糖基化终产物抗血清的制备及应用

以糖基化终产物的免疫学检测方法，检测血清或组织ＡＧＥｓ水平，为深入研究糖尿病并发症的机制打下基础。方法用纯化的ＡＧＥｓ－牛血清白蛋白免疫新西兰白兔，获取ＡＧＥｓ抗血清，用酶联免疫吸附法测定其效价，鉴定特异性；并用以检测糖尿病小鼠和糖尿病患者血清ＡＧＥｓ水平。     

内毒素血症患者的血浆能增加血管内皮细胞通透性

为研究脓毒症时血管通透性增高的机制，最近荷兰学者观察了内毒素血症患者的血浆对体外培养单层血管内皮细胞的作用。8名健康志愿者静脉注射大肠杆菌脂多糖（LPS）2ng／kg，随后定点检测血浆中反映血管通透性增高的炎症介质浓度。分别采集注射LPS后2h和4h血浆，与体外培养的人脐静脉内皮细胞共同温育。将荧光标记牛血清白蛋白分别用处理过的内皮细胞和半透膜滤过，计算滤过液中牛血清白蛋白的浓度比。观察培养基中单层内皮细胞通透性的变化。     

软脂酸钠法纯化牛血清白蛋白的工艺研究

目的研究软脂酸钠法纯化牛血清白蛋白的最佳工艺。方法以牛血清白蛋白提取率为考察指标,通过正交试验和单因素试验,研究软脂酸钠加入时的温度和加入量、血清稀释度、放置时间及水浴时间对白蛋白提取率的影响,并分析产品质量。结果该工艺白蛋白提取率达41.1%,白蛋白含量达95.0%以上。血清稀释度对白蛋白提取率影响大,放置时间次之。该法纯化牛血清白蛋白的条件为软脂酸钠加入时的温度为70℃、加入量1∶2/3,血清稀释度为1∶1,放置时间为1 h,水浴时间为1.5 h。结论该工艺是实现高效、快速纯化牛血清白蛋白的有效方法。     

壳聚糖微球/纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸复合支架制备及其蛋白缓释效果:与单纯纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸支架、壳聚糖微球的比较

背景:骨组织工程骨构建中如何使生长因子持续高效发挥作用是影响成骨速度和质量的关键,现多以各种材料的微球或支架作为缓释载体,但缓释作用有待提高.目的:实验拟制备壳聚糖微球,然后复合到纳米羟基磷灰石/聚乳酸羟基乙酸支架上,形成双重缓释作用,并测量对牛血清白蛋白的释放效果.方法:以牛血清白蛋白为模型药物,采用乳化交联法制备壳聚糖微球.将微球与纳米羟基磷灰石、聚乳酸-羟基乙酸按一定比例混合,以冰粒子为致孔剂,采用冷冻干燥法制备壳聚糖微球,纳米羟基磷灰石,聚乳酸-羟基乙酸复合支架.利用扫描电镜、激光粒度分析仪、压泵仪和力学性能测试仪检测复合支架的形态性能,考察药物在缓释支架上的体外释放规律.结果与结论:所制备的壳聚糖微球形态良好,呈规则圆球形,粒径集中分布在20～40 μum,微球药物包封率为86.5%,载药量为0.8%,随牛血清白蛋白初始用量的增加,载药量可升高至2.6%,但包封率下降至74.1%.壳聚糖微球能均匀分布在聚乳酸-羟基乙酸支架上,形成壳聚糖微球,纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸复合支架,孔径为1 00-400 μm,孔隙率>80%,压缩强度为1.1～2.3 MPa,10周降解率为26.5%.单纯纳米羟基磷灰石,聚乳酸-羟基乙酸支架其牛血清白蛋白在36 h累积释放量达85%以上,壳聚糖微球其牛血清白蛋白10 d累积释放量为33.6%,复合支架其牛血清白蛋白40 d累积释放量为81.5%.结果证实包埋壳聚糖微球的纳米羟基磷灰石,聚乳酸-羟基乙酸支架其压缩强度和降解速率合适,对蛋白类药物具有良好的缓释作用,有望作为组织工程的支架材料和生长因子的缓释载体.     

抗BSA多克隆抗体和单克隆抗体筛选及双抗体夹心ELISA法的建立与验证

目的建立高灵敏度检测生物制品中牛血清白蛋白（BSA）残留量的双抗体夹心ELISA法并验证。方法筛选高亲和力、高纯度的抗BSA单克隆抗体作为包被抗体,高纯度、高效价、特异性高的兔抗BSA多克隆抗体为酶标抗体,采用双抗体夹心ELISA法,以系列含量的BSA标准品作为标准,制作标准曲线,对样品中所含BSA进行定量检测;并对该方法各项指标进行验证。结果优化确定了ELISA试验条件,回归曲线相关系数r≥0．99;对BSA最低检测限为1．25ng／ml;准确性试验回收率为90％-106％;精密性变异系数为6．1％～8．4％;与豚鼠、小鼠、兔、鸡血清均无交叉反应。结论该方法线性好,特异性强,灵敏度高,准确性、重复性和稳定性好。方法可靠,易于操作,适用于生物制品的BSA残留量定量检测。     

有机物对次氯酸钠消毒液杀菌效果的影响

目的观察有机物对次氯酸钠消毒液杀菌效果的影响。方法采用悬液定量杀菌试验方法,对悬液中牛血清白蛋白影响次氯酸钠消毒液杀菌效果进行了观察。结果用含有效氯100 mg/L的该次氯酸钠消毒液作用5min,对含3 g/L牛血清白蛋白悬液中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭对数值均﹥5.00;作用20 min,对含30 g/L牛血清白蛋白悬液中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭对数值均﹥5.00。用含有效氯300 mg/L和500 mg/L的该次氯酸钠消毒液作用10 min,可分别对含3 g/L和30 g/L牛血清白蛋白悬液中黑曲霉菌的杀灭对数值﹥4.00。用含有效氯300 mg/L的该次氯酸钠消毒液作用10 min,对含3 g/L牛血清白蛋白悬液中脊髓灰质炎病毒灭活对数值﹥4.00;对含30 g/L牛血清白蛋白悬液中脊髓灰质炎病毒达到相同灭活效果需要用含有效氯700 mg/L的该次氯酸钠消毒液作用20 min。结论有机物对次氯酸钠消毒液杀灭细菌繁殖体、黑曲霉菌和灭活脊髓灰质炎病毒均有一定影响。     

荷载角质细胞生长因子纳米微囊脱细胞真皮的制备、特性及其对表皮干细胞群生长的作用

目的:构建一种荷载有角质细胞生长因子且能控制释放的新型组织工程化皮肤。方法:实验于2006-03/12于中山大学附属第二医院干细胞研究中心及中山大学高分子研究所进行。①材料:角质细胞生长因子(CytolLAB公司),牛血清白蛋白(Amresco公司),聚乳酸-羟基乙酸共聚物(由中山大学高分子化学研究所合成,聚乳酸与聚羟基乙酸摩尔比为75∶25,相对分子质量为50000),脱细胞真皮(北京桀亚莱福生物技术有限公司)。②方法:采用超声乳化-溶剂挥发及低温干燥方法,将角质细胞生长因子以牛血清白蛋白作联接包裹在聚乳酸-羟基乙酸共聚物内制成纳米微囊,根据公式计算微囊成球率、载药量及包封率;将微囊溶解于二氯甲烷中,进行体外释放实验检测不同时间牛血清白蛋白吸光度,作出牛血清白蛋白释放曲线;将角质细胞生长因子纳米微囊交联于脱细胞真皮表面,制成荷载角质细胞生长因子纳米微囊脱细胞真皮(KGF-ADM),在扫描电镜下观察微囊形态、分布及其与脱细胞真皮连接情况;采用Ⅰ型胶原酶复合胰蛋白酶消化的方法,从门诊健康患者无菌手术切除的包皮组织中获取表皮细胞单细胞悬液,经免疫荧光检测,证实其中含表皮干细胞,将表皮干细胞群分别接种于KGF-ADM及聚乳酸-羟基乙酸共聚物上,于恒温箱中培养3d后,在扫描电镜下观察细胞形态、生长情况及其与材料连接情况。结果:①纳米微囊成球率为85%,载药量为17.3%,包封率为73.5%。②纳米微囊中牛血清白蛋白可以控制缓慢释放,其释放曲线显示初期释放速度较快(前5d累计释放约40%),后进入缓慢释放期(30d累计释放约75%)。③扫描电镜检测显示纳米微囊形态规则,在KGF-ADM表面分布均匀,与KGF-ADM联接良好,部分分布于KGF-ADM深面;表皮干细胞群在KGF-ADM上生长活跃,细胞形态良好,部分形成克隆。结论:采用该方法可成功构建荷载角质细胞生长因子纳米微囊的新型组织工程化皮肤。     

ELISA法检测肝病病人血清聚合白蛋白抗体

用聚合牛血清白蛋白(PBSA)与酶标记PBSA 建立了检测血清聚合白蛋白抗体(AAA)的双抗原夹心ELISA 技术,可排除HBV 聚合人白蛋白受体的干扰。肝病病人AAA 阳性率显著高于非肝病病人或正常人。     

ELISA法检测干细胞溶液中残留牛血清白蛋白含量

目的检测胎牛血清白蛋白（Fetalbovineserumalbumin,BsA）在脐带源间充质干细胞溶液的含量以代表异源蛋白在脐带源间充质干细胞溶液中的残留情况的适用性,并通过改进培养条件和增加清洗次数以进一步减少BSA等异源蛋白在脐带源间充质千细胞溶液内的残留。方法运用定量EuSA方法检测了脐带源间充质干细胞溶液中BSA的含量,并探讨改进培养方式与增加清洗次数等方法对干细胞溶液中残留的BSA含量的影响。结果对细胞清洗次数的增加能够有效减少BsA等异源蛋白的残留,并且采用无血清培养基进行干细胞培养是减少BSA等异源蛋白在干细胞溶液内残留量的最有效方法。结论通过检测BSA以代表异源蛋白在脐带源间充质干细胞溶液中残留情况具有适用性;并且增加清洗次数能有效地降低BSA的残留量;采用无血清培养基进行干细胞培养是减少BSA等异源蛋白在干细胞溶液内残留量的最有效方法。     

组织工程医疗产品标准化研究的进展

本文根据美国FDA和ASTMF04委员会研究的“组织工程医疗产品系列标准”以及其目前工作进展,阐述了目前比较成熟的重要标准的大致内容。并提出了在我国开展其系列标准研究的重要意义和构想,以及所做配套科研工作。按作者的意图,我国组织工程医疗产品的标准化研究涉及大量的配套科研力量和资源,是我国组织工程医疗产品研究领域的重要组成部分,希望引起从事该项产品开发和研究的科研人员们重视和投入。