九香虫抗菌肽CcAMP1的分离纯化和抗菌活性检测

【目的】从药用昆虫九香虫 Coridius chinensis 中分离纯化抗菌肽,为进一步开发九香虫抗菌肽资源及深入挖掘九香虫的药用功能奠定基础。【方法】用大肠杆菌Escherichia coli 和金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 混合物作诱导源刺激九香虫产生抗菌肽,对血淋巴进行提取、凝胶过滤层析、固相萃取及反相色谱纯化,活性组分经质谱测定。对分离得到的这种抗菌肽进行人工合成,并进行抗菌活性检测。【结果】本研究获得一种九香虫抗菌肽CcAMP1,由17个氨基酸残基组成,分子量为1 997.37 u,带1个正电荷,表面有5个疏水氨基酸。对人工合成的CcAMP1进行抗菌活性检测表明,该抗菌肽与九香虫血淋巴一样对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌都有较好的抗菌活性,且对革兰氏阴性菌的抗菌活性更强。【结论】从九香虫中分离得到具有较强抗菌活性的阳离子抗菌肽CcAMP1,有较大的开发利用价值。     

榄绿粗叶木茎甲醇提取物体外抗菌活性研究

目的研究榄绿粗叶木茎甲醇提取物(以下简称MESLL)的抗菌作用及机理。方法体外抗菌实验,采用抑菌圈法及MIC法测定了金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌和大肠杆菌5种临床常见致病性菌株的抗菌活性。2结果 MESLL对金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌均有一定程度的抗菌活性,而对其它3种菌株则无明显抑制作用;结论 MESLL对金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌两种测试菌株具有一定抗菌活性。     

20种药用蕨类植物提取液抑菌试验研究

以20种药用蕨类植物提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、八叠球菌、变形杆菌、枯草杆菌、酵母菌进行抑菌活性研究,结果表明,20种蕨类提取液至少对一种供试微生物具有抑菌活性。样品蕨类醇提液比水提液具更强的抑菌活性,供试菌有阳性结果的水提液,平均抑菌圈直径10.12mm,而醇提液则为11.92mm。试验结果还表明,药用蕨类对枯草杆菌抗菌活性效果最明显,对酵母菌效果最差。不同蕨类植物其地上部分和地下部分抑菌效果不尽相同。     

海水小球藻抗菌蛋白的分离纯化及性质研究

海水小球藻(Chlorella pacifica)提取液经硫酸铵沉淀、DEAE-52离子交换层析和SephadexG-200凝胶过滤层析后分离纯化出1种抗菌蛋白.经SDS-PAGE测定,两个亚基的相对分子量分别为61 kD和70 kD;该抗菌蛋白对热稳定,氨基酸组成分析表明含17种氨基酸,其中谷氨酸的含量最高,其次为甘氨酸与天冬氨酸,胱氨酸的含量最低.在抗菌活性中,纯化的蛋白质对产黄青霉(Penicillium chrysogenum)和中华根霉(Rhizopus chinensis)有较强的抑制作用,对金黄色葡萄球菌(staphy lococcus aureus)和肠炎病病原菌(Ameromonas punctata)也有抑制作用,其抗真菌活性比抗细菌强.     

乳酸菌素Gassericin T基因的合成及其在大肠杆菌中的融合表达

目的:在大肠杆菌系统中表达有抗菌活性的乳酸菌素Gassericin T。方法:根据乳酸菌素Gassericin T的基因序列,把Gassericin T的结构基因gatA编码的氨基酸的密码子转换成大肠杆菌偏爱的形式;用人工合成的寡核苷酸片段,通过重叠PCR法扩增得到gatA片段(gat基因);将合成的gat基因插入pGEX-4T-1,构建pGEX-4T-1-gat融合表达载体,转化大肠杆菌DH5α株,IPTG诱导表达,经超声裂解后获得包涵体蛋白,经溶解、变性、复性处理后获得GST-Gassericin T融合蛋白;用琼脂扩散法测定其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、李斯特菌、枯草杆菌等的抗菌活性。结果与结论:采用pGEX-4T-1融合表达系统在大肠杆菌中表达了有活性的Gassericin T,融合蛋白以包涵体形式存在。复性的融合蛋白对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有明显的抑制作用,对李斯特菌的抑制作用不明显。     

赤楠叶不同极性提取物体外抗菌活性比较研究

对经过不同极性提取剂处理的赤楠叶提取物进行抗菌实验,结果表明：极性较大的提取剂所获得的提取物有较强的抗菌活性,其中水提物、水提醇沉物和醇提物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、普通变形杆菌、八叠球菌等均有较强的抑菌活性,以水提物尤为突出。     

芩暴红止咳口服液的体内外抗菌作用

本文通过大鼠的动物实验证明,芩暴红止咳口服液具有很强的抗菌消炎作用。同时采用氯化三苯四氮唑（TTC）快速试验方法对该药的体外抗菌作用进行了研究,结果表明芩暴红止咳口服液对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、卡他球菌、绿脓杆菌等具有较强的抗菌活性;对白色念珠菌、藤黄八叠球菌有抗菌活性;对枯草杆菌元抗菌活性。     

石花菜和海蒿子提取物抗菌活性初步研究

采用圆形纸片法,对石花菜和海蒿子粗提取物及萃取得到的不同极性组分进行抗菌实验。结果表明,石花菜和海蒿子均有不同程度的抗菌作用,海蒿子粗取物的抗细菌活性强于抗真菌活性,而石花菜乙醇提取物抗黑曲霉活性大于抗大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及枯草杆菌活性,其抑菌圈可达4 mm。     

鲑点石斑鱼皮肤抗菌活性蛋白的纯化及抗菌活性(英文）

近年来在多种生物体中都发现有抗菌活性蛋白和多肽。由于其具有生物化学多样性,抗病毒、微生物、真菌、原生动物、肿瘤,促进伤口愈合等生物学活性,而引起研究者的极大兴趣。抗菌活性蛋白和多肽在动物的先天免疫中具有重要作用,它们直接作用于细菌,并将其杀死。鲑点石斑鱼(Epinephelusfario)是中国南方水产养殖中重要的海水鱼。近年来,由于细菌和病毒引发的病害造成鲑点石斑鱼大量死亡,但其抗菌活性蛋白及多肽目前还未见报道。本研究发现鲑点石斑鱼皮肤具有抗菌活性成分,鲑点石斑鱼皮肤匀浆物经胰蛋白酶水解后抗菌活性丧失,说明该活性是由蛋白质引起的。经离子交换层析及凝胶过滤层析,从鲑点石斑鱼皮肤中分离纯化到抗菌活性蛋白(Efap)。SDS-PAGE显示,Efap为单链蛋白,分子量约41kD。该成分能同时抑制革兰氏阳性菌,如金黄色葡萄球菌、滕黄微球菌、枯草牙胞杆菌和革兰氏阴性菌,如溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、多杀性巴氏杆菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌。革兰氏阴性菌中,溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌和多杀性巴氏杆菌对Efap较敏感,MIC<20mol/L,其他3种菌敏感性较差,MIC>20mol/L。另外,Efap显示出较强的抗金黄色葡萄球菌的活性,MIC为5—10mol/L。Efap的广谱抗菌性,说明其在鲑点石斑鱼免疫防御中具有一定的作用。     

九香虫血淋巴及其纯化蛋白抑菌活性的研究

对九香虫AsporgopuschinensisDallas血淋巴及其血淋巴蛋白质分离物的抗菌活性进行了研究,抗菌活性检测指示菌为大肠杆菌Escherichiacoli和金黄色葡萄球菌Staphilocalliesacereus。测定结果表明,九香虫血淋巴及其离心上清液都具有明显的抗菌活性。用凝胶过滤法从血淋巴蛋白分离提纯获得一种小分子肽,SDS PAGE电泳为单一带,分子量约为1～1 4 4kD。该小分子蛋白对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有抑菌作用,与血淋巴对2种细菌的抗菌性一致,表明其是九香虫血淋巴中具抗菌作用的主要物质之一。     

钝节拟丽藻抑菌作用及提取条件的优化

研究了钝节拟丽藻提取液的抑菌作用,优化了提取条件。结果表明,钝节拟丽藻乙醇提取液对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌有明显抑制作用,对大肠杆菌、变形杆菌、酿酒酵母和黄曲霉无明显抑制作用。通过抑菌圈直径方法,对影响钝节拟丽藻抑菌物质提取的条件进行了单因素试验。正交试验中的固液比和提取温度影响样品提取液对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑菌效果,作用极显著,其交互作用对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑菌效果作用显著。最佳提取条件为固液比1∶20,提取温度85℃,50%乙醇溶剂,回流提取6 h。     

金樱子茎提取物体外抑菌活性研究

采用纸片扩散法和试管稀释法,研究金樱子茎不同溶剂粗提取物对临床常见病原细菌的抑菌活性。结果表明,金樱子茎水提取物对绿脓杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌无抑菌活性;对伤寒杆菌的最低抑菌浓度（MIC）为20 mg（生药）/mL;对金黄色葡萄球菌的MIC为10 mg（生药）/mL。金樱子茎75%乙醇提取物对绿脓杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌无抑菌活性;对金黄色葡萄球菌MIC为10 mg（生药）/mL。金樱子茎乙酸乙酯、氯仿、石油醚提取物对绿脓杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌无抑菌活性。     

家蝇Phormicin A多克隆抗体的制备及效价检测

家蝇Phormicin作为防御素家族的成员,是一类具有广普抗菌活性的抗菌肽.本研究采用原核表达法表达并纯化获得了家蝇PhormicinA蛋白.将家蝇Phormicin A原核表达蛋白与完全佐剂和不完全佐剂乳化混匀,先后免疫新西兰白兔获得其多克隆抗体.通过原核表达蛋白中和吸附实验,以及Western blot实验验证了抗体的特异性.进一步用金黄色葡萄球菌刺激家蝇三龄幼虫样品,进行内源性验证并测定抗体的效价.结果 显示,该多克隆抗体既可以识别家蝇Phormicin A原核表达蛋白,也可以识别金黄色葡萄球菌刺激家蝇三龄幼虫产生的内源性Phormicin A蛋白.本研究为进一步探索Phormicin在家蝇天然免疫和防御中的机制等后续工作打下基础.     

重组鹅β-防御素12蛋白的原核表达及生物学特性

【目的】研究重组鹅β-防御素12蛋白的原核表达并探究其生物学特性。【方法】采用His标签蛋白原核表达系统,将鹅防御素12(Av BD12)基因亚克隆到表达载体p Pro EX-HTa上,构建重组表达质粒。将重组表达质粒转化到大肠杆菌Rosseta感受态中,用IPTG进行诱导表达,并对该重组蛋白进行纯化。进一步采用菌落计数法测定其体外抗菌活性和盐离子稳定性。【结果】经Tricine-SDS-PAGE电泳分析,诱导表达的鹅Av BD12重组蛋白分子量约为12 k D,大部分以包涵体形式存在。该重组蛋白对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、四联球菌、枯草芽孢杆菌均具有抗菌活性,高浓度盐离子显著抑制重组蛋白的抗菌活性。此外,该重组蛋白对鸡红细胞没有溶血活性。【结论】该重组蛋白具有广谱抗菌活性,高浓度盐离子显著降低其抗菌活性,且该重组蛋白不具有溶解鸡红细胞的活性。     

血流感染葡萄球菌菌种分布及耐药特性分析

目的了解血流感染中葡萄球菌的菌种分布及其耐药特性,以指导临床合理使用抗菌药物。方法回顾性分析南昌大学第二附属医院2013年1月至2013年8月期间临床各科室送检的血培养标本中葡萄球菌的菌种分布和耐药特性。采用BACT/ALERT 3D全自动血培养仪进行培养,VITEK2-compact全自动细菌分析仪进行菌种鉴定和药敏试验。WHONET 5.6软件分析数据。结果共分离获得176株葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌24株,占13.6%;路邓葡萄球菌1株,占0.6%;凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)151株,占85.8%,人葡萄球菌53株、溶血葡萄球菌32株、表皮葡萄球菌23株及头状葡萄球菌15株居前四位。最常见的葡萄球菌分别为人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林CNS(MRCNS)检出率分别为29.2%和85.4%,对青霉素耐药率均100.0%,磺胺甲噁唑对MRSA(耐药率仅14.3%)有较强的体外抗菌活性,利福平对MRCNS(耐药率仅18.2%)有较强的体外抗菌活性,均未发现耐万古霉素、利奈唑胺和替加环素的菌株。结论葡萄球菌引起的血流感染菌种分布较广,以人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌为主,人葡萄球菌较金黄色葡萄球菌耐药及多重耐药性严重,但均仍对万古霉素、利奈唑胺、替加环素保持高度敏感。     

一种兔肠源抗菌蛋白分离纯化及其抑菌活性

目的探讨兔肠道组织抗菌有效成分的组成及其性质。方法将新鲜兔小肠组织匀浆,经高温处理,乙酸浸提后,检测抗菌活性,再经Sephadex G100和Sephadex G75凝胶柱过滤层析,收集具有抗菌活性的蛋白组分,经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色后,为一条蛋白带,其相对分子质量约为43×103。用琼脂糖弥散法和活菌计数实验检测纯化物对9株细菌的抑菌作用。结果分离得到一种纯的兔肠源抗菌蛋白,纯化的兔肠源抗菌蛋白对9株细菌的均有明显的抑菌作用,杀菌率介于78%与98%之间,显示了较强的抗菌活性。结论初步显示了兔肠源抗菌蛋白在细菌性疫病的防治方面的应用前景。     

重组人β防御素-3抗菌活性及其影响因素研究

采用琼脂扩散法对重组人β防御素-3(rhβD-3)的抗菌谱、最小抑菌浓度及其抗菌活性影响因素进行研究。结果表明,rhβD-3对G~+、G~-及真菌均有抑制作用。rhβD-3对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为15μg/mL,对大肠杆菌的最小抑菌浓度为20μg/mL。对rhβD-3的抗菌活性影响因素进行测定,结果表明rhβD-3在pH6.0时抗菌活性最高;而且在-70℃~100℃条件下仍具有较高的抗菌活性;在高于100 mmol/L NaCl浓度下,抗菌活性随着NaCl浓度的升高而降低。     

溶液环境对百日咳疫苗分离纯化的影响

针对百日咳疫苗在低盐条件下不稳定, 容易聚集而导致层析过程收率低、分离度低的难题, 实验中选择脲作为稳定剂来改善百日咳疫苗所处的溶液环境, 并采用离子交换层析和凝胶过滤层析进行百日咳疫苗的分离纯化, 通过ELISA抗原活性测定和还原性SDS-PAGE等方法研究了脲对百日咳疫苗分离纯化的影响。结果表明, 在流动相中加入 2 mol/L脲作为稳定剂, 能显著提高离子交换层析和凝胶过滤层析中的PT和FHA活性回收率、凝胶过滤层析的分离度、PT和FHA的纯度。这些结果对百日咳疫苗的分离纯化和层析工艺优化提供了重要的依据和参考。     

片球菌素PediocinPA-1抑菌活性检测

目的检测通过基因工程获得的片球菌素Pediocin PA-1抑菌活性。方法采用琼脂扩散法检测片球菌素Pediocin PA-1对单核细胞增生李斯特杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、沙门菌和大肠埃希菌O157的抑菌活性。结果片球菌素Pediocin PA-1对单核细胞增生李斯特杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌O157等均有抑制作用。其中对单核细胞增生李斯特杆菌、沙门菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用效果明显,对铜绿假单胞菌有微弱的抑制作用。结论通过基因工程获得的片球菌素Pediocin PA-1具有抑菌活性。     

链霉菌H03发酵液提取物的抗菌活性研究

以常见的病原细菌和植物病原真菌为指示菌研究了链霉菌发酵液提取物的抗菌活性,测定了发酵液提取物的抗菌谱和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:与青霉素、链霉素相比,该菌发酵液提取物的抗菌范围更广,对植物病原真菌棉花黄萎病菌、苹果轮纹病菌、小麦赤霉病菌、油菜菌核病菌、黄瓜炭疽病菌、甜菜褐斑病菌、稻瘟病菌,以及常见病原细菌大肠杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌都具有明显的抑制作用。利用试管二倍稀释法测定发酵液提取物对上述诸菌的最小抑菌浓度(MIC),结果分别为0.125、0.062 5、0.125、0.25、0.015、0.03、0.015、0.015、0.03、0.250、.015 mg/mL。其中对植物病原真菌中的黄瓜炭疽病菌、甜菜褐斑病菌、稻瘟病菌,以及病原细菌中的大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌抑制效果最佳。将发酵液提取物置于100℃下加热处理10 min后,其对金黄色葡萄球菌的抑菌活性不变,说明该发酵液提取物具有较好的热稳定性。