用单克隆抗体ELISA研究和分析霍乱弧菌抗原结果

本文用ELISA以12株单克隆抗体(McAb)对55株EI Tor弧菌和用遗传学方法突变的28株霍乱弧菌的菌体抗原进行了研究,同时与四种常规分型方法进行对比试验。用12株McAb可将55株El Tor弧菌分成11种抗原决定簇和18个McAb型,将遗传学方法的突变株分成9种抗原决定簇和10个McAb型。其中一株McAb2B_1H_1F_3能识别所有55株EI Tor弧菌和大部分突变株霍乱弧菌,表明有种的特异性;其余11株McAb与各型霍乱弧菌的抗原反应,均有差异,与这些菌株的反应百分比各不相同(21.0％～100％),表明可能存在着亚型和亚群。文中着重讨论了用McAb研究分析抗原的重要意义和McAb用于诊断的价值。     

非OI群霍乱弧菌的多种毒素原性

<正> 非OI群霍乱弧菌已逐渐被认识到是一种人类腹泻病的重要病因。1982年日本卫生保健部公布非IO群霍乱弧菌是8个新确认的食物中毒病原菌之一。由于该菌引起之流行应向卫生保健部报告,由非OI群霍乱弧菌引起的胃肠炎表现出不同的临床症状。可以设想在非OI群霍乱弧菌发病机理中有多种致病因子参与。 有几种已知的非OI群霍乱弧菌毒素。它们是1)类似霍乱毒素的肠毒素(类CT毒素),2)难以与EI-Tor溶血素相区别的非OI溶血素。3)另一种溶血素(NAG-rT-DH),与副溶血弧菌的耐热直接溶血素相近似。4)耐热肠毒素(NAG-ST),与大肠杆菌之耐热肠毒素相似但不相同,     

工程菌产霍乱肠毒素B亚单位的纯化

 本实验室使霍乱肠毒素(CT)B亚单位基因在大肠杆菌中获得表达,并能分泌到胞外。将该菌株培养物上清经过超滤浓缩后,用偶联上霍乱毒素IgG的CNBr-Sepharose 4B进行亲和层析,得到表达产物霍乱毒素B亚单位纯蛋白。经PA-GE、HPLC及琼脂免疫扩散等方法鉴定证明该蛋白与天然霍乱肠毒素B亚单位完全相同。     

医药上的应用

疫苗 901010 突变型链球菌糖苷转移酶B与霍乱弧菌毒素B亚单位的基因融合肽[会,英]/Dertzbaugh. M.…∥Abstr. Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol.-1989, 89 meet.-128[译自DBA,1989,8(17),89-10133] 霍乱弧菌毒素B亚单位(ctxB)能激发宿主产生抗外源性蛋白抗原的免疫力。使用ctxB有助于研制口服亚单位疫苗。使用     

霍乱肠毒素的提取与纯化

霍乱是由于霍乱弧菌分泌一种类似酶样的肠毒素作用于小肠上皮而引起的局部细胞代谢紊乱的急性肠遗传染病。霍乱肠毒素的概念是自Koch氏发现霍乱弧菌一百年来的一个重大进展。近年国内一些单位已开展提取工作,所化人力物力甚大,经常一无所获,或产毒很低,在毒素的鉴定与纯化上均存在一定的困难。本文介绍国外霍乱肠毒素的提取与纯化的研究进展。一、肠毒素的发现和早期研究     

产肠毒素大肠杆菌亚单位疫苗3STaM(G)-K99和3STaM(S)-K99的纯化及其免疫学性质的研究

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致新生犊牛和仔猪腹泻的主要病原体之一.ETEC的毒力因子主要有黏附素(CFs)、不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST)三种.在前期研究中,利用PCR和酶切连接技术成功构建了两种ETEC亚单位疫苗3STaM (G)-K99和3STaM(S)-K99,且在大肠杆菌中获得高效表达.本研究利用阴离子交换层析纯化融合蛋白3STaM (G)-K99 and 3STaM(S)-K99,辅以弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,通过Elisa分析其免疫学性质,并利用肠毒素中和实验在昆明系乳鼠中评价其激发抗STa中和抗体的能力.实验结果表明:亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and 3STaM (S)-K99能够激发相对较高水平、可针对天然STa、ETEC和融合蛋白STa-K99的特异性抗体.其次,亚单位疫苗中STa突变体(STaM)组分的肠毒素活性显著降低,且其所激发的特异性抗体属于中和抗体,能有效抑制天然STa的肠毒素活性.亚单位疫苗3STaM (G)-K99 and 3STaM(S)-K99为研制预防ETEC感染性腹泻的多价基因工程疫苗提供了基本素材和理论指导.     

建国以来我国自建的一些细胞株或系(六)

分泌霍乱弧菌肠毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞系本细胞株建于1984年,并于同年6月通过鉴定。用霍乱弧菌(569B)肠毒素免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP_2/0小鼠骨髓瘤细胞融合。用PHA和ELTSA检测抗体并进行克隆化培养,建立了17株分泌霍乱弧菌肠毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞系。在体内外培     

免疫印染法在单克隆抗体鉴定中的应用

应用免疫印染法对单克隆抗体(McAb)进行鉴定的结果证明:1.4份精制破伤风类毒素的McAb为抗破伤风类毒素有效成分的抗体;2.6份LT McAb皆为抗LT中相当B亚单位的抗体;3.提纯的HB_sAgMcAb IgG为IgG₁亚类,不含IgM杂质;提纯的HB_sAg McAb IgM进一步确证为IgM,未检出常见的IgG杂质。     

大肠杆菌和霍乱弧菌肠毒素的进化起源

<正> 产毒性大肠杆菌(ETEC)产生两种不同型肠毒素:不耐热毒素(LT)和耐热毒素(ST)。LT具有与霍乱弧菌肠毒素(霍乱毒素,CT)共同的结构和功能的特征,因抗原决定簇不同又可分为两型(i)LTp,由使小猪致病的ETEC所产生。(ii)LTh,由使人致病的ETEC产生。STI也有两个     

抗人IgG-Fab(λ型)单克隆抗体和抗人IgG单克隆抗体的鉴定

淋巴细胞杂交瘤技术,已成为生物学、医学领域中十分重要的研究方法。Lowe指出抗人免疫球蛋白(Ig)单克隆抗体(McAb)的建立,不仅为鉴定Ig的类、亚类、型、亚型、亚群和基因型等提供有价值的试剂,而且还可以在决定簇的水平上进一步研究Ig的结构和功能。Lowe等曾对抗K和λ链的McAb性质进行了研究。李伟雄等建立了抗游离λ链的McAb(待发表)。本文对抗人IgG的Fab和抗人IgG的McAb进行了研究和探讨。一、材料和方法 1.抗原动物及免疫用人IgG经木瓜酶断链后提取的Fab片断蛋白作为免疫抗原。动     

自然杀伤细胞和甲状腺细胞膜上的神经节苷脂的研究

本文对NK效应细胞和甲状腺细胞膜上的神经节苷脂进行了研究,采用同位素标记法,免疫组织化学法和ELISA法。结果说明,霍乱肠毒素B亚单位预先处理,人或小鼠的NK效应细胞,就能抑制对相应靶细胞杀伤作用, 随着B亚单位浓度增大,抑制作用增强。霍乱肠毒素能与甲状腺细胞膜结合。神经节苷脂预先与TsAb(LATS-B)结合,就能完全阻断TsAb(LATS-B)与甲状腺细胞膜结合。体外实验(ELISA法)证实TsAb(LATS-B)能与混合的神经节苷脂相结合。但是,CT和TSH仅能部分阻断TsAb与甲状腺细胞膜相结合,说明TsAb(LATS-B)的膜受体是很复杂的,GM_1神经节苷脂不是唯一的成分。     

抗B型葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的研制及其鉴定

本文用纯化B型葡萄球菌肠毒素(SEB)免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,经筛选及克隆化共获6株能稳定分泌抗SEB的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。通过将以混合佐剂(降植烷 FIA的混合物)和杂交瘤细胞同时注射制备McAb腹水的方法与常规法相比较,不仅量多(多1.56～1.84倍),而且活性好(高1个数量级)。初步鉴定表明:6株McAb均属IgGl亚类;其培养上清和腹水的ELISA滴度分别为10~(-3)～10~(-4)和10~(-5)～10~(-8)。它们与SEA均不起反应,其中3株(Sl.B4和E7)与SECl有轻微交叉反应;都能被10μg/m的SEB完全阻断等。说明其免疫学活性及特异性均较良好。     

抗乙型肝炎核心抗原单克隆抗体的研究

我们于1984年开始研究抗乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的单克隆抗体(McAb),得到2株杂交瘤母细胞系,经过再克隆获得6株能连续传代,稳定分泌抗HBcAg的细胞亚系,结果如下: 1.McAb组织培养上清液的ELISA滴度为1:40-1:160,腹水为1:10,000-1:100,000。 2.McAb与黑龙江省站,上海传染病总院从人肝脏分离的HBcAg和北京236部队研制     

霍乱弧菌和副溶血弧菌分离株的gyrB基因系统发育分析

依据gyrB基因部分编码序列构建系统发育树以分类和鉴别霍乱弧菌和副溶血弧菌,并探讨其种系发生关系。扩增并测序13株霍乱弧菌、8株副溶血弧菌、2株嗜水气单胞菌及1株类志贺邻单胞菌的gyrB基因(编码DNA促旋酶B亚单位)序列,并采用距离法与最大似然法构建系统发育树。两种方法所构建的树结构完全一致,霍乱弧菌、副溶血弧菌、嗜水气单胞菌及类志贺邻单胞菌各自形成一个独立的簇。其中,霍乱肠毒素基因(ctxA)阳性的霍乱弧菌(8株O139群与2株O1群ElTor型)聚类成一分枝;3株副溶血弧菌临床株(1株2002年流行株,2株2004年分离株)与1日本菌株及2001年1株自环境分离的毒力株聚类。系统发育分析靶分子gyrB基因可以良好区分上述4种常见病原菌。产毒O139群霍乱弧菌与产毒O1群ElTor型霍乱弧菌关系密切。副溶血弧菌环境毒力株与本地区临床主要流行株在系统发育关系上较为接近,可能是潜在的致病菌。     

抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体。方法:采用杂交瘤技术,获得2株针对重组黄曲霉尿酸氧化酶(rUOX)的杂交瘤细胞McAb17和McAb3;采用盐析和A蛋白亲合层析柱纯化该抗体。结果:McAb17和McAb3的腹水效价达到1∶512000,纯化后获得纯度大于95%的单抗,抗体亚类(型)分别为IgG1/k型和IgG2a/k型;ELISA结果显示制备的单抗与rUOX和Rasburicase(商品化rUOX)可发生特异反应。结论:制备了抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体McAb17和McAb3,为检测rUOX在动物体内的代谢变化提供了良好的实验基础。     

与霍乱毒素一致的模拟弧菌Vibrio Mimicus肠毒素的提纯

<正>霍乱病原菌、古典型和EI Tor生物型霍乱弧菌与一些其它弧菌即非O1群霍乱弧菌和模拟弧菌(最近才按蔗糖阴性分类为非O1群霍乱弧菌)密切相关。这些菌群的大多数菌种是非肠道致病性的或弱致病性的、或者引起不同于霍乱因子所致的腹泻,但有些菌种能产生一种与古典型霍乱弧菌的霍乱毒素密切相关的肠毒素。     

多重PCR方法检测霍乱弧菌的研究

霍乱弧菌是霍乱的病原体,可以分为O1群、O139群和非O1/非O139群。O1群和O139群霍乱弧菌产生的霍乱肠毒素(也称霍乱毒素)是产生霍乱的主要原因,也只有O1群和O139群霍乱弧菌可引起霍乱。其他群的霍乱弧菌毒性不高,但在食品中也不允许被检出。实验以霍乱胶原酶基因和霍乱毒素基因为目的基因,试图建立一种PCR方法对霍乱弧菌进行检测研究,结果表明此方法可以用于食品中的霍乱弧菌检测。     

冻干口服霍乱rBS-WC菌苗安全及效率评价的小鼠模型探讨

我们构建了高产、分泌霍乱毒素B亚单位的工程菌株E.coli MM2,并用该菌株生产的重组霍乱毒素B亚单位(rBS)与灭活霍乱弧菌菌体制成冻于口服rBS-WC菌苗。这一菌苗的实验室动物研究亦已进行,肯定其在多种动物安全、有效。目前已能较大量地生产rBS,正在探索放大与工业化生     

霍乱毒素佐剂的研究进展

霍乱毒素（CT）是霍乱弧菌分泌的一种不耐热肠毒素,具有很强的免疫原性和佐剂活性,是当今研究得最多且最深入的粘膜免疫佐剂之一,CT本身有很强的毒副作用,而一定的毒性又似乎是发挥佐剂作用所必须的。通过各种改造,使之具备优良的佐剂活性而没有显的毒副作用是当前研究的主要目标。本从CT作为佐剂的作用机理出发,概述当前对其进行改造的几种研究方向。     

利用转基因技术生产可预防霍乱的可食性番茄疫苗

TrangenicResearch 2 0 0 2年 1 0月 1 1卷 5期 4 47～ 4 5 4页报道 :霍乱是一种由霍乱弧菌 (Vibriocholerae)引起的烈性传染病。霍乱弧菌所分泌的毒素可导致严重腹泻。霍乱毒素由 1个A单位和 5个B单位组成。五聚B部分是有效的免疫辅剂。目前正在研制霍乱疫苗。已研制成功了由霍乱毒素亚单位B(CTB)与灭活的霍乱弧菌细胞混合而成的口服疫苗 ,可预防霍乱 (Sanchez等 ,1 993)。但由于CTB的造价太高 ,故不适于发展中国家生产疫苗使用。为此 ,近年来已开始利用转基因植物生产用于防治疾病的蛋白 (例如Fischer等 ,2 0 0 0 )。由于将抗原表达…