初步探讨鸟嘌呤核苷、姜黄素对AD双转基因小鼠学习记忆的影响

目的 采用Morris水迷宫测试小鼠定位航行及空间搜索等学习记忆和记忆保持能力,评价鸟嘌呤核苷、姜黄素对4月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠认知功能的影响。方法 将3月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.92 mg?kg-1?d-1)、鸟嘌呤核苷组(20mg?kg-1?d-1)、姜黄素组(200mg?kg-1?d-1)、姜黄素(200mg?kg-1?d-1)和鸟嘌呤核苷组(20mg?kg-1?d-1),每组12只;并以同月龄野生型C57/BL6J小鼠作对照。每天给药1次,连续给药1个月。应用Morris水迷宫进行行为学检测。结果 鸟嘌呤核苷、姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠空间学习记忆能力障碍有改善作用,尤其以姜黄素组明显。结论 鸟嘌呤核苷、姜黄素能改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的早期出现的认知障碍。     

姜黄素对阿尔茨海默双转基因小鼠海马超微结构的影响

目的 应用电子显微镜,观察β-淀粉样前体蛋白swe基因/早老蛋白1dE9基因(APPswe/PS1dE9)双转基因小鼠海马CA1区神经元以及突触的变化,评价姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠认知功能的影响.方法将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组(0.92 mg/kg)...     

半夏泻心汤和鸟嘌呤核苷对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠学习记忆的影响

目的采用跳台和Morris水迷宫检测半夏泻心汤和鸟嘌呤核苷对6月龄APPswe/PS1d E9双转基因小鼠学习记忆的影响。方法将APPswe/PS1d E9双转基因小鼠随机分为模型组5%羧甲基纤维素钠(CMC)灌胃、西药对照组盐酸多奈哌齐0.92 mg/(kg·d)灌胃、半夏泻心汤组650 mg/(kg·d)灌胃、中药对照组姜黄素200 mg/(kg·d)灌胃、鸟嘌呤核苷组0.5%CMC灌胃,除鸟嘌呤核苷组腹腔注射鸟嘌呤核苷16 mg/(kg·d),其他各组腹腔注射等体积的生理盐水,每组15只。正常组0.5%CMC灌胃和等体积的生理盐水腹腔注射为同窝野生型C57BL/6J小鼠。于3月龄时开始对各组小鼠分别实施对应的干预,给药3个月后,应用跳台和Morris水迷宫对小鼠进行行为学检测。结果跳台实验结果显示,模型组小鼠比正常组潜伏期时间明显缩短(P0.01);与模型组比,各干预组小鼠潜伏期时间均显著增加(P0.01)。Morris水迷宫结果显示,随着天数的增加,各组小鼠逃避潜伏期的时间缩短,游泳距离也呈递减趋势,中间有小幅波动。Morris水迷宫结果显示,空间探索实验即撤台实验中,模型组小鼠目标象限停留时间显著少于正常组(P0.01),西药对照组、中药对照组以及半夏泻心汤组小鼠的目标象限停留时间均比模型组延长(P0.05)。结论半夏泻心汤对APPswe/PS1d E9双转基因小鼠的早期学习记忆障碍具有改善作用,鸟嘌呤核苷可提高小鼠的记忆保持能力。     

姜黄素对APPswe/PS1△9转基因小鼠空间学习与海马HSP70蛋白表达的影响

目的 探讨姜黄素对APPswe/PS1△9转基因小鼠海马热休克蛋白70(HSP70)表达及对APPswe/PS1 A9转基因小鼠空间学习能力的影响,为AD治疗提供新的理论依据.方法 实验动物分为野生小鼠组、APP/PS1转基因小鼠组、姜黄素干预组、槲皮素(HSPs抑制剂)和姜黄素共同干预组.5月龄转基因小鼠腹腔注射姜黄素150 mg·kg-1·d-1,连续4周,槲皮素和姜黄素共同干预组采用给予150mg· kg-1·d-1姜黄素腹腔注射,同时给予槲皮素50mg· kg-1 ·d-1腹腔注射,连续4周.Western blot测定APP/PS1小鼠海马区HSP70蛋白的表达,Morris水迷宫测试APP/PS1小鼠学习记忆能力,主要观察指标为小鼠找到平台的潜伏期和穿越平台次数.结果 Western blot结果显示,APP/PS1转基因小鼠海马中HSP70蛋白的表达与WT小鼠相比明显降低(OD值:APPswe/PS1△9:0.31±0.14;WT:1.14±0.51,P＜0.01).小鼠腹腔注射给予姜黄素后HSP70的表达较APP/PS1转基因鼠明显升高(OD值:姜黄素:0.91±0.20,P＜0.05).腹腔注射姜黄素或同时给予槲皮素,连续4周后,Morris水迷宫测试结果显示,与WT小鼠相比,APP/PS1小鼠找到平台的潜伏期明显延长[APPswe/PS1 △9:(82.3±6.8)s;WT:(29.5±4.4)s]、穿越平台的次数显著降低[APPswe/PS1 △9:(2.7±1.1)次;WT:(5.2±2.1)次].姜黄素给药后小鼠找到平台的潜伏期较APP/PS1小鼠明显缩短[(47.7±7.6)s],穿越平台的次数增多[(4.5±1.9)次],而小鼠同时给予姜黄素和HSPs抑制剂槲皮素后,找到平台的潜伏期较姜黄素单独给药明显延长[(69.7±9.1)s],穿越平台的次数减少[(3.2±1.6)次].结论 姜黄素可促进APP/PS1转基因小鼠海马HSP70蛋白的表达,同时可提高APP/PS1转基因小鼠的空间学习能力,这可能与姜黄素提高HSP70表达有关,结果提示姜黄素对于AD可能具有潜在的治疗价值.     

姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠Aβ生成和降解的影响

目的 观察姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠B淀粉样蛋白(β amyloid,Aβ)生成酶早老素2(presenilin 2,PS2)和Aβ降解酶胰岛素降解酶(insulin degrading enzyme,IDE)表达的影响,探讨姜黄素在AD防治中的机制.方法 将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组[罗格列酮组,0.92 mg/(kg·d)]、姜黄素大[400 mg/(kg·d)]、中[200 mg/(kg·d)]、小[100 mg/(kg·d)]剂量组,每组10只;并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常对照组10只.每天灌胃给药1次,模型组和正常对照组用等体积0.5%羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose,CMC)灌胃.灌胃3个月后,应用Morris水迷宫、免疫组织化学等方法,检测动物的学习记忆能力、海马Aβ生成酶PS2和降解酶IDE表达变化.结果 行为学检测,模型组小鼠的游泳轨迹多为边缘型,而正常对照组、阳性对照组、姜黄素各组小鼠的游泳轨迹多为趋向型和直线型.Aβ生成酶PS2和降解酶IDE的免疫组织化学染色结果,模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞较正常对照组明显增加(P<0.01),与模型组相比,姜黄素各组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞减少(P<0.01).模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞平均灰度值较正常对照组降低(P<0.05),姜黄素小剂量组阳性细胞平均灰度值同模型组相比明显增加(P<0.01).模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞较正常对照组明显减少(P<0.01),与模型组相比,姜黄素中剂量组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞明显增加(P<0.05).模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值较正常对照组明显增加(P<0.01),姜黄素各组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值同模型组相比均明显降低(P<0.01).结论 姜黄素能通过减少Aβ生成酶和增加Aβ降解酶的表达,降低Aβ蛋白的表达进而改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的学习记忆能力.     

MicroPET观察姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑葡萄糖代谢的影响

目的利用18氟-脱氧葡萄糖microPET(18F-FDG microPET)影像学技术观察正常对照组小鼠,模型组和姜黄素治疗组APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的脑葡萄糖代谢情况。方法随机挑选6月龄正常对照组C57BL/6J小鼠3只,模型组和姜黄素治疗组APPswe/PS1dE9双转基因小鼠各3只,通过2%异氟烷吸入麻醉后,从尾静脉弹丸式注射放射性示踪剂18F-FDG每例约14.8～16.5 MBq,摄取45 min后进行10 min microPET图像采集。计算并比较各组小鼠每克脑组织(除小脑)18F-FDG的摄取率。结果姜黄素治疗组小鼠每克脑组织18F-FDG的摄取率高于正常对照组和模型组。结论姜黄素能明显提高APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑18 F-FDG的摄取及每克脑组织的摄取率,并可能通过影响脑葡萄糖代谢而发挥神经保护作用。     

川芎嗪对痴呆小鼠模型学习记忆能力的影响

目的研究川芎嗪对痴呆小鼠学习记忆的影响。方法对APPswe/PSΔE9双转基因小鼠在3月龄开始食物中连续给川芎嗪(100 mg/kg.d)进行治疗,停药后立即进行水迷宫实验,并与未给药APPswe/PSΔE9双转基因小鼠和及野生鼠进行比较。结果治疗组与APPswe/PSΔE9双转基因组比较,平台寻找潜伏期缩短,穿过原平台区的频次增加。结论川芎嗪能改善APPswe/PSΔE9痴呆模型小鼠的学习记忆能力。     

APP/PS双转基因阿尔茨海默病小鼠模型的老年斑及行为学动态分析

目的研究APP／PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠模型老年斑形成和行为改变的动态过程。方法将转APPswe突变基因小鼠与转PSAE9基因突变小鼠杂交，PCR鉴定APPswe／PSAE9双突变转基因小鼠的基因表型，筛选阳性小鼠建立APPswe／PS／kE9双转基因C57BL／6J小鼠模型。抗邮免疫组化、改良Bieschowsky银染法、Thioflavin-S荧光分别动态检测3、4、5、6、9、12月龄APPswe／PSAE9双转基因小鼠大脑病理改变。荷兰Noldus公司EthovisionXT监测分析软件动态观察3、6、9月龄的APPswe／PSAE9双转基因小鼠Morris水迷宫行为学改变。利用SPSS16．0软件统计分析。结果建立了人APPswe／PSAE9双转基因阿尔茨海默病小鼠模型。3月龄APP／PS1双转基因小鼠大脑组织抗Aβ1—17免疫组织化学、改良Bieschowsky银染法、Thioflavin—S荧光未检测到有明显老年斑形成。4．5月龄APPswe／PSAE9双转基因小鼠大脑组织上述三种方法均可检测到老年斑。9、12月龄双转基因小鼠老年斑数量体积明显增加，出现与阿尔茨海默病患者较相似的老年斑改变。Morris水迷宫试验发现3、6、9月龄APPswe／PSAE9双转基因小鼠行为学结果与同月龄野生型小鼠有差异，说明与同月龄野生型小鼠相比出现记忆学习能力缺陷（P〈0．05）。结论成功建立了人APPswe／PSAE9双转基因小鼠阿尔茨海默病模型，为阿尔茨海默病发病机制研究和药物研发提供了有价值的动物模型。     

APPswe/PS1dE9/TAU三转基因阿尔兹海默病大鼠模型的建立

目的大鼠的大脑比小鼠更大,是研究神经系统的重要模型。建立APPswe/PS1dE9/TAU三转基因大鼠,发展能更全面表现人类阿尔兹海默病表型的动物模型。方法构建人PrP-hAPP695 K595N/M596L、PrPhPS1dE9和PDGF-TAU转基因表达载体,显微注射法制备转基因大鼠。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Western blot检测转基因大鼠脑组织中人APP、PS1和TAU蛋白的表达。Morris水迷宫检测6月龄三转基因大鼠学习记忆能力改变。APP、PHF-TAU免疫组织化学染色观察三转基因大鼠脑组织APP及TAU的表达。结果得到1个同时高表达人APP、PS1和TAU三个基因的转基因大鼠品系。转基因大鼠6月龄已经出现显著的行为学改变:学习记忆能力下降,病理学改变表现为过度磷酸化TAU增多和神经元胞浆内Aβ表达异常增加。结论成功建立了APPswe/PS1dE9/TAU三转AD大鼠,可做为新一代工具动物模型用于基础医学和AD转化医学研究。     

橙皮素早期干预对APPswe/PS1dE9小鼠学习记忆能力和Aβ42、NEP的影响

目的 探究不同剂量橙皮素(hesperetin)早期干预对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠学习记忆能力、β-淀粉样蛋白(1-42)(amyloidβ-protein1-42,Aβ42)及Aβ降解酶脑啡肽酶(neprilysin,NEP)活性的影响.方法 设立三月龄C57BL/6J野生型小鼠为对照组(0.5％CMC-Na),三月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠分别为模型组、橙皮素低、中、高剂量组(0、20、40、80mg/kg/d),灌胃1次/d,连续6个月.采用Morris水迷宫行为学实验观察小鼠的学习记忆能力;HE染色观察小鼠海马神经元形态;ELISA法检测小鼠血清中Aβ42含量;蛋白印迹法(Western Blot)检测小鼠脑组织Aβ42、脑啡肽酶(N E P)的表达.结果 与对照组相比,模型组小鼠寻找平台潜伏期明显延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05),海马C A1区神经元有明显损伤,血清中Aβ42含量明显增加(P<0.05),脑组织中Aβ42含量明显增加(P<0.01)、N E P含量无明显差异;与模型组相比,橙皮素低、中、高剂量组小鼠潜伏期明显缩短(P<0.01),穿越平台次数增加(P<0.01),海马C A1区神经元形态结构有明显改善,血清中Aβ42含量明显降低(P<0.01),脑组织中Aβ42含量明显降低(P<0.01)、橙皮素中、高剂量组N E P含量明显升高(P<0.01).结论 橙皮素早期干预能明显改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠学习记忆能力和海马CA1区神经元损伤,其机制可能与提高NEP活性,增强Aβ42代谢有关.     

β-细辛醚对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑组织中差异蛋白表达的影响

目的 观察β-细辛醚对APPswe/ PS1dE9双转基因小鼠脑组织中差异蛋白表达的调节作用,探讨其对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的治疗作用机制.方法 实验动物分为正常对照组(C57BL/6J小鼠)、模型组(APPswe/ PS1dE9小鼠)和β-细辛醚治疗组(APPswe/PS1dE9小鼠),每组10只.β-细辛醚治疗组用灌胃方法给药,正常对照组和模型组给予等量生理盐水,历时90 d.用Morris水迷宫行为学方法测试小鼠学习记忆能力,用免疫组织化学方法检测小鼠脑组织中β-淀粉样前体蛋白(APP)的表达.用同J位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术对小鼠脑组织进行蛋白质组学分析,用蛋白质印迹法鉴定差异蛋白H2A、H2B的表达.结果 与模型组小鼠比较,经β-细辛醚治疗后,小鼠的逃避潜伏期和第1次穿越平台时间缩短(P＜0.05),平台穿越次数增多(P＜0.05),APP的表达减少(P＜0.05),差异蛋白组蛋白H2A 1-H、H2B 2-E和H2B 1-F/J/L的表达水平下降(P＜0.05).结论 β-细辛醚能够介入到组蛋白的修饰过程而起到治疗作用,这可能是其改善β-淀粉样肽毒性所致学习记忆能力下降的机制之一.     

异氟醚对阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因型小鼠学习记忆能力的影响

目的  研究异氟醚对阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因型小鼠学习记忆能力的影响。方法  将转基因小鼠分为转基因异氟醚组（Tg-iso组）及转基因空白对照组（Tg-con组）,野生型分为野生异氟醚组（Wt-iso组）及野生空白对照组（Wt-con组）。Tg-iso组及Wt-iso组于7个月龄行异氟醚麻醉,吸入1.1%异氟醚2 h,连续5 d。同时Tg-con及Wt-con组吸入30%氧气与70%氮气的混合气体。麻醉后48 h各组行水迷宫实验,麻醉后5个月各组行Y迷宫实验。结果  7个月龄时：与Wt-con组比较,Wt-iso组的潜伏期缩短（P = 0.013）;与Tg-con组比较,Tg-iso组的潜伏期缩短（P =0.043）;各组间空间探索实验目标象限时间和路程百分比的差异无统计学意义（P =0.392和P =0.300）。12个月龄时：与Tg-con组比较,Wt-con组和Tg-iso组辨别错误次数明显减少（P =0.044和P =0.020）。结论  短时间重复吸入低浓度的异氟醚不增加阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因型小鼠及野生对照型小鼠近期及远期学习记忆能力障碍的风险,反而在一定程度上有减轻的作用。

     

5月龄APP/PS1双转基因小鼠行为学及老年斑病理改变

目的 评价5月龄APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能及脑部病理改变。方法 5月龄APP/PS1（+/-）小鼠,采用Morris水迷宫实验评价空间学习记忆功能,免疫组织化学和刚果红染色观察淀粉样斑块沉积情况。结果 Morris水迷宫实验显示APP/PS1（+）小鼠逃避潜伏期明显长于APP/PS1（-）小鼠,表明5月龄APP/PS1（+）小鼠已经出现了空间学习记忆功能的损害。新物体识别实验中5月龄APP/PS1（+）小鼠对新物体的分辨指数无显著降低,免疫组化、刚果红染色显示5月龄APP/PS1（+）小鼠海马及皮质均出现斑块沉积。结论 5月龄APP/PS1双转基因小鼠出现空间学习记忆功能损害,小鼠脑内已经出现相应的病理改变。     

电针对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力及LC3Ⅱ、P62表达水平的影响

目的 研究电针对APP/PS1双转基因小鼠自噬相关蛋白LC3Ⅱ及受体蛋白P62相关的作用机制.方法 将7月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、电针治疗组,以同窝转基因阴性小鼠为正常对照组.电针治疗组予电针涌泉、百会,15 min/次,隔日1次,治疗6周,利用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力以及用Western blot法检测小鼠海马区域LC3Ⅱ及P62蛋白的表达.结果 水迷宫结果显示,模型组与正常对照组比较,逃避潜伏时增加(P<0.01);WB结果显示,与对照组相比,模型组LC3Ⅱ表达增强,P62表达减弱(P<0.05);与模型组相比,针刺组LC3Ⅱ表达减弱,P62表达增强(P<0.05).结论 APP/PS1转基因鼠存在神经元自噬途径功能亢进,电针可能通过抑制自噬水平,从而改善学习记忆功能.     

淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对AD模型小鼠大脑皮质FPN1表达的影响

目的?观察淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD）APPswe/PS1dE9双转基因小鼠模型大脑皮质FPN1表达的影响。方法?6月龄雄性APPswe/PS1dE9双转基因小鼠60只,随机分为6组,模型组、淫羊藿组、黄芪组、葛根组、复方组、去铁胺(DFO)组,6月龄雄性C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组。用药结束后,分别采用免疫组化、Real time PCR和Western blot方法检测各组小鼠大脑皮质FPN1的表达情况。结果?阴性对照组均未见FPN1阳性细胞。与正常对照组比较,模型组FPN1的mRNA和蛋白表达降低（P<0.05）;与模型组比较,复方组和DFO组FPN1的mRNA和蛋白表达增高（P<0.05）;与DFO组比较,复方组FPN1的mRNA和蛋白表达无统计学差异（P>0.05）,淫羊藿组、黄芪组、葛根组FPN1的mRNA和蛋白表达降低（P<0.05）。结论?应用淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以上调AD模型小鼠大脑皮质FPN1的表达,从而抑制AD模型小鼠脑铁超载,缓解铁超载带来的中枢神经系统功能衰退。      

产前应激加剧慢性子代应激诱导的子鼠学习记忆能力损伤

目的探讨产前应激是否进一步加剧慢性应激所致的6月龄雄性APPswe/PS1dE9子鼠学习记忆损伤及其可能机制。方法以 APPswe/PS1dE9双转基因小鼠为研究对象,实验分为产前慢性应激-子代慢性应激组( TT组)、产前慢性应激-子代正常处理组( TC组)、产前正常处理-子代慢性应激组( CT组)和产前正常处理-子代正常处理组( CC组)。应用Morris水迷宫检测子代小鼠的空间学习、记忆能力,通过HE染色观察小鼠海马CA3区神经元的病理组织形态,采用Congo red染色检查小鼠脑组织的淀粉样斑块,采用 Western blot 法检测小鼠海马组织淀粉样前体蛋白(APP)、淀粉样前体蛋白β位点分裂酶1(BACE1)和β-淀粉样蛋白1-42( Aβ42)的表达量,运用ELISA法检测血清皮质酮含量。结果与CC组相比, CT组小鼠的逃避潜伏期
　　和游泳距离延长(P<0．05),平台象限游泳时间和穿越平台次数减少(P<0．05);海马CA3区损伤的神经元数目明显增加(P<0．05),排列疏松紊乱,脱失现象明显,核固缩、浓染;脑组织淀粉样斑块数目增多;海马组织APP、BACE1和Aβ42的表达量升高( P <0．05);血清皮质酮浓度升高(P<0．05)。与CT组相比, TT组小鼠的逃避潜伏期和游泳距离进一步延长(P<0．05),平台象限游泳时间和穿越平台次数进一步减少( P <0．05);脑组织淀粉样斑块和海马CA3区损伤的神经元数目进一步增加(P<0．05);海马组织APP、BACE1和Aβ42的表达量和血清皮质酮浓度进一步升高(P<0．05)。结论产前应激进一步加剧慢性应激所致的子鼠学习记忆损伤,其机制可能与其升高小鼠血清皮质酮水平,促进APP和BACE1表达,进而增加Aβ42的生成,最终引起海马CA3区神经元损伤有关。     

APP/PS1双转基因老年性痴呆小鼠早期病理和认知行为变化

【目的】探讨APP/PS1双转基因老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠早期病理和行为学变化。【方法】选取5、7月龄的APP/PS1双转基因小鼠和非转基因小鼠,采用刚果红染色法和定量方法,并结合Morris水迷宫行为学测试,对其脑内淀粉样斑块积聚与学习记忆能力的月龄变化关系进行研究。【结果】(1)7月龄的双转基因组小鼠的空间辨别学习记忆能力与非转基因组小鼠比较差异有统计学意义(P<0.05);(2)APP/PS1双转基因组小鼠在5、7月龄时海马与脑皮质均观察到明显的橘红色斑块沉积,但非转基因组小鼠海马及脑皮质均未观察到淀粉样斑块沉积。【结论】7月龄APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力下降,APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层和海马部位淀粉样斑块的早期出现随年龄依赖性增加。