流式细胞术测定感染旋毛虫小鼠免疫功能的研究

目的观察感染旋毛虫小鼠免疫功能的动态变化.方法采用流式细胞术分别检测感染旋毛虫后7、14、21、28、35d小鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分率.结果实验组较正常组CD4+T细胞减少,CD8+T细胞增多,CD4+/CD8+细胞比值下降(P＜0.05),以感染后第14d最明显,直到感染后35d仍未见恢复.结论感染旋毛虫的小鼠出现免疫抑制现象,感染急性期的免疫抑制程度最高.     

感染旋毛虫大鼠免疫功能的动态观察

目的　观察感染旋毛虫大鼠免疫功能的动态变化。　方法　采用免疫组化的方法分别检测感染旋毛虫后 7、14、21、28、35、60 d大鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分率,并同时用酶联免疫吸附试验测定IgE水平。　结果　实验组较对照组CD4+T细胞减少, CD8+T细胞增多,CD4+/CD8+比值下降(P<0.01),以感染后第14 d最明显,直到感染后60 d仍未见恢复;大鼠外周血中IgE水平在感染旋毛虫后7 d增加,21 d达到高峰。　结论　感染旋毛虫的大鼠出现免疫抑制现象,感染急性期的免疫抑制程度最高,感染大鼠的免疫抑制主要发生在成虫产新生蚴及新生蚴移行期。IgE是大鼠旋毛虫感染急性期重要的抗体。     

旋毛虫成虫可溶性抗原免疫小鼠T淋巴细胞亚群的动态变化

目的　观察旋毛虫成虫可溶性抗原免疫小鼠T淋巴细胞亚群的动态变化。方法采用流式细胞术分别检测旋毛虫感染后 7、14、2 1、2 8、35天小鼠外周血CD+ 4 、CD+ 8T淋巴细胞的百分率。结果　免疫小鼠CD+ 4 、CD+ 8细胞增加 ,CD+ 4 /CD+ 8细胞比值与正常组比较无明显差异。结论　旋毛虫成虫可溶性抗原免疫小鼠未出现免疫抑制现象     

弓形虫P30抗原诱导小鼠抗弓形虫感染免疫保护的研究

目的 探讨弓形虫主要表膜p30抗原免疫小鼠后的抗感染保护作用。方法 用单克隆抗体分离纯化的p30抗原免疫小鼠，然后用RH株速殖子和Fukaya株包囊攻击感染，观察急性感染后小鼠死亡时间及慢性感染脑包囊形成的影响，并观察感染后不同时间抗体水平、细胞因子和T细胞亚群的变化。结果 p30抗原免疫小鼠后对攻击感染表现为，在一定程度上延长感染小鼠的存活时间，减少脑包裹的形成数量。血清中特异性抗体水平及IFN—γ、IL—2水平均高于同期对照组，而且免疫鼠脾CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞在感染早期升高较快，第4周达高峰，CD4^ ／CD8^ 比值随感染时间的延长而逐渐下降。结论 p30抗原免疫小鼠对攻击感染能特异性刺激小鼠产生体液和细胞免疫应答，具有明显的抗感染作用。     

旋毛虫感染小鼠IgG、IL-2和T淋巴细胞亚群动态变化的观察

目的　了解小鼠感染旋毛虫后 Ig G抗体水平、IL - 2分泌量和 T淋巴细胞亚群的动态变化。方法　分别于旋毛虫感染后第 7、14、2 1、2 8和 35天 ,采用 EL ISA方法检测血清特异性 Ig G抗体水平和 IL- 2含量 ,采用流式细胞仪检测 CD4+、CD8+T细胞百分率。结果　 Ig G抗体水平在感染后逐渐上升 ,感杂后 35天达最高值 ;T淋巴细胞的变化表现为 CD4+T细胞减少、CD8+T细胞增多 ,CD4+/ CD8+细胞比值下降 ,以感染后第 14天最为显著 ,直到感染后第 35天仍未见恢复。IL - 2分泌量以感染后第 7天达高峰 ,然后迅速下降 ,到感染后第 35天低于正常组。讨论　旋毛虫感染的急性期 ,小鼠出现免疫抑制现象。抗旋毛虫感染的保护性免疫是由细胞免疫与体液免疫协同完成的。     

微小隐孢子虫Cpgp40/15基因真核表达重组质粒诱导BALB/c小鼠的免疫应答

目的用构建的微小隐孢子虫Cpgp40/15基因真核表达重组质粒免疫BALB/c小鼠,观察其诱导的细胞及体液免疫反应,为研究高效的微小隐孢子虫基因疫苗提供理论依据。方法用碱裂解法大量制备pVAX1Cpgp40/15真核表达重组质粒,经肌肉注射和滴鼻两种途径免疫BALB/c小鼠,每鼠注射100μg(质粒与佐剂重量体积比为1∶0.5),2周后同量加强免疫1次,分别于免疫后15、30、45d尾静脉采血,用流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群数目,ELISA法测定IgG抗体滴度。实验设有pVAX1空质粒、C.parvum卵囊及生理盐水对照组。结果用pVAX1Cpgp40/15质粒免疫BALB/c小鼠30d后,血液中T淋巴细胞数目和抗体滴度发生明显变化,主要表现为CD4+和CD8+细胞数增加,CD4+/CD8+比值下降;攻击感染隐孢子虫后,免疫组小鼠血液CD4+/CD8+比值下降更显著,血清IgG抗体水平(30d内)显著升高,粪检虫卵数显著减少。结论用pVAX1Cpgp40/15重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导机体发生细胞及体液免疫应答,产生一定的免疫保护力。     

流式细胞术测定感染旋毛虫小鼠免疫功能的研究

目的 观察感染旋毛虫小鼠免疫功能的动态变化。方法 采用流式细胞术分别检测感染旋毛虫后7、14、21、28．35d小鼠外周血CD4^ ,CD8^ T淋巴细胞的百分率。结果 实验组较正常组CD4^ T细胞减少，CD8^ T细胞增多，CD4^ /CD8^ 细胞比值下降（P＜0．05），以感染后第14d最明显，直到感染后35d仍未见恢复。结论 感染旋毛虫的小鼠出现免疫抑制现象，感染急性期的免疫抑制程度最高。     

特异性IgG抗体作为宿主抗约氏疟原虫再感染关键效应分子的研究

目的探讨再感染早期宿主保护性免疫应答的相关机制。方法采用致死型约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii 17XL,Py17XL)感染抵抗型DBA/2小鼠,待全部小鼠自愈后用同种疟原虫株再次攻击。吉姆萨薄血膜染色法观察小鼠原虫血症水平;被动转移实验评估免疫血清的保护性作用;流式细胞仪检测脾中T、B细胞亚群动态变化。结果2/3小鼠能够完全抵御同种疟原虫再感染,仅1/3小鼠出现一过性低水平原虫血症,且于再感染后第8d自愈;免疫血清显著抑制初次感染小鼠原虫血症水平并延长其生存期;与初次感染相比,再感染早期脾CD4+T细胞、B220+和B220lowCD138+(浆细胞)亚群数目显著增加。结论特异性IgG抗体在宿主抗再感染免疫中发挥重要作用,记忆性T、B细胞可能为宿主保护性免疫应答的关键参与者。     

弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究

目的用pVACGRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护作用。方法大量制备pVACGRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠3次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照。于末次免疫4周后作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFNγ及IL4含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),并观察攻毒试验后小鼠存活情况。结果脾淋巴细胞增殖各组间差异无显著性(P>0.05);pVACGRA4组CD4+T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD8+T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD4+/CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);pVACGRA4免疫组IFNγA值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL4A值各组间无明显变化(P>0.05);pVACGRA4组可诱导产生特异性IgG抗体,但滴度不高;pVACGRA4免疫组小鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05)。结论用pVACGRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫攻击感染的部分保护作用。     

微小隐孢子虫CP23 DNA疫苗免疫保护作用研究

目的研究微小隐孢子虫表面抗原CP23 DNA疫苗产生的免疫反应及对小鼠的免疫保护作用。方法选BALB/c小鼠60只,随机分为3组,即疫苗免疫组、PBS对照组及空质粒对照组。疫苗免疫组用构建的真核表达质粒pcDNA 3.0-23每隔2周免疫1次小鼠,共免疫3次。PBS对照组肌注等量PBS,空质粒对照组肌注pcDNA3.0,免疫方法及次数同疫苗免疫组。末次免疫2周后,分别取小鼠脾脏、血清,检测CD4+和CD8+T细胞、细胞因子IFN-γ及抗CP23特异性抗体IgG和IgA滴度;用微小隐孢子虫攻击感染被免疫小鼠,收集小鼠粪便,计算小鼠排出的卵囊量。结果 PBS对照组及空质粒组比较,疫苗免疫组小鼠的CD4+T细胞、CD4+/CD8+比值及脾细胞培养上清中IFN-γ滴度均显著升高(P0.05),小鼠血清抗CP23特异性抗体IgG及IgA滴度随免疫次数增加显著升高(P0.05),攻击感染后小鼠排卵囊量显著减少(P0.05),且排出时间缩短。结论构建的微小隐孢子虫表面抗原CP23真核表达质粒能够诱导小鼠产生细胞及体液免疫反应,对小鼠有较好的免疫保护作用。     

感染旋毛虫小鼠的细胞因子和T淋巴细胞亚群的动态变化

目的：探讨感染旋毛虫小鼠的细胞免疫调节作用。方法：将小鼠分为重感染组、轻感染组及对照组，于感染后不同时间随机取脾细胞制备悬液，分别以旋毛虫抗原及ＣｏｎＡ刺激后，检测白细胞介素ＩＬ－２及ＩＬ－６的活性、ＩｇＧ抗体水平以及ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ细胞含量。结果：感染早期脾细胞以ＩＬ－２的分泌为主，而感染晚期以ＩＬ－６为主，重感染组比轻感染组的ＩＬ－２与ＩＬ－６分泌多。感染后７ｄ血清中出现ＩｇＧ抗体，２８－３５ｄ达高峰；感染后１４－２１ｄ，ＣＤ４＋含量逐渐减少，２１ｄ后又逐渐上升，而ＣＤ８＋的含量却持续增多。结论：感染４ｗｋ后，ＩＬ－６的诱生水平持续增高，可能对旋毛虫病的获得性免疫起重要作用。ＩＬ－２活性与ＣＤ８＋Ｔ细胞百分率的增高，可能提示Ｔｈ１产生的细胞因子促进ＩＬ－２活性与ＣＤ８＋Ｔ细胞活化。     

旋毛虫成虫抗原的免疫保护性研究

目的 比较旋毛虫成虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原对小鼠产生的免疫保护作用。 方法 检查免疫鼠和对照鼠肠道成虫、肌幼虫和血液中的嗜酸性粒细胞数;用ELISA测血清中抗旋毛虫肌幼虫IgG抗体滴度。 结果旋毛虫成虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原免疫组的成虫减虫率分别为84.48％、89.98％和85.16％;肌幼虫减虫率分别为69.82％、78.80％和73.94％。3种抗原免疫组小鼠血中的嗜酸性粒细胞(EOS)数明显增多,血清中IgG抗体滴度明显升高,IgG抗体的几何平均倒数滴度(GMRT)分别是未免疫组的6.96、7.99和6.06倍。 结论 旋毛虫成虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原均能诱导宿主产生较强的抗攻击感染保护力,且可激发特异性体液免疫和细胞免疫。成虫的排泄分泌抗原显示出更强的免疫原性。     

日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶免疫功能的研究

目的 目的 研究日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶 （Thioredoxin Glutathione Reductase of Schistosoma japoni? cum,SjTGR） 的免疫原性及抗日本血吸虫感染的免疫保护性作用。 方法 方法 75只小鼠随机分为5组： 空白组、 PBS组、 CpG2免疫组、 TGR免疫组和TGR + CpG2联合免疫组, 免疫3次。首次免疫前及第3次免疫后2周经尾静脉采血, 采用酶联免疫法分别检测血清中抗SjTGR蛋白IgG、 IgG1和IgG2a的抗体水平。第3次免疫后2周, 每只小鼠经腹部感染日本血吸虫尾蚴40±2条, 42 d后剖杀, 收集成虫和虫卵, 计算减虫率和减卵率; 制备各组小鼠单个脾淋巴细胞, 采用流式细胞术检测脾细胞表面标志物CD44high 、 CD4+ CD44high 或CD8+ CD44high 水平; 用SjTGR刺激免疫小鼠脾细胞72 h, 采用酶联免疫法检测脾细胞的IL?2、 IL?4、 IL?10和IFN?γ的水平。 结果 结果 第3次免疫后2周TGR与CpG2 + TGR免疫组小鼠血清抗SjTGR 抗体的IgG滴度均达1： 200 000以上, IgG2a与IgG1的比值 （IgG2a/ IgG1） 随时间的延长缓慢增高。TGR免疫组和TGR + CpG2联合免疫组细胞上清中的IFN?γ和IL?2水平与空白组、 PBS组、 CpG2免疫组相比明显增高 （P < 0.05）。TGR免疫组与TGR + CpG2免疫组小鼠脾细胞的CD44high 、 CD8+ CD44high 及CD4+ CD44high 与空白组和PBS组相比细胞比值增加 （P < 0.05）。TGR免疫组和CpG2 + TGR免疫组的减虫率分别为9.4%, 10.5%, 减卵率分别为9.2%和32.8%。 结论 结论 SjTGR具有较强的免疫原性, 可诱导小鼠免疫反应向Th1型极化, 但不足以产生抗日本血吸虫感染的保护效应。CpG2 ODN可能是一种有效的Th1型免疫佐剂。     

EHEC O157∶H7基因缺失突变株口服免疫小鼠的实验研究

目的　研究肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7基因缺失突变疫苗候选株EHEC 86 - 2 4 (Δstx/ler)的安全性和免疫保护效果 ,为进一步的临床实验提供依据。方法　对出生 7d昆明鼠经口服途径进行免疫 ,分别在一次免疫和加强免疫 14d后以O15 7∶H7强毒株EDL933(NalR)攻毒 ,观察小鼠的发病情况、疫苗候选株的保护率及攻毒后的带菌消长情况。同时又作了被动免疫实验 ,成年母鼠间隔 14d口服免疫两次 ,所生乳鼠 7d攻毒。结果　疫苗株以 10倍于强毒株最小致死剂量口服接种无致病作用。疫苗株一次免疫保护率可达 6 0 %。因小鼠的易感性随日龄和体重的增加而降低 ,加强免疫后 ,对照组未能全部致死 (死亡 4 0 % ) ,而免疫组全部存活 ;攻毒后免疫组比对照组排菌时间显著缩短 (2 4h/ 2 16h)。两次口服免疫后血清IgG抗体效价达 1∶16 0 0。被动免疫保护率 10 0 %。结论　该突变株通过口服接种能够引起特异性免疫应答反应 ,具有良好的免疫原性和免疫保护作用     

旋毛虫编码新生幼虫p46 kDa抗原基因重组融合蛋白对小鼠的免疫保护性研究

目的 探讨旋毛虫编码新生幼虫p46 kDa抗原基因重组融合蛋白WN10对小鼠的免疫保护性。方法 将纯化的重组融合蛋白WN10以20μg/只的剂量分3次免疫小鼠后，攻击感染旋毛虫肌幼虫200条／只，检查旋毛虫7日龄成虫数、雌虫体外产生新生幼虫数、感染35d的肌幼虫数并计算减虫率，同时用ELISA法检测血清中抗WN10抗体IgG滴度。结果WN10免疫小鼠后获得旋毛虫7日龄成虫、肌幼虫的减虫率分别为64．28％和61．21％，均与感染对照组和佐剂对照组差异显著；获得雌虫产新生幼虫的减虫率为16．46％，与感染对照组和佐剂对照组差异不显著；WN10免疫组小鼠在第3次免疫后1周可检测到高滴度的抗WN10抗体IgG，在攻击感染旋毛虫9周后仍维持在较高水平。结论 编码旋毛虫新生幼虫p46 kDa抗原基因重组融合蛋白可诱导小鼠产生较强的抗旋毛虫保护性免疫。     

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中46-58kD抗原诱发小鼠保护性免疫的研究

为探讨旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（ＴｓＬ１ＥＳ）中４６５８ｋＤ抗原的保护性免疫作用，本文用该纯化抗原组分加福氏完全佐剂（ＦＣＡ）腹腔注射免疫昆明小鼠３次，继以旋毛虫感染性幼虫３００条攻击感染，感染后第７天计数小鼠肠道成虫数、第３０天肌肉幼虫数和血清抗体ＩｇＧ滴度。结果：４６５８ｋＤ抗原免疫鼠的肠道成虫减虫率、肌肉幼虫减虫率和血清抗体ＩｇＧ的几何平均倒数滴度分别为４１８％、４６１％和２８４１２；与ＴｓＬ１ＥＳ诱导的保护性免疫力（４８３％、５０２％和３４５８６）水平接近；显著高于佐剂对照组（４８％、８３％和７４８６）。表明：ＴｓＬ１ＥＳ中４６５８ｋＤ抗原组分可产生明显的保护性免疫作用     

Analysis of iron superoxide dismutase‐encoding DNA vaccine on the evolution of the Leishmania amazonensis experimental infection

The present work aimed to evaluate the immunogenicity of Leishmania amazonensis iron superoxide dismutase (SOD)‐encoding DNA experimental vaccine and the protective properties of this DNA vaccine during infection. The SOD gene was subcloned into the pVAX1 plasmid, and it was used to immunize BALB/c mice. Twenty‐one days after the last immunization, mice were sacrificed (immunogenicity studies) or subcutaneously challenged with L. amazonensis (studies of protection), and alterations in cellular and humoral immune responses were evaluated, as well as the course of infection. Mice only immunized with pVAX1‐SOD presented increased frequencies of CD4⁺IFN‐γ⁺, CD8⁺IFN‐γ⁺ and CD8⁺IL‐4⁺ lymphocytes; moreover, high levels of IgG2a were detected. After challenge, mice that were immunized with pVAX1‐SOD had increased frequencies of the CD4⁺IL‐4⁺, CD8⁺IFN‐γ⁺ and CD8⁺IL‐4⁺ T lymphocytes. In addition, the lymph node cells produced high amounts of IFN‐γ and IL‐4 cytokines. Increased IgG2a was also detected. The pattern of immunity induced by pVAX1‐SOD partially protected the BALB/c mice from a challenge with L. amazonensis, as the animals presented reduced parasitism and lesion size when compared to controls. Taken together, these results indicate that leishmanial SOD modulates the lymphocyte response, and that the elevation in IFN‐γ possibly accounted for the decreased skin parasitism observed in immunized animals.     

感染旋毛虫小鼠外周血T淋巴细胞及其亚群和血清...

Acid alpha-naphthyl esterase (ANAE), a cytoplasmic marker, was used to identify the T lymphocytes and their subpopulations in peripheral blood of mice infected with Trichinella spiralis, and Dot-ELISA was used to identify the serum IgG antibody of the infected mice. The results showed that T lymphocytes increased on the d3 after infection, reaching the peak on d14, and then remained in number greater than normal up to d77. The spotted granular ANAE positive cells (Help T cells, Th) decreased and the scattered granular ANAE positive cells (Suppressor T cells, Ts) increased, leading to a drop of the Th/Ts ratio. The reduction in host immune function during T. spiralis infection might be related to the drop of Th/Ts ratio. At the same time, the serum IgG antibody increased on d7 after infection, reaching the peak on d28, and remained higher up to d140. The results indicated that the host's cellular immunological level was lower while the host's IgG antibody level was higher during T. spiralis infection.