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1.
目的观察阿司匹林对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的影响。方法采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度阿司匹林(1、2、5、10 mmol/L)分别培养3、6、12、24 h。激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,将其在倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管形成试剂盒来观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,免疫印迹杂交法(Western blot)半定量测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量。结果阿司匹林减少外周血EPCs数量,并且EPCs数量随阿司匹林浓度和作用时间增加而减少。其增殖能力、迁移能力、黏附能力、体外血管形成能力和iNOS含量亦随阿司匹林浓度和作用时间增加而降低。结论阿司匹林通过EPCs中iNOS含量,降低EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,从而抑制内皮细胞的生成。  相似文献   

2.
灯盏花素对内皮祖细胞数量、功能及iNOS的影响   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
目的:观察灯盏花素对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量、功能及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。方法:采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度灯盏花素(分别为5、10、20、40mg/L)培养24h,同时,对照组与灯盏花素20mg/L组分别培养6、12、24、48h。激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,将其在倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管生成试剂盒来观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,免疫印迹杂交法半定量测定iNOS含量。结果:灯盏花素能增加外周血EPCs数量、增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,并且其数量、增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力随灯盏花素浓度和作用时间的增加而增加,灯盏花素还能增加EPCs中iNOS含量。结论:灯盏花素增加EPCs的数量、增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,与其增加iNOS含量有关。  相似文献   

3.
目的:观察重组人脑利钠肽( rhBNP)对急性ST段抬高型心肌梗死( STEMI)患者外周血内皮祖细胞( EPCs)数量及功能的影响,并评估对冠状动脉侧枝循环形成及心功能的影响。方法选择海南省人民医院心内科未行急诊血运重建治疗(梗死时间>12 h)的STEMI患者132例,随机分成两组,第一组为静脉使用rhBNP组70例,第二组为未使用rhBNP的对照组62例,分别在发病第1、7天抽取外周血,采用贴壁选择法培养人外周血EPCs,荧光显微镜鉴定EPCs,并检测EPCs数量及体外增殖、迁移、黏附、体外血管生成能力。发病第7天行冠状动脉造影并使用Rentrop侧枝循环分级法评估侧枝循环形成,并心脏彩超测量LVDD、LVEF及检测血浆BNP来评估心功能。结果与对照组比较,rhBNP组外周血EPCs的数量明显增加,EPCs增殖、迁移、黏附、体外血管生成能力明显改善(P<0.01),冠状动脉侧枝循环明显丰富,心功能明显改善(P<0.05)。结论 rhBNP明显改善STEMI患者EPCs功能,促进冠状动脉侧枝循环的形成,改善心功能。  相似文献   

4.
目的:研究雷帕霉素和紫杉醇对骨髓内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)数量及功能的影响。方法:将离心法获得的SD雄性大鼠的骨髓单个核细胞接种于明胶包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度的雷帕霉素(0.1μg/mL,1μg/mL和5μg/mL)及紫杉醇(0.1μg/mL,1μg/mL和5μg/mL)培养24h。在激光共聚焦显微镜下观察细胞,DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI—acLDI.)和异硫氰酸荧光素标记的单叶豆凝集素1(FITCBS-1Lectin)双染色阳性的细胞为正在分化的EPCs,在倒置荧光显微镜下对其进行计数。然后分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、改良的Boyden小室法和黏附能力检测实验来观察EPCs的增殖能力、迁移能力及黏附能力。结果:EPCs数量随着雷帕霉素及紫杉醇浓度的增加而减少,其增殖能力、迁移能力及黏附能力亦随药物浓度的增加而降低,各项指标有统计学意义(P〈0.05)。相同浓度的雷帕霉素和紫杉醇对EPCs数量及功能的影响无显著差异。结论:雷帕霉素和紫杉醇可降低EPCs的数量及其增殖能力、迁移能力和黏附能力,且两种药物对EPCs的效应呈浓度依赖性。  相似文献   

5.
目的:研究一氧化碳(CO)对人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移、黏附功能及分泌NO的影响。方法:密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞,接种于预先包被人纤维连接蛋白的培养板上,培养1周后鉴定EPCs。将培养1周后的EPCs分为对照组和干预组,干预组分别加入25μM、50μM、100μM、200μM的一氧化碳释放分子-3(CORM-3)培养24 h。测定EPCs的增殖、迁移、黏附和分泌NO能力。结果:与对照组比较,干预组EPCs增殖、迁移、黏附能力增强,培养上清液中NO浓度增加(P0.05),且在100μM时作用最显著。结论:CO可促进体外培养的EPCs增殖、迁移、黏附和生成NO,提示CO可能通过改善EPCs功能加速血管再内皮化和促进血管新生。  相似文献   

6.
黄芪对动脉粥样硬化兔骨髓内皮祖细胞生长的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
李蕾  张怀勤  尹娟  范旰  陈骁 《实用医学杂志》2011,27(7):1154-1156
目的:研究黄芪对冠状动脉粥样硬化模型兔骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生长的影响,并探讨黄芪对冠心病临床治疗的可能机制。方法:建立动脉粥样硬化模型,分为正常对照组和动脉粥样硬化组,体外分离培养EPCs,通过荧光显微镜观察细胞经乙酰化低密度脂蛋白(DiI-ac-LDL)摄取试验和荆豆凝集素(FITC-UEA-I)和体外成血管试剂matrigel观察细胞成血管功能来鉴定EPCs,检测细胞黏附能力、迁移能力及增殖能力。结果:动脉粥样硬化组兔冠状动脉可见斑块或脂纹;DiI-ac-LDL和FITC-UEA-I双染色阳性;培养6d的EPCs可见血管腔样的结构;动脉粥样硬化组EPCs的数量、黏附、迁移及增殖能力较正常对照组明显下降,差异有显著性(P<0.05)。黄芪可以一定程度上促进动脉粥样硬化组兔骨髓EPCs的数量的增加及黏附、迁移和增殖能力,并以20g/L最为明显,差异有显著性(P<0.05)。结论:黄芪治疗冠心病的作用机制可能为促进EPCs的生长。  相似文献   

7.
目的观察阿托伐他汀对冠心病患者外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移、分化及集落形成能力的影响。方法选择冠心病患者32例,从外周血获取单个核细胞,体外培养后进行细胞分析和计数。结果 EPCs的数量、增殖率、贴壁细胞及迁移细胞数量均随阿托伐他汀用药时间的延长而增加。结论阿托伐他汀能提高内皮祖细胞(EPCs)的增殖及分化能力。  相似文献   

8.
本研究旨在观察阿司匹林对人脐血晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)功能的影响。采用密度梯度离心法及免疫磁珠分选法从脐血获得CD34+的单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养2周后收集贴壁细胞,通过流式细胞术、免疫荧光、RT-PCR、DiI-Ac-LDL的摄取及体外血管形成能力等方法对其进行鉴定。用不同浓度阿司匹林(终浓度分别为0.1,1,10,100,1 000,10 000μmol/L)处理EPC 24 h,然后分别采用CCK-8比色法、Transwell小室、黏附能力测定实验来观察EPC的增殖能力、迁移能力和黏附能力的变化。结果表明:低浓度的阿司匹林(0.1-1 000μmol/L)对脐血晚期EPC的增殖无明显影响,但可增强晚期EPC的黏附及迁移能力,而高浓度的阿司匹林(10 000μmol/L)显著抑制晚期EPC的增殖和迁移,但对其黏附能力无明显影响。结论:低浓度的阿司匹林可增强晚期EPC的黏附及迁移能力,而高浓度的阿司匹林抑制晚期EPC的增殖、黏附及迁移能力,从而抑制内皮细胞的生成。  相似文献   

9.
目的观察丹参多酚酸盐对体外培养的人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、黏附及一氧化氮(NO)分泌功能的影响。方法从人外周血分离培养获取单个核细胞(MNCs),接种在包被有人纤维连接蛋白的培养板上,在EBM完全培养液中培养。EPCs与不同浓度丹参多酚酸盐及辛伐他汀共培养一段时间,观察其对EPCs增殖、黏附和分泌功能的影响。结果丹参多酚酸盐能促进EPCs增殖,与对照组比较差异具有统计学意义(0.335±0.005 vs.0.292±0.005,P<0.01);并且能增强细胞黏附能力(32±0.8 vs.30±0.8,P<0.05),使NO分泌量增加[(51.3±1.8)μmol/L vs.(22.4±1.1)μmol/L,P<0.01]。结论丹参多酚酸盐可以促进体外培养的EPCs增殖并增强其功能。  相似文献   

10.
目的:观察不同强度弱恒磁场对体外培养大鼠内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移、黏附能力的影响.方法:将体外培养大鼠EPCs分为对照组及不同强度(0.1、0.5、1.0 mT)磁场组,磁场作用时间为24h,用四唑盐比色法检测EPCs增殖能力,用Transwell小室检测细胞迁移能力,并检测EPCs的黏附能力.结果:与对照组相比,0.5、1.0 mT磁场组细胞增殖能力显著高于对照组(P< 0.001);0.5、1.0 mT磁场组细胞迁移能力显著高于对照组(P< 0.01,P<0.05);0.5、1.0 mT磁场组细胞黏附能力显著高于对照组(P< 0.001),0.1 mT磁场组细胞增殖、迁移及黏附能力与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论:弱恒磁场可以促进大鼠EPCs增殖、迁移、黏附,具有预防经皮冠状动脉介入治疗后狭窄发生的潜在作用.  相似文献   

11.
为了了解淋巴细胞功能相关抗原1(lymphocyte function—associated antigen1,LFA-1)和极迟反应抗原4(very lateantigen 4,VLA-4)在高增殖潜能内皮祖细胞(high proliferative potential endothelial progenitor cells,HPP—EPCs)归巢过程中与血管内皮的黏附和跨内皮迁移中的作用,利用流式细胞术检测HPP—EPC中整合蛋白B1和B2的表达以及小鼠骨髓内皮细胞相应的受体的表达。利用体外黏附和迁移实验研究经过功能级别的中和抗体阻断VLA-4和LFA-1后HPP—EPC黏附和迁移细胞数目的变化。结果表明,HPP—EPC表达整合蛋白B1和B2,活化后小鼠骨髓内皮细胞表达细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule1,ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule1,VCAM-1);加CDlla抗体组黏附细胞或CD49d抗体组黏附和迁移细胞均较同型对照抗体组少,而且加CDlla和CD49d两种抗体联用组黏附和迁移细胞明显减少,其细胞数较任何单一抗体组少。结论:LFA-1和VLA-4在HPP—EPC与血管内皮的黏附和跨内皮迁移中发挥了重要的作用。  相似文献   

12.
【目的】探讨短期持续皮下输注胰岛素(CSII)强化治疗对初诊2型糖尿病患者循环内皮祖细胞(EPCs)水平的影响及CSII治疗保护血管的可能机制。【方法】采用密度梯度离心法收集外周血单个核细胞,诱导分化培养7天后,激光共聚焦显微镜鉴定FITC—UEA和DiLacLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,并在倒置显微镜下计数。40例初诊2型糖尿病患者接受为期2周的CSII强化治疗,于治疗前、后采用上述方法分别计数EPCS,同时测空腹血糖(FBS),餐后2小时血糖(PBS)和糖化血红蛋白(HbAlC)。【结果】2型糖尿病患者外周血循环EPCs较正常对照组明显减少,与HbAlC呈负相关,经CSII治疗后循环EPCS明显增加。【结论】初诊2型糖尿病患者外周血EPCs数量减少,早期CSII强化治疗不仅能迅速纠正糖代谢紊乱,同时能增加外周血EPCs数量,预防和延缓血管病变的发生。  相似文献   

13.
目的 研究外周血来源的血管内皮祖细胞(EPCs)的分离、培养、分化及鉴定方法,探索EPCs体外扩增所需的条件。方法 采集健康成人外周血,经Fieoll密度梯度离心法获取单个核细胞(MNC),接种在纤维连接蛋白包被的培养板上,在加有EGM-2-MV-SingleQuots的培养液中培养和扩增。于培养第7天选择免疫荧光(Dil-acLDL/FITC-UEA-1)鉴定培养所得的细胞是否具有EPCs的特征。结果 MNC在培养的第2天开始出现成簇现象,第4天细胞由圆形转变为梭形贴壁细胞,呈条索状或管状分布;激光共聚焦显微镜显示双染色阳性的细胞为正在分化的EPCs。结论 人外周血MNC在体外经适当条件的培养。完全可以分化成EPCs。  相似文献   

14.
沈永斌  李伟东  姜维良  孙占峰 《临床荟萃》2013,28(10):1123-1126,F0003
目的研究微小RNA-126(mir-126)对内皮祖细胞(EPCs)血管新生的调节能力,探索促进EPCs新生血管的新方法。方法实验分为3组,每组20只大鼠:mir-126高表达组,无效序列转染组,无转染对照组。提取大鼠骨髓中单个核细胞(MNCs),经体外诱导培养得到EPCs,使用细胞免疫荧光方法对细胞标记抗原及转染成功率进行鉴定。通过研究EPCs在基质胶中形成的管腔样结构的长度,以及离体环境下的迁移能力,判定各组内皮祖细胞的体外血管生成能力。结果转染mir-126组的内皮祖细胞较无效序列转染组和无转染对照组血管形成长度更长,分别为(1.52±0.16)mm、(1.19±0.14)mm vs(1.16±0.11)mm(P〈0.01),迁移细胞数量更多,(121.83±11.86)个/视野、(91.33±6.25)个/视野vs(95.33±9.56)个/视野(均P〈0.01)。结论 mir-126可以增加内皮祖细胞的体外血管生成能力。  相似文献   

15.
背景:现代医学研究表明,内皮祖细胞和补阳还五汤在治疗缺血性疾病上具有相似的功能,两者之间是否存在着一定的联系?目的:观察补阳还五汤对外周血内皮祖细胞数量和功能的影响。方法:采用密度梯度离心法分离培养兔外周血内皮祖细胞,经Dil-ac-LDL和FITC-UEA-I双染色和表面抗原的免疫组织化学检测鉴定后,将贴壁细胞随机分为4组,分别用基础培养基以及含有20,50,100g/L补阳还五汤的EBM-2培养基进行细胞培养72h。检测细胞形态及计数,再采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法、Transwell小室、黏附功能检测、一氧化氮检测及血管内皮生长因子免疫细胞化学分析来评定其增殖、迁移、黏附、分泌一氧化氮和表达血管内皮生长因子的能力。结果与结论:不同质量浓度补阳还五汤均能增加内皮祖细胞的数量,提高内皮祖细胞增殖、黏附、迁移和分泌一氧化氮的能力(P〈0.05),药物质量浓度在50g/L时影响最为显著(P〈0.01),而对血管内皮生长因子表达的影响较微弱。提示补阳还五汤能增加内皮祖细胞的数量,提高内皮祖细胞的增殖、迁移和黏附能力,并可能诱导晚期内皮祖细胞的分化。  相似文献   

16.
目的 观察细菌内毒素脂多糖(LPS )刺激人内皮祖细胞(EPCs )后不同浓度血必净注射液对其增殖、黏附功能的影响.方法 将EPCs 经复苏、培养、传代、鉴定为正在分化的EPCs 后,等量接种到培养板上,随机分为空白对照组[微血管内皮细胞培养液-2(EGM-2MV)]、LPS 组(100 μg/L)、血必净1 组(LPS 刺激EPCs 后加入5、25 、50 g/L 血必净注射液共同孵育)、血必净2 组(LPS 加5、25 、50 g/L 血必净注射液同时孵育EPCs),应用四甲基偶氮唑盐(MTT )比色法测定EPCs 的增殖和黏附能力[吸光度(A)值].结果 与空白对照组比较,LPS 组EPCs 增殖、黏附能力均显著降低(增殖能力:0.1077±0.0026 比0.1248±0.0037,黏附能力:0.0647±0.0020 比0.0770±0.0052,均P<0.05);与LPS 组比较,不同浓度血必净组EPCs 增殖能力均明显提高,且呈剂量-效应关系(均P<0.05),EPCs 黏附能力有所改善,但未见明显剂量-效应关系,以血必净1 组25 g/L 浓度升高更显著(0.0855±0.0030,P<0.05).结论 单纯LPS 刺激可导致EPCs 增殖、黏附能力下降;血必净注射液可使受损的EPCs 增殖、黏附能力改善,其中增殖能力随血必净注射液剂量增加而增强,而黏附能力与血必净注射液剂量间未见明显关系.提示血必净注射液可不同程度中和LPS 对EPCs 的损伤,在革兰阴性杆菌所致脓毒症早期使用血必净注射液可能有更好的效果.  相似文献   

17.
背景:对于小型实验动物,通过分离骨髓单个核细胞进行内皮祖细胞培养、扩增的方法较为繁琐。目的:探讨采用全骨髓培养方式扩增小型动物内皮祖细胞的可行性。方法:采用全骨髓培养分离C57BL/6小鼠内皮祖细胞,培养第7天行DiL-acLDL和FITC-UEA-1双荧光染色检测,并利用流式细胞仪检测其CD34、FLK-1表达情况。同时检测其体外血管生成能力,黏附、增殖和迁移能力。设立骨髓单个核细胞培养法为对照。结果与结论:全骨髓培养至第2天便可见早期内皮祖细胞集落形成,第7天时可见大量短梭状内皮祖细胞,其具有吞噬DiL-acLDL及结合FITC-UEA-1的能力,内皮祖细胞在基质胶上同样能够形成血管样结构,培养至第2周晚期内皮祖细胞集落出现,迅速生长形成典型的铺路石样,并能够在体外传代培养,细胞数量、细胞表面CD34、FLK-1表达、体外黏附、增殖和迁移能力及晚期集落出现时间与对照组差异无显著性意义(P〉0.05)。说明采用全骨髓培养的方式能够实现小型动物内皮祖细胞的筛选扩增,且操作简便。  相似文献   

18.
背景:内皮祖细胞具有很好的临床应用前景,特别是作为种子细胞参与组织工程血管构建及疾病治疗。目的:观察粒细胞集落刺激因子动员的外周血中内皮祖细胞的生物学特性。方法:获取粒细胞集落刺激因子动员正常人的外周血单个核细胞,同时获取8例正常成人外周血单个核细胞作为对照。将获取的细胞接种在预铺纤维连接蛋白的培养皿中进行体外培养。FACS和免疫组化法检测获取细胞的免疫表型;采用MTT比色法和黏附能力测定实验检测内皮祖细胞的增殖和黏附能力;实时定量PCR检测血管形成相关细胞因子的表达;荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL)吞噬实验鉴定内皮功能;将获取的细胞接种在含有血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的基底膜胶中诱导血管生成。结果与结论:动员后外周血和未动员外周血内皮祖细胞具有相似的细胞形态和免疫表型,FACS和免疫组化检测结果显示上述两种内皮祖细胞都表达内皮细胞特异性抗原CD34、CD31、FLK-1、ve-Cadherin、vWF和CD133。内皮细胞生长因子和基质细胞衍生因子1在动员后外周血内皮祖细胞中的表达水平增加;两种来源的内皮祖细胞都具有吞噬Dil-acLDL和在体外诱导血管生成的能力。但是,动员的外周血中内皮祖细胞的数量和增殖能力明显强于未动员外周血中的内皮祖细胞。结果可见动员后的外周血中可以分离出具有内皮祖细胞特性的细胞群体,该群体具有体外诱导血管生成的能力;与未动员的外周血内皮祖细胞相比,动员后外周血内皮祖细胞数量明显增加并具有更好的增殖能力。  相似文献   

19.
目的探讨布加综合征(Budd-Chiari syndrome,BCS)患者循环内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量、黏附及迁移能力的变化及与Child-Pugh分级和血清糖链抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)水平的相关性。方法 BCS患者30例为观察组,体检健康者20例为对照组,采用流式细胞术检测2组外周静脉血中CD34、CD133及血管内皮生长因子受体(kinase insert domain-containing receptor,KDR)3种抗体阳性细胞占单个核细胞的比率(即循环EPCs的数量);通过黏附能力测定和Transwell实验分别检测EPCs的黏附和迁移能力。采用Spearman相关系数分析EPCs的数量、黏附和迁移能力与Child-Pugh分级、血清CA125水平的相关性。结果观察组EPCs的数量[(0.021±0.006)%]、黏附能力[(15.7±1.4)个]、迁移能力[(15.6±1.6)个]均低于对照组[(0.038±0.007)%、(35.0±2.5)个、(23.9±2.6)个](P0.05);EPCs的数量、黏附和迁移能力与Child-Pugh分级均呈负相关(r=-0.628,P=0.000;r=-0.568,P=0.001;r=-0.635,P=0.000),与血清CA125水平均呈负相关(r=-0.365,P=0.047;r=-0.387,P=0.034;r=-0.446,P=0.013)。结论 BCS患者EPCs的数量越少、黏附和迁移能力降低越明显,Child-Pugh分级及血清CA125水平越高。  相似文献   

20.
目的:研究阿托伐他汀对冠状动脉慢血流(coronary slow flow,CSF)患者外周血内皮祖细胞(circulating endothelial progenitor cells,c EPCs)数量及功能的影响。方法 :选择确诊为CSF的患者61例,分为A组(30例)和B组(31例),B组仅给予常规药物治疗,A组在常规治疗的基础上给予阿托伐他汀40 mg治疗4周。研究CSF患者治疗前后c EPCs的数量及功能变化。结果:阿托伐他汀能显著增加CSF患者c EPCs的数量,同时也显著改善其c EPCs的黏附能力、迁移能力、增殖能力。结论:短期强化阿托伐他汀治疗可增加CSF患者c EPCs的数量且伴随着c EPCs功能的改善。  相似文献   

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