细胞色素C对HL-60细胞凋亡作用及其与相关bcl-2、bax基因的关系

为了探讨细胞色素C在体外作用于HL-60细胞时细胞发生的变化及其相关凋亡基因的bcl-2、bax表达变化的机制，用不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞24小时，然后分别用肌检测细胞色素C对HL-60细胞的抑制率；应用光学显微镜、荧光显微镜观察HL-60细胞形态的变化；用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的变化；用DNA凝胶电泳检测HL-60细胞的凋亡；用RT—PCR检测bcl-2、bax基因的表达的变化。结果表明：在细胞色素C浓度为0—150mg／L时，细胞抑制率随着浓度的增加而增加；当细胞色素C浓度在0—37．5mg／L时，细胞凋亡率逐渐增加，可见典型的凋亡细胞和明显DNA梯形条带，同时，在该浓度范围内bcl-2表达逐渐减少，而bax表达逐渐增加；当细胞色素C浓度大于37．5mg／L时，细胞凋亡率增加不明显，但细胞出现坏死。结论：细胞色素C能诱导HL-60细胞发生凋亡，细胞色素C对细胞周期的作用是将细胞阻滞于G1期，并且细胞凋亡率、bcl-2、bax基因的表达的变化与细胞色素C浓度呈一定的量效依赖关系，细胞色素C诱导HL-60凋亡可能与bax的激活和bcl-2的抑制有关。     

藏红花素对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制

本研究探讨藏红花素(crocin)对人急性白血病细胞HL-60增殖抑制的影响及其促凋亡机制。测定HL-60细胞在不同浓度crocin作用后的生长曲线,用荧光显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测bcl-2、bax基因的表达。结果表明,不同浓度crocin作用后HL-60细胞生长明显受抑制,并呈现出剂量时间依赖关系。在0-5mg/ml范围内HL-60细胞凋亡率逐渐升高。当crocin浓度高于5mg/ml时,HL-60细胞凋亡率并没有升高,反而下降,表现为细胞坏死。流式细胞术检测结果显示,细胞周期被阻滞于G0/G1,且在5mg/ml时阻滞作用最明显。RT-PCR结果显示,bcl-2基因表达明显下调,bax基因表达上调。结论:crocin可诱导HL-60细胞凋亡,并对细胞周期起阻滞作用,其作用机制可能与bcl-2基因表达抑制及bax基因表达激活有关。     

白花蛇舌草注射液抑制HL-60细胞增殖及作用机理研究

本研究通过对白花蛇舌草注射液（hedyotic diffusa willd Injection，HDI）在体外抑制人白血病细胞株（HL-60）增殖作用的观察，以探讨HDI用于治疗白血病患者的作用机制。以白血病HL-60细胞株为靶细胞，采用MTT法观察不同浓度的HDI对HL-60细胞增殖的影响；用流式细胞术和DNA Ladder观察细胞凋亡、以及粒系细胞分化的表面标志（CD33、CD15）表达；RT—PCR检测HDI对survivin、bcl-2基因表达的影响。结果表明：低浓度的HDI（1．56ml／L）对HL-60细胞增殖无明显抑制作用（P〉0．05），但当HDI浓度提高至3．12—12．5ml／L时，细胞则出现明显的增殖抑制，且随浓度增加抑制作用增强（P〈0．05或P〈0．01）。Annexin-V／PI双参数和DNA Ladder检测发现，HL-60细胞经不同浓度HDI诱导24、48、72小时后均未出现典型的凋亡现象，而粒系细胞表面标志CD15的表达，经不同浓度HDI诱导1周后均显著增高，CD33表达无显著变化。HL-60经HDI（6．25ml／L）处理2周后，survivin、bcl-2基因表达无明显变化；当处理3周后，survivin、bcl-2基因表达均明显低于未经处理过的细胞，分别低于60％和44％？结论：白花蛇舌草注射液在一定浓度下能够直接抑制白血病细胞增殖，其作用机制可能是通过诱导细胞分化、凋亡。     

阿霉素增强抗人DR5单克隆抗体mDRA-6诱导HL-60细胞凋亡的作用

目的观察抗死亡受体5（DR5）单克隆抗体（单抗）mDRA-6与阿霉素（Adr）对HL-60细胞的协同杀伤作用。方法用DR5蛋白免疫BALB／c小鼠，融合筛选抗DR5杂交瘤细胞，制备抗人DR5单抗mDRA-6；流式细胞术测定Adr对HL-60细胞表面DR5表达的影响；荧光显微镜下观察mDRA-6与Adr协同作用下HL-60细胞的形态变化；MTT法测定1μg／ml Adr与不同浓度的mDRA-6对HL-60细胞存活的影响；琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6与Adr联合对HL-60细胞DNA片断化的影响。结果Adr诱导HL-60细胞表面DR5表达，mDRA-6作用后HL-60细胞出现染色质浓缩、断裂，细胞出芽，凋亡小体形成，mDRA-6与Adr联用细胞形态变化更明显；mDRA-6与Adr对HL-60细胞具有明显的协同杀伤作用，20ng／ml的mDRA-6作用HL-60细胞10h，细胞死亡率为9．32％，1μg／mlAdr作用HL-60细胞10h，细胞死亡率为17.47％，20ng／ml mDRA-6联合1μg／mlAdr，可使HL-60细胞死亡率增至65．06％；20μg／ml mDRA-6与1μg／mlAdr联合作用于HL-60细胞3h，DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯形”条带。结论抗DR5单抗mDRA-6与Adr对HL-60细胞具有强大的协同杀伤作用。     

尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡机制影响的研究

为了研究尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡机制的影响，采用琼脂糖凝胶电泳检测其DNA凋亡带，用细胞免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达。结果表明，实验组自培养8小时起琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA梯形凋亡带。Bcl-2蛋白表达在各实验组随培养时间延长逐渐下降，而Bax蛋白的表达则逐渐增加，Bcl-2／Bax比值逐渐下降，8小时就与对照组出现差异（P〈0.05）。结论：尼莫地平及阿糖胞苷均能促进HL-60细胞凋亡，诱导其凋亡的机制与下调bcl-2及上调bax基因的蛋白表达有关。尼莫地平能加强阿糖胞苷促进HL-60细胞凋亡，其机制与协同下调bcl-2的表达有关。     

基因fas的表达对细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的影响

本研究观察fas基因表达的变化对细胞色素C诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响，并探讨细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的机制。将体外培养的HL-60细胞分成6组，细胞色素C终浓度分别为0（对照组）、9．375、18．75、37．5、75、150mg／L，用流式细胞仪检测细胞色素C对HL-60细胞的凋亡作用．用RT—PCR和Westernblot检测以凋亡为主的HL-60细胞中fas的表达水平。结果表明：细胞色素C终浓度分别为0、9．375、18．75及37。5mg／L时HL-60细胞是以凋亡效应为主，fas基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而增高，当细胞色素C浓度为75mg／L、150mg／L时，HL-60细胞是以坏死效应为主。结论：细胞色素C能够上调fasmRNA及其蛋白的表达，从而可以诱导HL-60细胞的凋亡。     

c-myc在大黄素抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡中的作用

目的研究中药大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的影响及探讨c—myc基因在其中的作用。方法应用MTT法绘制细胞生长曲线；细胞集落培养观察大黄素对HL-60细胞增殖的影响；DNA倍体分析、线粒体细胞凋亡检测法、末端缺失原位标记(TUNEL)法及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡；RT—PCR及Western blot检测大黄素作用前后c—myc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果大黄素能明显抑制HL-60细胞增殖，半数抑制浓度(IC50)约为20μmol／L；DNA片段化、亚G1峰(凋亡峰)的检出及线粒体细胞凋亡检测等证实大黄素能有效诱导HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率与药物作用浓度呈正相关。大黄素与HL-60细胞作用后c—myc基因mRNA及蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖，诱导其凋亡；c—myc基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

塞来西布对HL-60细胞增殖、凋亡及表达VEGF影响的体外研究

目的研究塞来西布（Celecoxib）对急性髓系细胞白血病（AML）HL-60细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制。方法以不同浓度的Celecoxib作用于体外培养的HL-60细胞,用MTT法检测细胞生长抑制率;用流式细胞仪分析凋亡细胞的百分率和细胞周期变化;QRT—PCR法检测VEGF表达水平。结果Celeeoxib以浓度依赖性方式有效地抑制HL-60细胞增殖,Celecoxib增加G0／G1期HL-60细胞百分率,降低S、G2期HL-60细胞百分率;Celecoxib能以浓度依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡。当Celecoxib浓度大于40μmol／L时,随着Celecoxib浓度增高,HL-60细胞VEGF-mRNA的表达逐渐降低,呈浓度依赖性变化。结论Celecoxib对HL-60细胞具有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,增殖抑制可能在于阻断了细胞周期的进行,降低VEGF活性可能是其诱导凋亡重要作用机制之一。     

细胞色素C对阿糖胞苷诱导白血病细胞凋亡的影响

【目的】探讨细胞色素C（CytC）对小剂量阿糖胞苷（LD-Ara—C）诱导白血病细胞凋亡的影响。【方法】用HL-60白血病细胞株进行传代培养,MTT试验检测Ara—c和Cyt C不同药物浓度对白血病细胞增殖的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。【结果】12μg／ml浓度以下的CytC具有促进HL-60细胞增殖的作用,不同浓度的CytC干预后HL-60细胞凋亡率均低于干预前（P〈0．01）。联合应用CytC和LD-Ara—C,HL-60细胞凋亡率明显高于单用LD-Ara—C组（P〈0．01）。【结论】外源性CytC在12μg／ml浓度以下时仅能促进白血病细胞增殖,联合应用CytC和LD-Ara—C可增强LD-Ara—C诱导白血病细胞凋亡的作用。     

黄芩苷对耐阿霉素白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响

本研究探讨中药黄芩苷对耐阿霉素人髓系白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响。应用MTT法绘制细胞生长曲线,观察黄芩苷对HL-60／ADR细胞增殖的影响;应用Annexin V FITC／PI双染流式细胞术、DNA片段化、TdT酶介导的原位缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡;RT—PCR检测黄芩苷作用不同时段后c-myc、bcl-2等凋亡相关基因mRNA的表达水平;Western blot法检测凋亡及信号通路相关蛋白C—MYC、BCL-2、pro—caspase-3、PARP、BAD等的表达变化。结果表明,黄芩苷能明显抑制HL-60／ADR细胞增殖所测得的细胞倍增时间为48小时,半数抑制率为28μmol;Annexin V FITC／PI法检测到早期凋亡细胞、DNA片段化,TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈浓度依赖性（20、40、80μmol／L）。黄芩苷作用HL-60／ADR细胞不同时段（12、24、48小时）后C-myc、bcl-2基因mRNA的表达,并随着作用时间的延长而逐渐减弱,C—MYC、BCL-2、procaspase-3、PARP（116kD）蛋白的表达逐渐下降,PARP（85kD）及BAD蛋白表达逐渐增强,呈时间依赖性。结论：黄芩苷能有效抑制HL-60／ADR细胞增殖,诱导其凋亡,上述凋亡相关基因及信号通路相关蛋白可能参与了黄芩苷抑制HL-60／ADR细胞增殖和诱导凋亡的过程：     

柴胡皂甙d上调HL-60细胞糖皮质激素受体mRNA并诱导细胞凋亡

目的　观察柴胡皂甙d(SSd)对HL 6 0细胞糖皮质激素受体 (GR)mRNA表达的调节作用以及对细胞凋亡的影响。方法　选用从柴胡中提取的单体成分SSd ,以3 H 胸腺嘧啶掺入法观察SSd对细胞生长的抑制作用 ,DNA凝胶电泳及流式细胞术分析细胞凋亡 ,用Northernblot分析GRmRNA的改变。结果　经SSd作用后 ,HL 6 0细胞3 H 胸腺嘧啶掺入率明显降低 ,呈时间和剂量依赖关系 ,10 μg/mlSSd处理 48小时作用最明显 ,6 0小时时出现典型的DNA片段梯形带 ,流式细胞仪分析细胞阻滞于G1期并出现凋亡峰 ;GRmRNA表达增加。结论　SSd可上调HL 6 0细胞GRmRNA表达并诱导细胞凋亡。     

去铁胺激活半胱天冬酶3诱导HL-60凋亡

为了研究铁螯合剂-去铁胺（deferoxamine,DFO）诱导人白血病细胞株HL-60凋亡时半胱天冬酶-3（caspase-3）活性的变化并探讨DFO诱导凋亡的可能机制.HL-60细胞经HE染色,在光学显微镜下观察其形态结构变化,用TUNEL法和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测caspase-3活性,原位杂交法检测凋亡基因bax的转录水平.结果表明,HL-60经去铁胺处理后,典型的细胞形态改变、DNA末端原位标记和FCM检测均证实DFO可诱导细胞凋亡,凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖性.在DFO诱导HL-60凋亡过程中,caspase-3活性明显升高,凋亡基因bax的转录水平均较对照组增高（P＜0.05）.caspase广谱抑制剂Z-AVD可明显降低DFO诱导的细胞凋亡率.结论：DFO通过激活caspase-3和增强bax活性而诱导HL-60凋亡.     

In vitro study of the apoptosis effect of DNR on HL-60 cells and its relationship with ROS, CER and NF-kappaB]

OBJECTIVE: To study the effect of DNR on HL-60 cells apoptosis in vitro and the related mechanism. METHODS: The apoptosis of HL-60 was observed by microscope, flow cytometry (FCM) and DNA electrophoresis and various apoptosis-associated proteins expression by immunocytochemistry (IC) and FCM assays; the changes of apoptosis in HL-60 cells treated with DNR or suppressors PDTC or FB1 were also observed. RESULTS: When treated with 0.2 approximately 2.0 micro mol/L DNR, the percentage of apoptotic HL-60 cells increased with the dose increasing and the time extending, and the typical apoptotic cells and the appearance of apoptotic DNA ladder were observed. It was shown that after treatment with 1 micro mol/L DNR, the fluorescence intensity index (FI) of both bcl-2 and c-myc in HL-60 cells decreased, the FI of Bax, caspase-3 increased at 2 h, but decreased at 5 h, the FI of NF-kappaB increased. After adding PDTC, the apoptosis percentage of HL-60 cells decreased, but FB1 didn't present these effect. CONCLUSION: It suggested from the results that at certain concentration, DNR can induce the apoptosis of HL-60 cells in vitro. The mechanism was supposed by suppressing the expression of bcl-2 and c-myc and activating the expression of Bax and caspase-3, NF-kappaB and ROS had the marked correlation with the apoptosis process, but the ceramide synthase wasn't associated with it.     

新生牛肝再生刺激素对HL-60细胞DNA的损伤作用

本研究旨在观察分子量小于10kD的肝再生刺激素(hepatocyte growth-promoting substance，HGS)在体外液体培养中对HL-60细胞增殖的影响，并探讨其作用机制。实验分为3组：22．5μg/ml组、40μg/ml组和对照组，用胎盘蓝染色法计数HL-60细胞生长曲线，观察HGS对HL-60细胞增殖的影响；应用单细胞凝胶电泳法比较不同剂量HGS引起HL-60细胞的DNA损伤情况；采用基因组DNA体外电泳技术，观察HL-60细胞在HGS作用后凋亡的DNA片段断裂情况。结果表明，22．5μg/ml和40μg/ml 2个组在2天培养后均观察到HL-60细胞的增殖受到抑制；基因组DNA体外电泳结果证明，在上述2个剂量的组内，出现了明显的DNA梯形条带，并于培养第2天有HL-60细胞凋亡；单细胞凝胶电泳(SEGE)显示，HL-60细胞在加入HGS后出现有慧尾的细胞数量增多。结论：HGS能够抑制白血病细胞系HL-60细胞的增殖，并通过诱导凋亡导致DNA损伤来杀伤对HL-60细胞。     

人巨细胞病毒体外感染诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡

本研究探讨人巨细胞病毒（hCMV）体外感染是否可引起早幼粒细胞的增殖、分化抑制、诱导其凋亡，并探讨其作用机制。采用hCMV AD169株体外感染早幼粒细胞白血病细胞HL-60，用PCR检测hCMV DNA，用形态学观察、DNA片段化检测及Annexin V／PI染色流式细胞仪检测等方法分析细胞凋亡情况。结果表明：hCMV AD169株在体外能明显抑制早幼粒细胞白血病细胞HL-60的生长，抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系；PCR检测发现病毒感染组HL-60细胞中有hCMV IEA的表达；形态学观察和DNA片段化检测证实了细胞凋亡的存在；流式细胞仪检测结果显示HL-60细胞凋亡率随培养液中病毒浓度的加大和感染时间的延长而增高，二者呈依赖关系。结论：hCMV AD169株在体外可直接感染HL-60细胞；hCMV AD169株在体外感染HL-60细胞后，可抑制HL-60细胞的分化和增殖；hCMV AD169株体外感染HL-60细胞后可诱导其凋亡，且凋亡率与病毒剂量及作用时间呈依赖性关系。     

阿霉素对K562细胞Gfi-1表达的影响及其与相关凋亡基因关系的研究

本研究探讨阿霉素体外作用于K562细胞的细胞效应及癌基因Gfi-1和相关凋亡基因表达变化的机制。用不同浓度的阿霉素作用于K562细胞24小时,然后应用DNA电泳和流式细胞术检测K562细胞凋亡;用RT-PCR、流式细胞术检测Gfi-1、Bcl-2、bax基因和蛋白表达的变化。结果表明：当阿霉素浓度在0、0.5、2.0mg/L作用K562细胞24小时,细胞凋亡增加,可见典型的DNA断裂电泳条带;同时,当ADM浓度自0.5增为2.0mg/L时,Gfi-1表达减少,bax表达增加;Bcl-2表达在ADM0.5-2.0mg/L之间变化不明显,mRNA及蛋白水平均无统计学差异;当阿霉素浓度大于2.0mg/L时,细胞凋亡率并不增加,而是下降,且出现细胞坏死。结论：一定浓度阿霉素能诱导K562细胞凋亡,细胞凋亡率表达的变化与阿霉素浓度呈一定的量效依赖关系,阿霉素诱导K562细胞凋亡可能与抑制Gfi-1基因的表达和激活bax基因的表达有一定的关系。     

c-myc小干扰RNA诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

本研究探讨c-myc小干扰RNA对白血病细胞系HL-60诱导凋亡的作用。将体外合成的siRNA转染HL-60细胞,观察形态学变化,应用MTT法绘制细胞生长曲线,用细胞集落培养观察c-mycsiRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用DNA片段化分析细胞的凋亡,RT—PCR及Western blot检测c-mycsiRNA作用前后Comyc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果表明：ComycsiRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度（IC50）约为150nmol／L;DNA片段化的检出证实C-mycsiRNA能有效诱导HL-60细胞调亡,凋亡率与药物作用时间呈正相关。C-mycsiRNA与HL-60细胞作用后C-myc基因和蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论：C-mycsiRNA能有效抑制HL-60细胞增殖,降低C-myc基因和蛋白的表达,诱导其凋亡。