031）。结论 成功建立了新西兰白兔减压病模型,以及包括行为学、肺和脊髓组织病理学、炎性指标和凝血功能指标在内的减压病模型评估体系。     

模拟失重对肺微血管内皮细胞F-actin的影响

目的：观察回转模拟失重对肺微血管内皮细胞纤维肌动蛋白（F-actin）的影响,探讨其在失重环境下的损伤机制。方法：组织块贴壁法原代培养肺微血管内皮细胞,采用回转器模拟失重效应。PMVEC回转培养24h、48h和72h,同时设1g同步对照静置培养。采用免疫荧光技术标记PMVEC内的F-actin,以激光共聚焦显微镜观察采集荧光图像。结果：与同步对照相比,不同时间回转的PMVEC微丝骨架均发生明显破坏,且这种破坏随着回转模拟失重时间的延长而加重。结论：模拟失重可破坏PMVEC内F-actin,导致PMVEC损伤。     

采用Changliver细胞制备肝细胞脂肪变性模型的方法探索

目的：探索油酸（OA）诱导建立人正常肝细胞Changliver脂肪变性的离体细胞模型的实验条件。方法选用不同浓度油酸作用不同时间点诱导Changliver细胞,并用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测细胞活性,油红O染色观察细胞内脂滴数量、甘油‐3‐磷酸氧化酶法检测细胞内三酰甘油（TG）含量。结果采用0．2mmol/LOA诱导24h能建立较好的Changliver细胞脂肪变性模型,模型组细胞内TG水平为（379．98±23．19）mg/g,空白组细胞内TG水平为（185．03±12．68）mg/g,两组比较差异有统计意义（P＜0．01）。结论0．2mmol/LOA油酸诱导的Changliver细胞24h可建立比较稳定的脂肪变性模型。该模型为非酒精性脂肪性肝病的研究提供可靠的新途径。     

MN9D多巴胺能细胞损伤模型的建立

目的建立离体多巴胺（dopamin,DA）能神经细胞系MN9D细胞损伤模型。方法离体细胞培养条件下,于培养液中加入不同浓度6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）作用于MN9D细胞30 min。24 h后,MTT比色法检测MN9D细胞的存活率、Hoechst 33258核染色和流式细胞仪检测MN9D细胞的凋亡变化。结果6-OHDA以浓度依赖性的方式引起MN9D细胞的凋亡,导致细胞存活率降低。200μmol/L浓度的6-OH-DA作用30 min、培养24 h后,MN9D细胞的存活率降低至68.8%左右,凋亡率增高至约37.8%。结论6-OH-DA能够引起MN9D细胞的存活率降低,而凋亡率增高,产生类似帕金森病时的DA能神经细胞损伤的表现。     

谷氨酰胺对细胞缺糖损伤的保护作用

目的观察谷氨酰胺（glutamine，Gln）对细胞缺糖（glucose desprivation，GD）损伤的保护作用．并探讨可能的作用机制。方法在以无糖培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PCI2）细胞建立细胞缺糖损伤模型的基础上，首先以噻唑蓝比色（MTT）法、流式细胞法、细胞线粒体跨膜电位检测等方法观察Gln对缺糖损伤细胞模型的作用；再以大鼠大脑中动脉线栓法建立动物脑缺血模型．观察Gln对动物缺血性损伤的保护作用；同时用免疫细胞化学法、Western blot印迹法检测细胞中应激基因葡萄糖调节蛋白75（grp75）的表达变化。结果Gln能使离体细胞在缺糖应激下存活率增加、凋亡率降低，线粒体跨膜电位稳定；动物实验显示Gln能减轻动物因缺血造成的脑损伤；免疫细胞化学法、Western blot印迹法检测结果表明Gln可以上调细胞中grp75的表达。结论Gln对细胞缺糖损伤和动物缺血性脑损伤具有一定的保护作用，这种保护作用可能与上调细胞中的应激基因grp75的表达有关。     

大鼠脊髓减压病模型的探索研究

目的：探讨建立大鼠脊髓减压病模型的加减压方案。方法：SD大鼠随机分为正常对照组、安全减压组和快速减压组,快速减压组分别采用3种加减压方案建立大鼠减压病模型,取脊髓胸腰段,HE染色后观察病理变化。结果：采用方案Ⅱ（经308空气加压至1MPa,高压下停留5．5min,50s减至常压出舱）制备的大鼠减压病模型,大体解剖可见所有大鼠脊髓有较多淤血和出血点,病理切片显示广泛的脊髓损伤。结论：方案Ⅱ制备的减压病模型大鼠死亡率低而且普遍发生脊髓损伤,可以作为建立脊髓减压病模型的加减压方案之一。     

大鼠椎管减压与细胞凋亡的相关性研究

目的:观察在大鼠脊髓压迫性损伤后椎管减压与神经细胞凋亡的关系.方法:健康成年SD大鼠36只,随机分为两组:(1)椎管减压组30只,每组10只,采用自制压迫装置于L_1水平制做椎管减压模型;(2)假手术组6只,只做全椎板切除不做脊髓压迫.用HE、Nissl、TUNEL、免疫组化和Western blot等方法,分别于脊髓压迫6、12 h和24 h后去除压迫装置,观察减压段脊髓组织病理变化、细胞凋亡与caspase-3的表达变化情况.结果:TUNEL(+)细胞数于6 h减压时开始增高(9.62±3.54),24 h减压时达峰值(26.09±4.11),与假手术组(3.38±1.04)相比具有显著性差异(P<0.05);各减压组间比较有显著性差异(P<0.05).caspase-3免疫反应与TUNEL(+)细胞数量表达变化相符.结论:大鼠脊髓损伤后,神经细胞凋亡的改变与脊髓受压时间长度相关;早期进行椎管减压可减少继发性神经细胞凋亡,加快神经功能恢复.     

脊髓型减压病大鼠血清血管内皮生长因子含量的变化

[目的]通过制作脊髓型减压病大鼠模型,观察成年大鼠脊髓受损后不同时期血管内皮生长因子（VEGF）含量的变化。[方法]健康雄性SD大鼠24只,鼠龄120～250 d ,体质量200～250 g ,24 h昼夜循环光照,自由饮水、取食,室温（24±2）℃。所有动物术前均经 Y 型电迷宫测试,然后随机分为三组,每组各8只。第一组：正常对照组;第二组：安全减压组;第三组：减压病组。各组分别于出舱后1d、1周、2周、4周和8周进行血清VEGF含量检测。[结果]正常对照组,安全减压组显示出舱后1 d血清VEGF含量较少,减压病组血清VEGF含量较多,与正常对照组,安全减压组相比差异有显著性（ P ＜0．05）,减压病组血清V EG F含量1周后下调,1周、2周减压病组与正常对照组,安全减压组相比差异亦有显著性（ P ＜0．05）,4周、8周时各组比较差异均无显著性（ P ＞0．05）。[结论]脊髓型减压病脊髓损伤可上调血清VEGF含量,从而对脊髓损伤起到指导治疗作用。     

超声气泡检测在潜水减压研究中的应用

即使没有违背减压方案,潜水减压结束后潜水员体内也会产生气泡,发生静脉气体栓塞.由于气泡数量少或这些气泡尚未造成明显的减压病症状和体征,大部分情况下潜水员并未感觉存在静脉气体栓塞.然而,减压后体内气泡的数量、部位、持续时间等与潜水后减压病的发生风险有关,越来越多的研究通过检测潜水减压后体内气泡的相关参数来评估减压应激程度和减压病的发生风险.本文就超声气泡检测方法在潜水减压研究中的应用进行综述.     

Ⅱ型减压病家兔脊髓神经超微结构的变化研究

目的电镜观察Ⅱ型减压病家兔脊髓神经轴突的超微结构改变,探讨减压病所致脊髓损伤的机制。方法将15只新西兰大耳白家兔按数字表法随机分为3组：减压病组、安全减压组和正常对照组,每组5只。减压病组行快速减压制作减压病动物模型,安全减压组采用安全减压,正常对照组行常压空气暴露,各组动物出舱后30 min内处死,取脊髓组织进行超微结构观察。结果减压病组神经细胞水肿,细胞内线粒体轻度肿胀,游离核糖体聚集;轴突水肿,髓鞘松解、褶曲,部分剥离,轴突内线粒体肿胀,微管排列紊乱,并见许多大小不等的空泡形成。安全减压组神经细胞和轴突轻度水肿,胞质和轴索内可见小空泡形成,髓鞘板层结构松散。正常对照组脊髓组织超微结构未见明显改变。结论神经纤维水肿、轴突脱髓鞘为Ⅱ型减压病家兔脊髓损伤的基本病变,脊髓血管内气泡及＂原位气泡＂可能同为导致脊髓损伤的直接原因。     

脂多糖致急性肺损伤时Tribbles同源蛋白3表达变化

目的 探讨Tribbles同源蛋白3(TRB3)在脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)时的变化及其与p38-MAPK信号通路的关系.方法 体内实验:复制LPS致ALI大鼠模型,分5 ml/kg生理盐水组和5 ml/kg LPS刺激组,免疫组织化学法检测肺组织中TRB3蛋白表达,RT-PCR检测肺组织TRB3 mRNA表达.体外实验:体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),随机分为LPS量效组(0、2、4、10 μg/ml LPS分别孵育4 h)、LPS时效组(10 μg/ml LPS分别孵育0、4、8、12 h)和p38抑制剂(SB203580)干预组(分为正常对照组、10 μg/ml LPS组、10 μmol/L SB203580组、10 μmol/L SB203580+10 μg/ml LPS组).Western blot法检测TRB3蛋白、p-p38和 p38-MAPK表达.结果 免疫组织化学法显示大鼠肺泡壁和腺上皮均表达TRB3;RT-PCR法检测大鼠肺组织和大鼠PMVEC均表达TRB3 mRNA;与生理盐水组比较,LPS致ALI大鼠肺组织TRB3 mRNA表达显著增加(t=15.524,P<0.01),LPS刺激的大鼠PMVEC中TRB3 mRNA表达增加(t=7.549,P<0.01);Western blot法显示PMVEC表达TRB3蛋白的表达量随LPS浓度(0、2、4、10 μg/ml)增加逐渐升高,差异有统计学意义(F=12.619,P<0.001);时效组TRB3蛋白表达量于4 h达高峰, 之后下降,8 h时仍高于0 h,差异有统计学意义(F=11.273,P<0.001).干预组:与正常对照组比较,10 μg/ml LPS组诱导大鼠PMVEC的p-p38、TRB3蛋白表达量增高(t=49.121、15.113,P<0.001);10 μmol/L SB203580+10 μg/ml LPS组与10 μg/ml LPS组比较,p-p38、TRB3蛋白表达量下降(t=7.040、11.900,P<0.05、0.001);10 μmol/L SB203580组对大鼠PMVEC表达p-p38及TRB3蛋白无影响,与正常对照组比较,差异无统计学意义.结论 LPS致ALI时TRB3表达增加,TRB3表达受p38-MAPK信号通路调控.     

模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响

目的 研究模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响,为防御失重所导致的不良影响寻找新的治疗靶点.方法 采用回转器模拟失重效应干预肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC),回转培养72h,同时设1g对照静置培养组.之后用免疫荧光染色标记细胞骨架肌动蛋白F-actin,并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的改变;光镜下观察单核细胞(THP-1) 与PMVEC 的黏附作用,并计算黏附率;绿色荧光标记的腺病毒感染细胞,荧光显微镜下观察,并在流式细胞仪检测感染效率.结果 回转72h PMVEC 胞质内F-actin 的表达减少,微丝的拉丝感和方向感明显弱化,排列松散,细胞伸展不好,体积变小;模拟失重抑制PMVEC 对单核细胞的黏附,导致黏附率(37.69%±6.5% vs 51.25%±8.2%,P<0.05) 下降;模拟失重组的腺病毒感染率更高(84.55%±5.31% vs 66.32%±5.74%,P<0.05),更容易受到腺病毒感染.结论 模拟失重可以损伤PMVECs 的屏障功能.     

模拟失重对肺微血管内皮细胞凋亡的影响

目的：观察回转模拟失重对肺微血管内皮细胞凋亡的影响。方法：组织块贴壁法原代培养肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC）,采用回转器模拟失重效应。PMVEC回转培养48h,同时设1g对照静置培养。采用Hoechst33258染色,荧光显微镜观细胞凋亡的形态学改变;采用Annexin V—FITC试剂盒对细胞染色,以流式细胞仪进行细胞凋亡检测。结果：回转模拟失重48h后,Hoeehst33258染色结果发现细胞凋亡明显增加;流式细胞仪定量结果表明回转48hPMVEC的凋亡率为19．85％,显著高于同步对照组PMVEC的凋亡率13．72％（19．85％±1．29％vs13．72％±1．15％,P〈0．01）。结论：48h回转模拟失重可明显诱导PMVEC发生凋亡。     

潜水作业致减压病的救治及预防

目的:分析潜水作业后各种类型减压病患者的临床特点,探讨各种救治及预防措施的利弊。方法:统计我院2000~2007年间35例各种类型的减压病的致病因素、主要症状、治疗方法。结果:本组35例全部痊愈,无效0例。根据不同类型的减压病采用相应的治疗方案,治疗效果确切,有效的预防是防止减压病发生的重要措施。结论:在高压氧舱条件受限的情况下,采用积极的前期防治措施可以减轻减压病的进程,为后期的治愈创造有利条件。