RARβ在豚鼠形觉剥夺性近视眼中的表达

目的检测视黄酸受体β（RARβ）在视网膜、脉络膜和巩膜中的表达，探讨RARβ和视黄酸（RA）对哺乳类动物形觉剥夺性近视的作用。方法采用形觉剥夺的方法建立豚鼠眼近视模型。选用1～3d龄健康三色豚鼠45只，随机分为3组，Ⅰ组为持续遮盖8周组，Ⅱ组为遮盖7周后去遮盖1周组，Ⅲ组为遮盖1周组。右眼为遮盖眼，左眼为开放对照眼。测量双眼实验前后的屈光状态及眼轴。应用免疫组织化学和RT-PCR技术检测RARβ的蛋白和mRNA表达水平。结果Ⅰ组诱导出了豚鼠明显的近视改变（P〈0．05）。Ⅱ组去遮盖眼近视度明显降低，眼轴较Ⅰ组短（P〈0．05）。Ⅲ组遮盖眼屈光度和眼轴与对照眼相比差异无显著统计学意义（P〉0．05）。Ⅰ组和Ⅲ组遮盖眼视网膜内核层RARβ蛋白表达高于对照眼（P〈0．05）。Ⅲ组遮盖眼视网膜、脉络膜和巩膜RARβmRNA表达增强（P〈0．05）。结论去除形觉剥夺可以抑制近视。形觉剥夺眼视网膜RARβ蛋白的高表达早于屈光度和眼轴的改变。RARβ在形觉剥夺眼视网膜、脉络膜和巩膜中的表达增强。     

形觉剥夺性近视豚鼠视网膜中神经生长因子及其受体的表达

目的 探讨视网膜神经生长因子（NGF）及其受体（TrkA）在豚鼠形觉剥夺性近视（FDM）视网膜中的表达.方法 对出生7 d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月制备FDM动物模型,左眼作为对照.遮盖前及遮盖2、4、8周后,检影验光检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度.免疫组织化学和逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）检测视网膜NGF和TrkA的表达变化.结果 形觉剥夺使豚鼠眼轴增长,近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比屈光度差异有统计学意义（P＜0.01）.遮盖眼NGF与TrkA免疫活性逐渐降低,NGF与TrkAmRNA表达下调,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 NGF和TrkA可能参与调控FDM的形成.     

胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸对豚鼠形觉剥夺性近视眼的抑制作用

目的观察豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部视网膜胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R）基因表达水平的动态变化,以及IGF-1R反义寡核苷酸玻璃体腔注射对形觉剥夺性近视眼屈光度及眼轴长度的影响,探讨视网膜IGF-1R在实验性近视眼发病中的作用。方法3周龄的三色豚鼠64只,随机均分为8组（每组8只）,A组：单眼遮盖7d;B组：未遮盖7d;C组：单眼遮盖14d;D组：未遮盖14d;E组：单眼遮盖14d后去遮盖7d;F组：未遮盖21d;G组：单眼遮盖14d＋玻璃体腔注射40μg（20μl）IGF-1R正义寡核苷酸;H组：单眼遮盖14d＋玻璃体腔注射40μg（20μl）IGF-1R反义寡核苷酸。检测各组的近视屈光度、眼轴长度以及后极部视网膜IGF-1R mRNA和蛋白质的表达水平。结果遮盖14d后实验眼眼轴明显延长,形成近视,去遮盖7d后,近视屈光度减低,眼轴增长减缓;随着遮盖时间的延长,后极部视网膜IGF-1R表达水平明显上调,去遮盖后,表达水平降低（P=0.000）。形觉剥夺14d后,IGF-1R正义寡核苷酸注射眼的眼轴长度 、近视屈光度以及后极部视网膜IGF-1R表达水平与单纯遮盖组无显著差异（P=0.664,0.797,0.312,0.117）;但IGF-1R反义寡核苷酸注射眼的近视屈光度显著减低,眼轴变短,后极部视网膜IGF-1R mRNA和蛋白质表达水平均明显下调（P=0.000）。结论形觉剥夺能上调豚鼠眼后极部视网膜IGF-1R的表达水平,去遮盖后,豚鼠近视屈光度减低,眼轴增长减缓,后极部视网膜IGF-1R的表达水平下调。利用反义寡核苷酸技术抑制视网膜IGF-1R基因的表达,可以抑制近视的发展。     

豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜Müller细胞中bFGF的表达

目的 观察视网膜Müller细胞中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在豚鼠形觉剥夺性近视(FDM)中的表达,进一步探讨近视眼的发病机制.方法 用半透明眼罩遮盖法建立豚鼠FDM模型;采用玻璃体腔注射L-α-氨基己二酸(L-α-AAA)破坏视网膜Müller细胞,观察其对豚鼠FDM形成的影响.视网膜检影验光测屈光度,A型超声测量眼轴长度.免疫组织化学法观察bFGF在视网膜Müller细胞中的表达.结果 遮盖眼与对照眼相比,产生了相对性近视(P＜0.05),眼轴增长(P＜0.05);去遮盖后,近视度数降低(P＜0.05);破坏视网膜Müller细胞后,近视度数较单纯遮盖眼降低(P＜0.05).近视眼与对照眼相比,视网膜Müller细胞中bFGF表达减弱.结论 视网膜Müller细胞可能参与了FDM形成的调控;视网膜Müller细胞中bFGF的表达可能与FDM有关.     

脑源性神经营养因子在鸡形觉剥夺性近视恢复期中的作用

目的观察形觉剥夺性近视(FDM)恢复期中视网膜脑源性神经营养因子(BDNF)水平的变化,探讨BDNF在FDM中的作用。方法鸡雏单眼遮盖建立FDM模型,剥夺眼去遮盖恢复2周,应用免疫组织化学技术检测剥夺眼视网膜神经节细胞层BDNF的表达。结果去遮盖2周后,剥夺眼BDNF阳性细胞数增加。结论形觉剥夺眼去剥夺后,随着近视程度的减轻,视网膜BDNF的表达水平升高。     

转化生长因子-β2在豚鼠形觉剥夺性近视中的表达

目的 观察形觉剥夺性近视（FDM）形成中视网膜转化生长因子-β2（TGF-β2）水平的变化,对FDM的发病机制做进一步的探讨.方法 出生3 d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月建立FDM模型,左眼作为对照,视网膜检影检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度.免疫组织化学分析TGF-β2的表达,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA的表达.结果 形觉剥夺使近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比差异有统计学意义（P＜0.01）,遮盖眼视网膜光感受器细胞层TGF-β2蛋白表达减少（P＜0.01）,TGF-β2 mRNA的表达下调.结论 TGF-β2参与调控FDM形成.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体1在形觉剥夺性近视豚鼠视网膜上的表达

目的对豚鼠行形觉剥夺建立近视动物模型，观察离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体1（N—methyl—D—aspartate receptor 1．NMDAR1）在近视豚鼠视网膜上的动态表达．探讨其在近视发病机制中的作用。方法60只三色豚鼠随机分为3组：未遮盖组（Ⅰ）、单眼遮盖2周组（Ⅱ）、单眼遮盖3周组（Ⅲ），其中右眼遮盖为实验眼，左眼为自身对照眼。对各组进行视网膜检影和A超测眼轴。分别运用免疫组化及Western Blotting法检测各组豚鼠视网膜NMDAR1蛋白表达。结果Ⅰ组双眼呈轻度远视状态．双眼眼轴差异无显著性（P〉0．05）；Ⅱ组实验眼呈轻度近视（-1.583±1.478）D，自身对照眼呈轻度远视（2.500±1.017）D：实验眼眼轴较自身对照眼轻度延长（P〈0．05）；Ⅲ组实验眼呈中度近视（-3．417±l.169）D，自身对照眼呈轻度远视（1.813±1．072）D；实验眼眼轴较自身对照眼明显延长（P〈0．05）。免疫组化显示NMDAR1主要表达在豚鼠视网膜的内核层细胞及神经节细胞。Ⅰ组实验眼视网膜上NMDAR1蛋白含量为0．338±0．314．Ⅱ组实验眼NMDAB1蛋白含量升高为0．464±0．280．Ⅲ组实验眼视网膜NMDAR1蛋白含量明显上调为0．635±0．037;实验眼视网膜上NMDAR1蛋白含量随遮盖时间延长明显上调．与自身对照眼比较差异有显著性（P〈0．05）。结论形觉剥夺可明显上调豚鼠视网膜NMDAR1的蛋白表达，形觉剥夺产生的异常视觉信号可能通过刺激谷氨酸的释放、NMDAR1过度生成，参与近视的调控。     

豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-Ⅰ/IGF-ⅡmRNA的表达

目的目的观察豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-Ⅰ/IGF-ⅡmRNA表达的变化,以探讨IGFs与形觉剥夺性近视发生的关系。方法实验用三色豚鼠30只,于出生后第2d,将左眼以半透明眼罩遮盖作为形觉剥夺眼,右眼不做任何处理为对照眼。测量实验前、遮盖4周、遮盖8周时遮盖眼和对照眼的屈光度、眼轴长度。遮盖8周实验结束时,RT-PCR检测后极部巩膜IGF-Ⅰ/IGF-ⅡmRNA的表达水平。结果形觉剥夺使遮盖眼后极部巩膜IGF-Ⅰ/IGF-ⅡmRNA表达升高,与对照眼相比差异有显著性意义（P〈0.05）。结论豚鼠巩膜可以自分泌/旁分泌IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ。形觉剥夺使遮盖眼后极部巩膜IGF-Ⅰ/IGF-ⅡmRNA表达升高,IGFs参与豚鼠形觉剥夺性近视形成中巩膜重塑的过程。     

NO-cGMP信号通路对豚鼠形觉剥夺性近视的调控

目的 建立豚鼠形觉剥夺性近视动物模型,观察一氧化氮-环磷酸鸟苷(NO-cGMP)信号通路在视网膜上的动态表达,探讨其在近视发病机制中的作用.方法 豚鼠分为3组:未遮盖组(Ⅰ)、遮盖2周组(Ⅱ)、遮盖3周组(Ⅲ),其中右跟遮盖为实验眼,左眼为自身对照眼.行视网膜检影和眼轴测量,原位杂交法检测神经细胞性一氧化氮合酶(ncNOS)的表达,放射免疫法检测c-GMP的含量,并对ncNOS和c-GMP的表达行直线相关分析.结果 Ⅱ组、Ⅲ组实验眼随形觉剥夺时间延长近视形成,眼轴延长.ncNOS主要表达在豚鼠视网膜的内核层(INL)及神经节细胞层(GCL),ncNOS及cGMP随形觉剥夺时间的延长明显上调,两者具有高度相关性.结论 NO-cGMP信号通路在豚鼠视网膜上有表达,形觉剥夺可明显上调视网膜上NO-cGMP信号通路的表达,该信号通路可能参与了近视的调控.     

豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜Müller细胞中bFGF的表达

目的观察视网膜Müller细胞中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在豚鼠形觉剥夺性近视（FDM）中的表达,进一步探讨近视眼的发病机制。方法用半透明眼罩遮盖法建立豚鼠FDM模型;采用玻璃体腔注射L-α-氨基己二酸（L-α-AAA）破坏视网膜Müller细胞,观察其对豚鼠FDM形成的影响。视网膜检影验光测屈光度,A型超声测量眼轴长度。免疫组织化学法观察bFGF在视网膜Müller细胞中的表达。结果遮盖眼与对照眼相比,产生了相对性近视（P〈0.05）,眼轴增长（P〈0.05）;去遮盖后,近视度数降低（P〈0.05）;破坏视网膜Müller细胞后,近视度数较单纯遮盖眼降低（P〈0.05）。近视眼与对照眼相比,视网膜Müller细胞中bFGF表达减弱。结论视网膜Müller细胞可能参与了FDM形成的调控;视网膜Müller细胞中bFGF的表达可能与FDM有关。     

豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部巩膜蛋白多糖水平的变化

目的观察豚鼠形觉剥夺性近视眼模型后极部巩膜蛋白多糖水平的变化,探讨其在哺乳类动物近视眼发生机制中的作用。方法出生2~3周的断乳花色豚鼠20只,随机均分成2组。遮盖组右眼予不透明眼罩遮盖2周,去遮盖组右眼遮盖2周后去遮盖1周。左眼开放为自身对照眼。于实验开始及结束时检影、测眼轴,达规定时限后处死动物,取后极部巩膜,行免疫组织化学及RT-PCR反应,检测decorin核心蛋白及其mRNA的表达。试验数据采用配对t检验和方差分析进行统计学处理。结果豚鼠遮盖组诱导的相对近视约-8.15 D,眼轴相对增长约0.63 mm;去遮盖组相对近视约-4.30 D,眼轴相对增长约0.57 mm。去遮盖组屈光程度下降值明显小于遮盖组(F=5.974,P<0.05)。免疫组织化学法及RT-PCR法示遮盖组和去遮盖组的实验眼和自身对照眼后极部巩膜均有decorin核心蛋白及其mRNA表达;其mRNA相对含量在组内比较差异均有显著性(P<0.05)。结论豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部巩膜decorin mRNA表达显著降低,去除遮盖后其表达上调,提示decorin可能参与了形觉剥夺性近视眼的发生。     

豚鼠形觉剥夺超高度近视模型的形态学研究

目的建立豚鼠形觉剥夺超高度近视模型并观察其后极部各层组织的病理组织学变化。方法 2周龄三色豚鼠分为形觉剥夺组（12只）和非形觉剥夺对照组（8只）,于形觉剥夺前,形觉剥夺后4、6、10、14周分别对各组进行检影和眼轴性参数测量。通过病理组织学光镜检查分析形觉剥夺14周后各组视网膜、脉络膜和巩膜厚度及其形态学的变化。结果豚鼠形觉剥夺后随时间延长近视度数逐渐增高,10周后可达-10.00 D以上的超高度近视,14周后近视度数更高、个别个体可达-20.00 D。眼轴性参数相应延长。形觉剥夺超高度近视眼视网膜、脉络膜和巩膜较对照组均明显变薄并有病理性改变。结论应用遮盖法对豚鼠施行长期单眼形觉剥夺会形成超高度近视,10周后可达-10.00 D以上,超高度近视眼巩膜、脉络膜和视网膜明显变薄,脉络膜和巩膜结构发生紊乱。视网膜结构中感光细胞层变薄最为明显,推测其对超高度近视的发生起重要作用。     

Recovery from axial myopia induced by a monocularly deprived facemask in adolescent (7-week-old) guinea pigs

PURPOSE: Guinea pigs have been increasingly used as an animal model for experimental myopia. Infant guinea pigs are susceptible to recovery from myopia within 2 weeks of form deprivation. This study investigated whether adolescent guinea pigs are susceptible to recovery from myopia after a longer period of form deprivation. METHOD: Twenty-two guinea pigs (age of 3 weeks) were randomly assigned to two groups: MDF (monocularly deprived facemask, n=11) and normal control (free of form deprivation, n=11). All animals underwent biometric measurement (refraction, corneal curvature and axial length) prior to the experiment. Animals in the MDF group wore a facemask that covered the right eye for 4 weeks. The MDF was then removed and biometric measurement was performed immediately and at 2, 6, 10 and 14 days. The same measurement was performed in the normal control group at time-points matching those of the MDF group. RESULTS: The MDF eyes were approximately 4D more myopic with a greater increase in vitreous length by 0.12 mm compared to either the fellow or the normal control eyes after form deprivation (p<0.01). This relative myopia shifted rapidly towards hyperopia within 2 days after removal of the MDF, followed by a more gradual recovery. A complete recovery occurred by 6 days after removal of the MDF compared to the fellow and normal control eyes (p>0.05). Vitreous length in the MDF eyes slightly reduced within 2 days after removal of the MDF and then remained steady. The MDF eyes were similar to both the fellow and normal control eyes in vitreous length (p>0.05) 6 days after removal of the MDF. There was no significant difference between the MDF, fellow and normal control eyes in the other axial components during the form deprivation and recovery period. CONCLUSION: Adolescent guinea pigs are susceptible to recovery from MDF-induced myopia. The refractive recovery is mainly correlated to the inhibited axial elongation of the vitreous chamber of the previously deprived eyes.     

豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜蛋白激酶C的变化

摘 要：目的 研究豚鼠形觉剥夺性近视眼形成过程中视网膜蛋白激酶C（PKC）的变化.方法 选取3周龄雄性三色豚鼠48只,用半透明眼罩遮盖豚鼠右眼建立近视眼模型,分为遮盖3、7、14 d组,每组16只豚鼠.每组中8只豚鼠遮盖右眼作为实验眼.以对侧未遮盖眼作为自身对照,剩余8只豚鼠作为正常对照.按预定时间观察豚鼠角膜曲率半径、屈光度和眼轴长度的变化,然后处死豚鼠,取视网膜,采用非放射性方法测定视网膜PKC活性,免疫组化染色定位分析PKC蛋白在视网膜的表达情况.各组间角膜曲率半径、屈光度、眼轴长度、视网膜PKC活性及免疫反应强度比较,采用单因素方差分析;组内左、右眼之间的比较采用t检验：视网膜PKC活性与PKC蛋白免疫反应强度的关系采用相关分析.结果 眼罩遮盖能诱导豚鼠遮盖跟眼轴延长、近视形成,且近视程度随遮盖时间的延长而加深.与对照组比较,各组遮盖眼视网膜PKC活性均升高（P〈0.05）.眼罩遮盖3 d后,遮盖眼视网膜PKC活性升高至（0.28±0.08）units/ml,遮盖7 d时PKC活性进一步升高至（0.43±0.10）units/ml,遮盖14 d时降低为（0.32±0.07）units/ml.免疫组化染色结果显示,PKC蛋白表达于视网膜神经节细胞和内核层细胞,呈棕黄色或棕褐色颗粒.与正常对照眼及自身对照眼比较,遮盖眼视网膜内核层细胞PKC蛋白表达上调（P〈0.05）,神经节细胞PKC蛋白表达无变化.遮盖眼视网膜内核层细胞PKC蛋白表达的变化趋势与PKC活性一致,两者之间有明显的相关关系（r=0.994,P=0.000）.结论 视网膜PKC活性升高参与了豚鼠形觉剥夺性近视的形成.     

左旋多巴对豚鼠形觉剥夺性近视形成的影响

目的研究腹腔注射左旋多巴（L-dopa）对豚鼠形觉剥夺性近视眼屈光状态及视网膜多巴胺含量的影响。方法眼罩遮盖建立豚鼠形觉剥夺性近视眼模型,分为正常对照组、L—dopa组（10mg／kg）、生理盐水组、遮盖组、遮盖＋L-dopa组、遮盖＋生理盐水组6个组。遮盖10d后,测定角膜曲率半径、眼球屈光度和眼轴长度,高效液相色谱检测视网膜多巴胺含量。结果眼罩遮盖10d后,豚鼠遮盖眼眼轴延长、近视形成,视网膜多巴胺含量降低（P〈0．05）,但角膜曲率半径无明显变化。腹腔注射L-dopa引起遮盖眼视网膜多巴胺含量增加、近视程度减轻（P〈0．05）,但对正常豚鼠眼球的屈光发育无明显影响（P〉0．05）。腹腔注射生理盐水后,豚鼠眼球屈光状态和视网膜多巴胺含量无明显变化（P〉0．05）。结论腹腔注射L—dopa能通过补充遮盖眼视网膜多巴胺含量,抑制豚鼠形觉剥夺性近视的形成。     

不同浓度阿托品滴眼液对豚鼠形觉剥夺性近视的影响

目的探讨不同浓度阿托品滴眼液对单眼形觉剥夺幼年豚鼠的屈光发育的影响,并分析阿托品抑制近视的可能作用位点和机制。方法实验研究。将80只3周龄体质量在100 g左右的豚鼠随机分至5组：单眼形觉剥夺4周组（8只）、形觉剥夺加点药同时进行4周组（每个浓度各8只）、形觉剥夺2周后再加点药2周组（每个浓度各8只）、单纯点药4周组（每个浓度各6只）、空白对照组（6只）。阿托品粉剂溶于单蒸水配制成3个浓度的阿托品滴眼液：0.2%、1.0%、3.0%。每天早上8∶30-9∶00间点药。在实验前、实验2 周、实验4 周时测量各组豚鼠屈光力、角膜曲率、眼轴长度等相关生物学参数。实验4周结束后取豚鼠眼视网膜做冰冻切片,免疫荧光法标记豚鼠视网膜上表达胰高血糖素的细胞。采用配对样本t检验和重复测量的双因素方差分析进行数据分析。结果单纯形觉剥夺组,实验2周后实验眼屈光度较自身对照眼往近视方向发展,同时伴有玻璃体腔加深、眼轴延长,差异有统计学意义（t=-11.09、7.89、3.73,P<0.05）;4周后,差异更显著。形觉剥夺加点药同时进行的3个浓度组,实验2周后实验眼与自身对照眼的各屈光参数差异均无统计学意义,而2眼差值与单纯剥夺组比较,屈光度、玻璃体腔深度、眼轴长度差异均有统计学意义（F=26.335、6.479、6.910,P<0.05）;4周后,3个浓度组实验眼屈光度与自身对照眼比较均开始往近视方向发展,差异有统计学意义（t=-4.67、-7.54、-2.78,P<0.05）,同时玻璃体腔加深,眼轴延长,而2眼差值与单纯剥夺组比较,各屈光参数的差异仍有统计学意义（F=16.962、5.193、6.882,P<0.05）;但3个浓度组的组间两两比较显示,各参数实验前后差异无统计学意义。形觉剥夺2周后再加点药2周组,实验4周后各浓度组2眼差值与单纯剥夺4周组比较,各屈光参数差异均无统计学意义。各组豚鼠视网膜上均未标记出胰高血糖素表达阳性的细胞。结论在3%的浓度范围内,阿托品滴眼液能通过抑制玻璃体腔加深、眼轴延长从而部分抑制豚鼠形觉剥夺性近视的发生,且作用效果没有明显的浓度依赖性。但在近视形成后运用阿托品,并不能抑制近视的进展。胰高血糖素能途径没有参与阿托品对豚鼠近视发生发展的作用过程。