巨噬细胞移动抑制因子对结肠癌HT-29细胞增殖和血管生成因子表达的影响

目的研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在体外对人结肠癌细胞HT-29增殖及VEGF和IL-8表达的影响。方法分别用25、50、100μg/L人重组MIF(rhMIF)对细胞进行处理后,采用MTT法检测细胞增殖,RT-PCR检测细胞VEGF、IL-8mRNA含量,ELISA测定细胞培养上清液中VEGF和IL-8的蛋白含量。结果rhMIF作用不同时间后,能够促进HT-29细胞生长,增殖活性随浓度增加、时间延长逐渐上升(P<0.05),呈现量—效、时—效关系。细胞VEGF和IL-8mRNA表达及上清液中VEGF和IL-8蛋白含量均明显增加,存在时间和浓度依赖性(P<0.05)。结论MIF能够促进结肠癌细胞增殖,MIF参与肿瘤血管形成有可能是通过上调VEGF和IL-8的表达发挥作用。     

分化抑制因子1对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的 检测分化抑制因子1(Id1)对结肠癌HT-29细胞VEGF表达的影响,探讨其在结肠癌增殖中的作用.方法 HT-29转染Id1表达质粒,RT-PCR方法和Western印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况;合成Id-1干扰序列转染HT-29细胞后,RT-PCR及Western印迹检测HT-29细胞VEGF mRNA和蛋白的表达情况,采用MTT法检测各组细胞增殖情况.结果 Id1表达质粒空白组、对照组(空载体组)、过表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.002 99±0.000 687、0.003 49±0.001 34、0.0313±0.00605(P＜0.01);VEGF/GAPDH蛋白分别为:0.132±0.035 1、0.131±0.053 0、0.245 ±0.032 6(P ＜0.01),MTT实验显示相对对照组,过表达组增殖明显快(P＜0.01).Id-1干扰空白组、对照组(空载体组)、抑表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.006 16±0.000 829、0.006 26±0.000 447、0.002 3±0.000 308(P ＜0.01);VEGF/GAPDH蛋白分别为:0.450 ±0.039 3、0.464±0.023 1、0.231±0.027 3(P ＜0.01).MTT实验显示相对对照组,抑表达组增殖明显减慢(P＜0.01).Id1过表达能显著上调VEGF mRNA和蛋白表达,提高细胞的生长,Id1抑制后能显著下调VEGF mRNA和蛋白表达,减缓细胞的生长.结论 在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1通过Id1 ↑ →VEGF ↑途径来影响结肠癌细胞增殖,在肿瘤血管生成中发挥重要作用.Id1有望成为结肠癌治疗的一个新靶点.     

环氧合酶-2抑制剂降低结肠癌细胞血管内皮生长因子表达的影响及机制

目的探讨选择性环氧合酶(COX)-2抑制剂celecoxib影响结肠癌HT-29细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的机制。方法体外培养结肠癌HT-29细胞,采用MTT法检测celecoxib对HT-29细胞增殖的影响。同时针对Sp1和Sp4进行RNA干扰,应用RT-PCR和Western印迹法联合检测celecoxib组和干扰组对HT-29细胞Sp1、Sp4和VEGF m RNA和蛋白表达的影响。结果随着药物浓度的增加(5、10、20、40和80μmol/L)和作用时间的延长(2、4、8、16和32 h),celecoxib对HT-29细胞的增殖具有显著抑制作用,在2、4、8、16和32 h时的半数抑制浓度(IC50)分别为40.36、33.15、31.67、30.94和31.54μmol/L。RT-PCR和Western印迹检测显示,celecoxib可显著降低HT-29细胞Sp1、Sp4和VEGF m RNA和蛋白的表达水平,同时经RNA干扰Sp1(Sp4)后,HT-29细胞Sp1(Sp4)和VEGF m RNA和蛋白的表达水平明显降低,但Sp4(Sp1)m RNA和蛋白表达变化不明显。结论 celecoxib可抑制结肠癌HT-29细胞增殖,其作用机制可能是通过下调Sp1和Sp4表达水平而降低结肠癌细胞中VEGF的表达水平。     

姜黄素对结肠癌细胞HT-29中NDRG2基因表达的影响

目的探讨姜黄素对HT-29结肠癌细胞株中N-myc F下游调节基因(NDRG)2表达的影响及姜黄素不同浓度处理下NDRG2基因表达情况。方法应用不同浓度的姜黄素干预体外培养的HT-29细胞48 h后,提取总RNA,并运用RT-PCR技术检测姜黄素对HT-29细胞中NDRG2基因表达的影响。利用RIPA细胞裂解液提取细胞总蛋白,运用Western印迹技术,检测姜黄素对HT-29细胞中NDRG2蛋白质表达的影响。结果姜黄素不但能够在mRNA水平促进HT-29细胞中NDRG2基因的表达,且能够促进NDRG2蛋白质的表达,且均具有统计学意义。但有效浓度范围在20~100μmol/L,且80μmol/L效果最佳,表明姜黄素在一定浓度范围内对NDRG2基因上调(P0.05),RG2基因,并能有效抑制肿瘤细胞。结论姜黄素能够促进结肠癌细胞株HT-29细胞中NDRG2基因和蛋白的表达,且具有剂量依赖性,最佳浓度为80μmol/L。     

姜黄素调控食管癌Eca-109细胞分化、增殖、凋亡的机制

目的探讨姜黄素对食管癌Eca-109细胞的分化、增殖、凋亡及分泌信号蛋白(Wnt)信号通路的影响及机制。方法 MTT法检测8、16、32、64μmol/L的姜黄素作用于食管癌Eca-109细胞24、48、72 h后细胞存活情况,计算细胞凋亡率,原位末端标记法(TUNEL)检测48 h后细胞凋亡情况,RT-PCR检测48 h后细胞中β连环蛋白(β-catenin)、GSK-3β、c-myc的mRNA的表达情况,Western印迹检测48 h后细胞中β-catenin、GSK-3β、c-myc蛋白的表达情况。结果姜黄素对食管癌Eca-109细胞的抑制作用随着作用时间和作用浓度的增加而增加,姜黄素作用24 h IC50为28.1μmol/L,48 h为23.2μmol/L,72 h为15.6μmol/L。TUNEL检测细胞凋亡率随着药物作用浓度的增加而增加。β-catenin、c-myc的转录水平随着药物浓度的增加而减弱。GSK-3β的转录水平随着药物浓度的增加而加强。β-catenin、c-myc蛋白表达量随着药物浓度的增加而减弱。GSK-3β蛋白表达水平随着药物浓度的增加而加强。结论姜黄素可以抑制食管癌Eca-109细胞增殖,促进细胞凋亡。姜黄素可以上调Wnt信号通路中GSK-3β酶的表达、促进β-catenin蛋白降解,从而抑制c-myc基因的转录,抑制癌细胞生长增殖。     

姜黄素对结肠癌细胞Caco2中MACC-1及PGE2的影响

目的研究姜黄素对体外培养人结肠癌Caco2细胞增殖及对细胞株中MACC-1、前列腺素(PG)E2表达的影响。方法采用不同浓度姜黄素作用于Caco2细胞,MTT法检测细胞增殖情况;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测药物作用后肿瘤细胞PGE2蛋白质水平表达变化,Western印迹检测药物处理后MACC-1与c-Met表达。结果姜黄素对Caco2细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量-时间依赖性(P0.05),测得半数致死量(IC50)为49.5μmol/L;在蛋白水平,姜黄素处理后,MACC-1与c-Met蛋白表达水平降低。结论姜黄素能够抑制Caco2细胞的增殖,并下调结肠癌细胞Caco2中PGE2、MACC-1的表达。     

姜黄素对结肠癌细胞HT-29中干细胞标记物CD24及Lgr5增殖的影响

[目的]探讨姜黄素对结肠癌细胞HT-29中干细胞的抑制作用,为结肠癌提供靶向性治疗及理论基础。[方法]采用流式细胞仪分选HT-29中CD24阳性表达细胞;分选出带有荧光标记物CD24的细胞接种于无血清培养基中,培养观察细胞的成球状态;加入10μmol/L、30μmol/L、60μmol/L的姜黄素干预后再次通过流式细胞仪分选HT-29细胞株中CD24阳性细胞表达;采用RT-PCR检测结肠癌干细胞CD24中Lgr5mRNA的表达;利用免疫组化检测加入姜黄素后观察Lgr5蛋白的表达。[结果]通过流式细胞仪分选HT-29细胞株CD24所占比例为40%,将分选出的CD24阳性细胞接种于无血清培养基中培养,10d后成球;加10μmol/L、30μmol/L、60μmol/L的姜黄素干预后再次通过流式细胞仪分选HT-29细胞株CD24所占比例分别为20.23%、13.04%、7.54%;在mRNA表达水平10μmol/L、30μmol/L、60μmol/L姜黄素作用于HT-29细胞,能够使分选出的细胞中CD24和Lgr5mRNA的表达比较呈下降趋势(P0.05)。通过免疫组化检测,姜黄素干预后,Lgr5随浓度的增加,其表达呈下降趋势(P0.05)。[结论]姜黄素对肿瘤干细胞具有抑制作用,为姜黄素的抗肿瘤机制提供另一理论途径。     

c-myc反义寡核苷酸对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的:研究体外c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法:利用脂质体LipofectamineTM2000介导将c-myc ASODN转染入大肠癌HT-29细胞中, 逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Westernblot方法检测c-myc基因mRNA及蛋白的表达,MTT、流式细胞仪(FCM)检测c-myc ASODN对人结肠癌HT-29细胞增殖抑制及其对奥沙利铂敏感性影响.结果:转染c-myc ASODN后, HT-29细胞内c-myc mRNA水平显著降低(0.464±0.029 vs0.974±0.027, 0.945±0.012, 均P<0.01). 在HT-29细胞中存在分子质量62 kDa的特异性条带, 与c-myc分子质量相符, ASODN组在PVDF膜上的特异性条带明显弱于对照组; MTT结果显示转染c-myc ASODN 48 h后的HT-29细胞的增殖速度较对照组细胞明显减慢. FCM显示c-myc ASODN转染后72 h后, 奥沙利铂+ c-myc ASODN组细胞凋亡率显著高于对照组( P<0.05).结论:体外c-myc ASODN可抑制c-myc mRNA及蛋白的表达, 阻断c-myc可抑制HT-29细胞增殖并增强其对奥沙利铂的敏感性, 可能为大肠癌的基因治疗提供新的靶点.     

胃肠安方对瘦素干预后人结肠癌细胞增殖以及VEGF分泌的影响

[目的]观察胃肠安方对瘦素干预后人结肠癌细胞增殖以及VEGF分泌的影响。[方法]体外培养人结肠癌HT-29细胞,建立空白对照组以及模型组,不同浓度胃肠安作用后CCK-8法检测细胞增殖。ELISA试剂盒检测细胞上清液VEGF含量。[结果]胃肠安方对人结肠癌HT-29细胞增殖有抑制作用,可以拮抗瘦素促进人结肠癌HT-29细胞增殖的作用。150 ng/ml leptin能明显促进HT-29细胞分泌VEGF,上清液VEGF浓度为(130.10±1.83)pg/ml,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。1.00 mg/ml、1.75 mg/ml、2.50 mg/ml胃肠安组VEGF浓度为(125.01±1.40)pg/ml,(102.99±1.40)pg/ml,(66.22±1.89)pg/ml,与模型对照组比较,差异有统计学意义,胃肠安方对leptin促HT-29 VEGF分泌的拮抗作用呈剂量依赖性。[结论]胃肠安方能够抑制瘦素刺激的结肠癌HT-29细胞增殖及VEGF分泌。     

普伐他汀对人结肠癌细胞增殖及COX-2蛋白表达的影响

目的体外观察普伐他汀对人结肠癌细胞HT-29、Ls-174-T细胞增殖、细胞周期及COX-2蛋白表达的影响。方法采用噻唑蓝（MTT）法观察普伐他汀对HT-29和Ls-174-T细胞增殖的影响，流式细胞仪（FCM）研究普伐他汀对细胞周期的作用，免疫细胞化学观察COX-2蛋白的表达。结果体外普伐他汀可抑制HT-29和Ls-174-T细胞增殖，各处理组内G0／G1期细胞增多，但诱导凋亡不明显，体外普伐他汀可减少HT-29和Ls-174-T细胞株COX-2蛋白的表达。结论体外普伐他汀对HT-29和Ls-174-T细胞增殖有抑制作用，该作用可能与使细胞生长阻滞于G0／G1期及抑制COX-2蛋白表达有关。     

MK886和celecoxib对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的 探讨通过5-脂氧合酶(LOX)抑制剂MK886及环氧合酶(COX)-2抑制剂celecoxib阻断花生四烯酸途径对结肠癌HT-29细胞增殖的影响。方法 CCK-8及EdU法分别检测不同浓度的MK886(200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μmol/L)和celecoxib(200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μmol/L)对体外培养的结肠癌细胞HT-29细胞的增殖抑制情况;采用细胞平板集落形成及细胞迁移能力实验检测经过MK886(25.0μmol/L)处理后的细胞克隆形成及迁移能力。结果 CCK-8结果显示,MK886及celecoxib均对HT-29细胞生长的增殖抑制率呈明显剂量和时间依赖性增加(P<0.05);EdU结果显示,MK886和celecoxib均能明显抑制结肠癌HT-29细胞DNA合成,且呈明显剂量依赖性(P<0.05);MK886对HT-29细胞克隆形成及迁移能力均有明显抑制作用(P<0.05)。结论 阻断花生四烯酸途径对结肠癌HT-29细胞增殖有明显抑制作用,但具体机制仍需进一步研究。     

巨噬细胞游走抑制因子通过PI3K／Akt信号通路调控人结肠癌细胞株HT-29增殖和血管生成因子表达

背景：巨噬细胞游走抑制因子（MIF）是-种多功能细胞因子,其在结直肠癌发生、发展中的作用机制尚不明确。目的：探讨MIF是否通过P13K／Akt信号通路调控人结肠癌细胞增殖和血管生成因子表达。方法：人结肠癌细胞株HT-29分为对照组（RPMI-1640）、重组人MIF（rhMIF）组、PI3K抑制剂LY294002组和LY294002预处理联合rhMIF组,并予相应干预。以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测HT-29细胞增殖状态,分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素-8（IL-8）mRNA表达和蛋白分泌,蛋白质印迹法检测Akt和磷酸化Akt（p—Akt）蛋白表达。结果：rhMIF对HT-29细胞具有促增殖作用,能增加细胞VEGF、IL-8 mRNA表达和蛋白分泌,并促进Akt蛋白磷酸化（P＜0．05）;而先予LY294002预处理可显著抑制rhMIF的上述作用．HT-29细胞增殖显著受抑（P＜0．05）,VEGF、IL-8mRNA表达、蛋白分泌以及p-Akt蛋白水平与对照组相比无明显差异。各组总Akt蛋白水平均无明显差异。结论：MIF诱导人结肠癌细胞增殖和血管生成因子表达可能是通过活化PI3K／Akt信号通路实现的。     

Cullin7表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

背景:结肠癌为常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率均较高。Cullin7定位于染色体6p21. 1,与恶性肿瘤的发生、发展密切相关。目的:探讨Cullin7表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用q RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测结肠癌组织、癌旁组织中Cullin7 m RNA和蛋白表达。以si RNA沉默Cullin7基因,并转染结肠癌HCT116细胞,q RT-PCR和蛋白质印迹法检测沉默效果。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测cleaved caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白表达。以si RNA Cullin7联合Wnt信号通路抑制剂FH-535处理结肠癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测cleaved caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白表达。结果:结肠癌组织中Cullin7 m RNA和蛋白表达明显高于癌旁正常组织(P 0. 05)。与对照组相比,si RNA Cullin7 1组、si RNA Cullin7 2组、si RNA Cullin7 3组Cullin7 m RNA和蛋白表达均明显降低(P 0. 05),尤其是si RNA Cullin7 2组。与对照组相比,沉默Cullin7表达后,结肠癌细胞增殖活性明显下降,细胞凋亡率明显增加,cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,β-catenin、C-myc蛋白表达明显下调(P 0. 05)。与si RNA Cullin7 2组相比,联合Wnt信号通路抑制剂FH-535后,结肠癌细胞凋亡率明显增加,cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,β-catenin、C-myc蛋白表达明显下调(P 0. 05)。结论:Cullin7基因参与了结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡,沉默Cullin7可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

鞘氨醇激酶1对结肠癌细胞血管生成拟态的影响及其机制

目的:研究鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,Sphk1)对人结肠癌HT-29细胞生成血管拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响及其可能的机制.方法:将人结肠癌HT-29细胞分为Sphk1抑制组、Sphk1激活组、对照组.Sphk1抑制组加入N,N-二甲基鞘氨醇(N,N-dimethyl-D-erythro-sphingosine,DMS)50μmol/L;Sphk1激活组加入佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(phorbol12-myristate-13-acetate,PMA)100nmol/L;对照组加入等量的培养基.采用MTT法检测细胞生长增殖;透射电镜观察细胞形态学变化;Matrigel三维培养法观察VM形成能力;Transwell小室模型观察细胞侵袭迁移能力的变化,QT-PCR、Western blot及ELISA技术检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果:DMS显著抑制细胞的增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡;透射电镜可见典型的凋亡特征;三维培养中不能形成管状VM;明显减弱VEGFmRNA及蛋白表达.PMA则显著促进HT-29细胞的增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡;透射电镜可观察到细胞增殖特征;促进三维培养中管状VM的形成;明显增强VEGFmRNA及蛋白表达.对照组、DMS组及PMA组的侵袭细胞数:112.00±6.25vs57.00±8.00,142.00±5.57;迁移细胞数:69.33±4.04vs42.00±4.16,111.00±8.03;VEGFmRNA表达量:1.000vs0.740±0.122,1.220±0.075;VEGF蛋白表达:0.39±0.05vs0.23±0.02,0.65±0.06;VEGF蛋白分泌:103.00±8.96vs63.89±8.44,201.01±17.93,均P<0.05.结论:Sphk1可促进HT-29细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡,诱导VM的形成,其机制可能是通过增强结肠癌细胞的侵袭迁移能力并促进VEGF表达而发挥作用.     

神经酰胺对结肠癌HT-29细胞凋亡和增殖细胞核抗原表达的影响

目的 探索神经酰胺(C_2-cer)影响人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和增殖细胞核抗原(PCNA)表达.方法 12.5、25 μmol/L的C_2-cer处理HT-29细胞,用MTT法、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、Western印迹等方法检测HT-29细胞增殖、凋亡和PCNA表达.结果 以12.5、25 μmol/L的C_2-cer处理HT-29细胞,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡明显增加,PCNA表达明显降低,并呈剂量-效应关系.结论 C_2-cer可诱导细胞凋亡,该效应可能与下调PCNA表达有关.     

Genistein对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察金雀异黄素(Genistein)对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法将HT-29细胞分别加入6.25、12.5、25、50、100μg/mL的Genistein进行培养,观察其生长、增殖、凋亡情况并检测其中的Bcl-2、Bax蛋白。结果 25、50μg/mL的Genistein作用48 h后,HT-29细胞的生长受抑制,凋亡率上升(P均<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.01),Bax蛋白表达上升(P均<0.01),呈剂量依赖性(P<0.05)。各浓度的Genistein作用48 h后对HT-29细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性(P均<0.05)。结论 Genistein既可以抑制HT-29细胞的生长及增殖,又可以诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调HT-29细胞Bax蛋白以及下调Bcl-2蛋白的表达有关。     

美洛昔康对结肠癌细胞VEGF和angiopoietin-2表达的影响

目的:研究COX-2选择性抑制剂美洛昔康(meloxicam)对结肠癌细胞HT-29生长及血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)表达的影响.方法:分别用100,200,400,800μmol/L美洛昔康对细胞进行干预后,采用CCK-8活细胞计数法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,ELISA测定细胞培养上清液中VEGF,Ang-2的蛋白含量,实时荧光定量PCR检测细胞COX-2,VEGF,Ang-2mRNA含量.结果:美洛昔康作用不同时间后,对HT-29细胞具有细胞毒作用,细胞增殖活性随浓度增加、时间延长逐渐降低(P值:0.000→0.029;0.000→0.043),呈现量-效、时-效关系.并且美洛昔康呈浓度依赖性改变细胞周期分布,G0/G1期细胞比例增加(P值:0.000→0.015).上清液中VEGF和Ang-2蛋白含量明显降低,存在时间和浓度依赖性(P值:0.000→0.018;0.000→0.028).细胞COX-2,VEGF和Ang-2mRNA表达亦明显降低(P值:0.000→0.025),也存在浓度依赖性.结论:美洛昔康能够在蛋白、核酸水平上抑制结肠癌细胞分泌VEGF和Ang-2,从而抑制肿瘤血管生成.     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过抑制Akt信号通路诱导大肠癌细胞凋亡

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大肠癌细胞系HT-29细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法体外培养的HT-29细胞,分为对照组和实验组,实验组和对照组加入同等体积的培养基,实验组用不同浓度(15~120μg/ml)EGCG分别处理24、48、72 h,MTT比色法测定其对HT-29细胞增殖的影响;EGCG(浓度分别为0、15、30、60μg/ml)处理HT-29细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度计检测Casepase-9相对活性,Rho123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,Western blot法检测Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt、pGSK-3β的表达。结果 EGCG能有效抑制HT-29细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性;EGCG(15、30、60μg/ml)作用于HT-29细胞48 h后,细胞凋亡率分别为11.6%、23.4%、34.5%;Bax表达量上调,而Bcl-2表达量下调;Casepase-9相对活性显著增加;线粒体膜电位显著降低;此外,EGCG可抑制p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达。结论 EGCG可通过抑制HT-29细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Akt信号通路,继而激活线粒体凋亡途径相关。     

马钱子碱对人结肠癌细胞HT-29增殖与凋亡的影响及相关机制

目的探讨马钱子碱对人结肠癌细胞HT-29增殖与凋亡的影响及其分子机制。方法以人结肠癌细胞HT-29为研究对象,将其按不同处理方式分为空白对照组,马钱子碱(1μmol/L)处理组、白细胞介素(IL)-6(100μg/L)处理组、马钱子碱联合IL-6处理组。CCK8法检测细胞增殖情况;Annexin-V-PI双染法检测细胞凋亡情况;细胞免疫荧光染色检测p-STAT3蛋白表达的位置和强度,Western印迹法检测凋亡相关蛋白表达量。结果马钱子碱处理组、马钱子碱联合IL-6处理组均可明显抑制细胞增殖且马钱子碱处理组细胞抑制率明显高于马钱子碱联合IL-6处理组(P<0.05)。马钱子碱处理组、马钱子碱联合IL-6处理组细胞凋亡率明显高于空白对照组且马钱子碱处理组细胞凋亡率明显高于马钱子碱联合IL-6处理组(P<0.05);IL-6处理组细胞凋亡率与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。马钱子碱处理组p-STAT3比值明显低于空白对照组(P<0.05);同时马钱子碱浓度越高p-STAT3蛋白表达量越低。马钱子碱处理组p-STAT3和抗凋亡BCL-2蛋白表达量明显低于空白对照组,促凋亡蛋白Bax、执行凋亡的DNA修复酶Parp表达量明显高于空白对照组(P<0.05);IL-6处理组的p-STAT3蛋白表达量明显高于空白对照组(P<0.05);马钱子碱联合IL-6处理组BCL-2蛋白表达量明显高于马钱子碱处理组,而Bax和DNA修复酶Parp表达量明显减少(P<0.05)。结论马钱子碱可有效抑制结肠癌细胞HT-29增殖并促进凋亡,其主要通过调节IL-6/STAT3信号通路,抑制细胞中STAT3磷酸化来实现。